專利名稱：使用抑制c5和備解素相互作用的抗-備解素抗體來抑制交替途徑介導(dǎo)的癥患的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗-備解素抗體劑，其抑制備解素與補體蛋白例如C5或C5b的結(jié)合， 以及這些抗體用于在哺乳動物的預(yù)防和治療環(huán)境中選擇性抑制交替補體途徑功能來預(yù)防、 停止或反轉(zhuǎn)疾病進展。
背景技術(shù)：
補體系統(tǒng)對于針對病原體的宿主防御來說是重要的，并且涉及清除例如病原體、 細(xì)菌細(xì)胞、外源抗原和腫瘤細(xì)胞。由于病原體炎癥和自身免疫疾病交替補體途徑(AP)活化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)C3a，C5a和C5b-9的水平提高相關(guān)于數(shù)種急性和慢性疾病。因此，抑制疾病誘導(dǎo)的AP活化在其中補體活化在疾病病理中發(fā)揮作用的疾病中對于臨床益處是重要的。
補體系統(tǒng)通過三種不同補體途徑來活化經(jīng)典、凝集素和交替途徑。經(jīng)典途徑通過抗原-抗體絡(luò)合物活化，并且是宿主防御所需要的。凝集素途徑是經(jīng)典途徑的變體。交替途徑由外源材料、人工表面、死亡組織、細(xì)菌和死亡酵母細(xì)胞所活化。選擇性抑制交替途徑活化而不影響經(jīng)典途徑的治療策略是治療和AP活化相關(guān)的疾病和病患的疾病相關(guān)性的。在病理條件下，交替途徑的活化產(chǎn)生過敏毒素，包括C3a，C5a和也稱為MAC的組織損壞C5b_9 分子。這些分子通過細(xì)胞活化、炎癥介導(dǎo)因子的釋放和C5b-9的沉積而介導(dǎo)炎癥和組織損壞。巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、血小板、肥大細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的白細(xì)胞趨化反應(yīng)和活化提供炎癥應(yīng)答的證據(jù)。另外，血管滲透性、細(xì)胞溶解和組織損傷過程也在炎癥過程中發(fā)生?；罨募?xì)胞釋放炎癥介導(dǎo)因子，例如TNF-α、IL-1 β、IL_6、IL_8、VEGF、嗜中性粒細(xì)胞、彈性蛋白酶和過氧化物。
已知需要備解素來引發(fā)交替補體途徑，由于其結(jié)合C3b組成AP活化中的必要的第一步驟。備解素高親和性地結(jié)合C3b。備解素-結(jié)合的C3b隨后結(jié)合因子B以形成PC3bB 絡(luò)合物，然后其被因子D切除以形成PC3bBb絡(luò)合物，其中Ba釋放。因為產(chǎn)生C3b和Bb的另外分子，因此它們裝配到PC3bBb絡(luò)合物中形成C5轉(zhuǎn)化酶，這會切除C5為C5a和C5b。所形成的C5表示在和C6，C7，C8和C9相關(guān)時形成C5b_9絡(luò)合物的錨蛋白。血液中的備解素濃度為約5μ g/mL，因此其是僅僅以比因子D更低濃度存在的非-蛋白酶分子。
備解素是交替途徑特異性分子，其存在和功能需要用于交替途徑的傳播。因此，抑制AP活化而不抑制經(jīng)典補體途徑表現(xiàn)為重要治療策略以抑制AP的疾病-引導(dǎo)的活化。因此，通過耗盡備解素、中和備解素或失活備解素來阻斷、抑制或防止AP活化保持為潛在重要的治療策略。
之前未發(fā)現(xiàn)結(jié)合C5或C 5b的抗-備解素抗體。本發(fā)明的抗體可以抑制備解素與C5或C5b的結(jié)合，因此抑制C3a，C3b，C5a，C5b和C5b_9的形成。類似地，可以產(chǎn)生抗-C5 抗體，其將抑制備解素與C5/C5b的相互作用，并且抑制C3a，C3b,C5a, C5b和C5b_9的形成。
由于備解素與C5的結(jié)合親和性弱于本發(fā)明的抗體與備解素的結(jié)合親和性，因此本發(fā)明的抗體可以抑制C5分子與備解素的結(jié)合，并且通過在這樣的環(huán)境中預(yù)防AP活化可以提供治療益處，在該環(huán)境中備解素與C5的結(jié)合是預(yù)存的。使用特異性預(yù)防備解素與C5 的結(jié)合的抗-備解素抗體來治療可以在其中交替補體途徑活化的病理條件下提供顯著的治療益處。
發(fā)明概述
已經(jīng)開發(fā)可以抑制備解素與C3b的結(jié)合的抗體，并且已經(jīng)討論了去聚合備解素聚合物的那些。這些抗體可以抑制C3a，C5a和C5b_9的形成。
本發(fā)明涉及在哺乳動物中抑制交替補體途徑活化的方法。該方法包括下列步驟: 向哺乳動物施用治療有效量的抗-備解素劑，其特異性結(jié)合備解素，并抑制備解素結(jié)合至少一種補體蛋白，例如C5，C5b或C9。
本發(fā)明還涉及抑制備解素結(jié)合例如C5或C5b、因此抑制C3a，C3b，C5a，C5b和 C5b-9形成的抗體。
在本發(fā)明的一個方面中，抗-備解素劑可以結(jié)合至少一種補體蛋白，包括但不限于 C5/C5b, C6, C7, C8 或 C9。
在本發(fā)明的另一方面中，抗-備解素劑可以選自下列組，包括但不限于合成小分子、DNA適體、DNA片段、siRNA、單克隆和多克隆抗體、單克隆和或多克隆抗體的衍生物，它們阻斷備解素結(jié)合C5/C5b，C6，C7，C8或C9中的至少一種，或者類似C5/C5b，C6，C7，C8或 C9中的至少一種中發(fā)現(xiàn)的肽的任何部分。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素劑可以是注冊為PTA_9641(14G11)的抗-備解素抗體。
本發(fā)明的抗-備解素單克隆抗體14G11結(jié)合SEQ ID NO: 15AFAYQKRSGGLCQPCRSPRWSLffS的N端結(jié)構(gòu)域。這些抗體抑制備解素結(jié)合C5b，并且抑制AP活化。
在本發(fā)明的另一方面中，抗-備解素劑可以體內(nèi)或離體施用至哺乳動物，包括人。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素抗體可以是單克隆、多克隆、嵌合、重組、人源化、脫免疫、humaneer化 或全人抗體。
在本發(fā)明的一個方面中，抗-備解素抗體還可以是抗體片段，例如單鏈抗體，IgG, F{ah' ) 2, F(ab), F(ab/ )片段,或截短抗體例如Fe截短抗體。
在本發(fā)明的另一方面中，抗-備解素劑與備解素的結(jié)合比可以為約O. 2 I至約
在本發(fā)明的又一方面中，抑制備解素與至少一種補體蛋白的結(jié)合可以允許在哺乳動物中抑制交替補體途徑而不影響經(jīng)典途徑活化。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素劑降低哺乳動物中游離備解素的水平。
在本發(fā)明的一個方面中 ，抗-備解素劑特異性結(jié)合備解素以抑制備解素與C5的結(jié)合?？贵w可以在其C5結(jié)合位點結(jié)合備解素單體上的抗原表位，并且抑制備解素和C3b的 Olimer的形成，如圖2中所示。
在本發(fā)明的另一方面中，抗-備解素劑特異性結(jié)合備解素以抑制備解素結(jié)合C6， C7, C8 或 C9。
在本發(fā)明的又一方面中，小鼠中產(chǎn)生的抗-備解素抗體可以使用結(jié)合并抑制備解素結(jié)合C5和C9的特異性⑶R域來制備。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素抗體可以抑制也稱為MAC的C5b_9絡(luò)合物的形成。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明提供通過施用治療有效量的抗-備解素劑來改善和過度或不受控制的交替途徑補體活化相關(guān)的疾病或病癥的方法，所述抗-備解素劑特異性結(jié)合備解素以抑制備解素結(jié)合C5。
在本發(fā)明的另一方面中，抗體可以在細(xì)胞或哺乳動物中制備，或者其可以以在哺乳動物中噬菌體展示或重組或天然抗體文庫基因工程化。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素抗體和抗原結(jié)合片段施用至受試者可導(dǎo)致下列中的至少一種抑制備解素結(jié)合C5,抑制備解素結(jié)合C5b,抑制備解素結(jié)合C9,降低C3bBb 的形成，降低C3a和C5a的產(chǎn)生，降低C5b_9絡(luò)合物的形成，降低嗜中性粒細(xì)胞的活化，降低單核細(xì)胞的活化，降低血小板的活化，降低白細(xì)胞-血小板綴合物的形成，降低TNF- α的產(chǎn)生，以及降低嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的產(chǎn)生。因此，抗體或其片段還可以在人血清/血漿中抑制交替途徑依賴性兔紅細(xì)胞胞溶。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明涉及在哺乳動物宿主中抑制交替補體途徑活化的方法，包括施用治療有效量的抗-備解素單克隆抗體，其特異性結(jié)合備解素上的抗原表位， 其中抗原表位涉及C5，C5b或C9結(jié)合。
在另一方面中，本發(fā)明涉及通過在哺乳動物中施用治療有效量的抗體而在哺乳動物中抑制交替補體途徑活化而不抑制經(jīng)典途徑活化的方法，所述抗體特異性結(jié)合備解素的抗原表位，這通過抑制備解素和C5的相互作用而不影響經(jīng)典途徑活化來阻斷交替途徑活化。
在進一步的方面中，本發(fā)明涉及在哺乳動物中抑制交替補體途徑活化而不抑制經(jīng)典途徑活化的方法。該方法包括下列步驟向哺乳動物施用治療有效量的抗體，所述抗體特異性結(jié)合備解素并抑制C5b-9的沉積，這通過抑制備解素和C5的相互作用而不影響經(jīng)典途徑活化來阻斷交替途徑活化。
在另一方面中，本發(fā)明涉及抑制交替補體途徑活化的方法，包括下列步驟向哺乳動物施用治療有效量的抗體，所述抗體通過抑制備解素和C5的相互作用而不影響經(jīng)典途徑活化來阻斷PC3b絡(luò)合物、PC3bB絡(luò)合物和PC3bBb絡(luò)合物的形成。
在又一方面中，本發(fā)明可以提供在出于發(fā)展疾病或病癥的個體中抑制交替補體途徑活化的方法，其中通過向需要的個體施用本發(fā)明的任何特定抗體或本文公開的其抗原結(jié)合片段來交替補體途徑的活化有助于疾病病理學(xué)、加重疾病或引起疾病。
在進一步的方面中，本發(fā)明可以涉及治療由疾病相關(guān)或病理條件介導(dǎo)的交替途徑活化的方法，包括下列步驟向哺乳動物施用治療有效量的抗體或其片段，其特異性結(jié)合備解素，并在病理位點阻斷C9裝配的引發(fā)和抑制C5b-9絡(luò)合物形成。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明提供藥學(xué)上可接受的載體中的抗-備解素劑，所述載體選自干燥可分散粉末；無水乙醇；小膠囊；脂質(zhì)體；霧 狀噴霧劑；和可注射的賦形劑。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素抗體可以在其C5結(jié)合位點特異性結(jié)合備解素單體上的抗原表位，并且可以抑制備解素和C3b聚合物的形成。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明涉及在備解素-敲除小鼠或其他嚙齒動物中制備大鼠或小鼠抗-備解素單克隆抗體的方法。該方法包括下列步驟向小鼠或其他嚙齒動物施用有效量的備解素或其片段以備解素敲除有效量的備解素或其片段(其引起敲除嚙齒動物以產(chǎn)生針對備解素的抗體)。小鼠或其他嚙齒動物可包括人免疫球蛋白基因。片段包括具有C5結(jié)合結(jié)構(gòu)域的肽。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明還涉及分離的抗體或其抗原結(jié)合部分，其結(jié)合人備解素并阻斷C5或C5b結(jié)合備解素。抗體或其抗原結(jié)合部分包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，包含三種CDR的氨基酸序列(SEQID NO I);和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，包括三種CDR的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段可包括由ATCC登錄號PTA-9641保藏的雜交瘤細(xì)胞系制備的抗體的重鏈可變域和輕鏈可變域。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明進一步涉及結(jié)合人備解素的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分。抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域，含有三種CDR的氨基酸序列 (SEQID NO 1)ο
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明進一步涉及結(jié)合人備解素的分離的抗體或其抗原結(jié)合部分?？贵w或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，三種CDR的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)。
在本發(fā)明的又一方面中，抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段還可以抑制在人血清 /血漿中交替途徑依賴性兔紅細(xì)胞胞溶。
在本發(fā)明的一個方面中，本發(fā)明涉及通過下列方式來在哺乳動物中抑制交替途徑補體活化的方法向哺乳動物中施用治療有效量的抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合部分，其以抗體與備解素單體的摩爾比為約O. 2 I特異性結(jié)合備解素以抑制交替途徑補體活化。
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的抗體可以體內(nèi)或離體施用。
在本發(fā)明的又一方面中，抗體或其抗原結(jié)合部分可以特異性結(jié)合備解素上的抗原表位，因此在哺乳動物中抑制交替補體途徑。
在另一方面中，本發(fā)明可以提供治療疾病或病患的方法，其中AP活化發(fā)揮作用。 治療包括下列步驟向哺乳動物施用源自鼠源單克隆抗體(ATCC PTA-9641)的抗備解素抗體或其抗原結(jié)合片段，其在C5或C5b的結(jié)合位點選擇性結(jié)合備解素，并且抑制C3bBb絡(luò)合物、PC3bBb絡(luò)合物、PC5絡(luò)合物、PC9絡(luò)合物和PC3b絡(luò)合物的形成?？?備解素抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有的平衡解離常數(shù)在約InM至約IpM之間。本發(fā)明的抗體可以施用至已經(jīng)或處于發(fā)展疾病或病患風(fēng)險的哺乳動物中，其中AP活化發(fā)揮作用。 在某些實施方案中， 疾病或病患選自本文所述的多種疾病，其中交替途徑在疾病中發(fā)揮病理作用。
附圖簡述


圖1示出備解素在C5b_9的裝配和形成中的假設(shè)作用的圖。
圖2顯示如果備解素可以存在為三聚體時PC5bC3bBb轉(zhuǎn)化酶的形成。
圖3顯示備解素與C3b，C5/C5b和C9的結(jié)合親和性。
圖4顯示本發(fā)明的抗-備解素劑可以抑制rRBC的溶血。
圖5顯示抗-備解素IgG和F(ab' )2高親和性地結(jié)合備解素。
圖6顯示通過抗-備解素抗體抑制備解素與C5b和C9的結(jié)合。
圖7顯示抑制正常人血清中新形成的C3b的AP-依賴性形成。
圖8顯示抑制正常人血清中PC3b絡(luò)合物的AP-依賴性形成。
圖9顯示抑制正常人血清中AP-依賴性Bb形成。
圖10顯示抑制正常人血清中AP-依賴性C5形成。
圖11顯示抑制正常人血清中AP-依賴性C9形成。
圖12顯示抑制正常人血清中AP-依賴性C5b_9形成。
圖13示出SEQIDNO:1-6。
圖14示出SEQIDNO:7-8。
圖15示出SEQIDNO:9-10。
圖16示出SEQIDNO
圖17示出SEQIDNO:13-14。
圖18示出SEQIDNO15o
發(fā)明詳述
如此處使用的，術(shù)語"抗體"或"其抗體片段"是指完整抗體或和完整抗體競爭特異性結(jié)合位點的其結(jié)合片段。結(jié)合片段包括Fab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)(ab' )2，F(xiàn)v，和單鏈抗體。
如本文使用的，術(shù)語"抗-備解素劑"是指小分子、DNA片段、siRNA，DNA的適體、 單克隆和多克隆抗體、單克隆和或多克隆抗體的衍生物，它們阻斷備解素結(jié)合C5或者類似 C5中發(fā)現(xiàn)的肽的任何部分。
如本文使用的，術(shù)語"補體決定區(qū)(CDR)"是指特異性抗體可以結(jié)合的抗體上的區(qū)域。
如本文使用的，術(shù)語"保守序列修飾"是指不顯著影響或改變含有氨基酸序列的抗體的結(jié)合特性的氨基酸修飾。保守修飾可包括氨基酸替換、增加和缺失。
如本文使用的，術(shù)語"抗原表位"是指抗原上的一組三維結(jié)構(gòu)，其中單克隆抗體及其片段將結(jié)合。
如本文使用的，術(shù)語"單克隆"是指這樣的抗體，其結(jié)合氨基酸序列，并且在其靶抗原上具有單一特異性抗原表位。
已知備解素高親和性地結(jié)合C3b。發(fā)現(xiàn)備解素結(jié)合C5和C5b對于備解素功能是重要的，并且特異性抑制備解素結(jié)合C5或C5b的單克隆抗體通過抑制C5b-9形成和抑制C3b 形成的來抑制備解素功能。本發(fā)明的一個實施方案涉及抗-備解素抗體，其可以結(jié)合備解素并抑制備解素結(jié)合C5或C5b。
備解素高親和性地結(jié)合C9，這表明備解素在MAC裝配中的作用。本發(fā)明的抗體可以抑制a)AP活化和b)AP誘導(dǎo)C5b-9的形成。抑制備解素結(jié)合C5/C9可以允許在哺乳動物中抑制交替補體途徑而不影響經(jīng)典途徑活化?？贵w與備解素結(jié)合的比可以為約O. 2 I 至約1. 5 I?？?備解素劑可以防止和/或逆轉(zhuǎn)備解素與C5和C9的結(jié)合。
因此，本發(fā)明的一個實施方案涉及抗-備解素抗體，其可以結(jié)合備解素，并抑制其功能所需要的備解素結(jié)合C5或C5b。通過抑制備解素結(jié)合C5/C5b，抗-備解素抗體可以抑制也稱為MAC的C5b_9絡(luò)合物的形成。
備解素也可以存在為聚合物，例如二聚體、三聚體或四聚體。已經(jīng)開發(fā)備解素結(jié)合 C3b，和抑制備解素結(jié)合C3b的抗體。本發(fā)明可包括可以抑制備解素結(jié)合C5b和C9的抗體。 C5提供錨以形成C5b-9絡(luò)合物，并且C9負(fù)責(zé)形成C5b-9絡(luò)合物的部分。本發(fā)明的抗體可以抑制MAC裝配，并提供在C3轉(zhuǎn)化酶形成位點形成MAC的機理。
在一個例子中，備解素可以存在為三聚體。具有三個備解素分子的三聚體可以包括可被C5b占據(jù)的兩個位點。一個位點將被C3b根據(jù)下式占據(jù)(P)x (C5b)y(C3b)z (Bb)w，其中X = Y+Z, Z = W。PC3bBb是純C3轉(zhuǎn)化酶。P(C5b)C3bBb也是結(jié)合C5b的轉(zhuǎn)化酶。該分子可以切除C3和C5，從而產(chǎn)生一定摩爾數(shù)的C5b。隨著途徑進行以制備MAC，備解素-結(jié)合的C3b能夠被C5b取代。備解素結(jié)合的C5b參與形成C5b-9。備解素也高親和性地結(jié)合 C9,這可進一步穩(wěn)定功能性聚合物C9分子的形成。
本發(fā)明的另一實施方案涉及特異性結(jié)合備解素的抗體，例如抗-備解素抗體，以及這些抗體用于通過抑制備解素結(jié)合C5或C5b而抑制交替補體途徑活化。本發(fā)明的抗-備解素抗體針對或特異性結(jié)合涉及控制備解素功能的備解素上的結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明的抗-備解素抗體或其片段可以通過數(shù)種方法抑制AP活化而不抑制或影響經(jīng)典補體途徑，包括但不限于選擇性抑制備解素結(jié)合C5或C5b，降低攻擊絡(luò)合物C5b-9的膜的形成，降低過敏毒素 (例如C3a和/或C5a)的形成，降低C3b的形成，降低嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和血小板的活化，和/或降低白細(xì)胞聚集體形成。
已知哺乳動物備解素的氨基酸序列。例如人備解素的氨基酸序列以登記 No. AAA36489公開于GenBank數(shù)據(jù)庫。人備解素是469氨基酸蛋白，包括單肽(氨基酸 1-28)和六個非-相同血栓spondin I型重復(fù)(TSR)，均為約60個氨基酸，如下所示氨基酸 80-134 (TSRl)，氨基酸 139-191 (TSR2)，氨基酸 196-255 (TSR3)，氨基酸 260-313 (TSR4)， 氨基酸 318-377 (TSR5)和氨基酸 382-462 (TSR6)。
抗-備解素抗體可以基于它們抑制備解素結(jié)合C5的能力來選擇，然后基于 rRBC (兔紅細(xì)胞)的AP依賴性溶血來選擇。這些抗體可以以約O. 2 I化學(xué)計量比結(jié)合備解素。抑制交替途徑(AP)補體活化可以引起C3a，C5a和C5b-9的水平降低，抑制單核細(xì)胞的活化，抑制單核細(xì)胞-血小板的，并且抑制嗜中性粒細(xì)胞-血小板聚集體。
在本發(fā)明的另一實施方案中，抗-備解素抗體可以抑制備解素結(jié)合C5。在本發(fā)明的進一步實施方案中，抗-備解素抗體可以抑制備解素與C5b的結(jié)合。在本發(fā)明的又一實施方案中，抗-備解素抗體可以抑制備解素結(jié)合C9。在這些實施方案中，抗-備解素抗體可以以下列來影響結(jié)合抗體與備解素約O. 2 I摩爾比、抗體與備解素約1:1摩爾比、抗體與備解素約1. 5 I比和抗體與備解素最大約10 I。
在本發(fā)明的進一步實施方案中，抗-備解素抗體可以高親和性地結(jié)合備解素，可以抑制C5結(jié)合，可以抑制C3a，C5a和C5b_9形成，可以抑制 嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和血小板活化，可以抑制白細(xì)胞血小板綴合物形成，并且可以防止交替補體途徑活化。
在本發(fā)明的又一實施方案中，本發(fā)明的抗體可以對于經(jīng)典途徑活化沒有影響。因此，本發(fā)明的單克隆抗體可以不抑制經(jīng)典途徑。本發(fā)明的單克隆抗體可以通過其結(jié)合C5或 C5b補體蛋白結(jié)合備解素上的抗原表位，所述抗原表位僅涉及AP活化。
在本發(fā)明的另一實施方案中，本發(fā)明的抗體可包含mAb的⑶R1，⑶R2和⑶R3的重鏈和輕鏈或其組合?？勺冎劓湹陌被嵝蛄惺居赟EQID NO :1 (CDRl)，SEQ ID N0:2(CDR2) 和 SEQ ID N0:3(CDR3)?？勺冚p鏈 CDR 示為 SEQ ID NO :4 (CDRl)，SEQ ID NO 5(CDR2)和 SEQ ID N0:6(⑶R3)。因此，在另一實施方案中，本發(fā)明可提供分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，包含可結(jié)合人備解素的CDR區(qū)。
因此，在本發(fā)明的又一實施方案中，本發(fā)明可以提供分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，包含(a)重鏈可變域，包含分別包括SEQ ID勵1，2和3的氨基酸序列的^1 1， ⑶R2和⑶R3 ;以及(b)輕鏈可變域，包含分別包括SEQ ID NO :4，5和6的氨基酸序列的 ⑶R1，⑶R2和⑶R3 ;其中抗體特異性結(jié)合人備解素。
在另一實施方案中，本發(fā)明的抗體可包含重鏈和輕鏈可變域，包含和本文所述抗體的氨基酸序列同源的氨基酸序列，并且其中抗體保持本發(fā)明的抗-備解素抗體的期望功能性能。例如，本發(fā)明可以提供分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，包含重鏈可變域和輕鏈可變域，其中(a)重鏈可變域，包含和SEQ ID NO 1的氨基酸序列至少80%同源的氨基酸序列；(b)輕鏈可變域，包含和SEQ ID NO 9的氨基酸序列至少80%同源的氨基酸序列； 以及(c)抗體特異性結(jié)合人備解素。
在本發(fā)明的各種實施方案中，抗-備解素抗體可以是例如嵌合抗體、人源化抗體、 人抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
在本發(fā)明的另外其他實施方案中，本發(fā)明的抗體的Vh和/或\氨基酸序列可以和本文闡述的序列85%，90%，95%，96%，97%，98%或99%同源。通過突變可以獲得具有Vh 和\區(qū)的抗體，所述區(qū)和上面闡述序列的Vh和\區(qū)具有高同源性例如80%或更高。
在其他實施方案中，本發(fā)明的抗體可包括重鏈可變域，包含重鏈⑶R1、⑶R2和 CDR3序列；和輕鏈可變域，包含輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，其中基于本文所述的優(yōu)選抗體這些CDR序列中的一種或多種包含特定氨基酸序列，例如NM4540或其保守修飾，并且其中抗體保持本發(fā)明的抗-備解素抗體的期望功能性能。
在本發(fā)明的另一實施方案中，抗-備解素單克隆抗體的一個例子可以標(biāo)記為 14G11?？?備解素抗體14G11可以結(jié)合備解素，并可以抑制備解素結(jié)合C5和C9 ;C3a，C5a 和C5b-9形成；AP C3轉(zhuǎn)化酶形成；和細(xì)胞活化。備解素結(jié)合C5，并且可在病理位點引導(dǎo)形成C5b-9絡(luò)合物。本發(fā)明的抗-備解素劑可結(jié)合備解素，并且抑制備解素結(jié)合C5或C5b，并因此可抑制AP活化。
本發(fā)明的抗-備解素單克隆抗體14G11可以結(jié)合SEQ ID NO : 15的N-端結(jié)構(gòu)域。 這些抗體可以抑制備解素與C5b的結(jié)合，并因此抑制AP活化。
本發(fā)明的抗體可以是單克隆，多克隆，嵌合，重組，人源化，脫免疫，Humaneer化 或全人抗體。抗體還可以是抗體片段，例如單鏈抗體，IgG, F(ab/ )2, F(ab), F(ab/ )片段，或截短抗體(例如Fe截短抗體)?？贵w可以在細(xì)胞或哺乳動物中制備，或者其可以以在哺乳動物中噬菌體展示或重組或天然抗 體文庫基因工程化。抗體可以體內(nèi)或離體施用。抗體可以缺少能力以在人中活化Fe Y受體以及缺少免疫原性。
本發(fā)明的中和抗體和抗原結(jié)合片段施用至受試者可以導(dǎo)致下列中的至少一種抑制備解素結(jié)合C5，抑制備解素結(jié)合C5b，抑制備解素結(jié)合C9，降低C3bBb的形成，降低C3a和 C5a的產(chǎn)生，降低C5b-9絡(luò)合物的形成，降低嗜中性粒細(xì)胞的活化，降低單核細(xì)胞的活化，降低血小板的活化，降低白細(xì)胞-血小板綴合物的形成，降低TNF-α的產(chǎn)生，以及降低嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的產(chǎn)生。因此，抗體或其片段還可以在人血清/血漿中抑制交替途徑依賴性兔紅細(xì)胞胞溶。
人源化單克隆抗-備解素抗體列于序列SEQ ID NO :7，SEQ ID NO :8，SEQ ID NO 9，SEQIDN0 10, SEQ ID NO :11，SEQ ID NO :12，SEQ IDNO 13 和 SEQ ID NO 14 中，其可以含有上面列出的CDR序列中的至少一種。另外，人源化單克隆抗-備解素抗體可以含有本發(fā)明的CDR序列的至少一種的任何組合。
治療抗體
目前接受的治療抗體包含鼠源，嵌合，靈長目源化和人源化抗體?？乖Y(jié)合片段通常認(rèn)為是抗體的單鏈可變域，F(xiàn)ab, Fab2' , Fe結(jié)構(gòu)域中截短和scFv。源自這些蛋白的嵌合和人源化片段含有是結(jié)合的主要肽段的CDR。在可以結(jié)合相同靶的各種抗體的CDR中的同源性可為50-70 %，70-80 %，和80-95 %，或在⑶R的一些例子中為100 %。這些抗體可以通過各種技術(shù)來制備，例如CDR移植、在非人靈長類中產(chǎn)生人抗體、在小鼠中產(chǎn)生人抗體、敲除小鼠技術(shù)以及可以用于制備這些抗體的其他方法。
而且，來自其他物種的一種或多種人抗體可以通過展示類型技術(shù)而產(chǎn)生，包括但不限于噬菌體展示、逆轉(zhuǎn)錄病毒展示、核糖體展示和其他這些技術(shù)。所得分子可以經(jīng)歷另外突變，例如親和成熟術(shù)，這些技術(shù)是熟知的。
抗-備解素抗體或其片段可以用于疾病的預(yù)防和治療性治療的治療方法，所述疾病直接或間接由交替補體途徑成分介導(dǎo)，和/或由本文所述的交替補體途徑活化后產(chǎn)生的因子介導(dǎo)。
抗體治療的另外標(biāo)準(zhǔn)
本發(fā)明的功能活性可以通過單克隆抗體抑制交替補體途徑的能力來測量。例如，本發(fā)明的抗-備解素抗體可以表現(xiàn)出下列性能中的一種或多種(I)抑制備解素結(jié)合 C5(或C5b) ；(2)降低PC3bBb形成/或C3bBb形成，(3)降低游離備解素的濃度，(4)降低 C3b的形成，(5)降低C3a，C5a和C5b_9的形成，(6)降低單核細(xì)胞⑶Ilb表達(dá)，(7)降低嗜中性粒細(xì)胞⑶Ilb表達(dá)，⑶降低血小板⑶62P表達(dá)，(9)降低白細(xì)胞-血小板綴合物形成，(10)降低腫瘤壞死因子α (TNF-α)以及(11)降低嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶形成。
雙特異性抗體、免疫毒素、放射標(biāo)記的療法、肽療法的產(chǎn)生、基因療法(特別是體內(nèi))、反義療法，并且小分子可以覆蓋在本發(fā)明中?？梢援a(chǎn)生雙特異性抗體，包含例如a) 兩種抗體，一種和備解素具有特異性并且另一種和一起綴合的的第二分子具有特異性； ( )單一抗體，其具有和備解素具有特異性的一鏈與和第二分子具有特異性的第二鏈； 或刪)具有和備解素以及其他分子具有特異性的單鏈抗體。這些雙特異性抗體可以使用本領(lǐng)域熟知的技 術(shù)來產(chǎn)生。
本發(fā)明的抗-備解素抗體或其片段可以用于疾病的預(yù)防和治療性治療的治療方法，所述疾病直接或間接由交替補體途徑成分介導(dǎo)，和/或由本文所述的交替補體途徑活化后產(chǎn)生的因子介導(dǎo)?？?備解素劑
在另一實施方案中，本發(fā)明可以提供抑制備解素-依賴性補體活化的副作用的方法?？?備解素抑制劑可以以這樣的量施用，該量在活體中有效地抑制備解素依賴性補體活化。在本發(fā)明的該方面的實施中，代表性備解素抑制劑可包括抗-備解素抗體，其可抑制備解素結(jié)合C5和C5b，并且可通過抑制和備解素有關(guān)的C5來抑制C3a，C5a和C5b_9的產(chǎn)生。備解素抑制劑可以單獨使用作為首要療法，或者和其他方法聯(lián)合作為補充以增加其他治療的益處。
抑制劑可以是小分子、適體、DNA片段、表示⑶R結(jié)構(gòu)域的小肽和/或siRNA。這些抑制劑抑制備解素結(jié)合C5，C9以及和C5相關(guān)的C3b。
適體
可以制備適體，其高親和性地結(jié)合備解素，并且是以特異地良好限定的三維形狀折疊的單鏈寡核苷酸，這允許它們和折疊的三維蛋白靶相互作用。不同于單克隆抗體，未觀察到適體是免疫原性。由于核算不會典型地被人免疫系統(tǒng)識別為外源試劑，因此適體通常不會引發(fā)抗體應(yīng)答。適體的三維結(jié)構(gòu)在適體和其靶蛋白之間產(chǎn)生較大的相互作用的表面積，從而使適體理想地適于阻斷蛋白-蛋白相互作用。而且，由于適體和細(xì)胞表面和外部發(fā)現(xiàn)的蛋白相互作用，因此適體不會不得不穿越細(xì)胞膜，這可以使得更容易遞送有效量的適體至靶。適體是化學(xué)穩(wěn)定的，并且可以指定為在人體中抵抗代謝降解。使用標(biāo)準(zhǔn)定義的化學(xué)修飾和綴合，適體可以特異性工程化以具有最佳半衰期或保持有效濃度的能力。適體被化學(xué)合成，從而允許以更低的成本快速大規(guī)模和可重現(xiàn)地制備?？?備解素抗體
在本發(fā)明的一些實施方案中，備解素抑制劑可以包含抗-備解素抗體，其通過抑制備解素結(jié)合C5和C5b來選擇性抑制交替途徑。這些抗體可以包括多克隆、單克隆或衍生自任何產(chǎn)生抗體的哺乳動物的重組抗體，并且可以是多特異性、嵌合、人源化、抗-獨特型和抗體片段?？贵w片段可包括Fab，F(xiàn)ab'，F(xiàn)(ab)2，F(xiàn)(ab' )2，F(xiàn)v片段，scFv片段以及本文進一步描述的單鏈抗體。本發(fā)明中所述的抗體是可以抑制備解素與C5，C5b和C9結(jié)合的那些。
抗-備解素抗體的制備
抗備解素抗體的制備可以通過使用完整備解素、備解素多肽和/或使用抗原備解素抗原表位-負(fù)載的肽(例如備解素多肽的一部分)來完成?？梢苑蛛x備解素肽和多肽， 它們用于作為天然多肽、重組或合成肽、以及催化失活的重組多肽來提高抗體。本發(fā)明的該實施方案可提供使用轉(zhuǎn)基因小鼠株獲得的抗-備解素抗體。用于制備抗備解素抗體的抗原還包括融合多肽。
多克隆抗體
使用熟知的方法，通過下列方式可以制備針對備解素的多克隆抗體使用備解素多肽或其免疫原性部分來免疫動物以產(chǎn)生多克隆抗體。多克隆抗體典型地在動物中提高， 例如犬、山羊、雞、大鼠、小鼠、馬、牛、兔、豚鼠或綿羊?；蛘?，本發(fā)明的抗-備解素抗體還可以源自低于人的靈長類和/或通過epitomics或cell DNA/RNA methodologies銷售的技術(shù)來制備。然后含有免疫原活性的抗體的血漿使用標(biāo)準(zhǔn)方法從這些免疫的動物中制備。
單克隆抗體
在本發(fā)明的一些實施方案中，備解素抑制劑可以是高特異性抗-備解素單克隆抗體，其針對抗原表位導(dǎo)向。如本文使用的，修飾劑"單克隆"表示抗體的特性 為得自抗體的基本上同源的群。單克隆抗體可以使用任何技術(shù)獲得，所述技術(shù)通過在培養(yǎng)基中的連續(xù)細(xì)胞系來提供制備抗體分子，例如雜交瘤法。
人單克隆抗體可以使用轉(zhuǎn)基因小鼠來獲得，所述小鼠已經(jīng)工程化以對應(yīng)于抗原刺激而產(chǎn)生特異性人抗體。
在本發(fā)明的一個實施方案中，用于本發(fā)明方法的抗-備解素單克隆抗體可以以 < ΙΟΟρΜ、優(yōu)選< IOpM和最優(yōu)選< 2pM的結(jié)合親和性結(jié)合備解素。嵌合/人源化抗體
嵌合抗體是非人的人源化形式，例如鼠源抗體，這含有源自非人免疫球蛋白的最少序列。人源化單克隆抗體通過下列制備將非人動物例如小鼠，來自小鼠免疫球蛋白的重可變鏈和輕可變鏈的CDR轉(zhuǎn)移到人可變結(jié)構(gòu)域。典型地，人抗體的殘基然后在非人配體的框架區(qū)中被取代。本發(fā)明的人源化抗體可包括結(jié)合CDR3區(qū)的備解素。另外，本發(fā)明的抗-備解素抗體的Fe部分可被取代以制備IgA或IgM以及人IgG抗體。重組抗體
抗-備解素抗體還可以使用重組方法來制備。重組方法。例如，人抗體可以使用人免疫球蛋白表達(dá)庫(例如得自 Stratagene, Corp. ,La Jolla, Calif 或 Bioatla, San Diego, CA)制備以產(chǎn)生人抗體的片段(VH，VL，F(xiàn)V，F(xiàn)d，F(xiàn)ab*F(ab' ) 2)，其然后使用制備嵌合抗體的那些方法類似的技術(shù)來用于構(gòu)建全人抗體。
免疫球蛋白片段
用于本發(fā)明方法的備解素抑制劑可包括完整免疫球蛋白分子以及相對熟知的片段，包括 Fab，F(xiàn)ab'，F(xiàn) (ab) · sub. 2，F(xiàn) (ab' ) · sub. 2 和 Fv 片段，scFv 片段，雙體，線性抗體， 單鏈抗體分子和抗體片段形成的多特異性抗體。
蛋白水解(例如通過常規(guī)方法而胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化整個抗體)可以獲得抗體片段。例如，抗體片段可以通過抗體和胃蛋白酶的酶切除制備以提供F(ab' )2。該片段可進一步使用硫醇還原劑來切除以產(chǎn)生Fab'單價片段。在另一例子中，切除反應(yīng)可以使用源自二硫鍵連接的切除的巰基的阻斷基團來進行。在又一例子中，使用胃蛋白酶的酶切除直接產(chǎn)生兩種單價Fab片段和Fe片段。
在本發(fā)明的一些實施方案中，缺少Fe區(qū)的抗體片段的使用可以優(yōu)選用于避免活化經(jīng)典補體途徑,這在Fe結(jié)合Fe Y受體時引發(fā)?？梢灾苽銶oAb，其通過多種方法避免Fe Y 受體相互作用。例如，單克隆抗體的Fe區(qū)可使用蛋白酶部分消化(例如無花果蛋白酶消化)來化學(xué)除去，從而產(chǎn)生例如抗原結(jié)合抗體片段例如Fab或F(ab)2。在另一例子中，不結(jié)合Fe Y受體的人Y 4 IgG同位型可以在本文所述的人源化抗體的構(gòu)建過程中使用。缺少 Fe結(jié)構(gòu)域的抗體、單鏈抗體和抗原-結(jié)合結(jié)構(gòu)域還可以使用本文所述重組技術(shù)來工程化。
另外，可以產(chǎn)生單肽鏈，其可以結(jié)合備解素特異性分子，其中重鏈和輕鏈Fv區(qū)連接。Fv片段可以通過肽接頭連接以形成單鏈抗原結(jié)合蛋白(scFv)。
另外藥劑
包含備解素抑制劑的組合物和方法可包括一種或多種另外治療藥劑。這些另外藥劑可以提高備解素抑制劑的活性，或者以增加性或協(xié)同性方式來提供的相關(guān)治療功能。例如，一種或多種備解素抑制劑可以聯(lián)合一種或多種消炎和/或鎮(zhèn)痛劑來施用。
抗體的制備
依照本發(fā)明的抗體可以使用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)方法在動物例如小鼠中制備。本發(fā)明的單克隆抗體可轉(zhuǎn)化為人源化版本用于治療用途。全人抗體還可以通過本領(lǐng)域熟知的方法產(chǎn)生?？贵w可以按照合同或固定制成人源化，全人，humaneer化，嵌合，重組以用于治療應(yīng)用。特定優(yōu)選的細(xì)胞系通過下列方式選擇確定細(xì)胞系具有高表達(dá)水平，并且產(chǎn)生具有構(gòu)成性備解素結(jié)合性能的抗體。
本發(fā)明的抗體還可以使用備解素敲除嚙齒動物例如小鼠制備以產(chǎn)生有效的阻斷抗體。由于這些嚙齒動物不含備解素基因，因此嚙齒動物將視注射備解素作為免疫原性抗原，而不是系統(tǒng)中存在的正常蛋白?；谧鳛榭乖⑸涞膫浣馑氐淖R別，嚙齒動物將產(chǎn)生針對其的抗體。使用敲除嚙齒動物的益處允許增加產(chǎn)生抗體的可能性，取決于使用的嚙齒動物，所述抗體是抗_大鼠，抗-小鼠和抗_任何其他物種。
抗體可以表達(dá)為四聚體，含有兩個輕鏈和兩個重鏈，為單獨重鏈，輕鏈Fab，F(xiàn)ab'， F(ab' )2和Fv，或者為單鏈抗體，其中重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域通過間隔劑連接。
對于一些應(yīng)用，非-1gG抗體可以是有用的。例如，如果需要多價抗體絡(luò)合物，可以使用IgM和IgA抗體。嵌合,人源化和人抗體典型地通過重組表達(dá)來制備。
或者，抗體編碼序列可以以轉(zhuǎn)基因引入以將基因組加入轉(zhuǎn)基因動物，并且隨后使用本領(lǐng)域熟知的方法在轉(zhuǎn)基因動物中表達(dá)。
重組抗體可以是鼠源類IgG1, IgG2a, IgG2b, IgM, IgA, IgD 或 IgE,人類 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD或IgE,或其組合或片段。在一個例子中，嵌合抗體文庫主要包括IgG抗體或Fab抗體片段。
治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的 方法 可通常包括下列步驟向需要的哺乳動物受試者施用有效量或治療有效量的本發(fā)明的抗體以降低交替補體途徑活化后產(chǎn)生的多肽的水平的方法；降低C5b-9 或膜攻擊絡(luò)合物(MAC)的水平；降低過敏毒素的水平；降低新形成的C3b，P，Bb和C5b-9的水平的方法；以及治療交替補體途徑介導(dǎo)的疾病或病患。
本發(fā)明的抗體的"有效量"或"治療有效量"是使交替補體途徑活化后產(chǎn)生的多肽的產(chǎn)生和/或水平有效地降低至少約20 %，至少約30 %，至少約40 %，至少約50 %，至少約60%，至少約70%，至少約80%，至少約90%或更高的量。
抗-備解素抗體可以以和藥學(xué)上可接受的賦形劑的制劑施用至個體。本領(lǐng)域已知大量藥學(xué)上可接受的賦形劑，并且無需在本文詳細(xì)討論。
在由本發(fā)明提供的方法中，本發(fā)明的抗體可以使用能夠?qū)е缕谕闹委熜Ч娜魏伪憷绞絹硎┯弥了拗?。因此，抗體可以引入多種制劑以用于治療施用。在一個例子中， 本發(fā)明的抗體可以通過聯(lián)合合適的藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑配制為藥物組合物，并且可以配制為固體、半固體、液體或氣體形式的制劑，例如片劑、膠囊劑、粉末劑、顆粒劑、油膏劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑和氣霧劑。
這樣，本發(fā)明的抗體的施用可以以多種施用來實現(xiàn)，包括口服、頰部、直腸、胃腸道、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、透皮、透鼻、肺部、氣管內(nèi)等施用。
在藥物劑型中，所述藥劑可以以它們藥學(xué)上可接受的鹽的形式來施用，或者它們還可以獨立地、或以合適的締合和聯(lián)合其他藥學(xué)上有效化合物來施用。下列方法和賦形劑僅僅是示例性的，并且絕不限制。
用于注射或靜脈內(nèi)施用的單位劑型可包含在組合物中的抑制劑作為無菌水、生理鹽水或另外藥學(xué)上可接受的載體中的溶液。
本發(fā)明的抗體可以使用某些頻率和時限施用至個體，以實現(xiàn)期望的治療效果。例如，本發(fā)明的抗體可以例如以下列方式施用1月1次、I月2次、I月3次、每隔一周(qow)、 每周I次(qw)、每周2次(biw)、每周3次(tiw)、每周4次、每周5次、每周6次、每隔一天 (qod)、每天(qd)、每天2次(qid)、或每天3次(tid)、或基本上連續(xù)或連續(xù)，時限為約I天至約I周、約2周至約4周、約I月至約2月、約2月至約4月、約4月至約6月或更長。
聯(lián)合療法
在一些實施方案中，抗-備解素抗體可以和第二治療劑在聯(lián)合療法中以有效量施用。
疾病病癥
在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的抗體可以用于在患有急性或慢性病理損傷的受試者(包括人)中通過體內(nèi)交替途徑抑制補體活化。本發(fā)明可以聯(lián)合使用下列疾病、病患、 損傷和治療，包括但不限于
體外循環(huán)疾病和病患心肺分流術(shù)后炎癥，手術(shù)后肺部障礙，心肺分流術(shù)，血液透析，白細(xì)胞清除術(shù)，血漿除去法，血小板除去法，肝素-引起的離體LDL沉降(HELP)，灌注后綜合征，體外膜式人工氧合法(ECMO)，心肺分流術(shù)(CPB)，灌注后綜合征，系統(tǒng)炎癥應(yīng)答以及多種器官失效。
心血管疾病和病患急性冠動脈綜合征，Kawaski病(動脈炎)，高安氏動脈炎,過敏性紫癜腎炎，血管滲漏綜合征，經(jīng)皮冠狀動脈干預(yù)(PCI)，心肌梗塞形成，急性心肌梗塞后缺血-再灌注損傷,動脈粥樣硬化,血管炎,免疫復(fù)合體血管炎,和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相關(guān)的血管炎(也稱為惡性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡-相關(guān)的血管炎，敗血癥，動脈炎，動脈瘤,心肌病,擴張性心肌病,心臟手術(shù),外周血管病癥,腎血管性病癥,心血管病癥,腦血管病癥，腸系膜/腸道血管病癥，糖尿病血管病，靜脈性氣栓(VGE)，韋格內(nèi)氏肉芽腫癥，肝素-引起的體外膜式人工氧合法以及白塞氏綜合征。
骨/肌與骨骼的疾病和病患關(guān)節(jié)炎,炎性關(guān)節(jié)病,非-炎性關(guān)節(jié)病,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，青年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，系統(tǒng)性青年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，骨質(zhì)疏松癥，全身性紅斑狼瘡(SLE)，白塞氏綜合征以及斯耶格倫氏綜合征。
移植疾病和病患移植排斥，異種移植，移植物抗宿主病，器官或移植物的異種移植，器官或移植物的異體移植以及超急性排斥。
眼睛/眼部疾病和病患濕和干年齡相關(guān)的黃斑變性(AMD)，脈絡(luò)膜新生血管 (CNV)，視網(wǎng)膜損傷，糖尿病視網(wǎng)膜病，糖尿病視網(wǎng)膜毛細(xì)管病，眼睛的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞真菌病，葡萄膜炎，糖尿病視網(wǎng)膜水腫，糖尿病視網(wǎng)膜病，糖尿病視多膜微動脈瘤，病理性近視， 視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞(CRVO)，角膜新生血管形成，視網(wǎng)膜新生血管形成，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)，眼睛的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞真菌病和普爾夏氏視網(wǎng)膜病。
血/血液疾病和病患膿毒癥，系統(tǒng)性炎癥應(yīng)答綜合征(SIRS)，失血性休克，急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，災(zāi)難性抗-磷脂綜合征(CAPS)，冷凝集素病(CAD)，自身免疫性血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)，內(nèi)毒血癥，溶血性尿毒癥(HUS)，非典型溶血性尿毒癥綜合征(aHUS)，陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥(PNH)，敗血癥，敗血病性休克，鐮狀細(xì)胞血癥， 溶血性貧血，嗜酸性白細(xì)胞增多綜合征和抗-磷脂綜合征(APLS)。
呼吸/肺疾病和病患 哮喘，韋格內(nèi)氏肉芽腫癥，輸血-相關(guān)的急性肺部損傷 (TRALI)，抗腎小球基底膜抗體(古德帕斯徹氏病)，嗜酸細(xì)胞性肺炎，過敏性肺炎，過敏性支氣管炎，支氣管擴張，反應(yīng)性氣道病綜合征，呼吸道合胞病毒(RSV)感染，副流感病毒感染，鼻病毒感染，腺病毒感染，變應(yīng)性支氣管肺曲菌病(ABPA)，肺結(jié)核，肺寄生蟲病，成人型呼吸窘迫綜合征，慢性阻塞性肺病(COPD)，類肉瘤病，氣腫，支氣管炎，囊性纖維變性，間質(zhì)性肺炎，急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，輸血-相關(guān)的急性肺部損傷，局部缺血/再灌注急性肺部損傷，棉屑沉著病，肝素-引起的體外膜式人工氧合法，過敏性休克和石棉-引起的炎癥。
中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)/神經(jīng)疾病和病患多發(fā)性硬化(MS)，重癥肌無力(MG)，假麻痹性重癥肌無力，多發(fā)性硬化,格-巴二氏綜合征，Miller-Fisher綜合征，中風(fēng)，中風(fēng)后再灌注，阿耳茨海默氏病，變集運動神經(jīng)病(MMN)，脫髓鞘，亨延頓氏舞蹈病，夏科氏綜合征 (ALS)，帕金森氏病，視乳頭變性疾病(DDD)，腦膜炎，來自腦膜炎的腦神經(jīng)損害，變異克雅氏病(vCJD)，特發(fā)性多神經(jīng)炎，腦/腦創(chuàng)傷(包括但不限于出血，炎癥和水腫)和神經(jīng)性疼痛。
創(chuàng)傷-引起的損傷和疾患失血性休克,低血容量性休克,脊髓損傷,腦損傷,腦創(chuàng)傷，腦缺血再灌注，挫傷，傷愈，重度燒傷和凍傷。
腎部疾病和病患腎再灌注損傷，鏈球菌感染后腎小球性腎炎(PSGN)，古德帕斯徹氏病，膜性腎炎，貝格爾氏病/IgA腎病，膜增生性腎小球性腎炎，膜狀腎小球性腎炎，膜增殖性腎小球性腎炎(腎小球膜毛細(xì)血管腎小球性腎炎)，急性感染后腎小球性腎炎，冷球蛋白性腎小球性腎炎，狼瘡腎炎，埃諾克-多恩萊因炎和腎皮質(zhì)壞死(RCN)。
器官的再灌注損傷和疾患包括但不限于心臟、腦部、腎臟和肝臟。
生殖和泌尿生殖疾病和病患痛性膀胱疾病和病患，感官膀胱疾病和病患，自發(fā)流產(chǎn)，男性和女性不孕不育病，孕期疾病，胎兒母體耐性，子癇前期，泌尿生殖炎癥，胎盤功能障礙的疾病和病患，流產(chǎn)慢性非細(xì)菌性膀胱炎和間質(zhì)性膀胱炎的疾病和病患。
皮膚/皮疾病和病患燒傷，牛皮癬，特應(yīng)性皮炎(AD)，嗜酸細(xì)胞性海綿層水腫，蕁麻疹，熱損傷，類天皰瘡，后天性表皮松解大疤性皮膚棘層松解，自身免疫大皰性皮膚病，大皰性類天皰瘡，硬皮病，血管性水腫，遺傳性血管神經(jīng)水腫(HAE)，貓眼瘡，妊娠皰疹,斯耶格倫氏綜合征，皮肌炎以及皰疹樣皮炎。
胃腸道疾病和病患克羅恩氏病,腹腔疾病/谷朊-敏感性腸病,惠普耳氏病,腸缺血，炎癥性腸病和潰瘍性結(jié)腸炎.
內(nèi)分泌疾病和病患淋巴瘤性甲狀腺腫，幼稚淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎，壓力焦慮，和影響泌乳刺激素的其他疾病，生長或胰島素-樣生長因子，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放，胰腺炎，艾迪生氏病，糖尿病包括但不限于I型和2型糖尿病，I型糖尿癥,類肉瘤病,糖尿病視多膜毛細(xì)管病，非-肥胖糖尿病(IDDM)，血管病，IDDM或2型糖尿病的神經(jīng)病或視網(wǎng)膜病并發(fā)癥以及胰島素耐性。
惡性腫瘤的治療源自化療和放射療法的疾病和病患。
通過引用并入
本文引用的所有文獻(xiàn)，包括專利、專利申請、論文、課本等以及本文引用的文獻(xiàn)，在它們并非已經(jīng)并入的情況，通過引用的方式全部并入本文 。另外，下列文獻(xiàn)也通過引用的方式全部并入本文，包括這些文獻(xiàn)中引用的文獻(xiàn)
下面描述和例子詳細(xì)描述本發(fā)明的某些優(yōu)選實施方案，并且描述發(fā)明人所涵蓋的最佳使用方式。然而，將意識到，無論文本中可出現(xiàn)多么詳細(xì)的內(nèi)容，本發(fā)明可以以多種方式來實施，并且本發(fā)明應(yīng)該依照所附權(quán)利要求書及其任何等同形式來理解。實施例
除非另外說明，否則所有試劑都是最高可得等級。所有補體蛋白、替換和經(jīng)典途徑緩沖液、檢測抗體和紅細(xì)胞來自Complement Technologies (Tyler, TX)或Quidel Corporation (San Diego, CA)。流式細(xì)胞計量術(shù)抗體來自 BD Biosciences, San Jose, CA。TMB 底物來自 Kirkegaard & Perry Limited, Gaithersberg, MD。所有次級抗體來自 American Qualex, San Clemente, CA, BSA 和其他試劑都來自 Sigma-Aldrich, St Louise, MO。
ELISA 板讀數(shù)器(SpectraMax 190and 250)來自 Molecular Devices,并且流式細(xì)胞計是FACS Calibur0 Varity 3D程序用于數(shù)據(jù)分析，曲線擬合使用MicroCal Origin程序來進行。使用SectraMax,Molecular Devices運行溶血動力學(xué)測定,ELISA板來自Corning Costar, Lowell, MA0
抗-備解素抗體產(chǎn)生于NovelMed Thrapeutics,并且對應(yīng)的細(xì)胞系儲存于ATCC。 F(ab)2和Fab使用合適的酶法來產(chǎn)生，并且使用凝膠電泳法來檢驗純度。
實施例1
備解素結(jié)合補體蛋白C3b，C5/C5b和C9
已知備解素高親和性地結(jié)合C3b。我們證實備解素高親和性地結(jié)合C5/C5b和C9， 并且最小地或不使備解素結(jié)合C6，C7和C8。C3和C5都存在為完整蛋白，然而當(dāng)?shù)孜锝Y(jié)合時，它們分別轉(zhuǎn)化為C3b和C5b。迄今為止沒有公開的報道證實備解素結(jié)合C5和/或C5b。 通過抑制備解素與C5/C5b的結(jié)合，我們證實阻斷交替途徑的活化。以每孔2. O μ g/50 μ I 聚苯乙烯微量滴定板包覆人C3，C5，C6，C7，C8和C9于磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)中在4°C下過夜。在吸氣蛋白溶液后，所述孔使用含有1%牛血清清蛋白(BSA)的PBS在室溫下阻斷2 小時。沒有補體蛋白包覆的孔作為背景對照。增加備解素在阻斷溶液中各種濃度的等分部分，并且使板孵育I小時。結(jié)合C3b，C5/C5b，C6，C7，C8和C9的備解素通過下列方式測量 以在阻斷溶液中1: 2000稀釋增加檢測抗體山羊抗-人備解素多克隆抗體。使板在室溫下孵育I小時。在使用PBS洗滌板后，加入過氧化物酶-綴合的兔抗-山羊抗體(在阻斷溶液中1: 2000稀釋)，并且允許孵育I小時。將板再次使用PBS徹底沖洗，并且加入100 μ I 的3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物。在25°C下孵育30分鐘后，TMB的反應(yīng)通過加入100 μ I的磷酸來淬滅，并且在微板讀數(shù)器中在450nm處讀取板。如圖3中所示，備解素結(jié)合底物，所述底物分別以2. 6，6. 2和15. 9nM的高親和性值結(jié)合C3b，C5/C5b和C9。對于 C6，C7和C8蛋白沒有或極少觀察到結(jié)合。
實施例2
抗-備解素IgG和F(ab' )2抑制交替途徑(AP)依賴性兔血紅細(xì)胞(rRBC)胞溶
該紅細(xì)胞胞溶測定基于rRBC表面上末端補體絡(luò)合物的形成。因此，rRBC胞溶。在 700nm處光散射的進展性降低是紅細(xì)胞胞溶的直接量度。典型地，rRBC在含有5m M MgCl2 的明膠佛羅拿緩沖液中、在正常人血清中孵育。在這些條件下，rRBC的表面在正常人血清中引發(fā)交替途徑的活化。交替途徑活化導(dǎo)致在rRBC的表面上形成C5b-9絡(luò)合物。期望抑制C5b-9絡(luò)合物形成的藥劑抑制細(xì)胞胞溶。為了評價抗-備解素抗體及其片段的效果，各種濃度的IgG，F(xiàn)(ah' )2和Fab和正常人血清(10% NHS)在AP緩沖液中在37°C下孵育， 固定濃度的兔紅細(xì)胞在能夠在700nm處讀取的溫度控制的ELISA板讀數(shù)器中。在700nm處測量的光散射的進展性降低(由于完整細(xì)胞的胞溶)是時間的函數(shù)。記錄數(shù)據(jù)，并且使用SpectraMax 190板讀數(shù)器和SoftMax軟件分析。在各濃度的IgG,F(ab' )2和Fab處計算總抑制，并且結(jié)果表示為未胞溶對照的百分比。各濃度處的數(shù)據(jù)使用MicroCal Origin軟件在S形圖中繪制。如圖4中所示，IgG和F(ab)2在正常人血清中抑制rRBC的AP依賴性溶血，抑制紅細(xì)胞胞溶的IC5tl為ΙΟηΜ?？贵w能夠以約IOnM的IC5tl抑制胞溶。
抗-備解素單克隆抗體不抑制經(jīng)典途徑活化
本發(fā)明的單克隆抗體不抑制經(jīng)典途徑，這是宿主防御的合適功能所需要的?？贵w增敏的綿羊紅細(xì)胞和I %或10%正常人血清在含有鈣(5mMCaCl2/MgCl2)緩沖液的明膠佛羅拿緩沖液中孵育。抗體增敏的綿羊細(xì)胞活化經(jīng)典途徑。結(jié)果，C5b-9形成在紅細(xì)胞表面上并引起細(xì)胞胞溶。我們在1%和10%正常人血清中檢測抗體。在兩種條件下，NM9401抑制紅細(xì)胞胞溶。在典型測定中，紅細(xì)胞在CP緩沖液中的1/10正常人血清中孵育以允許發(fā)生補體活化。由于CP活化，C5b-9形成在紅細(xì)胞表面上，從而引起細(xì)胞胞溶。在700nm處測量的光散射的進展性降低(由于細(xì)胞胞溶)是時間的函數(shù)?？箓浣馑豂gG以1%和10%血清濃度不會抑制抗體增敏的綿羊細(xì)胞的胞溶。如預(yù)計的，沒有血清對照不顯示對細(xì)胞胞溶具有作用。這些結(jié)果表明抗-備解素抗體能夠選擇性抑制交替補體途徑而不影響經(jīng)典途徑活化。
實施例3
抗-備解素IgG和F(ab' )2高親和性地結(jié)合人備解素
抗-備解素IgG和F(ab)2與人備解素的親和性在低pM范圍內(nèi)?？贵w和其片段以類似的親和性結(jié)合備解素。
聚苯乙烯微量滴定板包覆磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)中的人(每孔2. O μ g/50 μ I) 備解素在4°C下過夜。在吸氣備解素溶液后，將板使用含有1%牛血清清蛋白(BSA) (Sigma-Aldrich, St. Louis, Mo.)的PBS在室溫下阻斷I小時。沒有肽或備解素包覆的孔作為背景對照。將單克隆抗-備解素抗體IgG，F(xiàn)ab2和Fab在阻斷溶液中的等分部分加入備解素包覆的板，并且允許孵育I小時以使結(jié)合發(fā)生。在室溫下孵育I小時后，將板使用 PBS沖洗5次，并且和1: 2000稀釋的檢測過氧化物酶-綴合的山羊抗-小鼠單克隆抗體檢測。在該孵育后，將板沖洗，并且使用TMB試劑鑒定結(jié)合的過氧化物酶。如圖5中所示， IgG和F(ab)2高親和性地結(jié)合備解素。
實施例5
抗-備解素Fab2抑制備解素和C5/C5b與C9的相互作用
我們證實備解素高親和性地結(jié)合C5/C5b和C9。在該實驗中，我們證實抗-備解素 Fiah1 ) 2以8至20nM的親和性抑制備解素與C5/C5b和C9的相互作用。聚苯乙烯微量滴定板以每孔2. O μ g/50 μ I在磷酸鹽緩沖的鹽水(PBS)中包覆人C5和C9在4°C下過夜。在吸氣蛋白溶液后，將孔使用含有1%牛血清清蛋白(BSA)的PBS在室溫下阻斷2小時。沒有補體蛋白包覆的孔作為背景對照。將50nM的備解素的等分部分和各種濃度的在阻斷溶液中抗-備解素F(ab' )2孵育到C5和C9包覆的板上去，并且使這些板在室溫下孵育I小時。 通過增加在阻斷溶液中1: 2000稀釋的檢測抗體山羊抗-人備解素多克隆抗體測量備解素與C5/C5b和C9的結(jié)合。使板在室溫下孵育I小時。在使用PBS洗滌板后,加入過氧化物酶-綴合的兔抗-山羊抗體(在阻斷溶液中1: 2000稀釋)，并 且允許孵育I小時。將板再次使用PBS徹底沖洗，并且加入100 μ I的3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物。在25°C孵育30分鐘后，通過加入100 μ I的磷酸來淬滅TMB的反應(yīng)，在微板讀數(shù)器中在450nm 處讀取板。如圖6中所示，抗-備解素Fab2抑制備解素與C5和C9的相互作用，從而表明備解素與C5和C9的相互作用對于抑制交替途徑是重要的。在約20nM的抗-備解素的情況下觀察到完全抑制，從而表明抗體與備解素的比為O. 2 I。
實施例6
抗備解素IgG及其片段抑制交替補體途徑的C3轉(zhuǎn)化酶(PC3bBb)的形成，這通過備解素，C3b，Bb, C9, C9和C5b-9的沉積來測量。
交替補體途徑在正常人血清中被來自Salmonella Typhosa的脂多糖活化。我們已經(jīng)利用該示例來證實本發(fā)明的抗-備解素抗體是否將抑制PC3bBb的形成。我們測量在抗-備解素抗體及其片段存在和不存在下因子P，C3b，Bb, C5b，C9和C5b-9的沉積。使用合適的抗體檢測C3和C5轉(zhuǎn)化酶的形成。在抗-備解素抗體存在下，注意到C3和C5轉(zhuǎn)化酶形成的劑量依賴性抑制。在典型測定中，聚苯乙烯微量滴定板的孔以2μ g/δΟμ I在PBS 中包覆LPS(來自Salmonella Typhosa的脂多糖)過夜。將孔和PBS中的1% BSA孵育以阻斷孔中的未占據(jù)的位點。在室溫下進行2小時阻斷并且使用PBS沖洗后，AP緩沖液中的正常人血清(10%)混合各種濃度的抗體及其片段。將混合物孵育到LPS包覆的孔上去。 使板在37°C下孵育2小時以允許發(fā)生補體AP活化。在孵育后，將板使用PBS徹底洗滌，并且使用合適抗體來檢測C3轉(zhuǎn)化酶組分。我們使用在阻斷溶液中1: 2000的兔抗-人C3c、 在阻斷溶液中1: 2000的山羊抗-人P、以及在阻斷溶液中1: 500的山羊抗-人因子Bb 和在阻斷溶液中1: 2000的HlPO綴合的抗-人C5b-9檢測C3b。板和它們各自抗體一起在室溫下孵育I小時。在孵育后，將板使用PBS沖洗，并且使用1: 2000(對于C3b)過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗-兔檢測結(jié)合的抗體，在阻斷溶液中1: 2000的過氧化物酶標(biāo)記的兔抗-山羊用于備解素檢測。將所有板使用TMB顯色，之后使用PBS徹底洗滌。使用IM亞磷酸淬滅藍(lán)色。C3b(圖7)，因子P (圖8)，Bb (圖9)，C5b (圖10)和C9 (圖11)以及MAC(圖 12) 一起存在指示AP C3轉(zhuǎn)化酶形成。圖8證實因子P沉積的劑量依賴性抑制，圖9證實 Bb的劑量依賴性沉積，圖7證實C3b形成的劑量依賴性沉積，以及圖12證實通過抗-備解素抗體的C5b-9沉積的劑量依賴性沉積。這些數(shù)據(jù)提供抗-備解素單克隆抗體抑制轉(zhuǎn)化酶形成和抑制AP活化的直接證據(jù)。
實施例7
鼠源單克隆抗體指派的抗備解素14G11的DNA克隆和測序
通過RT-PCR和DNA測序來分析細(xì)胞系14G11中所含的免疫球蛋白特異性mRNA。 結(jié)果證實，細(xì)胞系轉(zhuǎn)錄IgGl Kappa抗體。除了主要轉(zhuǎn)錄,獲得兩種變體非-翻譯的kappa 轉(zhuǎn)錄體(假基因)。通過逆轉(zhuǎn)錄使用寡(dT)引物從RNA產(chǎn)生RT-PCR-cDNA。設(shè)定PCR反應(yīng)以 分析和擴增細(xì)胞系的可變和恒定重和輕區(qū)，并且寡-dT引物用于恒定重區(qū)和全長輕鏈， 以及特定引物用于可變重和可變輕區(qū)。cDNA反應(yīng)使用TdT拖尾以允許寡dT特異性引物用于產(chǎn)生全-延伸的(在5'端)克隆。將純化的插入物克隆到pBluescript中，并且從各反應(yīng)中挑出克隆。分離小量制備DNA，限制性內(nèi)切酶譜和陽性克隆通過測序來分析。下面可以看到所得測序數(shù)據(jù)。匪14G11. 9的測序結(jié)果14G11. 9重鏈結(jié)果-重鏈可變域匪14G11. 9的核苷酸序列
GACAAGTGTGCAGCCATGGGCAGGCTTACTTCTTCATTCCTGCTACTGATTGTCCCTGCATATGTCCTGTCCCAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTAGGCTGGATTCGTCAGCCATCAGGGAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTGGTGGGATGATGTCAAGAGCTATAACCCAGCCCTGAAGAGCCGACTGACTATCTCCAAGGATACCTCCAGTAGCCAGGTATTCCTCAGGATCGCCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCGAATTGGAGATGGTTATTACTCTTTTGACTATTGGGGCCAAGGCACCACTCTCACAGTCTCCTCAGCCAAAACGACACCCCCATCTGTCTATCCACTGGCCCCTGGATCTGCTGCCCAAACTAACTCCATGGTGACCCTGGGATGCCTGGTCAAGGGCTATTTCCCTGAGCCAGTGACAGTGACCTGGAACTCT
NovelMed重鏈可變域NM14G11. 9的氨基酸序列
MGRLTSSFLLLIVPAYVLSQVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVGWIRQPSGKGLEWL AHIWWDDVKSYNPALKSRLTISKDTSSSQVFLRIASVDTADTATYYCARI⑶GYYSFDYWGQGTTLTVSSAKTTPPS VYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWN
(突出區(qū)域分別涉及CDR2，CDR3和CDR 4)。
NovelMed kappa鏈可變域NM14G11. 9的核苷酸序列
GGAAATGCATCACACCAGCATGGGCATCAAAATGGAGTCACAGATTCAGGTCTTTGTATTCGTGTTTCT CTGGTTGTCTGGTGTTGACGGAGACATTGTGATGACCCAGTCTCACAAATTCATGTCCACATCAGTAGGAGACAGGG TCAGCATCTCCTGCAAGGCCAGTCAGGATGTGAGTGATGCTCTAGCCTGGTTTCAACAGAAACCGGGACAATCTCCT AAACTACTGATTTACTCGCCATCCTACCGGTACACTGGGGTCCCTGATCGCTTCACTGGCAGTGGATCTGGGACGGA TTTCACTTTCACCATCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAACATTATAGTACTCCGT GGACGTTCGGTGGAGGCACCAAACTGGAGATCAAACGGGCTGATGCTGCACCAACTGTATCC
Kappa輕鏈的氨基酸序列
MHHTSMGIKMESQIQVFVFVFLWLSGVD⑶IVMTQSHKFMSTSVGDRVSISCKASQDVSDAVAWFQQKP GQSPKLLIYSPSYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPWTFGGGTKLEIKRADAAPTV
(突出區(qū)域分別涉及CDR I, CDR 2和CDR 3)。
權(quán)利要求
1.一種在哺乳動物中抑制交替補體途徑活化的方法，所述方法包括下列步驟向哺乳 動物施用抗_備解素劑或其抗原結(jié)合片段，所述抗_備解素劑或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié) 合備解素，并通過抑制備解素與至少一種補體蛋白的結(jié)合來抑制所述交替補體途徑活化。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述至少一種補體蛋白選自C5/C5b、C6、C7、C8或C9。
3.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑抑制P_C3bBb雜聚物的形成。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB形 成、PC3bBb 形成和 PC5bC3bBb 形成的形成，其中(P) x (C5b) y (C3b) z (Bb) w 和 X = Y+Z，Z = W。
5.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑是合成小分子。
6.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑是適體或DNA片段。
7.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗-備解素劑是siRNA。
8.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑是抗_備解素抗體或其抗原結(jié)合片段。
9.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗-備解素抗體能夠特異性結(jié)合備解素上的抗原 表位。
10.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗-備解素抗體注冊為PTA-9641(14G11)。
11.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是嵌合、重組、人源化、脫免疫、 humaneer化或全人抗體。
12.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是IgG或抗原結(jié)合片段Fab、 Fab'、Fab2、scFv、Fv、CDRl、CDR2 或 CDR3。
13.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑體內(nèi)或離體施用于哺乳動物。
14.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述哺乳動物是人。
15.權(quán)利要求1所述的方法，其中抗-備解素劑或其抗原結(jié)合片段與備解素的比為約 0. 2 : 1 至約 1. 5 1。
16.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑抑制交替途徑而不會抑制經(jīng)典途徑。
17.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗_備解素劑降低哺乳動物中游離備解素的水平。
18.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述抗-備解素劑設(shè)置在藥學(xué)上可接受的載體中以施 用至哺乳動物。
19.權(quán)利要求16所述的方法，其中所述抗-備解素劑的藥學(xué)上可接受的載體選自干 燥可分散粉末；無水乙醇；小膠囊；脂質(zhì)體；霧狀噴霧劑；或可注射的賦形劑。
20.一種在哺乳動物中抑制交替補體途徑活化的方法，所述方法包括向哺乳動物施 用抗_備解素劑，所述抗_備解素劑特異性結(jié)合備解素，并通過抑制備解素與C5的結(jié)合來 在所述哺乳動物中抑制所述交替補體途徑活化。
21.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制P_C3bBb雜聚物的形成。
22.權(quán)利要求21所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB 形成、PC3bBb 形成和 PC5bC3bBb 形成的形成，其中X = Y+Z，Z = I
23.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑是合成小分子。
24.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑是適體或DNA片段。
25.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑是siRNA。
26.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑是抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合 片段。
27.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抗-備解素劑能夠特異性結(jié)合根據(jù)SEQID NO 15 (AFAYQKRSGGLCQPCRSPRWSLWS)的備解素上的抗原表位。
28.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抗-備解素抗體注冊為PTA-9641(14G11)。
29.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是嵌合、重組、人源化、脫免疫、 humaneer化或全人抗體。
30.權(quán)利要求26所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是IgG或抗原結(jié)合片段Fab、 Fab'、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2 或 CDR3。
31.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑體內(nèi)或離體施用于哺乳動物。
32.權(quán)利要求31所述的方法，其中所述哺乳動物是人。
33.權(quán)利要求20所述的方法，其中抗-備解素劑或其抗原結(jié)合片段與備解素的比為約 O. 2 : I 至約 I. 5 I。
34.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制交替途徑而不會抑制經(jīng)典途徑。
35.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑降低哺乳動物中游離備解素的水平。
36.權(quán)利要求20所述的方法，其中所述抗-備解素劑設(shè)置在藥學(xué)上可接受的載體中以 施用至哺乳動物。
37.權(quán)利要求36所述的方法，其中所述抗-備解素劑的藥學(xué)上可接受的載體選自干 燥可分散粉末；無水乙醇；小膠囊；脂質(zhì)體；霧狀噴霧劑；或可注射的賦形劑。
38.一種在哺乳動物中抑制炎癥應(yīng)答的方法，所述方法包括施用抗-備解素抗體或其 抗原結(jié)合片段，所述抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合備解素，并通過抑制備 解素與選自C6、C7、C8和C9的補體蛋白的結(jié)合來抑制所述交替補體途徑活化。
39.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段抑制 P-C3bBb雜聚物的形成。
40.權(quán)利要求39所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB 形成、PC3bBb 形成和 PC5bC3bBb 形成的形成，其中(P) x (C5b) y (C3b) z (Bb) w 和 X = Y+Z，Z = I
41.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素抗體能夠特異性結(jié)合備解素上的抗 原表位。
42.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素抗體注冊為PTA-9641(14G11)。
43.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是嵌合、重組、人源化、脫免疫、 humaneer化或全人抗體。
44.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是IgG或抗原結(jié)合片段Fab、 Fab'、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2 或 CDR3。
45.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素抗體體內(nèi)或離體施用于哺乳動物。
46.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述哺乳動物是人。
47.權(quán)利要求38所述的方法，其中抗體或其抗原結(jié)合片段與備解素的比為約O.2 I 至約1. 5 :1。
48.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗體抑制交替途徑而不會抑制經(jīng)典途徑。
49.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素劑降低哺乳動物中游離備解素的水平。
50.權(quán)利要求38所述的方法，其中所述抗-備解素劑設(shè)置在藥學(xué)上可接受的載體中以施用至哺乳動物。
51.權(quán)利要求50所述的方法，其中所述抗-備解素劑的藥學(xué)上可接受的載體選自干燥可分散粉末；無水乙醇；小膠囊；脂質(zhì)體；霧狀噴霧劑；或可注射的賦形劑。
52.一種改善和過度或不受控制的交替途徑補體活化相關(guān)的疾病或病癥的方法，所述方法包括向哺乳動物施用治療有效量的抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合部分特異性結(jié)合備解素，以抑制備解素與C5的結(jié)合和抑制交替途徑活化。
53.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制P_C3bBb雜聚物的形成。
54.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述抗-備解素劑抑制C3b形成、PC3b形成、PC3bB 形成、PC3bBb 形成和 PC5bC3bBb 形成的形成，其中(P)x(CSb)y(CSb)z(Bb)1^P X = Y+Z，Z = I
55.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段能夠特異性結(jié)合備解素上的抗原表位。
56.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體已經(jīng)在ATCC注冊為PTA-9641。
57.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是嵌合、重組、人源化、脫免疫、 humaneer化或全人抗體。
58.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體是IgG或抗原結(jié)合片段Fab、 Fab'、Fab2、scFv、Fv、CDR1、CDR2 或 CDR3。
59.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體體內(nèi)或離體施用于哺乳動物。
60.權(quán)利要求59所述的方法，其中所述哺乳動物是人。
61.權(quán)利要求52所述的方法，其中抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段與備解素的比為約 O. 2 I 至約1. 5 I。
62.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗體或其抗原結(jié)合部分特異性結(jié)合備解素，以在所述哺乳動物中抑制所述交替補體途徑。
63.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段降低哺乳動物中游離備解素的水平。
64.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述抗-備解素抗體或其抗原結(jié)合片段設(shè)置在藥學(xué)上可接受的載體中以施用至哺乳動物。
65.權(quán)利要求64所述的方法，其中所述抗-備解素劑的藥學(xué)上可接受的載體選自干燥可分散粉末；無水乙醇；小膠囊；脂質(zhì)體；霧狀噴霧劑；或可注射的賦形劑。
66.小鼠抗體，包含SEQID NO 1的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
67.小鼠抗體，包含SEQID NO :2的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
68.鼠源抗體，包含含有SEQID NO :1的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列和含有SEQ ID NO :2的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列。
69.抗體，包含SEQ ID NO :1、2、3、4、5 或 6。
70.嵌合抗體，包含SEQ ID NO :1 和 SEQ ID NO :2。
71.人源化抗體，包含SEQID NO :1、2、3、4、5或6中的至少一種。
72.人源化抗體的可變結(jié)構(gòu)域，包含選自SEQID NO :1、SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3 的重鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
73.人源化抗體的可變結(jié)構(gòu)域，包含選自SEQID NO :4、SEQ ID NO 5和SEQ ID NO 6 的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域氨基酸序列。
74.鼠源、嵌合或人源化抗-備解素抗體，包含大于50%同源性的SEQIDN0:l、2、3、4、 5和6的可變結(jié)構(gòu)域序列。
75.鼠源、嵌合或人源化抗-備解素抗體，包含大于約60%同源性的SEQID N0:l、2、 3、4、5和6的可變結(jié)構(gòu)域序列。
76.鼠源、嵌合或人源化抗-備解素抗體，包含大于約70%同源性的SEQID N0:l、2、3、4、5和6的可變結(jié)構(gòu)域序列。
77.鼠源、嵌合或人源化抗-備解素抗體，包含大于約80%同源性的SEQID NO :1、2、3、4、5和6的可變結(jié)構(gòu)域序列。
78.鼠源、嵌合或人源化抗-備解素抗體，包含大于約95%同源性的SEQID NO :1、2、3、4、5和6的可變結(jié)構(gòu)域序列。
79.多肽，包含包括SEQID NO :1和2的氨基酸序列或其部分。
80.抗體，所述抗體競爭抗-備解素鼠源抗體克隆14G11或人源化抗-備解素抗體。
全文摘要
一種在本發(fā)明的哺乳動物中抑制交替補體途徑活化的方法，包括施用一定量的抗體和/或其片段，所述抗體和/或其片段特異性結(jié)合備解素，并抑制備解素與補體蛋白例如C5的結(jié)合以在本發(fā)明的哺乳動物中抑制交替補體途徑。
文檔編號A61K9/127GK103068396SQ201180022197
公開日2013年4月24日 申請日期2011年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月2日
發(fā)明者R·班薩爾 申請人:諾沃姆德治療公司