專利名稱：含有大豆蛋白水解物的抗氧化劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有大豆蛋白水解物的抗氧化劑、和大豆蛋白水解物作為抗氧化劑的用途方法。
背景技術(shù)：
包括人在內(nèi)的需氧型生物為了生存通過呼吸攝入氧，此時攝入體內(nèi)的氧的一部分在能量代謝時轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化物自由基、過氧化氫、羥基自由基等活性氧。這樣的活性氧本來與以細菌或病毒感染時的巨噬細胞的病原體除去機制為代表的生物體防御等相關(guān)，在維持健康方面發(fā)揮重要的功能。但是，由于大氣污染、紫外線等環(huán)境因素、或吸煙等生活習(xí)慣、精神壓力等，生物體內(nèi)的平衡被破壞，活性氧一旦過剩，即會與生物體中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、DNA等發(fā)生反應(yīng)，引起蛋白質(zhì)改性、過氧化脂質(zhì)生成、遺傳損傷等，從而導(dǎo)致發(fā)生生活習(xí)慣病、促進衰老。因此，逐漸認識到除了生物體所具有的機制以外，來自飲食的抗氧化活性成分的攝 取對于維持健康也是非常重要的，并推薦積極地攝取抗氧化物質(zhì)作為第7種營養(yǎng)素。大豆據(jù)報告具有多種生理功能,關(guān)于抗氧化活性也有一些報告。例如，大豆異黃酮被確認具有與其他類黃酮類同樣高的抗氧化活性。另外，關(guān)于大豆蛋白水解物的抗氧化活性，對顯示抗氧化活性的肽序列進行了鑒定。但是，從大豆蛋白水解物中大量分離特定的肽以用作抗氧化劑在制造上存在困難。因此，如果能夠?qū)⒆鳛楦鞣N肽的混合物的大豆蛋白水解物本身用作抗氧化劑，則是有用的。其中，專利文獻I中記載了抗氧化能力增強了的大豆蛋白的水解物，并記載肽的平均分子量為3kDa 30kDa (3000 30000)。該文獻為了避免出現(xiàn)由于過度水解所導(dǎo)致的苦味，得到的是較高分子量的肽。另外，專利文獻2和3中也記載了顯示抗氧化能力的大豆蛋白的水解物，但專利文獻2中記載的肽的平均分子量為500 5000，專利文獻3的肽的平均氨基酸鏈長為10 100個，其分子量相當(dāng)于約1200以上。此外，專利文獻4中作為具有抗氧化活性的大豆蛋白水解物，記載了使用來源于枯草桿菌或米曲霉等的各種蛋白酶而得到的水解物，并記載了濾取該水解物的分子量為2000以下的水解物、該水解物的游離氨基酸的含有比例為20 30重量％。雖然認為這些大豆蛋白水解物具有一定的抗氧化活性，但該活性未必是能夠作為抗氧化劑得到實用的水平，因此還需要顯示更高的抗氧化活性的大豆蛋白水解物。現(xiàn)有技術(shù)文獻專利文獻專利文獻I :日本特開2005 - 80668號公報專利文獻2 :日本特開平10 - 203994號公報專利文獻3 :日本特開2000 - 4896號公報專利文獻4 :日本特開2003 - 210138號公報非專利文獻
非專利文獻I J. Agric. Food. Chem.，52，4026-4037，200
發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明所要解決的問題本發(fā)明的課題在于提供能用于飲食品或藥品的、顯示高的抗氧化活性的抗氧化劑。用于解決問題的方法本發(fā)明人對該課題進行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過得到蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上的大豆蛋白水解物，能夠得到與以往相比顯示更高的抗氧化活性的抗氧化劑，從而完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明提供以下的(I) (13)。
·
(I) 一種抗氧化物質(zhì)，其特征在于，其在預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的方法中作為有效成分使用，其含有大豆蛋白水解物，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。(2)根據(jù)上述(I)所述的抗氧化物質(zhì)，其中，生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病為動脈硬化、心肌梗塞、癌、糖尿病、阿耳茨海默病、或花粉病。(3)根據(jù)上述(I)所述的抗氧化物質(zhì)，其中，所述大豆蛋白水解物是除去了水解后的不溶物的大豆蛋白水解物。(4)根據(jù)上述(I)所述的抗氧化物質(zhì)，其進一步含有選自維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類和大蒜素中的I種以上的抗氧化物質(zhì)。(5) 一種用于預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的飲食品或藥品的制造方法，其特征在于，添加有效成分即大豆蛋白水解物作為抗氧化物質(zhì)，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。(6)根據(jù)上述(5)所述的飲食品或藥品的制造方法，其中，并用選自維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類和大蒜素中的I種以上的抗氧化物質(zhì)。(7) —種預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的方法，其特征在于，使用含有大豆蛋白水解物的抗氧化物質(zhì)作為有效成分，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。(8) 一種抗氧化劑，其特征在于，含有大豆蛋白水解物，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。(9)根據(jù)上述(8)所述的抗氧化劑，其中，所述大豆蛋白水解物是除去了水解后的不溶物的大豆蛋白水解物。(10)根據(jù)上述(8)所述的抗氧化劑，其進一步含有選自維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類和大蒜素中的I種以上的抗氧化物質(zhì)。 (11) 一種飲食品，其添加有上述(8 )所述的抗氧化劑。(12) —種藥品，其以上述(8)所述的抗氧化劑為有效成分。(13)大豆蛋白水解物在抗氧化劑的制造中的用途方法，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。發(fā)明的效果
通過本發(fā)明，可以提供不是使用了從大豆蛋白水解物中分離出的具有特定的抗氧化活性的肽、并是使用了該大豆蛋白水解物(肽混合物)本身的實用并且顯示高的抗氧化活性的抗氧化劑，從而能夠在生物體的氧化所導(dǎo)致的動脈硬化等疾病的預(yù)防或治療中發(fā)揮作用。



圖I為表示蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量與ORAC值之間的相關(guān)關(guān)系的圖表。
具體實施例方式本發(fā)明的抗氧化劑、本發(fā)明的在預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的方法中用作有效成分的抗氧化物質(zhì)、本發(fā)明的用于預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的飲食品或藥品的制造方法、或者本發(fā)明的預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的方法的特征在于，含有大豆蛋白水解物或?qū)⑵溆米饔行С煞?，其中，蛋白水解物中的分子量低?00的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。以下，對本發(fā)明具體地進行說明。(大豆蛋白原料)本發(fā)明中的大豆蛋白水解物是利用蛋白酶將大豆蛋白原料水解而得到的。這里，作為大豆蛋白原料的一個例子，可列舉出用水從大豆、脫脂大豆等中提取蛋白質(zhì)成分、并除去豆腐渣成分而得到的全脂豆?jié){或脫脂豆?jié){。作為大豆蛋白原料的另一個例子，可列舉出通過利用超濾膜的處理或使用了酸的等電點沉淀等、從這些豆?jié){將蛋白質(zhì)濃縮而得到的分離大豆蛋白。作為大豆蛋白原料的再一個例子，可列舉出通過酸洗滌或乙醇洗滌從大豆除去乳清成分并將蛋白質(zhì)濃縮而得到的濃縮大豆蛋白、或?qū)⒋蠖狗鬯槎玫降拇蠖狗邸＿@些大豆蛋白原料也可以是經(jīng)殺菌/干燥的物質(zhì)。另外，最終得到的大豆蛋白原料優(yōu)選以干燥重量計含有80重量％以上的蛋白質(zhì)，例如優(yōu)選分離大豆蛋白等。分離大豆蛋白通常是如下制備的。即，在脫脂大豆中加入水，在中性附近進行提取，將豆腐渣分離而得到豆?jié){。接著，將豆?jié){調(diào)整到PH4. 5附近，回收等電點沉淀物。在沉淀物中加入水和堿性劑，從而得到固體成分濃度為5 15重量％、pH為5. 7 8. O、優(yōu)選pH為6. 8 7. 5附近的水溶液。如此得到的分離大豆蛋白可以直接將溶液用于以下工序，也可以將未經(jīng)殺菌的物質(zhì)或經(jīng)殺菌的物質(zhì)在干燥后重新溶解使用。也可預(yù)先將還原糖制成水溶液，然后在其中溶解大豆蛋白原料。不過，分離大豆蛋白并不僅限定于上述制備方法，當(dāng)然也可以是對該制備方法進行各種改變而獲得的制備方法。(大豆蛋白水解物)本發(fā)明的大豆蛋白水解物是通過對上述大豆蛋白原料進行蛋白酶處理而得到的肽混合物。該蛋白水解物優(yōu)選分解度更高，特別優(yōu)選分子量低于500的肽在水解物中的肽與游離氨基酸的總量中所占的比例高。具體地，重要的是蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上、進一步優(yōu)選為60重量％以上。該分子量低于500的肽實質(zhì)上是由2 3個分子的氨基酸結(jié)合而成的二肽和三肽構(gòu)成的。
分子量低于500的肽的含量如下算出通過肽用凝膠過濾色譜法測定蛋白水解物中的分子量低于500的肽和游離氨基酸級分的比例，然后減去通過氨基酸分析算出的蛋白水解物中的游離氨基酸含量。如上特定的大豆蛋白水解物優(yōu)選盡可能減少除分子量低于500的肽以外的肽和游離氨基酸的比例。即，蛋白水解物中的游離氨基酸含量相對于肽與游離氨基酸的總量優(yōu)選為12重量％以下、更優(yōu)選為5重量％以下、進一步優(yōu)選為3重量％以下。此外，由于該蛋白水解物中的肽體優(yōu)選為更低分子的肽，因此蛋白水解物中的分子量為500以上的級分比例相對于肽與游離氨基酸的總量優(yōu)選為40重量％以下、更優(yōu)選為38重量％以下、進一步優(yōu)選為35重量％以下。
(蛋白酶)用于獲得本發(fā)明的大豆蛋白水解物的蛋白酶無論是動物來源、植物來源還是微生物來源均可，可以從蛋白酶的分類中被分類為“金屬蛋白酶”、“酸性蛋白酶”、“硫醇蛋白酶”、“絲氨酸蛋白酶”的蛋白酶、優(yōu)選從被分類為“金屬蛋白酶”、“硫醇蛋白酶”、“絲氨酸蛋白酶”的蛋白酶中適當(dāng)選擇。由于使屬于2種以上或3種以上的不同分類的酶依次或同時發(fā)揮作用的分解方法能夠增加分子量低于500的肽的比例，因此特別優(yōu)選。該蛋白酶的分類為酶學(xué)領(lǐng)域中通常采用的根據(jù)活性中心的氨基酸的種類不同而進行的分類方法。作為各自的代表，“金屬蛋白酶”中可列舉出桿菌屬(Bacillus)來源的中性蛋白酶、鏈霉菌屬(Streptomyces)來源的中性蛋白酶、曲霉屬(Aspergillus)來源的中性蛋白酶、“Termoase”等,“酸性蛋白酶”中可列舉出胃蛋白酶、曲霉屬(Aspergillus)來源的酸性蛋白酶、“Sumizyme FP”等，“硫醇蛋白酶”中可列舉出菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶等，“絲氨酸蛋白酶”中可列舉出胰蛋白酶、糜蛋白酶、枯草桿菌蛋白酶、鏈霉菌屬(Streptomyces)來源的堿性蛋白酶、“Alcalase”、“Bioprase”等。即使是除這些酶以外的酶，根據(jù)作用PH或與抑制劑的反應(yīng)性的不同，也能夠確認其分類?；钚灾行牟煌拿钢g由于對基質(zhì)的作用部位有很大不同，因此能夠減少“剪切殘留物”、高效地獲得酶分解物。另夕卜，通過并用不同來源的(來源生物)的酶，能夠進一步高效地制造酶分解物。即使分類相同但只要來源不同，對基質(zhì)蛋白質(zhì)的作用部位也就會不同，結(jié)果能夠增加分子量低于500的肽的比例。這些蛋白酶優(yōu)選外切蛋白酶活性小的蛋白酶。蛋白酶處理的反應(yīng)pH或反應(yīng)溫度根據(jù)所使用的蛋白酶的特性進行設(shè)定即可，通常，反應(yīng)PH在最適pH附近進行、反應(yīng)溫度在最適溫度附近進行即可。大體是，反應(yīng)溫度為20 80°C、優(yōu)選為40 60°C。反應(yīng)后加熱到足以使酶失活的溫度(60 170°C左右)，使殘留酶活性失活。蛋白酶處理后的反應(yīng)液可以直接使用或濃縮后使用，但通常進行殺菌、并進行噴霧干燥、冷凍干燥等后以干燥粉末的狀態(tài)使用。殺菌優(yōu)選加熱殺菌、加熱溫度優(yōu)選為110 170°C、進一步優(yōu)選為130 170°C。加熱時間優(yōu)選為3 20秒鐘。另外，可以將反應(yīng)液調(diào)整到任意的pH。可以將蛋白酶處理時或pH調(diào)整時產(chǎn)生的不溶物(沉淀物或懸浮物)通過離心分離或過濾等除去。除去不溶物能夠提高大豆蛋白水解物的抗氧化活性，因此優(yōu)選。還可以進一步利用活性炭或吸附樹脂進行純化。(抗氧化作用)本發(fā)明中的蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上的大豆蛋白水解物顯示高的抗氧化活性，可用作用于預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的有效成分。對于該水解物所具有的抗氧化活性，可以以采用非專利文獻I中記載的方法測定的“ORAC”(Oxygen Radical Absorbance Capacity :活性氧吸收能力)的值(單位ymol TE/g)為指標(biāo)。其中，單位中的“TE”為“Trolox equivalent(水溶性維生素E當(dāng)量)”的略寫，“Trolox”為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)“6-羥基-2，5，7，8-四甲基色滿-2-羧酸”的注冊商標(biāo)。ORAC值越高，表示活性氧吸收能力即抗氧化活性越高，本發(fā)明中的蛋白水解物中的分子量低于500 的肽多的大豆蛋白水解物的ORAC值優(yōu)選為350 μ mo I TE/g以上、更優(yōu)選為450 μ mo I TE/g以上、進一步優(yōu)選為500 μ mo I TE/g以上。(與其他抗氧化物質(zhì)的并用)通過將本發(fā)明的大豆蛋白水解物與I種以上的其他顯示抗氧化活性的物質(zhì)或含有這些物質(zhì)的提取物并用，能夠協(xié)同地提高抗氧化活性，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。對于并用其他的抗氧化物質(zhì)的形態(tài)沒有特別限定，可以預(yù)先與本發(fā)明的大豆蛋白水解物混合，制成混合制劑來使用，也可以在本發(fā)明中在使用大豆蛋白水解物時，將其他抗氧化物質(zhì)另外添加來使用。作為其他的抗氧化物質(zhì)，可列舉出例如維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類、大蒜素等。作為維生素類，可列舉出維生素C、維生素A、維生素E等。作為多酚類，除了異黃酮、槲皮素、楊梅素、山奈酚、橙皮甙、柚皮苷、花青素、兒茶素、白楊素、芹菜素、木犀草素等類黃酮類、芝麻素、芝麻素酚、芝麻素酚、細辛脂素、芝麻酚、芝麻酚林等木脂素類之外，還可列舉出碧蘿芷、姜黃素、綠原酸、沒食子酸、迷迭香酸、鞣花酸、香豆素、阿魏酸、姜烯酚、可可多酚等。作為類胡蘿卜素類，可列舉出胡蘿卜素(α —，β —，Y —，δ 一)、番茄紅素等胡蘿卜素類、或者葉黃素、蝦青素、玉米黃素、角黃素、巖藻黃素、花藥黃質(zhì)、紫黃質(zhì)、辣椒素等葉黃素類等。作為皂苷類，可列舉出皂樹屬皂苷等原料藥來源的皂苷、大豆皂苷、茶皂苷等。當(dāng)使用這些抗氧化物質(zhì)時，可以替代地使用含有這些抗氧化物質(zhì)的植物提取物，例如當(dāng)使用花青素時，可以使用藍莓提取物、黑醋栗提取物、巴西莓果提取物、接骨木果提取物等。上述顯示抗氧化活性的物質(zhì)或提取物中，特別是當(dāng)將維生素C、碧蘿芷、巴西莓果提取物、姜黃素或芝麻素并用時，協(xié)同效果更強，因此優(yōu)選。(飲食品中的利用)本發(fā)明的蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上的大豆蛋白水解物可以以將其作為有效成分的抗氧化劑的形式用于各種飲食品中。例如，可以以防止飲食品自身的氧化為目的而添加到飲食品中。另外，通過添加本發(fā)明的蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上的大豆蛋白水解物,能夠?qū)z取者發(fā)揮作為生理功能的抗氧化能力，從而得到可預(yù)防生物體的氧化所導(dǎo)致的下文所述的疾病的飲料、片劑、食品塊(壓成塊的精加工食品)、沙拉用調(diào)味醬、肉制品、零食點心、甜點、點心類和營養(yǎng)助劑等。(藥品中的利用)本發(fā)明的蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上的大豆蛋白水解物還可用作藥品。作為生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病，可列舉出動脈硬化、心肌梗塞、癌、糖尿病、阿耳茨海默病、花粉病等，能夠用作用于預(yù)防和治療這些疾病的藥品。當(dāng)以藥品的形態(tài)供給時，可以以液體、散藥、片劑、膠囊等各種形態(tài)使用。實施例以下，通過實施例對本發(fā)明更具體地進行說明。
(測定方法)首先，實施例中使用的各種測定方法整理如下。〈蛋白質(zhì)含量〉將通過凱氏定氮法(Kjeldahl method)測定的蛋白質(zhì)量的重量相對于105°C、12小時干燥得到的大豆蛋白級分的重量作為干燥物中的蛋白質(zhì)含量，用“ ％”表示。其中，氮換算系數(shù)設(shè)為6. 25。<游離氨基酸和肽的含量>通過使用了以下的凝膠過濾柱的HPLC法測定大豆蛋白水解物的分子量分布。將使用了肽用凝膠過濾柱的HPLC體系組裝，對作為分子量標(biāo)記物已知的肽作圖，在分子量與保持時間的關(guān)系中求出標(biāo)準(zhǔn)曲線。其中，分子量標(biāo)記物使用八肽[β-Asp]-血管緊張素 II 的 β-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe (分子量為 1046)、六妝血管緊張素 IV 的 Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe (分子量為 775)、五妝 Leu-Enkephalin 的Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu (分子量為 555)、二妝 Glu-Glu-Glu (分子量為 405)、游尚氛基酸 Pro(分子量為115)。將蛋白水解物(1%)在10，OOOrpm下離心分離10分鐘，將得到的上清用凝膠過濾用溶劑稀釋至2倍，其中的5 μ I供于HPLC。蛋白水解物中的游離氨基酸和分子量低于500的肽級分的比例(％)采用分子量低于500的范圍(時間范圍)的面積相對于總吸光度的圖不面積的比例來求出(使用柱Superdex Peptide 7. 5/300GLCGE Healthcare Japan 株式會社制)、溶劑I % SDS/10mM 憐酸緩沖液、pH為8. O、柱溫度為25°C、流速為O. 25ml/min、檢測波長220nm)。另外，蛋白水解物中的分子量為500以上的肽級分的比例(％)與上述同樣地采用分子量為500以上的范圍的面積相對于總吸光度的圖示面積的比例來求出。接著，利用氨基酸分析進行蛋白水解物中的游離氨基酸含量的測定。將蛋白水解物(4mg/ml)加入到等量的3%磺基水楊酸中，在室溫下振蕩15分鐘。在10，OOOrpm下離心分離10分鐘，將得到的上清用O. 45μm過濾器過濾，用氨基酸分析器“JLC500V”(日本電子株式會社制)測定游離氨基酸。蛋白水解物中的游離氨基酸含量是以相對于通過凱氏定氮法得到的蛋白質(zhì)含量的比例的形式算出的。將如上得到的從“游離氨基酸和分子量低于500的肽級分的比例”中減去“游離氨基酸含量”得到的值作為蛋白質(zhì)分解物中的“分子量低于500的肽的含量”。< ORAC值的測定〉將得到的樣品分別稱量lOOmg，使其溶解到50%乙醇中，定容到100ml，按照非專利文獻I記載的方法進行測定。定量使用“Trolox”(注冊商標(biāo)、從Kishida化學(xué)株式會社購得)作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用各測定值算出。(制造例I)分離大豆蛋白的制備從低改性脫脂大豆如下制備分離大豆蛋白。(I)將低改性脫脂大豆的熱水提取漿料用離心分離機除去豆腐渣級分，得到脫脂豆?jié){。
(2)將得到的脫脂豆?jié){的pH調(diào)整為4. 5，進行等電點沉淀，用離心分離機得到酸沉淀酪狀物，進行中和。(3)中和得到的各級分，在120°C下進行10秒鐘加熱殺菌。(制造例2)大豆蛋白水解物的制備(大豆蛋白水解物A、B)制備制造例I中得到的分離大豆蛋白的10%溶液，添加O. 2%或O. 5%的“Alcalase “(Novozymes Japan株式會社制),在55°C下進行15分鐘酶反應(yīng)。酶反應(yīng)后通過90°C、20分鐘的加熱處理使反應(yīng)停止，然后進行冷凍干燥，制得試樣(大豆蛋白水解物A、B)。(制造例3)大豆蛋白水解物的制備(大豆蛋白水解物C、D)制備制造例I中得到的分離大豆蛋白的3%溶液，相對于蛋白質(zhì)添加I %或2%的·金屬蛋白酶“Termoase”(來源Bacillus thermoproteolyticusRokko,大和化成株式會社)，在pH為9.0、58 °C下進行60分鐘酶反應(yīng)。接著，相對于蛋白質(zhì)加入0. 5%或1%的絲氨酸蛋白酶“Bioprase”(來源Bacillus sp.、Nagase ChemiteX株式會社),在pH為7. 5、58°C下進行60分鐘酶反應(yīng)。接著，相對于蛋白質(zhì)加入0. 5 %或I %的金屬蛋白酶“Sumizyme FP”(來源Aspergillus oryzae,新日本化學(xué)工業(yè)株式會社),在pH為7. 5、58°C下進行60分鐘酶反應(yīng)。在以上的酶反應(yīng)后，對酶反應(yīng)液進行90°C、20分鐘的加熱處理使反應(yīng)停止，然后進行冷凍干燥，制成試樣(大豆蛋白水解物C、D)。(制造例4)大豆蛋白水解物的制備(大豆蛋白水解物E、F、G)制備制造例I中得到的分離大豆蛋白的3 %溶液，相對于蛋白質(zhì)加入I %、1. 5 %或2%的與制造例3相同的“Termoase”，在pH為9. 0、58°C下進行60分鐘酶反應(yīng)。接著，相對于蛋白質(zhì)加入0. 5% >0. 75%或I %的與制造例3相同的“Bioprase”,在pH為7. 5、58°C下進行60分鐘酶反應(yīng)。接著，相對于蛋白質(zhì)加入0. 5 %、0· 75 %或I %的與制造例3相同的“SumizymeFP ”，在pH為7. 5、58°C下進行60分鐘酶反應(yīng)。在以上的酶反應(yīng)后，對酶反應(yīng)液進行90°C、20分鐘的加熱處理使反應(yīng)停止，進一步將通過酶反應(yīng)生成的不溶物通過離心分離和利用孔徑為I. Oym的膜濾器的過濾來除去，進行冷凍干燥，制成試樣(大豆蛋白水解物E、F、G)。(試驗例I)測定制造例2 4中得到的大豆蛋白水解物A G的蛋白質(zhì)含量(％ )、分子量低于500的肽在肽與游離氨基酸的總量中所占的含量(％)、分子量為500以上的肽含量和游離氨基酸含量、以及ORAC值(μ mo I TE/g)(比較例I 4、實施例I 3)。各蛋白水解物的制備條件和分析結(jié)果整理于表I和圖I。表I
權(quán)利要求
1.一種抗氧化物質(zhì)，其特征在于，其在預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的方法中作為有效成分使用，其含有大豆蛋白水解物，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗氧化物質(zhì)，其中，生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病為動脈硬化、心肌梗塞、癌、糖尿病、阿耳茨海默病、或花粉病。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗氧化物質(zhì)，其中，所述大豆蛋白水解物是除去了水解后的不溶物的大豆蛋白水解物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗氧化物質(zhì)，其進一步含有選自維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類和大蒜素中的I種以上的抗氧化物質(zhì)。
5.一種用于預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的飲食品或藥品的制造方法，其特征在于，添加有效成分即大豆蛋白水解物作為抗氧化物質(zhì)，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的飲食品或藥品的制造方法，其中，并用選自維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類和大蒜素中的I種以上的抗氧化物質(zhì)。
7.一種預(yù)防或治療生物體的氧化所導(dǎo)致的疾病的方法，其特征在于，使用含有大豆蛋白水解物的抗氧化物質(zhì)作為有效成分，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。
8.一種抗氧化劑，其特征在于，含有大豆蛋白水解物，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗氧化劑，其中，所述大豆蛋白水解物是除去了水解后的不溶物的大豆蛋白水解物。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的抗氧化劑，其進一步含有選自維生素類、多酚類、類胡蘿卜素類、皂苷類和大蒜素中的I種以上的抗氧化物質(zhì)。
11.一種飲食品，其添加有權(quán)利要求8所述的抗氧化劑。
12.一種藥品，其以權(quán)利要求8所述的抗氧化劑為有效成分。
13.大豆蛋白水解物在抗氧化劑的制造中的用途方法，其中，蛋白水解物中的分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上。
全文摘要
本發(fā)明提供能用于飲食品或藥品的、顯示高的抗氧化活性的抗氧化劑。通過得到分子量低于500的肽的含量相對于肽與游離氨基酸的總量為50重量％以上的大豆蛋白水解物，能夠得到顯示高的抗氧化活性的抗氧化劑。
文檔編號A61P9/10GK102917723SQ20118002681
公開日2013年2月6日 申請日期2011年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月31日
發(fā)明者本山貴康, 松林惠子 申請人:不二制油株式會社