專利名稱：用于皮膚護(hù)理中的穩(wěn)定化蛋白酶的制作方法
用于皮膚護(hù)理中的穩(wěn)定化蛋白酶優(yōu)先權(quán)本申請要求2010年I月19日提交的美國臨時申請No. 61/296,052的優(yōu)先權(quán)。概述公開了一項發(fā)明，其涉及合成用作皮膚護(hù)理劑的源自植物的固定化和交聯(lián)的蛋白酶。所得到的穩(wěn)定化蛋白酶將因為其固定化性質(zhì)而最少限度地滲透皮膚。該蛋白酶將因其交聯(lián)性質(zhì)并且在某些實施方案中歸因于其借助物理添加劑的穩(wěn)定作用而保留活性。本發(fā)明尤其涉及在局部皮膚應(yīng)用中使用的連接的木瓜蛋白酶產(chǎn)物。背景 蛋白酶的活性在表皮穩(wěn)態(tài)方面是重要的。因此，當(dāng)施加至皮膚時，蛋白酶具有多種潛在益處，但是受某些限制作用影響。木瓜蛋白酶是一種源自番木瓜和某些其他植物的有力蛋白酶。然而，它在溶液狀態(tài)下迅速喪失活性。這是因為與全部蛋白酶相似，木瓜蛋白酶自我消化以及經(jīng)歷變性。此外，當(dāng)使用常規(guī)木瓜蛋白酶產(chǎn)物作為與皮膚滲透和皮膚刺激相關(guān)的局部皮膚護(hù)理劑時，可以遭遇伴隨這些木瓜蛋白酶產(chǎn)物的其他難題。高度地希望的是開發(fā)在皮膚護(hù)理中使用的沒有此類限制的蛋白酶產(chǎn)物，并且更具體地，木瓜蛋白酶產(chǎn)物。為克服常規(guī)技術(shù)中的上述難題，本發(fā)明的示例性實施方案提供借助本文所述的技術(shù)改良的穩(wěn)定的交聯(lián)蛋白酶產(chǎn)物，并且尤其提供改良的穩(wěn)定的交聯(lián)蛋白酶產(chǎn)物。例如，在本發(fā)明的一些實施方案中，為了獲得穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶產(chǎn)物、將木瓜蛋白酶在初級交聯(lián)反應(yīng)中固定在聚合物如例如卡波姆或卡波普上，并且隨后通過添加具有胺反應(yīng)性的低分子量同源雙功能交聯(lián)試劑(例如己二亞氨酸二甲酯(DMA, Dimethyladipimidate)、辛二酸雙(橫基玻拍酸亞胺)酯(BS3, Bis (Sulfosuccinimidyl) suberate)、辛二亞氨酸二甲酯(DMS, Dimethyl Suberimidate)、庚二亞氨酸二甲酯(DMP, Dimethylpimelimidate)和辛二酸二玻拍酸亞胺酯(DSS, Disuccinimidyl suberate))進(jìn)行二級交聯(lián)反應(yīng)。在本發(fā)明的其他示例性實施方案中，進(jìn)行初級交聯(lián)反應(yīng)和二級交聯(lián)反應(yīng)以獲得穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶產(chǎn)物，并且隨后穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶使用物理穩(wěn)定劑例如糖或糖聚合物進(jìn)一步穩(wěn)定。例如，藻酸鈉可以根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方案用作物理穩(wěn)定劑。以上交聯(lián)的穩(wěn)定化木瓜蛋白酶產(chǎn)物仍可以通過包括在某些防腐劑體系或水包油制劑中的以上穩(wěn)定化木瓜蛋白酶產(chǎn)物被進(jìn)一步穩(wěn)定化。根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方案的固定化、交聯(lián)和穩(wěn)定化蛋白酶(例如木瓜蛋白酶)復(fù)合物的益處包括但不限于I.最小的皮膚滲透作用，2.在溶液中或干燥形式下保留蛋白酶活性3.最小的皮膚刺激作用，和4.易于配制。在本發(fā)明的其他實施方案中，描述了包含穩(wěn)定化蛋白酶的化妝品組合物、個人護(hù)理組合物和藥物組合物。
附圖簡述以下附圖僅出于說明目的而提供，并且不意圖是限制性的。圖I說明用于形成根據(jù)本發(fā)明的穩(wěn)定的交聯(lián)蛋白酶的交聯(lián)反應(yīng)。圖2說明根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方案的穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶產(chǎn)物，所述產(chǎn)物已經(jīng)歷過圖I中說明的交聯(lián)反應(yīng)。圖3說明在多個溫度下貯存根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方案的穩(wěn)定化木瓜蛋白酶的樣品多達(dá)12周后第0天活性的百分比。圖4說明在多個溫度下貯存無DMA樣品多達(dá)12周后第0天活性的百分比。圖5說明Sigma木瓜蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖6(a)說明根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方案在多個溫度下貯存穩(wěn)定化木瓜蛋白酶樣品多達(dá)12周后保留的第0天活性的百分比。圖6 (b)說明在多個溫度下貯存無DMA樣品多達(dá)12周后保留的第0天活性的百分比。圖7是說明在根據(jù)本發(fā)明的示例性實施方案的穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶產(chǎn)物中不存在游離的活性木瓜蛋白酶的圖表。圖8是說明含有0. 2% BS3的樣品和不含任何BS3的對照樣品在不同溫度下I周后的活性百分比的圖表。圖9是說明穩(wěn)定化木瓜蛋白酶樣品在有和沒有0. 1%藻酸鹽的情況下4周后的保留活性的百分比的圖表。

圖10是Sigma木瓜蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖11是說明糖或糖聚合物對在25°C和40°C下10天后的游離木瓜蛋白酶的穩(wěn)定性的影響的圖表。圖12是說明0. 4%木瓜蛋白酶在2周后保留的活性的百分比的圖表。圖13(a)說明已經(jīng)由DMA交聯(lián)并且已經(jīng)與藻酸鈉進(jìn)一步反應(yīng)的穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶產(chǎn)物。圖13 (b)是說明在多個溫度下貯存I % DMA樣品多達(dá)12周后保留的活性的百分比的圖表。圖13(c)是說明在多個溫度下貯存無DMA樣品多達(dá)12周后第0天活性的百分比的圖表。圖14是說明DMA對連接的木瓜蛋白酶的活性保留的影響的曲線圖。圖15是說明在不同溫度下12周后的連接木瓜蛋白酶樣品中的活性的圖表。圖16是Sigma木瓜蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖17是說明在制劑中保留的(含DMA的)連接木瓜蛋白酶的活性的曲線圖。圖18是說明在制劑中保留的(不含DMA的)連接木瓜蛋白酶的活性的曲線圖。圖19是說明在制劑內(nèi)保留的連接木瓜蛋白酶的活性的曲線圖。圖20是在安慰劑制劑中的Sigma木瓜蛋白酶的標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖21是說明在油和水制劑中保留的連接木瓜蛋白酶的活性的曲線圖。詳述除非另外限定，否則本文中所用的全部技術(shù)與科學(xué)術(shù)語具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。盡管與本文所述的那些方法和材料相似或等同的方法和材料可以用于實施或檢驗本發(fā)明，然而現(xiàn)在描述合適的方法和材料。本文所提及的全部出版物、專利申請、專利和其他參考文獻(xiàn)通過引用方式完整地并入。在矛盾的情況下，本說明書(包括定義)將居主導(dǎo)。此外，所述材料、方法和實施例僅是說明性的并且不意圖是限制性的。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將從以下詳細(xì)描述并且從權(quán)利要求書中是顯而易見的。如對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將顯而易見的，本文所述的具體特征和實施方案可以與任何其他特征或?qū)嵤┓桨附M合。表皮由幾個層(strata)或?qū)咏M成。最外層一角質(zhì)層由死亡的細(xì)胞組成，所述細(xì)胞已經(jīng)在幾天范圍內(nèi)從該層下方向上移行。這些死亡細(xì)胞通常借助一個稱作表皮脫屑的過程從皮膚表面撒落，所述過程刺激新細(xì)胞在更深水平下生長。較年幼的皮膚在這個過程中比老化或受損的皮膚更高效。因此，老化的皮膚顯得晦暗、厚和較無光澤(less toned)。這可以因環(huán)境因素而惡化，如暴露于陽光；激素影響，如雄激素、雌激素和表皮生長因子；和維生素缺乏如維生素A和D的缺乏。蛋白酶活性是脫屑過程中的關(guān)鍵因素。因此，為化妝效 果(如皮膚光滑和抗老化)施加蛋白酶至皮膚是合乎需要的。然而，蛋白酶在化妝品和其他應(yīng)用中的用途已知具有三個主要限制不穩(wěn)定性、可能有變應(yīng)原性和皮膚滲透作用。本發(fā)明基于，至少部分地基于這樣的發(fā)現(xiàn)蛋白酶可以借助某些交聯(lián)反應(yīng)來穩(wěn)定以形成蛋白酶卡波姆共聚物，在本文也稱作“穩(wěn)定化蛋白酶”。此類穩(wěn)定化蛋白酶包含與卡波姆交聯(lián)的蛋白酶，其中蛋白酶的伯胺與卡波姆的羧基交聯(lián)并且其中蛋白酶的胺經(jīng)胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑進(jìn)一步交聯(lián)。在本發(fā)明的一個實施方案中，穩(wěn)定化蛋白酶還包含物理穩(wěn)定劑，例如糖或糖聚合物。還公開了一種形成此類穩(wěn)定化蛋白酶產(chǎn)物的方法，其中進(jìn)行初級交聯(lián)反應(yīng)以將與所述蛋白酶的伯胺與卡波姆的羧基交聯(lián)并且通過胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑進(jìn)行二級交聯(lián)反應(yīng)。蛋白酶蛋白酶是催化蛋白質(zhì)分解的酶。蛋白酶，本身作為蛋白質(zhì)，具有自我降解的傾向并且在本質(zhì)上是不穩(wěn)定的。這種蛋白質(zhì)本質(zhì)也使得它們具有變應(yīng)原性。另外，因為它們降解蛋白質(zhì)的能力，所以它們可以滲透至表皮的更深層并且對下層造成損傷。用于本發(fā)明中的合適蛋白酶包括木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶和奇異果蛋白酶。無花果蛋白酶是從無花果(榕屬(Ficus)樹的果實)的膠乳中分離的非特異性巰基蛋白酶。無花果蛋白酶最常見地從無花果(Ficus carica)和脫毛格木(Ficus glabatra)獲得。然而，無花果蛋白酶也可以從其他格屬物種(如印度格(Ficus elastica)和Ficusinsipida)的果實中分離。菠蘿蛋白酶是從菠蘿(鳳梨(Ananas comosus))的莖和/或果實分離的巰基蛋白酶。奇異果蛋白酶，也稱獼猴桃蛋白酶，是一種從獼猴桃果實(硬毛獼猴桃(Actinidia deliciosa))獲得的半胱氨酸蛋白酶。木瓜蛋白酶是一種從番木瓜(Carciapapaya)和山地番木瓜(Vasconcellea cundinamarcensis)、最經(jīng)常地從綠色未成熟果實的膠乳中獲得的半胱氨酸蛋白酶。這些蛋白酶按重量計以約0. 1%和5%之間的濃度存在?？ú返鞍酌甘紫裙潭ㄔ诳ú飞?。卡波姆是具有高分子量的丙烯酸的均聚物，所述丙烯酸與幾種多元醇烯丙基醚(例如烯丙基醚季戊四醇、蔗糖的烯丙基醚或丙烯的烯丙基醚)中的任一種交聯(lián)。合適卡波姆的例子是卡波姆910、卡波姆934、卡波姆934p、卡波姆940和卡波姆941，其中數(shù)字后綴表示聚合物鏈的平均分子量。如本文所用，“固定化”蛋白酶或“連接的”蛋白酶指已經(jīng)通過初級交聯(lián)反應(yīng)與卡波姆反應(yīng)的蛋白酶。適用于這種初級交聯(lián)反應(yīng)的交聯(lián)劑是能夠?qū)Ⅳ然c伯胺偶聯(lián)的試劑。合適交聯(lián)劑的一個例子是水溶性碳二亞胺I-乙基-3-(3- 二甲氨基丙基)碳二亞胺。EDC是用來將羧基與伯胺偶聯(lián)的零長度交聯(lián)劑。EDC與羧酸基團(tuán)反應(yīng)以產(chǎn)生O-?；愲寤鶊F(tuán)，該基團(tuán)與游離的胺基團(tuán)反應(yīng)后形成交聯(lián)鍵。EDC在這個實施方案中是在反應(yīng)期間轉(zhuǎn)變成雙取代脲的初級交聯(lián)劑。NHS是一種增加交聯(lián)速率并且在交聯(lián)反應(yīng)期間保持不變的酸酯和催化劑?；瘜W(xué)交聯(lián)劑一旦固定在卡波姆上，則固定化蛋白酶與胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑在二級交聯(lián)反應(yīng)中反應(yīng)以形成蛋白酶卡波姆共聚物，在本文也稱作“穩(wěn)定化蛋白酶”。交聯(lián)試劑優(yōu)選地是低分子量交聯(lián)試劑，從而該交聯(lián)試劑將在二級交聯(lián)反應(yīng)中完全反應(yīng)或近乎完全反應(yīng)?？梢允褂玫暮线m交聯(lián)試劑的例子包括亞氨酯交聯(lián)試劑如己二亞氨酸二甲酯(DMA)、庚二亞氨酸二甲酯(DMP)、辛二亞氨酸二甲酯(DMS)和二甲基3,3 二硫代雙(dimethyl 3, 3dithiobis)。胺反·應(yīng)性交聯(lián)試劑可以按重量計以范圍從約0. 05%至約5 %、優(yōu)選地約I %和5%之間的多個濃度提供。在某些實施方案中，使用DMA。物理穩(wěn)定劑在化學(xué)交聯(lián)后，固定化和交聯(lián)的蛋白酶任選地用物理穩(wěn)定劑例如糖或糖聚合物進(jìn)一步穩(wěn)定。合適的糖或糖聚合物的例子是藻酸鈉、海藻糖、甘露醇、甘油和黃原膠。在一個實施方案中，使用藻酸鈉。這種物理穩(wěn)定劑可以按重量計約0. 1%和5%之間的濃度包含。在圖I中顯示用于形成本發(fā)明穩(wěn)定化蛋白酶的一個實施方案的交聯(lián)反應(yīng)的圖示。在圖2中顯不穩(wěn)定化木瓜蛋白酶廣物的圖不。應(yīng)用/制劑本發(fā)明的穩(wěn)定化蛋白酶具有最小的皮膚滲透作用，以溶液或干燥形式保留蛋白酶活性，具有最小的皮膚刺激作用并且相對易于在制劑中提供。因此，與常規(guī)技術(shù)的蛋白酶產(chǎn)物相比，本發(fā)明的示例性實施方案提供更穩(wěn)定和安全得多的蛋白酶產(chǎn)物，特別是穩(wěn)定化木瓜蛋白酶產(chǎn)物實施方案。穩(wěn)定化蛋白酶適用于化妝品和個人護(hù)理制劑中，例如，剝脫制品、抗皺紋和/或抗老化制品、沐浴添加劑、護(hù)發(fā)制品、液體皂和銷售皂、清潔溶液、濕潤清潔布、油劑或粉劑、抗痤瘡制品。穩(wěn)定化蛋白酶特別適于通過施加本發(fā)明的一種或多種穩(wěn)定化蛋白酶至需要治療的干燥、老化或受損皮膚來治療干燥、老化或受損的皮膚。化妝品和/或個人護(hù)理制劑可以為例如油包水或水包油乳液、醇性或含醇制劑、離子型或非離子型兩性脂質(zhì)的囊泡狀分散體或凝膠的形式。示例性化妝品和/或個人護(hù)理制劑包含按重量計約0. 5%和5%之間、優(yōu)選地約1%和3%之間的穩(wěn)定化蛋白酶。本發(fā)明的穩(wěn)定化蛋白酶也適于藥物應(yīng)用，例如，清創(chuàng)應(yīng)用。清創(chuàng)是從傷口(例如潰瘍傷口或燒傷)除去死亡或受損組織以輔助愈合。在本發(fā)明的一個實施方案中，將本發(fā)明的一種或多種穩(wěn)定化蛋白酶施加至需要清創(chuàng)的皮膚傷口或燒傷。用于治療傷口或燒傷的包含穩(wěn)定化蛋白酶的示例性制劑和產(chǎn)品包括繃帶/敷料、貼劑、洗滌溶液劑、油膏劑或凝膠劑或合成性組織。在某些實施方案中，清創(chuàng)組合物，例如繃帶、敷料或貼劑，可以任選地包括抗微生物藥。對于清創(chuàng)應(yīng)用，在藥物組合物中包括的穩(wěn)定化蛋白酶的量將是有效清除壞死組織和使傷口中的膿液化并且在合理時間內(nèi)(例如，在七天時間內(nèi))實現(xiàn)基本上除去全部此類物質(zhì)的量。除皮膚護(hù)理應(yīng)用之外，本發(fā)明的穩(wěn)定化蛋白酶也可以適于本領(lǐng)域已知的其中將希望有穩(wěn)定形式蛋白酶的其他應(yīng)用中。一 個示例性應(yīng)用是口腔護(hù)理組合物。包含穩(wěn)定化蛋白酶的局部用組合物可以進(jìn)一步包含在化妝品制劑、個人護(hù)理制劑或藥物制劑中常規(guī)使用的多種其他成分，只要它們沒有不可接受地更改本發(fā)明的益處。任選常規(guī)成分類別的非限制性例子包括香料、顏料、著色劑、精油、收斂劑、抗老化劑、抗痤瘡劑、抗結(jié)塊劑、消泡劑、抗微生物劑、抗氧化劑、粘合劑、PH調(diào)節(jié)劑、皮膚漂白劑和光亮劑、皮膚調(diào)理劑、防曬劑、防腐劑、抗炎劑、潤濕劑、增稠劑和維生素。對于化妝品、個人護(hù)理和/或藥物應(yīng)用的某些實施方案，需要隨穩(wěn)定化蛋白酶進(jìn)一步包括防腐劑體系。酶已知在苛刻條件(如較高溫度和存在不相容性的化學(xué)品如強(qiáng)力乳化劑)下變性。與穩(wěn)定化蛋白質(zhì)一起使用并且特別適用于穩(wěn)定化木瓜蛋白酶的兩個示例性防腐劑體系是(a)苯氧乙醇+苯甲酸(b) Diocide (苯氧乙醇+辛二醇+己二醇的摻合物)
實施例本發(fā)明在以下實施例中進(jìn)一步描述，這些實施例不限制在權(quán)利要求書中描述的本發(fā)明范圍。實施例I通過進(jìn)行初級交聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生了保留其蛋白酶活性并且比含有游離木瓜蛋白酶更安全的穩(wěn)定的木瓜蛋白酶產(chǎn)物，在所述初級交聯(lián)反應(yīng)中，使用碳二亞胺I-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)連同N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS) —起，使1%木瓜蛋白酶與卡波姆交聯(lián)。接下來，隨后進(jìn)行二級交聯(lián)反應(yīng)，在所述二級交聯(lián)反應(yīng)中，固定化木瓜蛋白酶與己二亞氨酸二甲酯(DMA)反應(yīng)以進(jìn)一步交聯(lián)了交聯(lián)的木瓜蛋白酶，從而形成穩(wěn)定的交聯(lián)木瓜蛋白酶產(chǎn)物。按重量計，DMA以1%濃度提供并且木瓜蛋白酶以1%濃度提供。產(chǎn)生三個(3)實驗性實驗批次的以上穩(wěn)定化木瓜蛋白酶產(chǎn)物以確定1% DMA在經(jīng)過12周的貯存期后對初級交聯(lián)木瓜蛋白酶的酶活性/穩(wěn)定性的影響。表I中描述了用于開展這些實驗的反應(yīng)條件。表I
權(quán)利要求
1.一種穩(wěn)定化蛋白酶產(chǎn)物，包含 與卡波姆交聯(lián)的蛋白酶，其中所述蛋白酶的伯胺與卡波姆的羧基交聯(lián)并且其中所述蛋白酶的胺經(jīng)胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑進(jìn)一步交聯(lián)。
2.如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述穩(wěn)定化蛋白酶還包含物理穩(wěn)定劑。
3.如權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述物理穩(wěn)定劑是糖或糖聚合物。
4.如權(quán)利要求3所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述穩(wěn)定化蛋白酶包含O.1%和5%之間的物理穩(wěn)定劑。
5.如權(quán)利要求3所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述糖或糖聚合物選自藻酸鈉、海藻糖、甘露醇、甘油、黃原膠、蔗糖和山梨醇。
6.如權(quán)利要求5所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述物理穩(wěn)定劑是藻酸鈉。
7.如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述蛋白酶選自木瓜蛋白酶、無花果蛋白酶、菠蘿蛋白酶和獼猴桃蛋白酶。
8.如權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述蛋白酶是木瓜蛋白酶。
9.如權(quán)利要求7所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其包含O.1%和5%之間的所述蛋白酶。
10.如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑選自己二亞氨酸二甲酯(DMA)、辛二酸雙(磺基琥珀酰亞胺)酯(BS3)、辛二亞氨酸二甲酯(DMS)、庚二亞氨酸二甲酯(DMP)和辛二酸二琥珀酰亞胺酯(DSS)。
11.如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶，其中所述蛋白酶是木瓜蛋白酶并且所述胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑是DMA。
12.如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶產(chǎn)物，還包含防腐劑體系。
13.如權(quán)利要求12所述的穩(wěn)定化蛋白酶產(chǎn)物，其中所述防腐劑體系包含苯氧乙醇和苯甲酸。
14.如權(quán)利要求12所述的穩(wěn)定化蛋白酶產(chǎn)物,其中所述防腐劑體系包含diocide。
15.一種形成穩(wěn)定化蛋白酶的方法，包括 進(jìn)行初級交聯(lián)反應(yīng)以將與所述蛋白酶的伯胺與卡波姆的羧基交聯(lián)；并且 借助胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑在所述蛋白酶上進(jìn)行二級交聯(lián)反應(yīng)。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述初級交聯(lián)反應(yīng)使用交聯(lián)試劑碳二亞胺I-乙基-3 (3- 二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基磺基琥珀酰亞胺實施。
17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中用于進(jìn)行二級交聯(lián)反應(yīng)的交聯(lián)試劑是一種選自己二亞氨酸二甲酯(DMA)、辛二酸雙(磺基琥珀酰亞胺)酯(BS3)、辛二亞氨酸二甲酯(DMS)、庚二亞氨酸二甲酯(DMP)和辛二酸二琥珀酰亞胺酯(DSS)的交聯(lián)試劑。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述用于進(jìn)行二級交聯(lián)反應(yīng)的交聯(lián)試劑是DMA。
19.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述二級交聯(lián)反應(yīng)借助按重量計I%至5 %的胺反應(yīng)性交聯(lián)試劑進(jìn)行。
20.如權(quán)利要求15所述的方法，還包括在進(jìn)行所述二級交聯(lián)反應(yīng)后添加物理穩(wěn)定劑。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述物理穩(wěn)定劑是藻酸鈉。
22.—種治療干燥、老化或受損皮膚的方法，包括施加包含一種或多種如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶的化妝品組合物至所述皮膚。
23.一種傷口或燒傷清創(chuàng)的方法，包括局部施加包含一種或多種如權(quán)利要求I所述的穩(wěn)定化蛋白酶的 組合物。
全文摘要
公開了一項涉及合成用作皮膚護(hù)理劑的源自植物的固定化和交聯(lián)的蛋白酶的發(fā)明。所得到的穩(wěn)定化蛋白酶將因為其固定化性質(zhì)而最少限度地滲透皮膚。該蛋白酶將因其交聯(lián)性質(zhì)并且在某些實施方案中歸因于其借助物理添加劑的穩(wěn)定作用而保留活性。本發(fā)明尤其涉及在局部皮膚應(yīng)用中使用的連接的木瓜蛋白酶產(chǎn)物。
文檔編號A61K8/73GK102802670SQ201180014449
公開日2012年11月28日 申請日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月19日
發(fā)明者M·恰范 申請人:巴斯夫公司