專利名稱：催產(chǎn)素樣分子的新用途及相關(guān)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種物質(zhì)及其組合物在治療肥胖和/或胰島素抵抗方面的用途。特別地，本發(fā)明涉及一種物質(zhì)及其組合物在治療代謝綜合征方面的用途。
背景技術(shù)：
根據(jù)2005年世界衛(wèi)生組織(WHO)在全球范圍內(nèi)的估計，成年人中至少有4億人表現(xiàn)出體重超標(biāo)，且他們中的大多數(shù)患有與超重相關(guān)的疾病。WHO估計到2015年將有23億成年人超重并且有7億成年人為過度肥胖。肥胖癥與增加的游離脂肪酸和甘油三酯的循環(huán)血漿水平有關(guān)，這會在如骨骼肌的周緣組織中產(chǎn)生胰島素抵抗。與健康個體相比，在肥胖癥患者中，脂肪組織是增大的并且表現(xiàn)出激素例如瘦素(I印tin)和脂連素(adiponectin)的脂肪因子分泌類型的改變，而瘦素和脂連素在控制體重、胰島素敏感度、炎癥、血管發(fā)生和脂 質(zhì)代謝方面發(fā)揮著作用。已知的是，體重超標(biāo)特別是肥胖病與降低的胰島素敏感性直接相關(guān)，胰島素敏感性通常通過進一步刺激胰臟胰島素分泌防止血糖水平的增長來進行補償。因此，已知增長的過剩脂肪，特別是在腹部區(qū)域增長的過剩脂肪為能夠發(fā)展成為2型糖尿病的胰島素抵抗發(fā)展的重要危險因子。增長的外周胰島素抵抗定義為在葡萄糖攝入和抑制肝臟葡萄糖產(chǎn)生方面，組織對胰島素的有效反應(yīng)減少，首先導(dǎo)致β細胞開始試圖忽略增長的胰島素需求并導(dǎo)致其功能作用的改變以及數(shù)量的減少，引起高血糖癥的功能性障礙并表現(xiàn)為2型糖尿病。進一步的，肥胖癥是代謝綜合征主要組成成員之一，特征為一組包括軀干性肥胖癥并伴有選自升高的血清甘油三酯、低水平的高密度膽固醇(HDL)、升高的血壓以及由胰島素抵抗引起的升高的空腹血糖中的至少兩個其他的病癥的綜合征。死于心臟病發(fā)作或中風(fēng)(stroke)的代謝綜合征的患者是沒有綜合征的人群的約兩倍，患有心臟病發(fā)作或中風(fēng)的代謝綜合征患者是未患綜合征的人群的約三倍。另外，患有代謝綜合征的人具有五倍的高風(fēng)險發(fā)展為2型糖尿病。60%以上的代謝綜合征患者將發(fā)展成為2型糖尿病患者，50%的將發(fā)展為心血管疾病患者，35%以上將患有急性的心肌梗塞，并且接近20%的將患中風(fēng)。預(yù)計世界上20-25%的成年人患有代謝綜合征。進一步地，肥胖癥是發(fā)展成為例如某些癌癥的進一步紊亂的重要危險因子。因此，對開發(fā)新的應(yīng)對肥胖癥和/或胰島素抵抗的治療方法有巨大的健康和經(jīng)濟需求。由于目前沒有對這種多要素的綜合征的有效治療方法并且這種綜合征為進一步的疾病如嚴(yán)重的心血管疾病和糖尿病并發(fā)癥的根源，因此同樣有開發(fā)代謝綜合征治療方法的需求。催產(chǎn)素(OT)是垂體后葉激素九肽(Cys-Tyr-IIe-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly(SEQ ID N0:1))，在中央和外周形成并發(fā)揮多種生理作用。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)，OT基因在下丘腦室旁核(PVN)和視上核(SON)的神經(jīng)元中表達。這些核中的大細胞OT神經(jīng)元投射于神經(jīng)垂體并且為系統(tǒng)性釋放OT的主要來源，然而PVN的小細胞OT神經(jīng)元為中樞投射(project centrally)。OT在若干器官中進行外周合成,例如卵巢,睪丸,胸腺，腎臟和心臟。截至目前為止，已克隆了單獨的OT受體(0TR)，其在包括脂肪組織的多種組織中表達。與其產(chǎn)生和結(jié)合位點的廣泛的分布一致，OT被證實參與多種中樞和末梢過程(Gimpl等，2001，Pysiol. Rev.，81，629-683)。OT目前被用于刺激子宮收縮而誘導(dǎo)分娩，控制胎盤娩出后的產(chǎn)后出血并催乳(Pitocin , Parke-Davis, Morris Plains, N. J.和Syntocinon⑧、Novatis Pharmaceuticals, EastHanover, N. J. )。OT的使用被報道同樣能夠增加雌性的性反應(yīng)并且利于治療雄性性功能障礙(Pfaus，2009, J. Sex Med. Jun.，6，1506-33)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及意料不到的發(fā)現(xiàn)用OT對高脂肪飲食導(dǎo)致的肥胖癥模型進行給藥會導(dǎo)致劑量依賴性的體重增加的降低，由于脂肪代謝的改善，特別是脂肪組織中脂解作用和脂肪酸β氧化的增加，并伴隨葡萄糖耐受性和胰島素抵抗的改善，而這些改變不依賴于食物攝入。本發(fā)明的第一方面提供了一種衍生物，該衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催 產(chǎn)素激動劑(oxytocin agonist),所述衍生物用于抑制或治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病。本發(fā)明的第二方面涉及一種衍生物在制備用于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗疾病的藥物制劑中的用途，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑。本發(fā)明的第三方面涉及一種治療或改善選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病或紊亂的方法，所述方法包括用治療有效量的衍生物對有需要的受試者進行給藥，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑或它們的藥物制劑。根據(jù)本發(fā)明的第四方面涉及一種藥物制劑，該藥物制劑含有選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑的衍生物與至少一種有利于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病或紊亂的輔助藥劑(co-agent)的組合，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。


圖I顯示了如實施例I所述的在高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖癥的大鼠模型中進行中樞OT給藥對體重增加的作用。A:生理鹽水輸注的對照組(·)和OT輸注大鼠(0)14天治療期的累積體重增加(5-7周高脂肪飲食，45%)。B :體重增加差值以及C :生理鹽水輸注的對照組(黑色柱)和OT輸注大鼠(1.6nmol/d)(白色柱)14天治療期的累積食物攝入量。D:食物效能(14天實驗期中體重增加與累積食物攝入量的比值)。圖2顯示了如實施例I所述的在高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖癥的大鼠模型中進行中樞OT給藥對脂質(zhì)代謝的作用。A :生理鹽水輸注的對照組(黑色柱)和OT輸注大鼠(I. 6nmol/d)(白色柱)的附睪白脂肪組織(eWAT)中參與甘油三脂攝入、脂肪生成和脂解作用的酶的mRNA表達。B :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)和OT輸注大鼠(I. 6nmol/d)(白色柱)的附睪白脂肪組織(eWAT)中參與脂肪酸β氧化的PPAR-α和酶的mRNA表達。圖3顯示了如實施例I所述的在高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖癥的大鼠模型中進行中樞OT給藥對胰島素抵抗的作用。A :葡萄糖差值以及B :處理前C4)(3周高脂肪飲食，45% ；n=16只大鼠)，處理結(jié)束(7周高脂肪飲食，45% ;每個處理的n=6)，生理鹽水輸注的對照組(·)和OT輸注大鼠( ) (1. 6nmol/d)在腹膜內(nèi)GTT (1. 5g/kg)過程中測量的胰島素水平差值。C :HFD誘導(dǎo)的過度肥胖生理鹽水輸注的對照組(黑色柱)和OT輸注大鼠(白色柱)(14天的腦室內(nèi)(i. c. V. ) OT輸注(1. 6 nmol/d))的正常血糖-高胰島素鉗夾(euglycemichyperinsulinemic clamp)過程中葡萄糖輸注率(GIR)。D&E :HFD誘導(dǎo)的過度肥胖生理鹽水輸注的對照組(黑色柱)和OT輸注大鼠(白色柱)在不同類型的肌肉(D):紅四頭肌(QR)、白四頭肌(QW)、紅腓腸肌(GR)、白腓腸肌(GW)、比目魚肌(S)、脛骨肌(Tib)(14天i.e. v. OT輸注(I. 6nmol/d))中正常 血糖-高胰島素鉗夾過程測量的胰島素刺激的葡萄糖利用指數(shù)，以及在不同類型的脂肪組織庫(E):腹股溝WAT (iWAT)和附睪WAT (eWAT)中正常血糖-高胰島素鉗夾過程測量的胰島素刺激的葡萄糖利用指數(shù)。圖1-3 :數(shù)值為每組6-7只動物的平均值土SEM。與對照組相比，*P〈0. 05廣P〈0. 01。圖4顯示了如實施例2所述的體外脂肪細胞中OT對脂質(zhì)代謝的直接作用。A :用生理鹽水(黑色柱)或5μΜ 0T(白色柱)溫育24小時后，分化的3T3-L1脂肪細胞中脂質(zhì)代謝相關(guān)的酶的mRNA表達(不同系列培養(yǎng)的3T3L1脂肪細胞進行3次獨立的實驗)B :用生理鹽水(黑色柱)或5μΜ 0T(白色柱)溫育24小時后，分化的3T 3L1脂肪細胞中的OEA含量(不同系列培養(yǎng)的3T3L1脂肪細胞進行2次獨立的實驗)。圖5顯示了如實施例3所描述的對高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖癥大鼠模型進行外周OT給藥的影響。A :生理鹽水輸注對照組(·)、0T輸注大鼠( ) (50nmol/d)和(▲)成對飼養(yǎng)(pair-fed) (PF)對照組14天治療期的累積體重增加(5_7周高脂肪飲食，45%)。B:生理鹽水輸注對照組(黑色柱)，OT-輸注大鼠(50nmol/d，白色柱)和PF對照組(灰色柱)在14天處理期中的累積食物攝入量。C :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)，0T輸注大鼠(50nmol/d,白色柱)和PF對照組(灰色柱)在10天(DlO)處理期中身體成分參數(shù)(脂肪和除去脂肪的身體質(zhì)量(lean body masses))。D :在10天處理期開始(DO)和結(jié)束(DlO)之間的身體成分參數(shù)的差值。E :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)、0T-輸注大鼠(50nmol/d，白色柱)和PF對照組(灰色柱)中不同脂肪墊重量(腹股溝WAT、iWAT、附睪WAT、eWAT)與體重的比值。數(shù)值為每組7-8只動物的平均值土SEM。與對照組相比，乍〈O. 05。F :生理鹽水輸注對照組、OT輸注大鼠(50nmol/d)和PF對照組新分離的附睪(eWAT)和腸系膜(mWAT)脂肪墊的照片。圖6顯示了進行外周OT給藥對如實施例4所描述的高脂肪飲食(HFD)誘導(dǎo)的胰島素抵抗的作用。A :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)、OT輸注大鼠(50nmol/天)(白色柱)和成對飼養(yǎng)(PF)對照組(灰色柱)中胰島素抵抗的激素模型分析(HOMA-IR)。B :在正常血糖-高胰島素鉗夾過程中，HFD誘導(dǎo)的過度肥胖的生理鹽水輸注對照組(黑色柱)、0T輸注大鼠(50nmol/天)(白色柱)和成對飼養(yǎng)(PF)對照組(灰色柱)的葡萄糖輸注率(GIR)。數(shù)值為每組7-9只動物的平均值土SEM。與對照組相比，*P<0. 05。圖7顯示了進行㈧中樞和⑶外周OT給藥對如實施例I和5所描述的高脂肪飲食(HFD)誘導(dǎo)的肥胖癥大鼠模型的血漿甘油水平的作用。A :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)和OT輸注大鼠(1.6nmol/天)(白色柱)的血漿甘油水平。B :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)、0T輸注大鼠(50nmol/天)(白色柱)和PF對照組(灰色柱)的血漿甘油水平。數(shù)值為每組6-8只動物的平均值土SEM。圖8顯示了進行外周卡貝催產(chǎn)素給藥對如實施例6所描述的高脂肪飲食(HFD)誘導(dǎo)的肥胖癥的作用。A :生理鹽水輸注對照組(·)、卡貝催產(chǎn)素輸注大鼠(5nmol/d) (Δ)和相關(guān)的成對飼養(yǎng)(PF)對照組(▲)、卡貝催產(chǎn)素輸注大鼠(50nmol/d) ( O )和相關(guān)的PF對照組( )的14天治療期的累積體重增加(5-7周高脂肪飲食，45%)。B :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)、卡貝催產(chǎn)素輸注大鼠(5nmol/d，白色柱)以及相關(guān)的PF對照組(灰色柱)、卡貝催產(chǎn)素輸注大鼠(50nmol/d，有斜線的白色柱)和相關(guān)的PF對照組(有斜線的灰色柱)的14天實驗期中累積食物攝入量。C :生理鹽水輸注對照組(黑色柱)、卡貝催產(chǎn)素輸注大鼠(5nmol/d,白色柱)及相關(guān)的PF對照組(灰色柱)、卡貝催產(chǎn)素輸注大鼠(50nmol/d，有斜線的白色柱)以及相關(guān)PF對照組(有斜線的灰色柱)的10天處理期的身體脂肪比例的變化。數(shù)值為每組7-8只動物的平均值土SEM。與對照組相比，乍〈0.05。圖9表示了用于實施例I所描述的qPCR的引物序列。
具體實施例方式本文涉及的術(shù)語“催產(chǎn)素衍生物”包括天然的或合成的，治療性的或預(yù)防性的，肽片段，肽的類似物，以及化學(xué)修飾的衍生物或與催產(chǎn)素的親本分子表現(xiàn)出相似的活性或基·本上保持了催產(chǎn)素的親本分子的活性的活性肽的鹽。例如，催產(chǎn)素衍生物包括催產(chǎn)素或化學(xué)修飾的催產(chǎn)素肽類似物，例如，通過羧基端的酰胺化作用(-NH2),在肽序列中D氨基酸的使用，小非肽基部分的整合，以及氨基酸自身的修飾(例如側(cè)鏈R-基團的烷基化作用或酯化作用)(模擬肽(P印tidomimetics))。特別地，術(shù)語催產(chǎn)素衍生物包括“催產(chǎn)素類似物”，催產(chǎn)素類似物表示多肽與天然的人催產(chǎn)素基本上同源，但由于一個或更多的缺失、插入或置換，催產(chǎn)素類似物具有不同于天然的人催產(chǎn)素的氨基酸序列。基本上同源意指與如上所述的天然氨基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%的一致性的變體氨基酸序列。兩個氨基酸序列或兩個核酸序列的百分比一致性可以通過目測和/或數(shù)學(xué)計算確定，或更簡單的通過利用已知的用于序列比對的計算機程序比對序列信息，例如Clustal package version 1.83。催產(chǎn)素類似物可以含有至少有一個保守取代氨基酸的序列，表示給定氨基酸殘基被有相似生化特征的殘基所取代。催產(chǎn)素衍生物可以包括，但并不限于WO 2008/042452或EP 1928484中所描述的衍生物，將這些內(nèi)容通過整體引用的方式合并入本文，例如4-蘇氨酸-I-羥基脫氨催產(chǎn)素(4-threonine-l-hydroxydeaminooxytocin)>4-絲氨酸，8_異亮氨酸_催產(chǎn)素、9_脫氨催產(chǎn)素、7-D-脯氨酸-催產(chǎn)素及其脫氨類似物、(2，4- 二異亮氨酸)-催產(chǎn)素、脫氨催產(chǎn)素類似物、長效催產(chǎn)素類似物、I-脫氛-I-單氧甲酸基-E12_Tyr (OMe) ]-OT (dCOMOT) (l-deamino-l-monocarba-E12-Tyr(OMe)]-OT(dCOMOT))、卡貝催產(chǎn)素(carbetocin) (SEQ ID N0:2: 丁酰 _Tyr(Me)-IIe-Gln-Asn-CyS-Pro-Leu-Gly-NH2)、4_ 蘇氛酸，7-甘氛酸-催產(chǎn)素(TG-0T)、I- 丁酸-2- (O-甲基-L-酪氨酸)-I-氧甲酸基催產(chǎn)素(l-butanoicacid-2- (0-me thy I-L-tyro s ine) -l-carbaoxytocin)、He-海螺緊張素(116-(3011(^代88；[11)、阿托西班(3108讓311)、加壓素(oxypressin)、脫氨_6_氧甲?；?催產(chǎn)素(dC60)、脫氨加壓素(desmopressin),以及其中殘基I和6之間的二硫鍵被硫醚取代的I-脫氨催產(chǎn)素。術(shù)語“催產(chǎn)素激動劑”包括能夠與催產(chǎn)素受體(OTR)相互作用的物質(zhì)和/或顯著的通過與OTR相互作用模擬催產(chǎn)素生物活性的物質(zhì)。例如，催產(chǎn)素激動劑包括WO2007/050353,WO 2005/023812,WO 2004072083 和 W003/016316 中描述的物質(zhì)，將這些內(nèi)容通過整體引用的方式合并入本文。催產(chǎn)素激動劑包括肽、模擬肽和小分子。特別地，它們包括WAY-267、464(4-(3, 5-二羥基苯甲基)-N-(2-甲基_4_[(1-甲基_4，10-二氫吡唑啉酮[3, 4-b] [1,5]苯并二氮雜卓-5 (IH)-基)羰基]苯甲基)哌嗪-I-羧胺基)(464(4-(3，5_dihydroxybenzyl)-N-(2-methyl-4-[(I-methyI-4，10-dihydropyrazolo [3,4-b] [I,5]benzodiazepin-5(IH)-yl)carbonyl]benzyl)piperazine-l-carboxamide))、代可莫頓(decomoton)和4, -(3, 5- 二輕基-苯甲基)-喊嚷-I-竣酸2-甲基-4-(3-甲基-4, 10- 二氫-3H-2, 3，4，9-四-氮雜-苯并[f]甘菊環(huán)-9-羰基)_苯甲胺基(4，-(3，5-Dihydroxy-benzyl)-piperazine-l-carboxylic acid2-methyl_4-(3-methyl_4, 10-dihydro-3H_2，3, 4,9-tetra-aza-benzo[f]azulene-9-carbonyl)-benzylamide)。術(shù)語“模擬肽”定義為含有非肽結(jié)構(gòu)元件的肽的類似物，這種肽能夠模擬或干擾(agonizing)天然親本肽的生物學(xué)活性。本發(fā)明背景下的催產(chǎn)素衍生物、催產(chǎn)素類似物或催產(chǎn)素激動劑的其他有效形式包括其他藥學(xué)上可接受的所述化合物的活性鹽，以及活性同分異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、同質(zhì)多象變體、溶劑化物、水合物和/或所述化合物的藥物前體。 術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”指的是含有并非為生物學(xué)上或并非其他方面不適宜的物質(zhì)的載體。術(shù)語“載體”指的是存在于藥物制劑中的并非活性劑的任何成分，并因此包括稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、填料、著色劑、濕潤或乳化劑、PH緩沖劑、防腐劑等。術(shù)語“肥胖癥”包括含有大量體脂(body fat)的疾病或紊亂。典型地，肥胖的人具有約30kg/m2以上的人體質(zhì)量指數(shù)(body mass index) (BMI)(個體體重除以他或她的身高的平方)。已知肥胖癥伴隨有多種并發(fā)癥高發(fā)的風(fēng)險,例如2型糖尿病、高血壓、心血管疾病和關(guān)節(jié)炎。術(shù)語“胰島素抵抗”指的是升高的血糖水平(空腹血糖水平為110_126mg/dL ;在服用75g葡萄糖2小時后血糖水平高于140mg/dL)。術(shù)語“代謝綜合征”指的是一組包括中心性肥胖癥(通過測量腰圍的腹部過度肥胖，典型的為女性等于或高于80cm和男性等于或高于90cm)加上至少兩個選自于紊亂脂肪血癥(特別是升高的血清甘油三酯，典型的等于或高于150mg/dL以及低水平的高密度脂蛋白(HDL)，典型的男性低于40mg/dL和女性低于50mg/dL)、升高的血壓(BP)(典型的心臟收縮BP等于或高于130mmHg且心臟舒張BP等于或高于85mmHg)或胰島素抵抗的其他病癥的綜合征。本文所使用的“治療”和“處理(treating)”等通常指獲得需要的藥理上或生理上的作用。所述作用可以以預(yù)防或局部預(yù)防疾病、癥狀或其病癥的方式預(yù)防和/或可以以局部或完全治愈疾病、病癥、癥狀或由疾病引起的不良反應(yīng)的方式治療。本文所用的術(shù)語“治療”涵蓋任何哺乳動物特別是人類的治療，并且包括(a)預(yù)防疾病在受試者中的發(fā)生，受試者可能易患疾病但還沒有診斷患有該疾病的對象；(b)抑制疾病，即阻礙其發(fā)展；或緩解疾病，即疾病和/或其癥狀或病癥的復(fù)原如改善或修復(fù)損傷。特別地，肥胖癥的治療包括體重的標(biāo)準(zhǔn)化或改善過重的體重且特別是中心性脂肪沉積(central fat deposit).肥胖癥的治療同樣包括發(fā)生與以上所述的肥胖癥相關(guān)的并發(fā)癥風(fēng)險的降低。
特別地，胰島素抵抗的治療包括標(biāo)準(zhǔn)化或改善對外源性或內(nèi)源性胰島素的正常生理響應(yīng)的損傷，特別是通過控制血糖水平或胰島素生成。胰島素抵抗的治療包括預(yù)防或減緩綜合征轉(zhuǎn)向2型糖尿病的進程。特別地,代謝綜合征的治療包括標(biāo)準(zhǔn)化或改善綜合征中的至少一個部分,而不依賴于體重降低。在特別的方面，代謝綜合征的治療包括預(yù)防2型糖尿病的發(fā)展。本文使用的術(shù)語“受試者”指的是哺乳動物。例如，本發(fā)明關(guān)注的哺乳動物包括人、靈長類、馴養(yǎng)動物例如牛、羊、豬、馬、實驗室嚙齒動物等。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語治療的“有效性”可以基于疾病對根據(jù)本發(fā)明的使用的應(yīng)答過程中的改變進行測量。例如，根據(jù)本發(fā)明的治療的有效性可以通過中心性脂肪(例如，腰圍減小，脂肪量減少)的減少或胰島素抵抗的降低來進行測量，胰島素抵抗通過口服葡萄糖耐受試驗(0GTT)、空腹血糖測試(FPG)或正常血糖高胰島素鉗夾方法而獲得。另一個例子是，月巴胖癥治療的有效性包括血漿甘油三酯的減少等。
制備方法催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物、催產(chǎn)素激動劑以及催產(chǎn)素類似物均可商購獲得(例如NeoMPS，斯特拉斯堡，法國)或如US 2，938，891和US 3，076, 797中所描述的可以被本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易地制備并根據(jù)已知的方法測試生物活性。本文描述和/或關(guān)注的全部肽催產(chǎn)素衍生物或類似物可以通過利用自動化的或手工固相合成的技術(shù)的化學(xué)合成方法或利用分子重組技術(shù)進行制備，所用技術(shù)為本領(lǐng)域所公知。組合物本發(fā)明提供了組合物形式的藥劑或治療劑以及治療患者的方法，所述患者優(yōu)選為哺乳動物患者，最優(yōu)選為患有醫(yī)學(xué)上的疾病，特別是患有選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病的人類患者。在特定的實施方式中，本發(fā)明提供了組合物形式的藥劑或治療劑以及治療患者的方法，所述患者優(yōu)選為哺乳動物患者，最優(yōu)選為患有醫(yī)學(xué)上疾病的人類患者，其中所述疾病為代謝綜合征。在特定的實施方式中，本發(fā)明提供了組合物形式的藥劑或治療劑以及治療患者的方法，所述患者優(yōu)選為哺乳動物患者，最優(yōu)選為患有醫(yī)學(xué)上疾病的人類患者，其中所述疾病為2型糖尿病。在特定的實施方式中，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的作為藥物使用的藥物制劑。本發(fā)明的藥物成分可以含有選自根據(jù)本發(fā)明描述的任何形式的催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑中的至少一種物質(zhì)。本發(fā)明的組合物可以進一步包括一種或多種藥學(xué)上可接受的添加成分例如明礬、穩(wěn)定劑、抗微生物劑、緩沖劑、著色劑、調(diào)味劑、佐劑等。根據(jù)本發(fā)明的組合物與常規(guī)使用的佐劑、載體、稀釋劑或賦形劑一起添加到藥物組合物的形式中并且可以作為固體，例如片劑或填充膠囊，或液體如藥水，懸浮液，藥膏，乳齊U，酏劑，或填充有它們的膠囊、膜片(films)或凝膠(gels)，所有均用于口服，或以無菌可注射藥水形式通過注射或持續(xù)靜脈輸注用于腸胃外途徑(包括皮下)。如果需要，可以容易地制備緩釋組合物，例如緩釋凝膠、膜片以及皮膚貼片(transdermal patches)。所述組合物也可以配制成干燥產(chǎn)品，用于在使用前與水或其他合適的載體重新組合。本發(fā)明液體形式的組合物包括，但并不限于水性或油性的懸浮液、藥水、乳劑、糖漿劑以及酏劑，可以用于點滴(drops)，用于注射，在鼻腔中噴射或浸透?？勺⑸涞慕M合物典型的基于可注射的無菌鹽水或磷酸鹽緩沖液或其他本領(lǐng)域已知的可注射載體。這種藥物組合物及其單位劑型(unit dosage forms)可以包括常規(guī)比例的成分，有或沒有額外的活性組分或成分，并且這種單位劑型可以含有與預(yù)期使用的每日劑量范圍相當(dāng)?shù)娜魏芜m當(dāng)有效量的活性成分。根據(jù)特定的實施方式，根據(jù)本發(fā)明的組合物為可注射的或可吸入的(inhalable)。這種液體制劑可以包括添加物，所述添加物包括但不限于，懸浮劑、乳化劑、非水性賦形劑以及防腐劑。懸浮劑包括但不限于，山梨醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/糖漿、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠以及氫化可食用脂肪。乳化劑包括但不限于，卵磷脂、去水山梨糖醇單油酸酯以及阿拉伯膠(acacia)。防腐劑包括但不限于，甲基或?qū)p基苯甲酸丙酯(propyl p-hydroxybenzoate)以及山梨酸。分散劑或濕潤劑包括但不限于聚(乙烯乙二醇)、甘油、牛血清白蛋白、Tween⑧、Span 。其他的材料以及劑型處理技術(shù)等如Remington’s PharmaceuticalSciences,第21 版，2005，University of the Sciences in Philadelphia, Lippincottffi11iams&ffilkins第5部分中所描述，將這些內(nèi)容通過引用的方式合并入本文。本發(fā)明的組合物也可以配制為緩釋制劑(depot preparation),可以通過植入或肌肉注射的方式進行給藥。所述組合物可以與適當(dāng)?shù)亩嗑垠w或疏水材料(例如在可接受的油中的乳劑)、離子交換樹脂或微溶的衍生物進行配制(例如微溶的鹽)。本發(fā)明的固體組合物可以以普通方式的片劑或錠劑的形式進行配制。例如，用于口服給藥的片劑和膠囊可以含有常規(guī)的賦形劑，所述賦形劑包括但不限于粘合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑以及濕潤劑。粘合劑包括但不限于，糖漿劑、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠(tragacanth)、淀粉和聚乙烯卩比咯燒酮的膠楽;劑(mucilage)。填充劑包括但不限于乳糖、糖、微晶纖維素、玉米淀粉、磷酸鈣和山梨醇。潤滑劑包括但不限于硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、聚乙二醇和二氧化硅。崩解劑包括但不限于，馬鈴薯淀粉和淀粉乙醇酸鈉。濕潤劑包括但不限于十二烷基硫酸鈉。片劑可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進行包覆。本發(fā)明的組合物也可以配制為鼻腔給藥，其形式可以包括但不限于粉劑或液體鼻腔噴霧、懸浮液、滴鼻液、凝膠、膜片或藥膏，通過管道或?qū)Ч?，通過輸注器，通過塞尾(packtaiI)，通過脫脂棉(小的扁平吸水墊)，通過鼻腔或通過粘膜下層輸注。鼻腔給藥可以按照EP 1928484或WO 2008/042452中描述的方法進行，例如通過利用裝置，所述裝置包括但不限于單位計量容器、泵型噴霧(pump sprays)、滴管、擠壓瓶、無空氣和無防腐劑噴霧、噴霧器、定量霧化吸入器和加壓定量霧化吸入器。鼻腔給藥裝置為本領(lǐng)域所公知并且有一些可商購獲得。氣霧噴霧劑可以通過利用增壓組件或噴霧器及合適的推進劑(propellant)進行分配給藥，所述推進劑包括但不限于二氟二氯甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、烴、壓縮空氣、氮氣或二氧化碳。氣霧劑系統(tǒng)需要對藥物組合物為惰性的推進劑。在加壓氣霧劑的情況下，可以通過設(shè)置閥門以給藥精確計量而控制藥劑單元。粉末狀鼻腔噴霧可以配制成通過鼻吸入裝置(nasal insufflator device)(用于將氣體、粉末或蒸汽吹入體腔的裝置)或加壓氣霧罐(pressurized aerosol canister)而給藥的微球體的形式。本發(fā)明的化合物也可以以緩釋形式或通過持續(xù)釋放給藥系統(tǒng)進行給藥(W0 2004178147)。對代表性的持續(xù)釋放材料的描述也可以在并入材料Remington的Pharmaceutical Sciences 中找至丨J。給藥方式本發(fā)明的組合物可以以任何形式進行給藥，包括靜脈注射、口服途徑、粘膜給藥(施用于鼻粘膜表面、鼻道、鼻腔；施用于口腔粘膜表面包括齒齦、口腔底部、面頰、唇、舌、牙齒；并且施用于眼或眼周粘膜表面包括結(jié)膜、淚腺、鼻淚管、上眼瞼或下眼瞼粘膜以及眼)、鼻內(nèi)投藥(例如通過噴霧、滴劑、粉劑、凝膠、膜片、吸入劑或其他方式)、皮膚或經(jīng)皮膚給藥(例如，通過皮膚給藥包括面、頸、頭皮、身體或其組合)例如通過真皮內(nèi)或皮下注射或其組
入
口 ο組合 根據(jù)本發(fā)明，催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑及其藥物制劑可以單獨進行給藥或與有利于肥胖癥和/或胰島素抵抗治療的輔助藥劑組合使用，例如用于治療、穩(wěn)定、預(yù)防和/或延遲肥胖癥和/或胰島素抵抗的物質(zhì)，例如輔助藥劑選自De Fronzo, 2010, Am.J. Med. 3 (I)，S38-48中所描述的雙胍類、格列酮類(glitazones)、磺酰脲類、DPPIV抑制劑或GLP-I激動劑。本發(fā)明圍繞在同時或按順序與有利于治療肥胖癥和/或胰島素抵抗(例如，多藥物服藥法)的其他治療方案或輔助藥劑進行給藥之前，用選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑的衍生物及其藥物制劑以治療上有效的劑量對個體進行給藥。與所述輔助藥劑同時給藥的選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑的衍生物或其藥物制劑可以以相同或不同的組合物進行給藥并采用相同或不同的給藥途徑進行給藥。根據(jù)一個實施方式，提供了一種藥物制劑，所述藥物制劑含有選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑的衍生物，結(jié)合有至少一種有利于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病或紊亂的輔助藥劑，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。根據(jù)另一個實施方式，提供了根據(jù)本發(fā)明的藥物制劑，其中所述衍生物為催產(chǎn)素。以單倍或多倍劑量對個體的給藥量會根據(jù)多種因素而改變，包括藥物代謝動力學(xué)性能、患者狀態(tài)以及特征(性別、年齡、體重、健康狀況、體型(size))、癥狀的程度、同時進行的治療、治療的頻率及希望達到的效果。在特定的實施方式中，催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物或催產(chǎn)素激動劑的有效量取決于用于給藥的形式及組合物。典型地，經(jīng)粘膜或經(jīng)皮膚進行給藥的催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物或催產(chǎn)素激動劑的有效量通常低于通過其他途徑給藥時使用的藥劑劑量(例如，口服、靜脈注射、肌肉注射或皮下注射)。在特定的實施方式中，用催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物或催產(chǎn)素激動劑進行給藥使用的劑量包括但不限于在約10至約1500 μ g劑量范圍內(nèi)的有效量，典型的從約20至約1000 μ g,例如從約25至約750 μ go在其他特定的實施方式中，用催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物或催產(chǎn)素激動劑進行給藥使用的劑量包括EP 1928484或WO 2008/042452中所描述的經(jīng)鼻給藥的劑量?；颊咴趯嵤┓绞街校鶕?jù)本發(fā)明的患者為患有選自肥胖癥和胰島素抵抗疾病的患者。在進一步的實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的患者患有肥胖癥。在另一個進一步的實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的患者患有胰島素抵抗。
在另一個進一步的實施方式中，患者患有代謝綜合征。在另一個進一步的實施方式中，患者患有2型糖尿病。根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用在本發(fā)明的另一個實施方式提供了一種衍生物在制備用于抑制或治療肥胖癥和/或胰島素抵抗的藥物組合物中的用途，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑。在進一步的實施方式中，提供了一種衍生物在制備用于預(yù)防或治療代謝綜合征的藥物組合物中的用途，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑。在進一步的實施方式中，提供了一種衍生物在制備用于預(yù)防或治療2型糖尿病的藥物組合物中的用途，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑?！?br> 在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了一種預(yù)防和/或治療疾病的方法，該方法包括用治療有效量的衍生物對有需要的哺乳動物進行給藥，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物以及催產(chǎn)素激動劑，其中，所述疾病選自肥胖癥和/或胰島素抵抗。在另一個實施方式中，提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物、用途或方法，其中所述疾病為肥胖癥。在另一個實施方式中，提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物、用途或方法，其中所述疾病為胰島素抵抗。在另一個實施方式中，提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物、用途或方法，其中所述衍生物
為催產(chǎn)素。在另一個實施方式中，提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物、用途或方法，其中所述衍生物為催產(chǎn)素類似物。在另一個實施方式中，提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物、用途或方法，其中所述催產(chǎn)素類似物為卡貝催產(chǎn)素。在另一個實施方式中，提供了根據(jù)本發(fā)明的化合物、用途或方法，其中所述衍生物為催產(chǎn)素激動劑。根據(jù)本發(fā)明的化合物和組合物可以用于抑制或治療肥胖癥和/或胰島素抵抗。在特定的實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的化合物和組合物可以用于抑制或治療代謝綜合征，在另一個特定的實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的化合物和組合物可以用于抑制或預(yù)防或治療2型糖尿病。以下描述的實施例將以更加詳細的方式并參考附圖中代表的實施方式來說明本發(fā)明。實施例后續(xù)縮寫分別定義如下Acadm (介質(zhì)鏈酸基輔酶 a 脫氫酶(medium chain acyI-CoAdehydrogenase)),Acoxl (?；o酶 a 氧化酶 I (acyI-CoA oxidase I)),BAT (棕色脂肪組織(brown adiposetissue) ), Ci (居里(Curie) ), d(天)，h(小時),μ g(微克)，mg(毫克),min(分鐘),mM(毫摩爾)，nm(納米),ACACA (乙酸輔酶 A 羧化酶 a (acetyl-coenzyme A carboxylasealpha))，AEA (花生四烯乙醇胺(Anandamide))，BW (體重)，cDNA (互補 DNA)，DGATl ( 二酰甘油 O-酸基轉(zhuǎn)移酶同系物 I (diacylglycerol 0~acy I transferase homo log I)), Ehhadh (M酰輔酶A水合酶/3-輕?；o酶A脫氫酶(enoyI-CoAhydratase/3-hydroxyacyI-CoAdehydrogenase)),ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗),eWAT (附睪白脂肪組織(epididymal whiteadipose tissue)), FASN(脂肪酸合酶)，GIR(葡萄糖輸注率(glucose infusion rate)),GR(紅排腸肌(redgastrocnemius)), GW(白月非腸肌(white gastrocnemius)), HFD(高脂肪飲食(high-fat diet)), HSL(激素敏感性脂肪酶(hormone-sensitive lipase)),iWAT(腹股溝白脂肪組織(inguinal WAT)), Lpl (脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase)),M-MLV-RT(莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶(Moloney Murine Leukemia VirusReverseTranscriptase)), NEFA(非酯化脂肪酸(Non-esterified fatty acids)), OEA(油酸乙醇胺(Oleoylethanolamide)), 0T(催產(chǎn)素)，PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))，PEA(十六酰胺乙醇(Palmitoylethanolamide)), PNPLA2(含有 patatin 樣憐脂酶結(jié)構(gòu)域 2 (patatin-likephospholipase domain containing 2)), QR(紅四頭肌(red quadriceps)), Qff(白四頭肌(white quadriceps)), RNA(核糖核酸)，RT(逆轉(zhuǎn)錄酶)，S(比目魚肌)，SO)l (硬脂酰輔酶 A 脫氫酶 I (stearoyl-CoenzymeA desaturase I)), TG(甘油三脂)，TIB (胚骨肌)，UCP3 (解f禹連蛋白3 (uncoupling protein 3)), 2_AG (2-花生四烯酸甘油酯(2-Arachidonoylglycerol))。 實施例I :中樞或外周OT輸注對體重增加、脂質(zhì)代謝和胰島素抵抗的積極影響。用以下高脂肪飲食導(dǎo)致的肥胖癥鼠模型分析給藥OT的有益代謝作用。動物和飲食將購買自查爾斯河(L，Arbresle,法國)的雄性Wistar大鼠(300_325g)在控制溫度(22°C)和照明(在07:00-19:00時進行光照)的單獨籠子中飼養(yǎng)。允許自由飲水和食用 45% 的高脂肪飲食(HFD)(代謝能，4. 56kcal/g) (Ssniff EF R/M acc. D12451 (I)mod. , ssniff Spezialdiaten GmbH, Soest,德國)7 周。每天(08 :30-09:30 時)記錄體重、攝
食和攝水。所有過程均獲得了本大學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)并且依據(jù)瑞士動物實驗指南(Swissguidelines for animalexperimentation)進行。腦室內(nèi)(i.c.v.)輸注為研究OT在代謝內(nèi)穩(wěn)態(tài)中的作用，上述雄性Wistar大鼠用HFD 45%飼喂7周致過度肥胖并且在實驗的最后2周進行腦室內(nèi)(i. c. V.)輸注OT (I. 6nmol/d)或生理鹽水。在飼喂HFD 3周后，對大鼠進行外科手術(shù)。分別肌肉注射40和9mg/kg的氯胺酮 _ 甲苯噻嗪(ketamine-xylasine) ( Ketalai* -Rornpun ， Parke-DavisandBayer, Leverkusen,瑞士)將它們麻醉，并且在右側(cè)腦室植入插管，用牙粘固粉固定于頭蓋骨上，如先前在(Rohner-Jeanrenaud 等，1989, Endocrino Iogy 124, 733-9)中所述。在恢復(fù)一周后，測量對i. cv.注射血管收縮素II (Angiotensin II) (5ng/ μ I)(Novabiochem, Laiifelfingen,瑞士)的飲水響應(yīng)(drinking response),以確認插管的正確放置。在高脂肪飲食飼喂的第5周末，給藥催產(chǎn)素(NeoMPS ,斯特拉斯堡，法國)或其介質(zhì)(NaCl O. 9%)的滲透微型真空泵(Alzet , model 2001, Alza 公司，Cupertino, CA)被皮下植入并且經(jīng)由聚乙烯導(dǎo)管連接于所述i. c. v.插管，方法如先前(Rohner-Jeanrenaud等，1989,如上)中所描述的。以I. 6nmol/天/大鼠或16nmol/天/大鼠的劑量持續(xù)14天給藥0T。輸注介質(zhì)的組的大鼠與輸注OT動物的食物消耗量成對飼養(yǎng)，以在不依賴于食物攝入的前提下來評價OT的作用。成對飼養(yǎng)方案為在早晨給每日食物總量的三分之一且在黑暗之前給余下的三份之二。在09:00和13:00之間用異氟醚麻醉(HalocarbonLaboratories, RiverEdge, NJ)并且迅速斷頭處死大鼠。將血樣收集于EDTA-包覆的管中，離心并在-20°C下保存。迅速移取組織，冷凍-夾緊(freeze-clamped)，并在-80°C下保存。皮下(s. c.)輸注上述雄性Wistar大鼠的另一組用以上所述的方法致過度肥胖并皮下輸注生理鹽水或OT ( NeoMPS ,斯特拉斯堡，法國)(50nmol/天/大鼠)持續(xù)14天。葡萄糖耐受實驗OT引起的外周脂質(zhì)代謝中對葡萄糖耐受性和胰島素敏感性的變化的影響用葡萄糖耐受實驗(GTT)進行測定。在移除食物4小時后腹腔內(nèi)給藥葡萄糖(75mg/kg體重)。在輸注葡萄糖后0、15、30、60、90分鐘后用葡萄糖計(One Touch II; LifeScan)測量取自尾部的血液樣品的血糖水平。 正常血糖-高胰島素鉗夾通過進行正常血糖-高胰島素鉗夾結(jié)合先前在(Vettor等，1994，Diabetologia, 37，1202-1208)中描述的標(biāo)記的2-脫氧葡萄糖技術(shù)來測量整體和組織特異性葡萄糖利用率。HFD引起的過度肥胖大鼠被禁食過夜并且用戊巴比妥(75mg/kg戊巴比妥鈉，Abbott實驗室，芝加哥，IL)進行腹腔內(nèi)麻醉。在正常血糖-高胰島素鉗夾過程中測量總的葡萄糖利用率，如之前在(Vettor等，1994，如上)中所描述的。在鉗夾結(jié)束時，體內(nèi)各個組織中胰島素刺激的葡萄糖利用指數(shù)通過以快速輸注方式注射經(jīng)標(biāo)記的2-脫氧-D-[1-3H]葡萄糖(30 μ Ci ;Amersham Biosciences UK, Little Chalfont,英國)來確定，如之前在(Vettor等，1994，如上)中所描述的。用快速斷頭術(shù)處死大鼠，并且迅速移取組織，冷凍-夾緊，并且在-80°C下保存。對2-脫氧-d-[l-3H]葡萄糖-6-磷酸鹽組織濃度的測量使得能夠?qū)Ω鱾€組織的體內(nèi)葡萄糖利用率指數(shù)進行計算(Vettor等，1994，如上)并且以ng/mg. min表達。血漿測量為了確認OT對次級代謝的作用，測定了血糖、胰島素、瘦素、FFA、甘油以及TG的水平。血糖用葡萄糖氧化酶法(Glu, Roche Diagnostics GmbH, Rotkreuz,瑞士)進行測量。血漿非酯化脂肪酸(NEFA)以及甘油三酯(TG)水平分別用來自于Wako Chemicals GmbH (諾伊斯，德國)和Biom6rieux(Marcy I’Etoile,法國)的NEFA C和TG酶法PAP150商品化試劑盒進行測定。如先前(Pequeux 等，2001，Scand. J. Clin. Lab. Invest.，61，407-415)中所描述的，血漿OT水平利用ELISA進行測定。血漿甘油水平利用游離甘油試劑(Sigma)進行測量。中樞OT輸注促進了升高的血漿OT水平，說明了 OT對脂肪組織潛在的指導(dǎo)作用。組織加工及實時RT-PCR為了描述能夠?qū)Υ渭壌x產(chǎn)生作用的機制，在脂肪的組織中分析了參與脂質(zhì)代謝的酶的表達(附睪白脂肪組織和肩胛棕色脂肪組織)。以Trizzol試劑(Sigma-Aldrich, Buchs,瑞士)利用單步提取法從凍存的組織中提取總RNAs。用1%的瓊脂糖凝膠電泳分析RNA的完整性并且用分光光度法測量濃度。量為2. 5 μ g的總RNAs用于采用隨機六聚體(Microsynth,日內(nèi)瓦，瑞士)，dNTPs (Promega公司，Madisson, WI,美國)，作為RNase抑制劑的RNasin(Promega公司)以及Moloney小鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄(M-MLV-RT)酶試劑盒((Invitrogen，巴塞爾，瑞士)的RT。為了進行定量PCR(qPCR)，利用SYBR 綠色 PCR Master Mix (Applied Biosystems,沃靈頓，英國)以及 ABI7500 設(shè)備(AppliedBiosystems,福斯特市,加拿大)將6. 25或12. 5ng的cDNA進行基因擴增。用PrimerExpress軟件(http://phym. unige. ch/)設(shè)計所有引物(圖9，表I),并且以200_300nM的濃度用于qPCR。結(jié)果用持家基因、核蛋白體蛋白S29 (PRS29)的表達水平進行標(biāo)準(zhǔn)化。OT給藥對不依賴于食物攝入的體重增加的作用。與生理鹽水的作用相比，長期i. c. V. OT輸注減緩了累積體重增加的50%以上(圖1A&1B ；P<0. 05)，排除了食物攝入的影響(圖1C)。這導(dǎo)致與生理鹽水輸注對照相比，OT處理的大鼠的食物效能顯著降低，采用在14天實驗期中體重增加與累積食物攝入的比值來計算指數(shù)(圖ID ；P<0. 05)。
OT給藥在脂質(zhì)代謝中的作用除血漿甘油三酯濃度降低外，與輸注生理鹽水相比，中樞OT給藥的所有測量的次級代謝參數(shù)(即，血糖、胰島素、瘦素和FFA水平)均沒有改變，如下表2所示。表2
生理鹽水輸注催產(chǎn)素輸注
(對照大鼠)(處理大鼠)
催產(chǎn)素(pg/ml)7.5 ±2.021.8 士 5.8 *
葡萄糖(mg/dl)159.1 ±5.7159.5 ±4.1
胰島素(ng/ml)2.5 ±0.71.7 ±0.3瘦素(ng/ml)13.9 ±3.711.3 ±2.2 FFA (mmol/1) 0.82 二 0.06 0.70 ± 0.06 TG (mmol/1) 1. 11 土 0.09 0.80 = 0.05 *
OEA (pmol/m!)145 二 13178 二 15
PEA(nmol/ml)1.34 ±0.161.63 ± 0.15
AEA (pmol/ml)18 = 2.919 士 2.3
2-AG (pmolAnl)78 = 1353 士 4.9數(shù)值表示每組6-7只動物的平均值土 SEM。與對照相比*P〈0. 05。所有其他對照的P = NS。油酰乙醇胺(OEA)、十六酰胺乙醇(PEA)、花生四烯乙醇胺(AEA)和2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)。另外，中樞(圖7A)和外周(圖7B) OT給藥均增加了血漿甘油水平，表明了長期OT給藥能夠增強脂解作用。在被認為是腹內(nèi)脂肪庫的附睪白脂肪組織(eWAT)中，中樞OT輸注促進了負責(zé)上調(diào)TG循環(huán)的酶Lpl的mRNA表達水平的升高(圖2A ；P<0. 01)，中樞OT輸注不改變參與脂肪生成和TG儲存的酶[例如乙酰輔酶A羧化酶a (Acaca，也稱為ACC-α )、脂肪酸合酶(Fasn)以及二酰甘油O-?；D(zhuǎn)移酶同系物I (Dgatl)]的mRNA表達(圖2Α)，然而卻增強了參與脂肪代謝的兩個酶的mRNA表達，即含有patatin樣磷脂酶結(jié)構(gòu)域2 (Pnpla2)(圖2A ；P<0. 05)以及激素敏感性脂肪酶(HSL)(圖2A ；P<0. 01)。OT對HSL的刺激作用在蛋白水平上同樣可以檢測到。
與對照組相比，可以預(yù)期的是，作為脂肪細胞中FFA細胞內(nèi)升高的可利用率為OT輸注大鼠中這種增強的TG上調(diào)和脂解作用(I. 6nmol/d)的結(jié)果，OT輸注大鼠中實際未改變的血漿FFA水平的觀察(表2)表明了由給藥OT誘導(dǎo)的對這些底物的內(nèi)源性利用。通過以上所述的實時RT-PCR測量參與脂肪酸氧化的酶的mRNA表達，顯示出OT輸注增強了?；o酶A氧化酶I (Acoxl，圖2B，P〈0. 05)、烯酰輔酶A水合酶/3-羥?；o酶A脫氫酶(Ehhadh，圖2B，P〈0. 05)和介質(zhì)鏈?；o酶a脫氫酶(Acadm，也稱為MCAD，圖2B，P〈0.05)的eWAT表達，并且還加強了脂肪酸感知蛋白、解耦連蛋白3 (Ucp3，圖2B，P<0. 05)的表達。為了進行對比，也在肩胛間棕色脂肪組織(BAT)中分析了以上大部分基因的mRNA表達，且觀察到的是OT輸注顯著增強了參與脂肪酸β -氧化的主要酶的表達以及該組織中PPAR-Ci的表達。相反的是，中樞OT輸注不會改變肝臟和骨骼肌中參與脂肪酸β-氧化的基因的表達。另外，中樞OT輸注促進了顯著的硬脂酰輔酶A脫氫酶I (Scdl)mRNA表達的增強，Scdl分別將不飽和脂肪酸棕櫚酸(16:0)以及硬脂酸(18:0)轉(zhuǎn)化為單不飽和脂肪酸棕櫚油酸(16:1)和油酸(18:1)(圖2Α ;Ρ〈0. 05)。已知的是，這些獲得的脂肪酸可以以磷脂的方式整合到膜中，也可以貯存為TG。由于未從OT輸注動物的eWAT中觀察到參與TG貯存的酶的mRNA的表達發(fā)生變化(圖2A)，觀察到了 OT引起的棕櫚油酸或油酸合成并以磷脂(PL)整合入膜的增加。油酰乙醇胺(OEA)為內(nèi)源性大麻素家族成員，由N-?；?磷脂酰乙醇胺磷脂酶D (NAPE-PLD)切割N-油酰基-磷脂酰乙醇胺(NOPE)獲得，NOPE由油酸從磷脂酰膽堿(PO的sn-Ι位轉(zhuǎn)移至磷脂酰乙醇胺(PE)的游離氨基而產(chǎn)生?？梢钥闯?，與生理鹽水的作用相比，長期i. c. V. OT輸注增加了 eWAT OEA的含量，但沒有改變其他內(nèi)源性大麻素的eWAT含量，例如OEA飽和類似物、衍生自棕櫚油酸的十六酰胺乙醇(PEA)、花生四烯乙醇胺(AEA)或2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)，也沒有改變OEA和其他內(nèi)源性大麻素的血漿水平(表2)。為了證明中樞OT輸注通過促進脂肪組織中OEA的合成來調(diào)整外周脂質(zhì)代謝的假說，用10倍高劑量的0T(16nmol/d)i.C.V.輸注HFD誘導(dǎo)的過度肥胖大鼠，持續(xù)14天。在這個劑量下，與i.e. V.生理鹽水輸注對照組相比，中樞OT輸注降低了累積食物攝入量。因此，為確定OT引起的代謝作用是不依賴于改變的食物攝入的，以與OT處理大鼠相同的食物消耗量成對飼養(yǎng)(PF) 了第二個生理鹽水輸注對照組。i. c. V. OT輸注大鼠的體重增加顯著低于生理鹽水輸注對照組，該作用是不依賴于食物攝入的改變的，而在PF對照組中未觀察至IJ。這個劑量的OT對ScdlmRNA表達以及OEA含量的刺激作用比其他的低劑量(5. 6和2倍對4. 2和I. 3倍)的OT要顯著得多，并且與食物攝入的改變不相關(guān)，進一步支持了中樞OT在脂肪組織中的脂質(zhì)代謝的作用涉及OT促進的OEA合成。與用十分之一的低劑量獲得的結(jié)果一致的是，輸注16nmol/d的OT并沒有改變eWAT PPAR- a mRNA,但是導(dǎo)致了不依賴于食物攝入的PPAR- α靶基因(例如Acadm、Acoxl、Ehhadh、Ucp3)表達的增加。OT輸注顯著增加了在BAT中PPAR- α及其靶基因的mRNA表達。OT對BAT活性的潛在作用包括增加的產(chǎn)熱作用(thermogenesis),但并不能因此而排除其他作用。OT給藥在高脂脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗中的作用進行了兩次葡萄糖耐受實驗(GTT)，第一次在3周HFD后(B卩，在分別進行生理鹽水和OT處理之前)且第二次在兩周生理鹽水或OT輸注后(B卩，HFD的7周之后)。與飼喂HFD的3周后進行的GTT相比，在HFD的7周之后，生理鹽水輸注和OT輸注大鼠表現(xiàn)出葡萄糖耐受的損傷(圖3A ；P<0. 05)。在生理鹽水輸注組中這種損傷伴隨有胰島素分泌過多(圖3B ；P<0. 05)，表明了胰島素敏感性降低的發(fā)生，而這在OT-輸注動物中沒有觀察到，說明OT具有抵御HFD誘導(dǎo)的葡萄糖耐受性和胰島素抵抗的防護作用。正常血糖-高胰島素鉗夾實驗證實了相較于生理鹽水組，OT輸注能夠促進顯著增加的葡萄糖輸注率(GIR)(圖3C ；P<0. 05)以及紅骨骼肌(圖3D ;Ρ〈0·01)，如紅四頭肌(圖3D ;Ρ〈0· 01)、紅腓腸肌(圖3D ；Ρ<0. 05)以及比目魚肌(圖3D ；Ρ<0. 05)中的葡萄糖利用指數(shù)。在用OT中樞輸注的大鼠中，同樣觀察到了腹股溝(圖3Ε ；Ρ<0. 05)和附睪WAT中(圖3Ε ；Ρ<0. 05)葡萄糖攝入的顯著增加?？偠灾@些結(jié)果支持了不依賴于食物攝入改變的情況下，長期中樞OT輸注降低了高脂肪飲食(HFD)誘導(dǎo)的過度肥胖大鼠的體重增加，改善了 HFD誘導(dǎo)的胰島素抵抗(改善了葡萄糖耐受性，伴隨有GTT過程中顯著的胰島素分泌減少，即改善的胰島素敏感性，增加的GIR以及紅骨骼肌、iWAT和eWAT中葡萄糖利用指數(shù))，降低了血漿甘油三酯水平和增強了負責(zé)TG攝入的酶Lpl的附睪白脂肪組織(eWAT)的表達，并參與了脂解作用和脂肪酸β 氧化的酶的表達。鑒于長期中樞OT輸注對骨骼肌或肝臟中的脂質(zhì)代謝沒有影響，這個作用選擇性的靶向于白脂肪組織。更進一步地，OT引起的eWAT OEA含量的增加以及為PPAR-α革巴基因(Jeong等，2009，· Exp. Mol. Med.，41，397-405)的編碼參與脂肪酸β氧化的酶的基因(例如Acadm、Acoxl、Ehhadh、Ucp3)的上調(diào)支持了 OT在加強PPAR-α活性中的作用。實施例2:體外OT對脂肪細胞中脂質(zhì)代謝的直接作用OT對分化的3T3-L1脂肪細胞中脂質(zhì)代謝的體外作用采用以下方法進行分析。小鼠3T3-L1成纖維細胞按照之前所描述的(Olson等，1997，Mol. Cell. Biol.，2425-2435)向前脂肪細胞表型分化。簡而言之，細胞在添加有4. 5g/l葡萄糖和10%熱滅活貧化的牛血清的達爾伯克改良伊戈爾培養(yǎng)基(DMEM)中，在37°C /8%C02下培養(yǎng)。誘導(dǎo)細胞分化，細胞覆蓋后兩天，繼續(xù)用4. 5g/l葡萄糖、10%含有I μ g/ml胰島素的胎牛血清(FCS)、0. 25 μ M地塞米松和O. 5mM異丁基甲基黃嘌呤(isobutylmethylxanthane, IBMX)的DMEM溫育4天；僅有
4.5g/l葡萄糖、含有胰島素的10%FCS的DMEM再溫育四天；4. 5g/l葡萄糖、10%FCS的DMEM溫育3-4天。當(dāng)90%以上的細胞表現(xiàn)出其細胞質(zhì)中有大的脂肪顆粒積累時，認為細胞已經(jīng)分化。OT能夠增強受中樞OT輸注影響的所有脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的mRNA表達。這包括OT對PPAR- α的刺激作用(圖4Α)。另外，盡管OT對ScdlmRNA表達的影響沒有在中樞輸注大鼠中獲得的顯著，將3T3-L1脂肪細胞暴露于OT導(dǎo)致了 OEA含量的增加(圖4Β)。為了進一步支持OEA可能是OT誘導(dǎo)的脂肪組織中脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)劑，3T3-L1脂肪細胞在OEA存在的情況下進行溫育，并且OEA表現(xiàn)出誘導(dǎo)PPAR- α和多數(shù)PPAR- α相關(guān)基因(Acadm、Acoxl、Ehhadh、Ucp3)的 mRNA 表達。實施例3 :外周OT給藥對體重增加和脂質(zhì)代謝的積極影響OT給藥的有益代謝作用采用與實施例I相同的高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖癥模型大鼠和 PPAR-α 敲除鼠(Lee 等，1995，Mol. Cell. Biol.，15(6) :3012-22)進行分析。HFD 誘導(dǎo)的過度肥胖動物、生理鹽水或OT組(參見實施例I的條件)經(jīng)由微型真空泵(Λ丨zet ，如上)進行皮下輸注。OT以50nmol/天/大鼠的劑量給藥14天。
身體成分參數(shù)利用EchoMRI-700 定量核磁共振(QMR)分析儀(Echo Medical Systems,休斯頓，德克薩斯州)在處理的開始和結(jié)束時測量大鼠的總脂肪質(zhì)量和除去脂肪的身體質(zhì)量。在該劑量下，OT給藥降低了食物攝入量(圖5B;P〈0. 05)及體重增加(圖5A ;P〈0.05)。鑒于在PF組中沒有觀察到體重降低，所以O(shè)T處理大鼠的體重降低仍然與激素的減食欲作用無關(guān)(圖5A)。用QMR分析儀分析身體成分顯示在處理10天后，不依賴于食物攝入的變化(圖5C和D ；P<0. 05)，外周OT給藥促進了脂肪質(zhì)量的顯著減少，同時誘導(dǎo)了除去脂肪的身體質(zhì)量百分比的增加。通過測試和稱量不同脂肪組織庫也證實了這種不依賴食物攝入的脂肪質(zhì)量的減少(圖5E和F)。PPAR- α敲除鼠和野生型鼠在PPAR- α敲除(KO)鼠和同類野生型鼠中進行外周OT給藥(50nmol/天)至少3天。而野生型動物中外周OT輸注誘導(dǎo)了顯著的體重增加的降低，可是在PPAR-α KO鼠中該 參數(shù)沒有變化。一致的是，OT外周輸注促進了野生型鼠中PPAR-α靶基因(AcadnuAcoxl、Ehhadh、Ucp3)的mRNA表達，但在PPAR- α敲除鼠中沒有作用。統(tǒng)計分析對于實施例1-3,結(jié)果以平均值土SEM表不。米用Levene測試用于檢查各組之間的平均變化(SPSS有限公司，芝加哥，IL)。為評價處理的效果，當(dāng)常規(guī)的和平均變化測試不適用時，用參數(shù)(學(xué)生t檢驗)和非參數(shù)(Mann-Whitney檢驗)測試進行各組的比對。統(tǒng)計顯著性確定為*P〈0. 05, #P〈0. 01。這些結(jié)果支持了通過直接活化PPAR-α途徑、刺激內(nèi)源性大麻素、油酰乙醇胺(OEA)在脂肪組織中的合成，并且進而刺激脂解作用和局部脂肪酸氧化而發(fā)揮OT誘導(dǎo)脂肪組織的脂質(zhì)代謝的作用。所有觀察到的代謝作用支持了 OT給藥的效果和/或用于抑制或治療肥胖癥或胰島素抵抗的OT樣分子(例如，OT衍生物、OTR激動劑或OT類似物)對OT受體通路的活化作用。特別地，這些多個成分的影響支持了 OT給藥的效果和/或用于治療多個成員的綜合征例如代謝綜合征以及預(yù)防、抑制、緩解或治療由增加的外周胰島素抵抗例如2型糖尿病引起的疾病的OT樣分子對OT受體通路的活化作用。實施例4 :外周OT給藥對高脂肪飲倉誘導(dǎo)的胰島素抵抗的積極影響用與實施例I中相同的高脂肪飲食誘導(dǎo)的大鼠模型評價OT給藥的有益作用。HFD誘導(dǎo)的過度肥胖動物經(jīng)由微型真空泵(Alzet ,如上)皮下輸注生理鹽水或OT(NeoMPS ，斯特拉斯堡，法國)(50nmol/d天/大鼠)持續(xù)14天。胰島素抵抗的內(nèi)穩(wěn)態(tài)模型評估在空腹過夜后測量胰島素血癥和糖血癥(即在正常血糖-高胰島素鉗夾前)并用于計算“胰島素抵抗的內(nèi)穩(wěn)態(tài)模型”(HOMA-IR)。HOMA-IR用以下方式計算(空腹血清胰島素mU/1) X (空腹血糖 mM)/22. 5。如實施例I中所述的方法測定外周OT給藥對高脂肪飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗的影響。在HFD的7周后，OT輸注大鼠與生理鹽水輸注對照組相比顯示出更低的HOMA-IR(圖6A)。鑒于在PF組中沒有觀察到這種降低，所以該作用與激素的減食欲作用無關(guān)(圖6A)。正常血糖-高胰島素鉗夾證實了如顯著增加的葡萄糖輸注率(GIR)所顯示的，OT輸注促進了胰島素敏感性的增加(圖6B)。總而言之，這些結(jié)果顯示了長期外周OT輸注改善了HFD誘導(dǎo)的胰島素抵抗(降低的HOMA-IR和增加的GIR)。實施例5:外周卡貝催產(chǎn)素給藥對體重增加和脂質(zhì)代謝的積極影響用與實施例I中相同的高脂肪飲食誘導(dǎo)的肥胖癥大鼠模型分析用根據(jù)本發(fā)明的催產(chǎn)素衍生物(卡貝催產(chǎn)素)進行給藥的有益代謝作用。HFD誘導(dǎo)的過度肥胖動物經(jīng)由微型真空泵(Alzet ，如上)皮下輸注生理鹽水或卡貝催產(chǎn)素(Bachem) (5nmol/天/大鼠或50nmol/天/大鼠)持續(xù)14天。在處理的開始和第10天用實施例3中所述的定量核磁共振測量身體成分參數(shù)。在5nmol/天和50nmol/天的劑量中，卡貝催產(chǎn)素給藥均能夠減少食物攝入量(圖8B ;Ρ〈0· 05)和降低體重增加(圖8Α ;Ρ〈0· 05)。鑒于在兩個PF組(圖8Α)中沒有觀察到這樣的作用，所以卡貝催產(chǎn)素處理的大鼠的體重減少仍與肽的減食欲作用無關(guān)。用QMR分析 儀確定體重成分顯示在處理10天后，進行外周卡貝催產(chǎn)素給藥促進了不依賴于食物攝入變化的脂肪質(zhì)量的顯著下降(圖8C ；Ρ<0. 05)。綜上所述，所有的觀察到的作用支持了 OT給藥的效果和/或用于抑制或治療肥胖癥或胰島素抵抗的OT樣分子(例如，OT衍生物、OTR激動劑或OT類似物)對OT受體通路的
活化作用。
權(quán)利要求
1.一種衍生物，該衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑，所述衍生物用于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的衍生物，其中，所述疾病為胰島素抵抗。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的衍生物，其中，所述疾病為肥胖癥。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的衍生物，其中，所述疾病為代謝綜合征。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的衍生物，其中，所述疾病為2型糖尿病。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的衍生物，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素類似物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的衍生物，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項所述的衍生物，其中，所述衍生物為卡貝催產(chǎn)素。
9.一種藥物制劑，該藥物制劑含有選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑的衍生物與至少一種有利于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病或紊亂的輔助藥劑的組合，以及至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素類似物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素。
12.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的藥物制劑，其中，所述衍生物為卡貝催產(chǎn)素。
13.衍生物在制備用于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病的藥物組合物中的用途，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素類似物。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素。
16.根據(jù)權(quán)利要求13或14所述的用途，其中，所述衍生物為卡貝催產(chǎn)素。
17.一種在受試者中治療或改善選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病或紊亂的方法，該方法包括用治療有效量的衍生物對有需要的受試者進行給藥，所述衍生物選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑，或它們的藥物制劑。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述藥物制劑為根據(jù)權(quán)利要求9-12中任意一項所述的藥物制劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述衍生物為催產(chǎn)素。
20.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中，所述衍生物為卡貝催產(chǎn)素。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑的衍生物，該衍生物用于治療選自肥胖癥和胰島素抵抗的疾病，本發(fā)明還涉及相關(guān)的方法和藥物制劑。特別地，本發(fā)明涉及一種用于治療代謝綜合征的選自催產(chǎn)素、催產(chǎn)素衍生物和催產(chǎn)素激動劑的衍生物。
文檔編號A61P3/10GK102905720SQ201180024489
公開日2013年1月30日 申請日期2011年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月18日
發(fā)明者F·羅納-杰雷諾, N·德布隆 申請人:日內(nèi)瓦大學(xué)