專利名稱：：抗凝血劑抗體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是抗凝血劑治療的領(lǐng)域?，F(xiàn)有技術(shù)抗凝血劑為預(yù)防血液凝固的物質(zhì)；即，抗凝血劑可以使血液停止凝固。抗凝血劑廣泛用作治療人血栓性疾病的藥物，例如在易感者中預(yù)防原發(fā)性及繼發(fā)性深靜脈血栓形成、肺栓塞、心肌梗塞及中風(fēng)。ー類重要的ロ服抗凝血劑通過拮抗維生素K的作用而起作用，例如包括華法林在內(nèi)的香豆素類。第二類化合物通過輔因子間接抑制凝血，例如抗凝血酶III或肝素輔因子II。此包括數(shù)種低分子量的肝素產(chǎn)物，其通過抗凝血酶III主要催化抑制Xa因子(以及針對凝血酶的程度較小)(貝米肝素(bemiparin)、舍托肝素(certoparin)、達(dá)替肝素(dalteparin)、依諾肝素(enoxaparin)、那ノ出肝#(nadroparin)、帕肝素(parnaparin)、瑞肝素(reviparin)、亭扎肝素(tinzaparin),小鏈寡糖(磺達(dá)肝素(fondaparinux)、艾卓肝素(idraparinux))通過抗凝血酶III僅抑制Xa因子。類肝素(達(dá)那肝素(danaparoid)、舒洛地特(sulodexide)、硫酸皮膚素(dermatansulfate))通過兩種輔因子起作用，且抑制Xa因子及凝血酶兩者。第三類則為凝血的直接抑制劑。直接Xa因子抑制劑包括阿哌沙班(apixaban)、伊度沙班(edoxaban)、奧米沙班(otamixaban)、利伐沙班(rivaroxaban),且直接凝血酶抑制劑包括ニ價水蛭素(比伐盧定(bivalirudin)、來匹盧定(Iepirudin)Ji西盧定(desirudin))以及單價化合物阿加曲班(argatroban)及達(dá)比加群(dabigatran)。由于血液凝固為停止出血的生物機(jī)制，因此抗凝血劑治療的副作用是可能發(fā)生不期望的出血事件。因此需要提供一種能夠阻止所述抗凝血劑相關(guān)的出血事件發(fā)生的解毒劑(antidote)(Zikria及AnselI，CurrentOpinioninHematology2009,16(5):347-356)。一種實(shí)現(xiàn)此目標(biāo)的方法為在給藥抗凝血劑后中和患者體內(nèi)所存在的抗凝血劑化合物活性。目前可使用的抗凝血劑解毒劑為魚精蛋白(用于中和肝素)及維生素K(用于中和類似華法林的維生素K拮抗剤)。對于罹患嚴(yán)重創(chuàng)傷及嚴(yán)重出血且接受低分子量肝素治療的患者而言，新鮮冷凍血漿及重組因子VIIa也可作為非特異性解毒劑使用(LauritzenB.等人，Blood，2005，607A-608A)。也有報導(dǎo)指出魚精蛋白片段(美國專利第6，624，141號)及小合成肽(美國專利第6，200，955號)作為肝素或低分子量肝素解毒剤；且凝血酶突變蛋白(美國專利第6，060，300號)可用作凝血酶抑制劑的解毒齊U。已有報導(dǎo)指出凝血酶原中間體及衍生物可用作水蛭素及合成凝血酶抑制劑解毒剤(美國專利第5，817，309號及第6，086，871號)。對于Xa因子直接抑制劑而言，已有報導(dǎo)指出失活Xa因子類似物可用作解毒劑(W02009042962)。此外，重組VIIa因子已經(jīng)用于逆轉(zhuǎn)抗凝血酶III依賴性Xa因子之間接抑制劑(例如磺達(dá)肝素及艾卓肝素)的效應(yīng)(BijsterveldNR等人，Circulation,2002，106:2550-2554;BijsterveldNR等人，BritishJ.ofHaematology,2004(124):653-658)。有關(guān)抗凝血劑逆轉(zhuǎn)的方法的綜述提供于Schulman及Bijsterveld,TransfusionMedicineReviews2007:21(I)，37-48中。對于抗凝血劑療法提供改良的解毒劑存在需求，且具體地，為針對類似達(dá)比加群的直接凝血酶抑制劑提供解毒剤，該特異性解毒劑至今尚無人公開。發(fā)明概述在ー個方面中，本發(fā)明涉及一種能夠中和抗凝血劑的活性的抗體分子。在另一方面中，該抗體分子針對抗凝血劑具有結(jié)合特異性。在另一方面中，該抗凝血劑為ー種直接凝血酶抑制劑、Xa因子抑制劑或維生素K拮抗劑。在另一方面中，該抗凝血劑為達(dá)比加群(dabigatran)、阿加曲班(argatroban)、美拉加群(melagatran)、希美加群(ximelagatran)、水蛭素(hirudin)、比伐盧定(bivalirudin)、來匹盧定(Iepirudin)、地西盧定(desirudin)、阿哌沙班(apixaban)、奧米沙班(otamixaban)、利伐沙班(rivaroxaban)、去纖維蛋白多核苷酸(defibrotide)、雷馬曲班(ramatroban)、抗凝血酶III或Drotrecogina。在另ー實(shí)施方案中，該抗凝血劑為通式(I)的ニ取代的ニ環(huán)雜環(huán)，及其互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體及鹽R3-A-Het-B-Ar-E,(I)其中A表示連接至該Het基的苯并、批唳并或噻吩并部分的羰基或磺?；?，B表示亞こ基，其中連接至該Ar基的亞甲基可經(jīng)氧或硫原子或經(jīng)-NR1-基置換，其中R1表不氫原子或(V4-燒基，E表示RbNH-C(=NH)-基，其中Rb表不氣原子、輕基、C1^-燒氧基擬基、環(huán)己基氧基擬基、苯基-C1J-燒氧基擬基、苯甲酰基、對-Cu-烷基-苯甲酰基或吡啶甲?；?，同時上述Cm-烷氧基羰基的2-位的こ氧基可再經(jīng)Cu-燒基橫酸基或2-(C^3-燒氧基)-こ基取代，Ar表示任選經(jīng)氯原子或經(jīng)甲基、こ基或甲氧基取代的1，4-亞苯基，或其表示2，5-亞噻吩基，Het表示I-(Cu-烷基)-2，5_亞苯并咪唑基、I-環(huán)丙基-2，5_亞苯并咪唑基、2，5-亞苯并噻唑基、I-(C1^3-烷基)_2，5-亞吲哚基、I-(C1^3-烷基)_2，5-亞咪唑并[4，5_b]吡啶基、3-((V3-烷基)-2，7-亞咪唑并[1，2-a]吡啶基或1-沁_(dá)3-烷基)-2，5-亞噻吩并[2，3-d]咪唑基，及Ra表示R2NR3-基，其中R2為Cy-烷基，其可經(jīng)羧基、CV6-烷氧基羰基、芐氧基羰基、C1^3-烷基磺?；被驶騃H-四唑-5-基取代，C2_4_燒基,其經(jīng)輕基、節(jié)氧基、羧基燒基氨基、CV3-燒氧基擬基燒基氨基、N-((V3-燒基)-羧基-(V3-燒基氨基或N-(C^3-燒基)"C^3-燒氧基擬基-Cu-燒基氨基取代，同時在上述基團(tuán)中，與氮原子相鄰的a-位的碳原子不可被取代，R3表示C3_7_環(huán)烷基、炔丙基(其中不飽和部分不可直接連接至該R2NR3基的氮原子)、任選經(jīng)氟或氯原子或經(jīng)甲基或甲氧基取代的苯基、任選經(jīng)甲基取代的吡唑基、噠唑基(pyridazolyl)或卩比唳基,或R2及R3與在其之間的氮原子一起表示5-至7-元亞環(huán)燒亞胺基(cycloalkyleneimino),其任選經(jīng)羧基或C^4-燒氧基羰基取代,其可再與苯環(huán)稠合。在另ー實(shí)施方案中，該抗凝血劑為選自以下的化合物，及其互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體及鹽(a)2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并噻唑_5_甲酸-N-苯基-N-(2_羧こ基)-酰胺，(b)2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并噻唑_5_基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(c)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(d)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(3-輕基擬基丙基)-酸胺，(e)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(2_批啶基)-N-(羥基羰基甲基)-酰胺，(f)I-甲基-2-[2_(2-甲脒基噻吩-5-基)こ基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(g)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2_批啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(h)I-甲基-2-[2-(4-甲脒基苯基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(i)l-甲基-2-[2-(4_甲脒基苯基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(j)I-甲基-2-[2-(4_甲脒基苯基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[2-(1H-四唑-5-基)こ基]-酰胺，(k)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[2-(1H-四唑-5-基)こ基]-酰胺，(1)1-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(m)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(3-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(n)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(o)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[(N-羥基羰基こ基-N-甲基)-2-氨基こ基]-酰胺，(p)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(3_氟苯基)-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(q)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(4_氟苯基)-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(r)I-甲基-2-[N_(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(s)I-甲基-2-[N_(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(t)I-甲基-2-[N_(4-甲脒基苯基)氨基甲基]-吲哚-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-甲氧基羰基こ基)-酰胺，(u)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)氨基甲基]-噻吩并[2.3-d]咪唑_5_基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(v)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺，(w)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2_批啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(X)I-甲基-2-[N_(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺，(y)l-甲基-2-[N-[4_(N-正己基氧基羰基脒基)苯基]-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-こ氧基羰基こ基)-酰胺。在另一方面中，本發(fā)明涉及針對達(dá)比加群、達(dá)比加群酯和/或達(dá)比加群的0-?；咸擒账岬目贵w分子。在另一方面中，該抗體分子為多克隆抗體、單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、抗體的片段，尤其為Fab、Fab'或F(ab')2片段、單鏈抗體，尤其為單鏈可變片段(scFv)、域抗體、納米抗體、雙價抗體(diabody)或DARPin。在另一方面中，本發(fā)明涉及ー種如上所述的抗體分子，其用于醫(yī)藥中。在另一方面中，本發(fā)明涉及ー種如上所述的抗體分子，其用于治療或預(yù)防抗凝血劑療法所產(chǎn)生的副作用。在另一方面中，該副作用為出血事件。在另一方面中，本發(fā)明涉及一種治療或預(yù)防抗凝血劑療法所產(chǎn)生的副作用的方法，該方法包括將有效量的如上所述抗體分子給藥至有此需要的患者。在另一方面中，本發(fā)明涉及包含所述抗體分子以及容器和標(biāo)簽的試劑盒。圖I:利用凝血酶凝血時間測試法，觀察到凝血時間會隨著達(dá)比加群濃度增加而增長。200nM的濃度會造成凝血時間比基線增加約5倍，且該濃度用于第一組及第二組實(shí)驗(yàn)中。最后ー組實(shí)驗(yàn)中采用500nM的濃度(超治療濃度)。圖2:四種針對達(dá)比加群的不同抗體(A至D)均可使人血漿中達(dá)比加群所延長的凝血時間中和。人血漿中的基線凝血時間為10.9秒，當(dāng)使200nM達(dá)比加群與血漿預(yù)先培養(yǎng)時，凝血時間延長至51秒。將各抗體添加至經(jīng)200nM達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的血漿中，并再培養(yǎng)5分鐘。隨后，通過添加凝血酶，開始凝血酶凝血時間。各抗體會以不同程度逆轉(zhuǎn)達(dá)比加群的凝血時間。濃度最高的溶液會造成抗凝血活性的最大逆轉(zhuǎn)。圖3:將濃度遞增的多克隆抗體(抗體D)添加至已與200nM達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的人血漿中，測量其作用。基線凝血時間為11秒，添加達(dá)比加群延長凝血時間至63.7秒。隨后，測試遞增濃度的抗體對逆轉(zhuǎn)達(dá)比加群所延長凝血酶凝血時間的作用。最低濃度將凝血酶凝血時間降低至43.9秒。較高的濃度將凝血酶凝血時間完全降至基線水平，并造成達(dá)比加群的抗凝血作用的完全中和。添加非特異性兔多克隆抗體(方塊)對逆轉(zhuǎn)達(dá)比加群的抗凝血作用無影響。圖4:將濃度遞增的多克隆抗體(抗體D)添加至已與500nM達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的人血漿中，測量其影響?；€凝血時間為10.9秒，添加該較高濃度達(dá)比加群時，延長凝血時間至111.7秒(増加約10倍)?？贵w的1:2稀釋液或原液逆轉(zhuǎn)達(dá)比加群所延長凝血酶凝血時間的效應(yīng)與濃度具有相關(guān)性。最高濃度也會使凝血酶凝血時間完全逆轉(zhuǎn)至基線水平，且甚至使超治療濃度的達(dá)比加群的抗凝血作用完全中和。圖5:杭-達(dá)比加群抗體分子重鏈可變區(qū)的序列。圖6:杭-達(dá)比加群抗體分子輕鏈可變區(qū)的序列。圖7:小鼠單克隆抗體(克隆22)逆轉(zhuǎn)人血漿及人全血中達(dá)比加群的抗凝血作用。將濃度遞增的小鼠單克隆抗體添加至已與30nM達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的人血漿或全血中。通過添加I.5至2U/ml的凝血酶開始該測試，并測量凝血時間。將存在及不存在該化合物下的凝血時間差異定義為100%達(dá)比加群活性。該抗體以劑量依賴性方式抑制達(dá)比加群-介導(dǎo)的凝血時間延長。圖8:自克隆22抗體產(chǎn)生的小鼠Fab逆轉(zhuǎn)人血漿中達(dá)比加群的抗凝血作用。將濃度遞增的小鼠Fab添加至已與7nM達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的人血漿中。也測試完整抗體，作為陽性對照組。通過添加0.4U/ml的凝血酶開始該測試，并測量凝血時間。將達(dá)比加群介導(dǎo)的凝血時間增加的完全阻斷定義為100%抑制。該Fab以劑量依賴性方式抑制人血漿中達(dá)比加群所誘發(fā)的凝血時間延長。圖9:小鼠單克隆抗體(克隆22)逆轉(zhuǎn)人血漿中的達(dá)比加群?；咸擒账岬目鼓饔?。將濃度遞增的小鼠抗體添加至已與7nM達(dá)比加群酰基葡糖苷酸或達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的人血漿中。通過添加0.4U/ml的凝血酶開始該測試，并測量凝血時間。將該化合物介導(dǎo)的凝血時間增加的完全阻斷定義為100%抑制。該抗體以劑量依賴性方式抑制人血漿中達(dá)比加群?；咸擒账崴T發(fā)的凝血時間延長。圖10:人源化Fab(Fab18/15)逆轉(zhuǎn)人血漿中達(dá)比加群的抗凝血作用。將濃度遞增的Fab18/15添加至已與7nM達(dá)比加群預(yù)先培養(yǎng)的人血漿中。通過添加0.4U/ml的凝血酶開始該測試，并測量凝血時間。將達(dá)比加群介導(dǎo)的凝血時間增加的完全阻斷定義為100%抑制。該Fab以劑量依賴方式抑制人血漿中達(dá)比加群所誘發(fā)的凝血時間延長。圖11:在接受達(dá)比加群的大鼠中通過在t=0時推注給藥等摩爾的Fab而持續(xù)輸注時的體外全血凝血酶凝血時間(3.OU/mL凝血酶)。帶有實(shí)心圓圈的線表示無藥物的載體治療。帶有實(shí)心方塊的線表示無Fab時達(dá)比加群的抗凝血活性。帶有實(shí)心三角的線表示給藥Fab后的抗凝血活性。數(shù)據(jù)表示為平均值土SE,姆治療組動物數(shù)n=4。圖12:在接受達(dá)比加群的大鼠中通過在t=0時推注給藥等摩爾的Fab而持續(xù)輸注時的體外全血aPTT。實(shí)心圓圈表示無藥物的載體治療。帶有實(shí)心方塊的線表示無Fab時達(dá)比加群的抗凝血活性。帶有實(shí)心三角的線表示給藥Fab后的抗凝血活性。數(shù)據(jù)表示為平均值土SE，每治療組動物數(shù)n=4。圖13:在接受達(dá)比加群的大鼠中通過在t=0時推注給藥劑量遞增的Fab而持續(xù)輸注時的體外全血凝血酶凝血時間(3.OU/mL凝血酶)。帶有實(shí)心圓圈的線表示無藥物的載體治療。帶有實(shí)心方塊的線表示無Fab時達(dá)比加群的抗凝血活性。帶有實(shí)心三角的實(shí)線表示等摩爾給藥Fab后的抗凝血活性,帶有實(shí)心三角的虛線表示給藥等摩爾劑量的50%的Fab后的抗凝血活性。數(shù)據(jù)表示為平均值土SE,姆治療組動物數(shù)n=4。圖14:在接受達(dá)比加群的大鼠中通過在t=0時推注給藥劑量遞增的Fab而持續(xù)輸注時的體外全血aPTT。實(shí)心圓圈線表示無藥物的載體治療。帶有實(shí)心方塊的線表示無Fab時達(dá)比加群的抗凝血活性。帶有實(shí)心三角的實(shí)線表示等摩爾給藥Fab后的抗凝血活性,帶有實(shí)心三角的虛線表示給藥等摩爾劑量的50%的Fab后的抗凝血活性。數(shù)據(jù)表示為平均值土SE，每治療組動物數(shù)n=4。發(fā)明詳述在ー個方面中，本發(fā)明涉及一種能夠中和抗凝血劑的活性的抗體分子。抗體(也稱為免疫球蛋白，縮寫為Ig)為發(fā)現(xiàn)于脊椎動物血液或其他體液的Y球蛋白，且可通過免疫系統(tǒng)用以識別及中和外來物體，例如細(xì)菌及病毒。所述抗體通常為由各具有兩個大重鏈及兩個小輕鏈的基本結(jié)構(gòu)單元所組成，以形成(例如)具有I個單元的單體、具有2個單元的ニ聚體或具有5個單元的五聚體?？贵w可通過非共價鍵相互作用而結(jié)合至稱為抗原的其他分子或結(jié)構(gòu)。此結(jié)合是特異性的，也就是抗體會以高親和力方式僅結(jié)合至特定結(jié)構(gòu)。被抗體所識別的抗原的獨(dú)特部分稱為抗原表位或抗原決定基。結(jié)合至該抗原表位的抗體部分有時稱為互補(bǔ)位，其位于該抗體的所謂的可變域或可變區(qū)(Fv)中。該可變域包括三個被骨架區(qū)(FR)隔開的所謂的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。在本發(fā)明上下文中，所提及的⑶R是根據(jù)Chothia的定義(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.1987，196:901917)以及Kabat(E.A.Kabat,T.T.Wu、H.Bilofsky、M.Reid-Miller,S.H.Perry,SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutesofHealth,Bethesda(1983))。本領(lǐng)域已經(jīng)進(jìn)ー步開發(fā)出抗體，且使所述抗體成為醫(yī)學(xué)及技術(shù)中具有多功能的エ具。因此，在本發(fā)明上下文中，術(shù)語“抗體分子”或“抗體”(本文作為同義詞使用)并不只包括自然界中所發(fā)現(xiàn)的抗體(該抗體包括例如兩條輕鏈及兩條重鏈，或僅包括兩條重鏈(如在駱駝物種中))，也包括所有包含至少ー個具有抗原結(jié)合特異性的互補(bǔ)位及具有與免疫球蛋白可變域類似結(jié)構(gòu)的分子。因此，本發(fā)明的抗體分子可為多克隆抗體、單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、抗體的片段，尤其為Fv、Fab、Fab'或F(ab')2片段、單鏈抗體，尤其為單鏈可變片段(scFv)、小模塊免疫藥物(SMIP)、域抗體、納米抗體、雙價抗體。多克隆抗體是指具有不同氨基酸序列的抗體分子的集合，且可通過本領(lǐng)域公知的方法，從接受抗原免疫的脊椎動物的血液中獲得。單克隆抗體(mAb或moAb)為氨基酸序列相同的單ー特異性抗體，單克隆抗體可通過雜交瘤技術(shù),從被稱為雜交瘤的雜交細(xì)胞株制備產(chǎn)生的，該稱為雜交瘤的雜交細(xì)胞是指可產(chǎn)生特異性抗體的B細(xì)胞與骨髄瘤(B細(xì)胞癌)細(xì)胞融合的克隆(KohlerG、MilsteinC，Continuousculturesoffusedcellssecretingantibodyofpredefinedspecificity.Nature1975；256:495-7)。或者，單克隆抗體可通過在宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)法制備(NorderhaugL、OlafsenT、MichaelsenTE、SandlieI.(1997年5月)，“Versatilevectorsfortransientandstableexpressionofrecombinantantibodymoleculesinmammaliancells”，JImmunolMethods204(1):77-87;參見下文)。對人的應(yīng)用而言，往往需要降低源自其他物種(如小鼠)的抗體的免疫原性。這可通過構(gòu)建嵌合抗體，或通過稱為“人源化”的方法來實(shí)現(xiàn)。在本文中，“嵌合抗體”應(yīng)理解成將包含衍生自一種物種(例如小鼠)的序列部分(例如可變域)融合至衍生自不同物種(例如人)的序列部分(例如恒定域)的抗體。“人源化抗體”為ー種包括源自非人物種可變域的抗體，其中某些氨基酸發(fā)生突變，使該可變域整體序列更類似接近于人可變域的序列?？贵w的嵌合化及人源化的方法也是本領(lǐng)域公知的(BillettaR、LobuglioAF,“Chimericantibodies”IntRevImmunol.1993;10(2-3):165-76；RiechmannL、ClarkM、WaldmannH>WinterG(1988),“Reshapinghumanantibodiesfortherapy”，Nature:332:323)。此外，已經(jīng)開發(fā)基于衍生自人基因組序列的產(chǎn)生抗體的技術(shù)，例如通過噬菌體展不技術(shù)或使用轉(zhuǎn)基因動物(W090/05144；D.Marks>H.R.Hoogenboom>T.P.Bonnert>J.McCafferty>A.D.Griffiths及G.Winter(1991),“By-passingimmunisation.HumanantibodiesfromV-genelibrariesdisplayedonphage.，’J.Mol.Biol.，222，581-597；Knappik等人，J.Mol.Biol.296:57-86,2000；S.Carmen及L.Jermutus,“Concep·tsinantibodyphagedisplay”，BriefingsinFunctionalGenomicsandProteomics20021(2):189-203；LonbergN、HuszarD,“Humanantibodiesfromtransgenicmice，，，IntRevImmunol.1995；13(I):65-93；BriiggemannM、TaussigMJ,“Productionofhumanantibodyrepertoiresintransgenicmice，，,CurrOpinBiotechnol.1997年8月，8(4)455-8)。所述抗體為本發(fā)明上下文中的“人抗體”。本發(fā)明的抗體分子也包括保持抗原結(jié)合特性的免疫球蛋白片段，如Fab、Fab'或F(ab')2片段。通過免疫球蛋白的斷裂(例如通過蛋白消化)或通過重組表達(dá)所述片段可獲得所述片段。例如通過常規(guī)技術(shù)，例如使用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶(W094/29348)或內(nèi)切蛋白酶Lys-C(Kleemann等人，Anal.Chem.80,2001-2009,2008)可實(shí)現(xiàn)免疫球蛋白消化作用。以木瓜蛋白酶或Lys-C消化抗體通常會產(chǎn)生兩個相同的稱為Fab片段的抗原結(jié)合片段(每一片段具有単一的抗原結(jié)合位點(diǎn))及殘留的Fe片段。經(jīng)胃蛋白酶處理則會產(chǎn)生F(ab/)2。通過宿主細(xì)胞中重組表達(dá)制備Fab分子的方法詳細(xì)說明于下文中。已開發(fā)出多種技術(shù)以將免疫球蛋白可變域或衍生自所述可變域的分子置于不同的分子背景內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，這些也應(yīng)視為“抗體分子”。一般而言，這些抗體分子在尺寸上小于免疫球蛋白，且包括單ー氨基酸鏈或由數(shù)條氨基酸鏈組成。例如單鏈可變片段(scFv)為免疫球蛋白重鏈及輕鏈的可變區(qū)的融合體，利用短接頭(通常為絲氨酸(S)及甘氨酸(G))連在一起(W088/01649；W091/17271;Huston等人，InternationalReviewsofImmunology,第10卷，1993，195-217)。“單域抗體”或“納米抗體”在單一的Ig樣域中具有抗原結(jié)合位點(diǎn)(W094/04678；W003/050531；ffard等人，Nature.1989年10月12日；341(6242):544-6;Revets等人，ExpertOpinBiolTher.5(1):111-24,2005)。可將ー或多個具有針對相同或不同抗原的結(jié)合特異性單域抗體連在一起。雙價抗體為由兩條氨基酸鏈組成的ニ價抗體分子，其包含兩個可變域(W094/13804;Holliger等人，ProcNatlAcadSciUSA.1993年7月15日；90(14):6444-8)。抗體樣分子的其他實(shí)例為免疫球蛋白超家族抗體(IgSF;Srinivasan及Roeske,CurrentProteinPept.Sci.2005,6(2):185-96)。有ー種不同概念產(chǎn)生所謂的小模塊免疫藥物(SMIP)，其包括連接至單鏈鉸鏈的Fv域及缺乏恒定域CHl的效應(yīng)子結(jié)構(gòu)域(W002/056910)。在另一方面中，本發(fā)明的抗體分子甚至可能與免疫球蛋白可變域僅具有遠(yuǎn)距結(jié)構(gòu)相關(guān)性，或根本沒有所述相關(guān)性，只要其具有相當(dāng)于免疫球蛋白可變域的特定的結(jié)合特異性及親和カ即可。所述非免疫球蛋白“抗體模擬物”(有時稱為“支架蛋白”)可能基于A蛋白、載脂蛋白、纖維結(jié)合蛋白域、錨蛋白通用序列重復(fù)域及硫氧還蛋白的基因(Skerra，CurrentOpinioninBiotechnology2007,18(4):295-304)。本發(fā)明上下文中的優(yōu)選實(shí)施方案為經(jīng)設(shè)計的錨蛋白重復(fù)蛋白(DARPin's；Steiner等人，JMolBiol.2008年8月24日；382(5):1211-27；StumppMT、AmstutzP,CurrOpinDrugDiscovDevel.2007年3月；10(2):153-9)。可將抗體分子融合(成為融合蛋白)或另外連接(通過共價鍵或非共價鍵)至對該抗體分子的特性具有所需影響的其他分子實(shí)體。例如可能需要改善抗體分子的藥代動力學(xué)性質(zhì)、例如體液(如血液)中的穩(wěn)定性，特別是在單鏈抗體或域抗體的情況下。已在此方面開發(fā)諸多技術(shù)，尤其為延長所述抗體分子在循環(huán)中的半衰期，如聚こニ醇化(W098/25971；W098/48837；W02004081026);將抗體分子融合或共價連接至對血清蛋白(如白蛋白)具有親和カ的另ー抗體分子(W02004041865;W02004003019);或使抗體分子表達(dá)為具有全部或部分血清蛋白(如白蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白)的融合蛋白(W001/79258)。在另一方面中，抗體分子對抗凝血劑具有結(jié)合特異性。“結(jié)合特異性”指抗體分子對該抗凝血劑的結(jié)合親和カ顯著高于對結(jié)構(gòu)上無關(guān)的分子的結(jié)合親和力。親和カ為抗體分子上的単一抗原結(jié)合位點(diǎn)與単一抗原表位之間的相互作用。其以締合常數(shù)KA=kass/kdiss或解尚常數(shù)KD=kdiss/kass表不。在本發(fā)明的一方面中，如通過表面等離子共振分析法(MalmqvistM.,“Surfaceplasmonresonanceiordetectionandmeasurementoiantibody-antigenaffinityandkinetics.”，CurrOpinImmunol.1993Apr;5(2):282-6)所測定，該抗體與抗凝血劑的結(jié)合親和性的Kd值范圍為0.IpM至IOOiiM,優(yōu)選為IpM至IOOiiM,優(yōu)選為IpM至IiiM。也可使用動態(tài)排除分析(KinExA)技術(shù)，測量抗體親和性(Dariing,R.J.及BraultP_A.,“KineticexclusionassaytechnologyCnaracterizationofMolecularInteractions.”，ASSAYandDrugDevelopmentTechnologies.2004年12月，2(6)647-657)?？赏ㄟ^稱為親和性成熟的方法來增強(qiáng)抗體分子的結(jié)合親和性(Marks等人，1992，Biotechnology10:779-783;Barbas,等人，1994，Proc.Nat.Acad.Sci,USA91:3809-3813；Shier等人，1995，Gene169:147-155)。因此，本發(fā)明也包括親和性成熟的抗體。在本發(fā)明另一方面中，該抗體分子能夠中和抗凝血劑的活性。即，在與該抗體分子結(jié)合之后，該抗凝血劑即無法發(fā)揮其抗凝血活性，或此活性程度已顯著下降。優(yōu)選地，當(dāng)針對所討論的抗凝血劑采用適當(dāng)?shù)幕钚苑治?，特別是采用對凝血酶敏感的凝血分析，如蛇靜脈酶(ecarin)凝血時間或凝血酶凝血時間測定時(H.Bounameaux、MarbetGA、LammleB,等人，“Monitoringofheparintreatment.Comparisonofthrombintime,activtedpartialthromboplastintime,andplasmaheparinconcentration,andanalysisofthebehaviourofantithrombinIII，，，AmericanJournalofClinicalPathology198074(1):68-72)，抗體結(jié)合后的抗凝血活性會下降至少2倍、5倍、10倍或100倍。為了制備本發(fā)明的抗體分子，本領(lǐng)域技術(shù)人員可自多種本領(lǐng)域公知的方法中選擇(Norderhaug等人，JTmmunoIMethods1997,204(I)77-87；Kipriyanow及LeGall,MolecularBiotechnology26:39-60,2004；Shukla等人，2007，J.ChromatographyB,848(1):28-39)?？鼓獎楸绢I(lǐng)域公知的，如上文所述。在本發(fā)明另一方面中，該抗凝血劑為直接凝血酶抑制劑、Xa因子抑制劑或維生素K拮抗劑。維生素K拮抗劑的實(shí)施例為包括華法林在內(nèi)的香豆素類。Xa因子的間接主要抑制劑的實(shí)例為通過抗凝血酶III的活化產(chǎn)生作用的肝素類物質(zhì)，其包括數(shù)種低分子量的肝素產(chǎn)物(貝米肝素(bemiparin)、舍托肝素(certoparin)、達(dá)替肝素(dalteparin)、依諾肝素(enoxaparin)、那屈肝素(nadroparin)、帕肝素(parnaparin)、瑞肝素(reviparin)、亭扎肝素(tinzaparin))、某些寡糖(磺達(dá)肝素(fondaparinux)、艾卓肝素(idraparinux))、類肝素(達(dá)那肝素(danaparoid)、舒洛地特(sulodexide)、硫酸皮膚素(dermatansulfate)),及直接Xa因子抑制劑(阿哌沙班(apixaban)、奧米沙班(otamixaban)、利伐沙班(rivaroxaban))。凝血酶抑制劑的實(shí)施例包括ニ價水蛭素(比伐盧定(bivalirudin)、來匹盧定(Iepirudin)、地西盧定(desirudin))、及單價化合物阿加曲班(argatroban)及達(dá)比加群(dabigatran)。因此，在另一方面中，該抗凝血劑為達(dá)比加群、阿加曲班、美拉加群、希美加群、水蛭素、比伐盧定、來匹盧定、地西盧定、阿哌沙班、伊度沙班、奧米沙班、利伐沙班、去纖維蛋白多核苷酸、雷馬曲班、抗凝血酶III或Drotrecogina。在另ー實(shí)施方案中，該抗凝血劑為通式(I)的ニ取代的ニ環(huán)雜環(huán)，及其互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體及鹽R3-A-Het-B-Ar-E,(I)其中A表示連接至該Het基的苯并、卩比唳并或噻吩并部分的羰基或磺?；?，B表示亞こ基，其中連接至該Ar基的亞甲基可經(jīng)氧或硫原子或經(jīng)-NR1-基置換，其中R1表不氫原子或C^4-燒基，E表示RbNH-C(=NH)-基，其中Rb表不氣原子、輕基、C1^-燒氧基擬基、環(huán)己基氧基擬基、苯基-C1J-燒氧基擬基、苯甲?；?、對-Cu-烷基-苯甲酰基或吡啶甲?；瑫r上述Cm-烷氧基羰基的2-位的こ氧基可再經(jīng)Cu-燒基橫酸基或2-(C^3-燒氧基)-こ基取代，Ar表示任選經(jīng)氯原子或經(jīng)甲基、こ基或甲氧基取代的1，4-亞苯基，或其表示2，5-亞噻吩基，Het表示I-((^3-烷基)-2，5_亞苯并咪唑基、I-環(huán)丙基-2，5_亞苯并咪唑基、2，5-亞苯并噻唑基、I-(C1^3-烷基)_2，5-亞吲哚基、I-(C1^3-烷基)_2，5-亞咪唑并[4，5_b]吡啶基、3-((V3-烷基)-2，7-亞咪唑并[1，2-a]吡啶基或1-沁_(dá)3-烷基)-2，5-亞噻吩并[2，3-d]咪唑基，及Ra表示R2NR3-基，其中R2為Cy-烷基，其可經(jīng)羧基、CV6-烷氧基羰基、芐氧基羰基、C1^3-烷基磺酰基氨基羰基或IH-四唑-5-基取代，C2_4_燒基,其經(jīng)輕基、節(jié)氧基、羧基燒基氨基、CV3-燒氧基擬基燒基氨基、N-((V3-燒基)-羧基-(V3-燒基氨基或N-(C^3-燒基)"C^3-燒氧基擬基-Cu-燒基氨基取代，同時在上述基團(tuán)中，與氮原子相鄰的a-位的碳原子不可被取代，R3表示C3_7_環(huán)烷基、炔丙基(其中不飽和部分不可直接連接至該R2NR3基的氮原子)、任選經(jīng)氟或氯原子或經(jīng)甲基或甲氧基取代的苯基、任選經(jīng)甲基取代的吡唑基、噠唑基或吡啶基，或R2及R3與在其之間的氮原子一起表示5-至7-元亞環(huán)烷亞胺基，其任選經(jīng)羧基或(V4-烷氧基羰基取代，其可再與苯環(huán)稠合。式(I)化合物、其制備及其用作抗凝血劑的用途公開于W098/37075中。在另ー實(shí)施方案中，該抗凝血劑為選自以下的化合物，及其互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體及鹽(a)2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并噻唑-5-甲酸-N-苯基-N-(2_羧こ基)-酰胺、(b)2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并噻唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(C)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(d)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(3-輕基擬基丙基)-酸胺、(e)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(2_批啶基)-N-(羥基羰基甲基)-酰胺、(f)I-甲基-2-[2_(2-甲脒基噻吩-5-基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(g)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-批啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(h)I-甲基-2-[2-(4-甲脒基苯基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(i)l-甲基-2-[2-(4_甲脒基苯基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(j)I-甲基-2-[2-(4_甲脒基苯基)こ基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[2-(1H-四唑-5-基)こ基]-酰胺、(k)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[2-(1H-四唑-5-基)こ基]-酰胺、(1)1-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(m)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(3-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(n)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(0)1-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[(N-羥基羰基こ基-N-甲基)-2-氨基こ基]-酰胺、(p)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(3-氟苯基)-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(q)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑_5_基-甲酸-N-(4_氟苯基)-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(r)l-甲基-2-[N_(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(S)l-甲基-2-[N_(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(t)l-甲基-2-[N_(4-甲脒基苯基)氨基甲基]-吲哚-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-甲氧基羰基こ基)-酰胺、(u)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)氨基甲基]-噻吩并[2.3-d]咪唑_5_基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(V)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基こ基)-酸胺、(w)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2_批啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(X)l-甲基-2-[N_(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基こ基)-酰胺、(y)l-甲基-2-[N-[4_(N-正己基氧基羰基脒基)苯基]-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-こ氧基羰基こ基)-酰胺。本發(fā)明上下文中優(yōu)選的抗凝血劑為達(dá)比加群(CAS211914-51-1，N-[2-(4-甲脒基苯基氨基甲基)-I-甲基-IH-苯并咪唑-5-基羰基]-N-(2-吡啶基)-@-丙氨酸)，其具有化學(xué)式(II)權(quán)利要求1.一種抗體分子，其能夠中和抗凝血劑的活性。2.權(quán)利要求I的抗體分子，其中該抗體分子針對所述抗凝血劑具有結(jié)合特異性。3.權(quán)利要求I或2的抗體分子，其中所述抗凝血劑為直接凝血酶抑制劑、Xa因子抑制劑或維生素K拮抗劑。4.前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子，其中所述抗凝血劑為達(dá)比加群、阿加曲班、美拉加群、希美加群、水蛭素、比伐盧定、來匹盧定、地西盧定、阿哌沙班、奧米沙班、利伐沙班、去纖維蛋白多核苷酸、雷馬曲班、抗凝血酶III或Drotrecogin-a。5.前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子，其中所述抗凝血劑為具有通式(I)的二取代的二環(huán)雜環(huán)，或其互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體及鹽R3-A-Het-B-Ar-E,(I)其中A表示連接至該Het基的苯并、吡啶并或噻吩并部分的羰基或磺酰基，B表示亞乙基，其中連接至該Ar基的亞甲基可經(jīng)氧或硫原子或經(jīng)-NR1-基置換，其中R1表不氫原子或CV4-燒基，E表示RbNH-C(=NH)-基，其中Rb表不氧原子、輕基、C^9-燒氧基擬基、環(huán)己基氧基擬基、苯基-(V3-燒氧基擬基、苯甲?；?Cu-烷基-苯甲?；蜻拎ぜ柞；?，同時上述C^9-烷氧基羰基的2-位的乙氧基可再經(jīng)C1--燒基橫酸基或2-(C1--燒氧基)-乙基取代，Ar表示任選經(jīng)氯原子或經(jīng)甲基、乙基或甲氧基取代的1，4-亞苯基，或其表示2，5-亞噻吩基，Het表示I-(Cu-烷基)-2，5-亞苯并咪唑基、I-環(huán)丙基-2，5-亞苯并咪唑基、2，5-亞苯并噻唑基、I-((V3-烷基)-2，5-亞吲哚基、I-(C1^3-烷基)_2，5-亞咪唑并[4，5-b]吡啶基、3-((V3-烷基)-2，7-亞咪唑并[I,2-a]吡啶基或I-(Cp3-烷基)-2，5-亞噻吩并[2,3-d]咪唑基，及Ra表示R2NR3-基，其中R2為CV4-烷基，其可經(jīng)羧基、CV6-烷氧基羰基、芐氧基羰基、CV3-烷基磺酰基氨基羰基或IH-四唑-5-基取代，C2-4~燒基，其可經(jīng)輕基、節(jié)氧基、羧基-C1--燒基氨基、CV3-燒氧基擬基燒基氨基、N-((V3-燒基)-羧基-(V3-燒基氨基或N-(C^3-燒基)-C1--燒氧基擬基燒基氨基取代，同時在上述基團(tuán)中，與氮原子相鄰的a-位的碳原子不可被取代，R3表示C3_7_環(huán)烷基、炔丙基、任選經(jīng)氟或氯原子或經(jīng)甲基或甲氧基取代的苯基、任選經(jīng)甲基取代的吡唑基、噠唑基或吡啶基，所述炔丙基中的不飽和部分不可直接連接至該R2NR3基的氮原子，或R2及R3與在其之間的氮原子一起表示5-至7-元亞環(huán)烷亞胺基，其任選經(jīng)羧基或CV4-烷氧基羰基取代，其可再與苯環(huán)稠合。6.權(quán)利要求5的抗體分子，其中所述抗凝血劑為選自以下的化合物(a)2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并噻唑-5-甲酸-N-苯基-N-(2-羧乙基)-酰胺、(b)2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并噻唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(c)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(d)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(3-輕基擬基丙基)-酸胺，(e)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(羥基羰基甲基)-酰胺，(f)l-甲基-2-[2-(2-甲脒基噻吩-5-基)乙基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-批啶基)-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(g)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(h)l-甲基-2-[2-(4-甲脒基苯基)乙基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(i)l-甲基-2-[2-(4-甲脒基苯基)乙基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(j)I-甲基-2-[2-(4-甲脒基苯基)乙基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[2-(1H-四唑-5-基)乙基]-酰胺，(k)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[2-(1H-四唑-5-基)乙基]-酰胺，(1)1-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(m)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(3-吡啶基)-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(n)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-N-甲基-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(0)1-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-[(N-羥基羰基乙基-N-甲基)-2-氨基乙基]-酰胺，(P)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(3-氟苯基)-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(q)l-甲基-2-[N_(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(4-氟苯基)-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(r)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(s)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(t)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)氨基甲基]-吲哚-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-甲氧基羰基乙基)-酰胺，(U)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)氨基甲基]-噻吩并[2.3-d]咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(V)I-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-苯基-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(w)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-輕基擬基乙基)-酸胺，(x)l-甲基-2-[N-(4-甲脒基-2-甲氧基-苯基)-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-羥基羰基乙基)-酰胺，(y)l-甲基-2-[N-[4-(N-正己基氧基羰基脒基)苯基]-氨基甲基]-苯并咪唑-5-基-甲酸-N-(2-吡啶基)-N-(2-乙氧基羰基乙基)_酰胺，其互變異構(gòu)體、立體異構(gòu)體及鹽。7.權(quán)利要求2的抗體分子，其中所述抗凝血劑為達(dá)比加群。8.權(quán)利要求7的抗體分子，其能夠中和達(dá)比加群及達(dá)比加群的1-0-?；咸擒账岬幕钚浴?.權(quán)利要求5至8中任一項的抗體分子，其包含具有選自SEQIDNO:I及SEQIDNO:2的CDR1，選自SEQIDNO:3,SEQIDNO:4,SEQIDNO:5,SEQIDNO:6,SEQIDN0:7及SEQIDN0:8的CDR2，以及選自SEQIDNO:9及SEQIDNO:10的CDR3的重鏈可變域，以及具有選自SEQIDNO:IUSEQIDNO:12及SEQIDNO:13的CDRl，SEQIDNO:14的CDR2及SEQIDNO:15的CDR3的輕鏈可變域。10.權(quán)利要求9的抗體分子，其包含具有SEQIDNO:I的CDR1，選自SEQIDN0:6、SEQIDN0:7及SEQIDNO:8的CDR2、SEQIDNO:10的CDR3的重鏈可變域，及具有SEQIDNO:13的CDRl，SEQIDNO:14的CDR2，SEQIDNO:15的CDR3的輕鏈可變域。11.權(quán)利要求9或10的抗體分子，其包含選自SEQIDN0:16、18、20、22、24及26的重鏈可變域，及選自SEQIDN0:17、19、21、23、25及27的輕鏈可變域。12.權(quán)利要求11的抗體分子，其包含SEQIDNO:16的重鏈可變域，及SEQIDNO:17的輕鏈可變域；或SEQIDNO:18的重鏈可變域，及SEQIDNO:19的輕鏈可變域；或SEQIDNO:20的重鏈可變域，及SEQIDNO:21的輕鏈可變域；或SEQIDNO:22的重鏈可變域，及SEQIDNO:23的輕鏈可變域；或SEQIDNO:24的重鏈可變域，及SEQIDN0:25的輕鏈可變域；或SEQIDNO:24的重鏈可變域，及SEQIDNO:27的輕鏈可變域；或SEQIDNO:26的重鏈可變域，及SEQIDN0:27的輕鏈可變域。13.前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子，其為多克隆抗體、單克隆抗體、人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、抗體的片段，尤其為Fab、Fab'或F(ab')2片段、單鏈抗體，尤其為單鏈可變片段(scFv)、小模塊免疫藥物(SMIP)、域抗體、納米抗體、雙價抗體或經(jīng)設(shè)計的錨蛋白重復(fù)蛋白(DARPin)。14.權(quán)利要求13的抗體分子，其為scFv，其中該重鏈可變域及輕鏈可變域通過選自SEQIDNO:28、SEQIDNO:29、SEQIDNO:30及SEQIDNO:31的連接肽連接。15.權(quán)利要求14的抗體分子，其包含SEQIDN0:32或SEQIDN0:33。16.權(quán)利要求13的抗體分子，其具有包含SEQIDN0:34或SEQIDNO:40的重鏈及包含SEQIDNO:35的輕鏈，或其具有包含SEQIDNO:42的重鏈及包含SEQIDNO:43的輕鏈。17.權(quán)利要求13的抗體，其為具有包含SEQIDNO:36,SEQIDN0:38或SEQIDNO:41的Fd片段，及包含SEQIDN0:37或SEQIDNO:39的輕鏈的Fab分子。18.前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子，其用于醫(yī)藥中。19.前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子，其用于治療或預(yù)防抗凝血劑療法的副作用，和/或用于逆轉(zhuǎn)抗凝血劑的過量。20.權(quán)利要求19的抗體分子，其中所述副作用為出血事件。21.治療或預(yù)防抗凝血劑療法的副作用或抗凝血療法過量事件的方法，該方法包括向有此需要的患者給藥有效量的前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子。22.制備前述權(quán)利要求中任一項的抗體分子的方法，其包括(a)提供宿主細(xì)胞，其包含一或多個編碼與表達(dá)調(diào)控序列功能相關(guān)的抗體分子的核酸，(b)培養(yǎng)該宿主細(xì)胞,及(C)自該細(xì)胞培養(yǎng)物回收該抗體分子。23.試劑盒，其包括權(quán)利要求I至20中任一項的抗體，或其藥物組合物。24.試劑盒，其包括(a)權(quán)利要求I至20中任一項的抗體或其藥物組合物；(b)容器,和(C)標(biāo)簽。25.試劑盒，其包括權(quán)利要求7至20中任一項的抗體，以及達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽。26.權(quán)利要求25的試劑盒，其中達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽的形式為固體、液體或凝膠的形式。27.權(quán)利要求25的試劑盒，其中所述達(dá)比加群酯的藥學(xué)上可接受的鹽為甲磺酸鹽。28.權(quán)利要求25或27的試劑盒，其中達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽每劑量單位的規(guī)格為75mg至300mg,以每天一次或每天兩次給藥。29.試劑盒，其包括(a)權(quán)利要求7至20中任一項的抗體或其藥物組合物，(b)達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，(C)容器,和(d)標(biāo)簽。30.權(quán)利要求29的試劑盒，其中達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽的形式為固體、液體或凝膠的形式。31.權(quán)利要求29的試劑盒，其中所述達(dá)比加群酯的藥學(xué)上可接受的鹽為甲磺酸鹽。32.權(quán)利要求29或31的試劑盒，其中達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽每劑量單位的規(guī)格為75mg至300mg,以每天一次或每天兩次給藥。33.試劑盒，其包括(a)第一藥物組合物，其包含達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽；(b)第二藥物組合物，其包含權(quán)利要求7至20中任一項的抗體；(c)指示將所述第一和第二藥物組合物分別給藥于患者的說明書，其中所述第一和第二藥物組合物包含于分別的容器中，且將所述第二藥物組合物給藥于需要中和或部分中和達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-?；咸擒账岬幕颊摺?4.一種在正在接受達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽治療的患者中，中和或部分中和達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-酰基葡糖苷酸的方法，該方法包括給藥權(quán)利要求7至20中任一項的抗體或其藥物組合物。35.一種在患者中中和或部分中和達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-?；咸擒账岬姆椒ǎ摲椒ò?a)確認(rèn)患者正在接受達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽治療，且確認(rèn)該患者服用的量；(b)在進(jìn)行凝固或凝血試驗(yàn)或分析之前，用權(quán)利要求7至20中任一項的抗體中和達(dá)比加群或其1-0-?；咸擒账?，其中達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-?；咸擒账釋⒏蓴_該試驗(yàn)結(jié)果或分析結(jié)果的精確讀數(shù)；(c)使用來自患者的樣品進(jìn)行該凝固或凝血試驗(yàn)或分析，以確定達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-?；咸擒账岵淮嬖诘那闆r下血塊形成的水平；和(d)調(diào)節(jié)達(dá)比加群、達(dá)比加群酯、達(dá)比加群的前藥或其藥學(xué)上可接受的鹽給藥患者的量，以在患者中達(dá)到血塊形成和分解之間的適當(dāng)平衡。36.權(quán)利要求34或35的方法，其中抗體與達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-酰基葡糖苷酸的摩爾比介于0.I至100之間。37.權(quán)利要求36的方法，其中抗體與達(dá)比加群或達(dá)比加群的1-0-酰基葡糖苷酸的摩爾比介于0.I至10之間。38.權(quán)利要求35的方法，其中該試驗(yàn)結(jié)果或分析結(jié)果的精確讀數(shù)為纖維蛋白原水平、活化蛋白C抵抗或相關(guān)測試的精確讀數(shù)。全文摘要本發(fā)明涉及對抗抗凝血劑、特別是對抗達(dá)比加群的抗體分子，以及所述抗體分子作為此類抗凝血劑的解毒劑的用途。文檔編號A61K39/00GK102711813SQ201180006616公開日2012年10月3日申請日期2011年1月20日優(yōu)先權(quán)日2010年1月20日發(fā)明者A.沃特曼,J.E.帕克,J.范里,K.卡納達(dá),N.豪爾,S.辛,T.利曾伯格,U.孔茲申請人:貝林格爾.英格海姆國際有限公司