專利名稱：中藥蟾酥提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種中藥蟾酥提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
藥用蟾蜍為兩棲綱蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍(Bufo bufogaraarizans Cantor)或黑框蟾蜍(Bufo meLanostictus Schneider)。蟾酥為中華大蟾蜍或黑框蟾蜍的耳后腺及皮膚腺分泌的白色漿液，經(jīng)加工干燥制成。中藥蟾酥的應(yīng)用有幾千年的歷史，《本草匯言》中對(duì)蟾酥的描述為蟾酥，通行十二經(jīng)絡(luò)、藏府、膜原、溪谷、關(guān)節(jié)諸處。蟾酥，療疳積，消臌脹，解疔毒之藥也。能化解一切瘀郁壅滯諸疾，如積毒、積塊、積脹、內(nèi)疔癰腫之證，有攻毒拔毒之功也?！侗静萸笳妗分忻枋鰹轶杆?，味辛氣溫有毒，能拔一切風(fēng)火熱毒之邪，使之外出。蓋邪氣著人肌肉，郁而不解，則或見為疔腫發(fā)背、陰瘡、陰蝕、疽癘惡瘡，故必用此辛溫以治，蓋辛主散，溫主行，使邪盡從汗出，不留內(nèi)入，而熱自可以除矣。性有毒，止可外治取效；即或用丸齊U，亦止二、三、四厘而已，多則能使毒人。其用作丸投服，亦宜雜他藥內(nèi)，勿單服也。目前， 中藥蟾酥仍廣泛應(yīng)用于多個(gè)中成藥中，作為主要的功效成分，如六神丸、牛黃消炎丸等。蟾酥中的活性物質(zhì)主要為酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈等多種脂溶性強(qiáng)心甾類化合物，在化學(xué)上屬于留族化合物，而其C17上再接一個(gè)α -吡喃酮基，凡具有此種骨架的物質(zhì)，總名蟾蜍二烯內(nèi)酯。《中國(guó)藥典》2010年版一部中蟾酥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也以華蟾酥毒基及酯蟾毒配基的含量作為中藥蟾酥的含量測(cè)定指標(biāo)?，F(xiàn)代對(duì)于中藥蟾酥的藥理作用的研究，熱點(diǎn)主要集中在于其抗腫瘤、鎮(zhèn)痛和強(qiáng)心作用的分子藥理學(xué)機(jī)制方面。目前的主要研究結(jié)果表明，華蟾酥毒基、酯蟾毒配基及蟾毒靈三種脂溶性成分的混合物不但具有明顯的抗腫瘤作用，而且還能將腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞新生血管形成等作用。中國(guó)專利申請(qǐng)“一種蟾酥提取物及其制備方法”(申請(qǐng)?zhí)枮?00710041880. 7，公開號(hào)為CN101322723A，公告日為2008年12月17日)使用無(wú)水乙醇提取，提取物經(jīng)硅膠柱分離，以一定比例的石油醚、丙酮等度洗脫的方法得到酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種脂溶性成分的混合物，其總量高于90%，但該方法采用提取溶劑為無(wú)水乙醇，其提取效率較低，分離所用的石油醚、丙酮的用量較大，對(duì)環(huán)境污染和破壞的程度也較大；等度洗脫的方法、洗脫劑的用量等都未作進(jìn)一步考察，且轉(zhuǎn)移率也未進(jìn)行公開；更為重要的是，該方法對(duì)中藥蟾酥提取物的干燥溫度以及時(shí)間未作規(guī)定，因在分離、純化過(guò)程中使用了有機(jī)溶劑，可能導(dǎo)致蟾酥提取物中殘留有大量的石油醚、丙酮等毒性有機(jī)溶劑，導(dǎo)致含量偏低且毒性大大增加。因此，從安全性和有效的角度考慮，三種蟾毒配基的總含量有待進(jìn)一步提高，且對(duì)丙酮、石油醚等有機(jī)溶劑殘留量沒(méi)有進(jìn)行檢查、測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供含酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物且三種蟾毒配基的重量百分比(按干燥品計(jì)算)之和為95%以上的中藥蟾酥提取物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述中藥蟾酥提取物的制備方法，采用該方法得到的中藥蟾酥提取物中酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物的重量百分比 (按干燥品計(jì)算)為95%以上，提取效率更高，純化純度也顯著增加，提取物更加安全可靠， 并且采用該方法，使用溶劑量更少，對(duì)環(huán)境的污染程度更低，操作簡(jiǎn)便，易于工業(yè)化生產(chǎn)。為達(dá)到以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是中藥蟾酥提取物，其特征在于，該提取物采用下述方法提取獲得在60 90°C的溫度下將中藥蟾酥藥材用體積百分比為 60% 95%的乙醇水溶液回流提取，將提取液濃縮后經(jīng)硅膠柱分離，用體積比1 8 1的石油醚與丙酮為洗脫劑進(jìn)行等度洗脫，收集洗脫液，經(jīng)過(guò)濾、濃縮、減壓干燥得到含有酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物且三種蟾毒配的重量百分比之和>95% 的中藥蟾酥提取物，所述的重量百分比按干燥品計(jì)算。進(jìn)一步，酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物占中藥蟾酥提取物的重量百分比為96 100%。本發(fā)明提供的上述中藥蟾酥提取物的制備方法，包括以下步驟(1)在60 90°C的溫度下，將中藥蟾酥藥材用體積百分比為60% 95%的乙醇水溶液作為提取溶劑回流提取，每次提取時(shí)中藥蟾酥藥材與提取溶劑的比例為Ig 5 25mL，提取時(shí)間為30 90分鐘，提取次數(shù)為2 4次；(2)將步驟(1)所得提取液濃縮后經(jīng)硅膠柱分離，用體積比1 8 1的石油醚和丙酮為洗脫劑進(jìn)行等度洗脫，收集洗脫液，過(guò)濾，減壓條件下蒸干，即得含酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基的混合物；(3)將所得混合物在30 50°C的條件下減壓干燥36 72小時(shí)，即得含三種蟾毒配基混合物的中藥蟾酥提取物。進(jìn)一步，為提高提取率及節(jié)約提取溶劑，步驟(1)中，預(yù)先將所述中藥蟾酥藥材粉碎、研磨成蟾酥粉，并過(guò)10 60目篩后使用；所述提取溶劑為體積百分比為75% 90%的乙醇水溶液，每次提取時(shí)中藥蟾酥藥材與乙醇水溶液的比例為Ig 8 15ml，提取時(shí)間為 40 80分鐘，提取次數(shù)為2 3次。優(yōu)選地，所述蟾酥粉過(guò)15 25目篩后使用。進(jìn)一步，為增大上樣量，步驟O)中，向濃縮后的提取液中加入拌樣用硅膠，蒸干得拌樣硅膠，所得拌樣硅膠采用干法上樣。其中，加入的所述拌樣用硅膠的量以能完全吸附蟾酥提取物濃縮液為宜。優(yōu)選地，所述拌樣用硅膠的重量為中藥蟾酥藥材重量的0. 5 2. 0 倍，且所述拌樣用硅膠的粒度為100 200目。再進(jìn)一步，所述拌樣用硅膠的重量為中藥蟾酥藥材重量的0. 6 1. 8倍，且所述拌樣用硅膠的粒度為100 160目。進(jìn)一步，所得拌樣硅膠采用干法上樣前，預(yù)先將分離硅膠用2 3倍分離硅膠體積的洗脫劑浸泡1小時(shí)后濕法裝柱，所述分離硅膠的粒度為100 300目。進(jìn)一步，所述洗脫劑中石油醚和丙酮的體積比為2 4 1。進(jìn)一步，為降低中藥蟾酥提取物中有機(jī)溶劑石油醚、丙酮的殘留量，步驟(3)中， 將所述混合物在35 45°C條件下減壓干燥48 60小時(shí)，即得含三種蟾毒配基混合物的中藥蟾酥提取物。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其優(yōu)點(diǎn)在于第一、本發(fā)明采用體積百分比為60 95%的乙醇水溶液作為提取溶劑，較《中國(guó)藥典》2010年版的提取方法提取效率更高，上述三種蟾毒配基混合物的提取率為92%以上， 三種成分總的轉(zhuǎn)移率大于65% ；且采用乙醇水溶液比無(wú)水乙醇更加環(huán)保、安全。第二，相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中采用60目篩的蟾酥粉以無(wú)水乙醇提取的方式，本發(fā)明采用15 25目篩的蟾酥粉以60 95%的乙醇水溶液回流提取的方式，三種蟾毒配基混合物的轉(zhuǎn)移率優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的轉(zhuǎn)移率；更重要的是，采用本發(fā)明的方法放大生產(chǎn)時(shí)，工人的勞動(dòng)強(qiáng)度以及工作環(huán)境的粉塵污染程度將大大降低。第三，本發(fā)明采用拌樣硅膠干法上樣、等度洗脫，簡(jiǎn)化了純化方法，進(jìn)一步提高了三種蟾毒配基的總含量，保證其總含量高于95%水平(通常在95 100%范圍)，純化效率高，純化純度也顯著增加，減小了藥物的毒副作用。第四，按照本發(fā)明的方法制得的中藥蟾酥提取物中，殘留溶劑、重金屬、砷鹽等項(xiàng)目符合《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄相關(guān)要求，干燥失重小于5. 0%。這充分體現(xiàn)了本發(fā)明的中藥蟾酥提取物的安全性、有效性。第五，本發(fā)明提供的中藥蟾酥提取物的制備方法及所用設(shè)備簡(jiǎn)單，使用溶劑量更少，對(duì)環(huán)境的污染程度更低，耗時(shí)較短，易于工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例3中藥蟾酥經(jīng)乙醇水溶液提取后得到的HPLC色譜圖，圖中色譜峰1表示蟾毒靈(BL)，色譜峰2表示華蟾酥毒基(CBG)，色譜峰3表示酯蟾毒配基(RBG)；圖2為本發(fā)明實(shí)施例3中藥蟾酥經(jīng)提取、純化后得到的HPLC色譜圖，圖中色譜峰 1表示蟾毒靈(BL)，色譜峰2表示華蟾酥毒基(CBG)，色譜峰3表示酯蟾毒配基(RBG)；圖3為本發(fā)明實(shí)施例3中的中藥蟾酥藥材使用體積百分比為90%乙醇水溶液提取 3次三種成分轉(zhuǎn)移率柱狀圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例3中等度洗脫三種蟾毒配基的洗脫曲線，圖中曲線A表示酯蟾毒配基(RBG)，曲線B表示華蟾酥毒基(CBG)，曲線C表示蟾毒靈(BL)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。本發(fā)明實(shí)施例中所述用的蟾酥藥材購(gòu)自北京閆村蟾蜍養(yǎng)殖基地、安徽廣印堂中藥飲片廠或山東平安達(dá)中藥飲片廠。硅膠為青島海洋化工廠生產(chǎn)的柱層析用硅膠，拌樣用硅膠粒度為100 160目，分離硅膠粒度為100 300目；分離柱I直徑為2厘米、柱高為20厘米，分離柱II直徑為5 厘米、柱高為60厘米。實(shí)施例1取蟾酥藥材1克，研細(xì)過(guò)30目篩，加15mL體積百分比為75%的乙醇水溶液，在 80°C條件下回流提取60分鐘，上述條件下提取2次，合并濾液，將提取液趁熱過(guò)濾，旋蒸濃縮后加入1. 2克拌樣用硅膠拌樣，得拌樣硅膠。采用分離柱I，取12克分離硅膠，以石油醚和丙酮(體積比為3 1)為洗脫劑，先用40mL的洗脫劑浸泡該分離硅膠1小時(shí)后濕法裝
5柱，加入所制得的拌樣硅膠，再用洗脫劑等度洗脫60分鐘。通過(guò)薄層色譜法進(jìn)行監(jiān)測(cè)，收集含有這三種蟾毒配基的洗脫液，蒸干，在35°C條件下減壓干燥12小時(shí)，即得本發(fā)明中藥蟾酥提取物。其中，三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)為 97. 42% (HPLC 方法測(cè)定)。實(shí)施例2取蟾酥藥材10g，研細(xì)過(guò)60目篩，加入IOOmL體積百分比為85%的乙醇水溶液，在 80°C條件下回流提取45分鐘，上述條件下提取3次，合并濾液，將提取液趁熱過(guò)濾，旋蒸濃縮后加入13. 0克拌樣用硅膠拌樣，得拌樣硅膠。采用分離柱I，取150克分離硅膠，以石油醚和丙酮(體積比為4 1)為洗脫劑，先用300mL的洗脫劑浸泡該分離硅膠1小時(shí)后濕法裝柱，加入所制得的拌樣硅膠，再用洗脫劑等度洗脫。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)，收集含有這三種蟾毒配基的洗脫液，蒸干，在45 °C條件下減壓干燥60小時(shí)，即得本發(fā)明中藥蟾酥提取物。其中， 三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)為98. 92% (HPLC方法測(cè)定)。實(shí)施例3取蟾酥藥材5g，研細(xì)過(guò)20目篩，加入60mL體積百分比為90%的乙醇水溶液在 90°C條件下回流提取30分鐘，提取3次，合并濾液，趁熱過(guò)濾提取液，旋蒸濃縮后加入5. 0 克拌樣用硅膠拌樣，得拌樣硅膠。采用分離柱I，取50克分離硅膠，以石油醚和丙酮(體積比為3 1)為洗脫劑，先用130mL的洗脫劑浸泡該分離硅膠1小時(shí)后濕法裝柱，加入所制得的拌樣硅膠，再用洗脫劑等度洗脫。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)，收集含有這三種蟾毒配基的洗脫液， 蒸干，在40°C條件下減壓干燥60小時(shí)，即得本發(fā)明中藥蟾酥提取物。其中，三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)為97. 73% (HPLC方法測(cè)定)。實(shí)施例4取蟾酥藥材150g，研細(xì)過(guò)30目篩，加入1600mL體積百分比為90%的乙醇水溶液在80°C條件下回流提取45分鐘，提取3次，合并濾液，趁熱過(guò)濾，旋蒸濃縮后加入125g硅膠拌樣，得拌樣硅膠。采用分離柱II，取300克分離硅膠，以石油醚和丙酮(體積比為4 1)為洗脫劑，先用SOOmL的洗脫劑浸泡該分離硅膠1小時(shí)后濕法裝柱，加入所制得的拌樣硅膠， 再用洗脫劑等度洗脫。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)，收集含有這三種蟾毒配基的洗脫液，蒸干，在40°C條件下減壓干燥96小時(shí)，即得本發(fā)明中藥蟾酥提取物。其中，三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)為96. 22% (HPLC方法測(cè)定)。實(shí)施例5取蟾酥藥材15g，研細(xì)過(guò)40目篩，加入75mL體積百分比為65%的乙醇水溶液在 80°C條件下回流提取30分鐘，提取3次，合并濾液，趁熱過(guò)濾，旋蒸濃縮后加入7. 5g拌樣用硅膠拌樣，得拌樣硅膠。采用分離柱I，取150克分離硅膠，以石油醚和丙酮(體積比為 1 1)為洗脫劑，先用400mL的洗脫劑浸泡該分離硅膠1小時(shí)后濕法裝柱，加入所制得的拌樣硅膠，再用洗脫劑等度洗脫。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)，收集含有這三種蟾毒配基的洗脫液，蒸干， 在30°C條件下減壓干燥36小時(shí)，即得本發(fā)明中藥蟾酥提取物。其中，三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)為96. (HPLC方法測(cè)定)。實(shí)施例6取蟾酥藥材100g，研細(xì)過(guò)15目篩，加入2500mL體積百分比為70%的乙醇水溶液
6在70°C條件下回流提取90分鐘，提取3次，合并濾液，趁熱過(guò)濾，旋蒸濃縮后加入200. Og拌樣用硅膠拌樣，得拌樣硅膠。采用分離柱I，取250克分離硅膠，以石油醚和丙酮(體積比為 8 1)為洗脫劑，先用600mL的洗脫劑浸泡該分離硅膠1小時(shí)后濕法裝柱，加入所制得的拌樣硅膠，再用洗脫劑等度洗脫。通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)，收集含有這三種蟾毒配基的洗脫液，蒸干， 在50°C條件下減壓干燥72小時(shí)，即得本發(fā)明中藥蟾酥提取物。其中，三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)為98. 7% (HPLC方法測(cè)定)。從實(shí)施例1 6的測(cè)定結(jié)果可以看出，采用本發(fā)明的方法，三種蟾毒配基混合物占整個(gè)提取物的重量百分比(按干燥品計(jì)算)均在95%以上。從圖3上可以看出，采用本發(fā)明的方法，對(duì)中藥蟾酥藥材以體積百分比為90%的乙醇水溶液提取3次后(見實(shí)施例幻，三種蟾毒配基的總提取率達(dá)95. 4% ；經(jīng)硅膠柱分離后，三種蟾毒配基的總轉(zhuǎn)移率大于65 %，提取效率非常顯著。從圖4上看，三種蟾毒配基類成分在洗脫劑的洗脫下，酯蟾毒配基、蟾毒靈以及華蟾酥毒基被洗脫下來(lái)，收集3 8倍柱體積洗脫液可得到純度較高的三種成分的洗脫液。以下將本發(fā)明的方法與現(xiàn)有方法(中國(guó)專利申請(qǐng)“一種蟾酥提取物及其制備方法”(申請(qǐng)?zhí)枮?00710041880. 7，公開號(hào)為CN101322723A,公告日為2008年12月17日)) 進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如下1)本發(fā)明提供的中藥蟾酥提取方法，三種蟾毒配基的提取率較現(xiàn)有方法更高?，F(xiàn)有方法采用無(wú)水乙醇為提取溶劑，其提取率不足85%，而本發(fā)明的提取率為95%以上。2)本發(fā)明提供的中藥蟾酥提取方法，三種蟾毒配基的轉(zhuǎn)移率較現(xiàn)有方法更高?，F(xiàn)有方法中，三種蟾毒配基的總轉(zhuǎn)移率均在50%以下，本發(fā)明的總轉(zhuǎn)移率達(dá)到65%以上，且產(chǎn)品的純度也進(jìn)一步提高。3)采用現(xiàn)有方法所得到的中藥蟾酥提取物中，殘留溶劑石油醚、丙酮的含量高達(dá)到2 5%，兩種殘留溶劑的含量均超過(guò)《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定0.5%的限度要求的 5 10倍，這大大降低了產(chǎn)品的安全性；本發(fā)明經(jīng)過(guò)減壓干燥使提取物中殘留的石油醚、丙酮的含量均低于《中國(guó)藥典》2010年版的限度0. 5%的要求(測(cè)定結(jié)果均低于0. 2% )，保證了產(chǎn)品的安全、有效。經(jīng)過(guò)方法學(xué)考察，所使用的殘留溶劑測(cè)定方法可以滿足蟾酥提取物的殘留溶劑測(cè)定要求。4)采用現(xiàn)有方法對(duì)150g蟾酥藥材進(jìn)行分離，洗脫劑(石油醚、丙酮)的用量共計(jì)為16 20L;本發(fā)明分離提取相同重量的蟾酥藥材，其洗脫劑(石油醚、丙酮)的用量為 8 10L，大大減少了有機(jī)溶劑的用量，同時(shí)也大為降低了對(duì)環(huán)境的污染。綜上所述，與上述現(xiàn)有方法相比，本發(fā)明提供的方法具有提取效率更高、產(chǎn)品純度更高、有機(jī)溶劑用量更少、殘留有機(jī)溶劑更少等優(yōu)點(diǎn)。上述實(shí)施例只是對(duì)本發(fā)明的舉例說(shuō)明，本發(fā)明也可以以其它的特定方式或其它的特定形式實(shí)施，而不偏離本發(fā)明的要旨或本質(zhì)特征。因此，描述的實(shí)施方式從任何方面來(lái)看均應(yīng)視為說(shuō)明性而非限定性的。本發(fā)明的范圍應(yīng)由附加的權(quán)利要求說(shuō)明，任何與權(quán)利要求的意圖和范圍等效的變化也應(yīng)包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.中藥蟾酥提取物，其特征在于，該提取物采用下述方法提取獲得在60 90°C的溫度下將中藥蟾酥藥材用體積百分比為60 95%的乙醇水溶液回流提取，將提取液濃縮后經(jīng)硅膠柱分離，用體積比1 8 1的石油醚與丙酮為洗脫劑進(jìn)行等度洗脫，收集洗脫液， 經(jīng)過(guò)濾、濃縮、減壓干燥得到含有酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物且三種蟾毒配基的重量百分比之和>95%的中藥蟾酥提取物，所述的重量百分比按干燥品計(jì)笪弁。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥蟾酥提取物，其特征在于，酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物占中藥蟾酥提取物的重量百分比為96 100%。
3.中藥蟾酥提取物的制備方法，包括以下步驟(1)在60 90°C的溫度下，將中藥蟾酥藥材用體積百分比為60% 95%的乙醇水溶液作為提取溶劑回流提取，每次提取時(shí)中藥蟾酥藥材與提取溶劑的比例為Ig 5 25mL， 提取時(shí)間為30 90分鐘，提取次數(shù)為2 4次；(2)將步驟(1)所得提取液濃縮后經(jīng)硅膠柱分離，用體積比1 8 1的石油醚和丙酮為洗脫劑進(jìn)行等度洗脫，收集洗脫液，過(guò)濾，減壓條件下蒸干，即得含酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基的混合物；(3)將所得混合物在30 50°C的條件下減壓干燥12 96小時(shí)，即得含三種蟾毒配基混合物的中藥蟾酥提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，預(yù)先將所述中藥蟾酥藥材粉碎、研磨成蟾酥粉，并過(guò)10 60目篩后使用；所述提取溶劑為體積百分比為75% 90%的乙醇水溶液，每次提取時(shí)中藥蟾酥藥材與乙醇水溶液的比例為 Ig 8 15ml，提取時(shí)間為40 80分鐘，提取次數(shù)為2 3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，所述蟾酥粉過(guò) 15 25目篩后使用。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，步驟O)中，向濃縮后的提取液中加入拌樣用硅膠，蒸干得拌樣硅膠，所得拌樣硅膠采用干法上樣，所述拌樣用硅膠的重量為中藥蟾酥藥材重量的0. 5 2. 0倍，且所述拌樣用硅膠的粒度為100 200目。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，所述拌樣用硅膠的重量為中藥蟾酥藥材重量的0. 6 1. 8倍，且所述拌樣用硅膠的粒度為100 160目。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，所得拌樣硅膠采用干法上樣前，預(yù)先將分離硅膠用2 3倍分離硅膠體積的洗脫劑浸泡1小時(shí)后濕法裝柱， 所述分離硅膠的粒度為100 300目。
9.根據(jù)權(quán)利要求3到8任一所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，所述洗脫劑中石油醚和丙酮的體積比為2 4 1。
10.根據(jù)權(quán)利要求3到8任一所述的中藥蟾酥提取物的制備方法，其特征在于，步驟 (3)中，將所述混合物在35 45°C條件下減壓干燥48 60小時(shí)，即得含三種蟾毒配基混合物的中藥蟾酥提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥蟾酥提取物，該提取物采用下述方法提取獲得在60～90℃的溫度下將中藥蟾酥藥材用體積百分比為60～95％的乙醇水溶液回流提取，將提取液濃縮后經(jīng)硅膠柱分離，用體積比1～8∶1的石油醚與丙酮為洗脫劑進(jìn)行等度洗脫，收集部分洗脫液，經(jīng)過(guò)濾、濃縮、減壓干燥得到含酯蟾毒配基、華蟾酥毒基及蟾毒靈三種蟾毒配基混合物且三種蟾毒配基的重量百分比(按干燥品計(jì)算)之和≥95％的中藥蟾酥提取物。本發(fā)明還提供上述中藥蟾酥提取物的制備方法。采用該方法得到的中藥蟾酥提取物中三種蟾毒配基的重量百分比之和在95％以上，提取轉(zhuǎn)移率更高，使用溶劑量更少，殘留溶劑少，污染程度更低，操作簡(jiǎn)便，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K35/56GK102512453SQ20111044941
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者何秀峰, 劉冬, 趙立敏 申請(qǐng)人:北京協(xié)和制藥二廠