脂質(zhì)化的抗原及其于增強(qiáng)免疫學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明的Ag473，為一種腦膜炎雙球菌NeisseriaMengitidis的脂蛋白，是用以制造高量的重組脂蛋白，以作為一種佐劑使用。尤其，Ag473的前40個(gè)殘基（D1功能域）與登革熱病毒外膜蛋白的非脂質(zhì)化的一致功能域III，E3(rlipo-D1E3)融合。將rlipo-D1E3投予小鼠，可促使TLR2介導(dǎo)脾細(xì)胞增生，且TLR2介導(dǎo)由骨髓衍生的樹突細(xì)胞特異性制備細(xì)胞激素，并經(jīng)由TLR2活化NF-kB傳訊途徑。N-端脂質(zhì)化片段的特征在于，其中專一性N-?；?S-二酰基甘油基-CSQEAK片段已被確定。以其投藥可增加由骨髓衍生的樹突細(xì)胞與經(jīng)由TLR2的NF-kB傳訊途徑，且與特定腫瘤抗原（E7)組合時(shí)，可增加腫瘤生長抑制作用。
【專利說明】脂質(zhì)化的抗原及其于增強(qiáng)免疫學(xué)反應(yīng)的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是關(guān)于脂肽或脂蛋白，特別是關(guān)于含有Ag473脂質(zhì)化序列的脂肽或脂蛋 白，以及其相關(guān)的組成物及相關(guān)的制造與使用方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 疫苗接種被認(rèn)為是用來預(yù)防病原體感染的最有效且最具效率的方式。然而，至今 仍有許多感染性疾病尚無可利用的疫苗，或還未能達(dá)到足夠的免疫作用。此外，許多疫苗因 為其效能太低、會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重副作用、穩(wěn)定性低或是價(jià)格昂貴而不適用。因此，亟需研發(fā)出更 有效的疫苗或相關(guān)試劑。
[0003] 疫苗含有用以誘發(fā)保護(hù)性免疫反應(yīng)的衍生自病原體的抗原性物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)。 一般而言，經(jīng)修飾的蛋白質(zhì)(例如經(jīng)脂質(zhì)化的蛋白質(zhì)）較未經(jīng)修飾的蛋白質(zhì)更具致免性。某 些疫苗產(chǎn)品中的蛋白質(zhì)系藉由使用重組技術(shù)在大腸桿菌中表現(xiàn)而制備得。但是，大腸桿菌 通常被認(rèn)為不適合用來制造經(jīng)修飾的蛋白質(zhì)，包括經(jīng)脂質(zhì)化的蛋白質(zhì)。更特別地，大腸桿菌 細(xì)胞將天然具有脂質(zhì)化的蛋白質(zhì)脂質(zhì)化的執(zhí)行力差，也不會(huì)制造出呈現(xiàn)經(jīng)脂質(zhì)化形式的非 天然具有脂質(zhì)化的蛋白質(zhì)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明（至少一部份)是基于意外發(fā)現(xiàn)（1) 一種Ag473的脂質(zhì)化序列可促使具有該 脂質(zhì)化序列的融合蛋白進(jìn)行脂質(zhì)化作用；及（2)經(jīng)脂質(zhì)化的融合蛋白或其片段不僅本身具 有高致免性，且能夠增強(qiáng)其他抗原的致免性。
[0005] 前述的Ag473為一種腦膜炎雙球菌Neisseria Mengitidis的脂質(zhì)蛋白質(zhì)，是由四 個(gè)功能域（SP及功能域1-3)所組成。以下列示此蛋白質(zhì)具有四個(gè)已確定功能域的胺基酸 序列（SEQ ID N0:1):
[0006]
[0007]

【權(quán)利要求】
1. 一種疫苗調(diào)配物，包含抗原及含有脂肽或脂蛋白的佐劑組成物，其特征在于，該脂肽 或脂蛋白具有式（I)結(jié)構(gòu)：
式⑴ 其中 RpR2與R3其中一者為C14_2(l烯基，且其他二者各別獨(dú)立地為C 14_2(l烷基或C14_2(l烯基；且 X為附屬于式（I)所示的半胱胺酸殘基的胺基酸序列。
2. 如權(quán)利要求1所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，X的長度具有1-100個(gè)胺基酸殘基。
3. 如權(quán)利要求2所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，X的長度具有3-20個(gè)胺基酸殘基。
4. 如權(quán)利要求3所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，X具有SEQ ID NO:7或8的序列。
5. 如權(quán)利要求4的疫苗調(diào)配物，其特征在于，X具有SEQ ID NO: 7的序列。
6. 如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，該脂肽或脂蛋白具有下 列立體結(jié)構(gòu)：
a
7. 如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，札與R3各別為C14_2(l烷 基。
8. 如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，R2為C14_2(l烯基。
9. 如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，R2 為-(ch2) 7-ch=ch- (ch2) 5ch3。
10. 如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的疫苗調(diào)配物，其特征在于，凡與馬各別 為 _(CH2)14CH3。
11. 一種在個(gè)體內(nèi)增強(qiáng)抗原免疫學(xué)反應(yīng)的方法，其特征在于，該方法包含投藥予一個(gè)體 其所需的抗原及含有脂肽或脂蛋白的佐劑組成物，該脂肽或脂蛋白具有式（I)結(jié)構(gòu)： 式⑴
其中 RpR2與R3其中一者為C14_2(l烯基，且其他二者各別獨(dú)立地為C 14_2(l烷基或C14_2(l烯基；且 X為附屬于式（I)所示的半胱胺酸殘基的胺基酸序列。
12. 如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，X的長度具有1-100個(gè)胺基酸殘基。
13. 如權(quán)利要求12項(xiàng)所述的方法，其特征在于，X的長度具有3-20個(gè)胺基酸殘基。
14. 如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，X具有SEQ ID NO:7或8的序列。
15. 如權(quán)利要求14的方法，其特征在于，X具有SEQ ID NO:7的序列。
16. 如權(quán)利要求11-15中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，該脂肽或脂蛋白具有下列立 體結(jié)構(gòu)：
Ο
17. 如權(quán)利要求11-16中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，札與R3各別為C14_2(l烷基。
18. 如權(quán)利要求11-17中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，R2為C14_2(l烯基。
19. 如權(quán)利要求11-18中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，R2 為-(ch2) 7-ch=ch- (ch2) 5ch3。
20. 如權(quán)利要求11-19中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，&與R3各別為_(CH2) 14CH3。
【文檔編號】A61K39/39GK104220092SQ201180008771
【公開日】2014年12月17日 申請日期:2011年2月9日 優(yōu)先權(quán)日:2010年2月9日
【發(fā)明者】劉士任, 劉學(xué)鴻, 冷治湘, 陳信偉, 郭恩澤, 莊再成 申請人:財(cái)團(tuán)法人衛(wèi)生研究院