專利名稱：TNF-α結(jié)合蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及TNF- α結(jié)合蛋白及其在預(yù)防和/或治療急性和慢性免疫疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、銀屑病、多發(fā)性硬化癥和其它自身免疫疾病中的用途。發(fā)明背景
本領(lǐng)域需要能夠結(jié)合TNF- α (亦稱作腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子-阿爾法、腫瘤壞死因子-a、TNF和惡液質(zhì)素)的改良抗體。在實施方案中，所述抗體能夠中和TNF-α。本發(fā)明提供結(jié)合蛋白的新家族、移植CDR的抗體、人源化抗體及其片段，其能夠結(jié)合TNF-α、以高親和力結(jié)合TNF-α和結(jié)合并中和TNF-α。發(fā)明簡述
本發(fā)明涉及TNF-α結(jié)合蛋白，尤其是抗-TNF-α抗體或其結(jié)合TNF-α的抗原-結(jié)合部分。在實施方案中，能夠結(jié)合TNF-α的抗體或其抗原結(jié)合部分，包含選自SEQ ID NO:22-36的氨基酸序列。在一個方面，本發(fā)明提供人源化結(jié)合蛋白，其包含能夠結(jié)合人TNF- α的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含至少一個CDR,所述CDR包含選自以下的氨基酸序列SEQID N0:22 的殘基 31-35、SEQ ID NO: 22 的殘基 50-65、SEQ ID NO: 22 的殘基 98_106、SEQ IDNO: 23的殘基24-34、SEQ ID NO: 23的殘基50-56和SEQ ID NO: 23的殘基89-97，其中結(jié)合蛋白包含人接納體構(gòu)架。在實施方案中，結(jié)合蛋白包含至少3個⑶R，例如，包含選自以下的可變結(jié)構(gòu)域CDR集合(a) SEQ ID NO: 22的殘基31-35、SEQ ID NO: 22的殘基50-65和SEQID NO: 22 的殘基 98-106 ;和(b) SEQ ID NO: 23 的殘基 24-34、SEQ ID NO: 23 的殘基 50-56和SEQ ID NO:23的殘基89-97。在特定實施方案中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含氨基酸序列，該氨基酸序列包含 SEQ ID NO:22 的殘基 31-35、SEQ ID NO:22 的殘基 50-65、SEQ ID NO:22的殘基 98-106、SEQ ID NO: 23 的殘基 24-34、SEQ ID NO: 23 的殘基 50-56 和 SEQ ID NO: 23的殘基89-97。在實施方案中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含VH區(qū)，例如，包含選自SEQ ID NO: 24、25、28、29、30、31、32和33的氨基酸序列。在另一實施方案中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含VL區(qū)，例如，包含選自SEQ ID NO: 26、27、34、35和36的氨基酸序列。在特定實施方案中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含VH區(qū)和VL區(qū)，例如，其中VH區(qū)包含選自SEQ ID NO: 24、25、28、29、30、31、32和33的氨基酸序列，VL區(qū)包含選自SEQ ID NO: 26、27、34、35和36的氨基酸序列。在實施方案中，人接納體構(gòu)架包含至少一種選自SEQ ID NO: 6_21的氨基酸序列。在特定實施方案中，人接納體構(gòu)架包含選自SEQ ID NO: 9、10、11、12、15、16、17和21的氨基酸序列。在另一實施方案中，人接納體構(gòu)架包含至少一個構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，其中所述構(gòu)架的氨基酸序列與人接納體構(gòu)架的序列至少65%相同，并包含至少70個與人接納體構(gòu)架相同的氨基酸殘基。在另一實施方案中，人接納體構(gòu)架包含至少一個在關(guān)鍵殘基上的構(gòu)架區(qū)氣基酸取代，所述關(guān)鍵殘基選自Btt鄰CDR的殘基、糖基化位點殘基、稀有殘基、能夠與人TNF-α相互作用的殘基、能夠與⑶R相互作用的殘基、規(guī)范殘基(canonicalresidue)、重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基、游標(biāo)區(qū)(Vernier zone)中的殘基和在Chothia-定義的可變重鏈⑶Rl及Kabat-定義的第一重鏈構(gòu)架之間重疊的區(qū)域中的殘基。在實施方案中，關(guān)鍵殘基選自H1、H12、H24、H27、H29、H37、H48、H49、H67、H71、H73、H76、H78、L13、L43、L58、L70 和 L80。在實施方案中，VH 突變選自Q1E、I12V、A24V、G27F、I29L、V29F F29L I37V、I48L、V48L、S49G、V67L、F67L、V71K、R71K、T73N、N76S、L78I 和 F78I。在另一實施方案中，VL突變選自V13L、A43S、I58V、E70D和S80P。在實施方案中，結(jié)合蛋白包含兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所述兩個可變結(jié)構(gòu)域具有選自SEQ ID NO: 24和SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO:24 和 SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:25 和 SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:25 和 SEQ IDNO:27的氨基酸序列。
在實施方案中，結(jié)合蛋白結(jié)合TNF-α。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)TNF-α的生物學(xué)功能。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白中和TNF-α。在又一實施方案中，結(jié)合蛋白減弱TNF- α結(jié)合其受體的能力，例如，結(jié)合蛋白減弱原-人TNF- α、成熟-人TNF- α或截短的-人TNF-α結(jié)合其受體的能力。在又一實施方案中，結(jié)合蛋白降低TNF-α的選自以下的一種或多種生物學(xué)活性=TNF-依賴的細(xì)胞因子產(chǎn)生、TNF-依賴的細(xì)胞殺傷、TNF-依賴的炎癥、TNF-依賴的骨質(zhì)侵蝕和TNF-依賴的軟骨損傷。在實施方案中，結(jié)合蛋白具有選自以下的結(jié)合速率常數(shù)(on rate constant,Kon):至少約IO2IT1S'至少約IO3IT1S'至少約IO4M-1 s'至少約105Μ 和至少約IO6M-1S-1,該速率常數(shù)可通過表面等離振子共振來測量。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白具有選自以下的解離速率常數(shù)(off rate constant, Koff):最多約1θ 、最多約l(T4s'最多約KTiV1和最多約IO-fV1,該速率常數(shù)可通過表面等離振子共振來測量。在又一實施方案中，結(jié)合蛋白具有選自以下的解離常數(shù)(Kd):最多約10_7 M、最多約10_8 M、最多約10_9 M、最多約10,M、最多約1(Γη Μ、最多約1(T12 M和最多1(Γ13Μ。在實施方案中，結(jié)合蛋白包含選自以下的重鏈免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域人IgM恒定結(jié)構(gòu)域、人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域、人IgA恒定結(jié)構(gòu)域和人IgE恒定結(jié)構(gòu)域。在特定實施方案中，重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域為人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白進一步包含選自以下的輕鏈免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域人Ig K恒定結(jié)構(gòu)域和人Ig λ恒定結(jié)構(gòu)域。例如，在實施方案中，結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域，該恒定結(jié)構(gòu)域具有選自SEQ ID NO:2,SEQ ID NO:3、SEQ ID Ν0:4和SEQ ID Ν0:5的氨基酸序列。在特定實施方案中，人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域包含選自SEQ ID Ν0:2和SEQ ID Ν0:3的氨基酸序列。在另一實施方案中，輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域為包含氨基酸序列SEQ ID Ν0:4的人Ig κ恒定結(jié)構(gòu)域。在又一實施方案中，輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域為包含氨基酸序列SEQ ID Ν0:5的人Ig λ恒定結(jié)構(gòu)域。在特定實施方案中，本發(fā)明提供能夠結(jié)合人TNF-α的結(jié)合蛋白，該結(jié)合蛋白包含具有選自SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的Ig恒定重區(qū)；具有選自SEQID N0:4和SEQ ID NO: 5的氨基酸序列的Ig恒定輕區(qū)；具有選自SEQ ID NO: 24、25、28、29、30、31、32和33的氨基酸序列的Ig可變重區(qū)；和具有選自SEQ ID NO: 26、27、34、35和36的氨基酸序列的Ig可變輕區(qū)。在特定實施方案中,本發(fā)明的結(jié)合蛋白選自免疫球蛋白分子、Fv、二硫鍵連接的Fv、單克隆抗體、scFv、嵌合抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、⑶R-移植的抗體、雙抗體、人源化抗體、多特異抗體、Fab、雙重特異抗體、Fab’片段、雙特異抗體、F(ab’)2片段，DVD-Ig 、包含在鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；dAb片段、分離的互補決定區(qū)(CDR)和單鏈抗體。在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的結(jié)合蛋白的結(jié)晶的結(jié)合蛋白，其中結(jié)合蛋白為晶體形式。在實施方案中，晶體為無載體的藥用控制釋放晶體。在另一實施方案中，所述結(jié)合蛋白比結(jié)合蛋白的可溶性對應(yīng)物具有更長的體內(nèi)半衰期。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白保留生物學(xué)活性。在另一方面，本發(fā)明提供釋放TNF-α結(jié)合蛋白的組合物，該組合物包含(a)制齊U，其中所述制劑包含本發(fā)明的結(jié)晶的結(jié)合蛋白和成分；和(b)至少一種聚合載體。在實施·方案中，聚合載體為選自以下的一種或多種的聚合物聚丙烯酸、聚腈基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酸酐、聚縮酚酸肽、聚酯、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚b-羥基丁酸酯、聚己內(nèi)酯、聚二氧雜環(huán)己酮、聚乙二醇、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚有機磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、馬來酸酐-烷基乙烯醚共聚物、pluronic多元醇、白蛋白、藻酸鹽、纖維素和纖維素衍生物、膠原、纖維蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、寡糖、糖胺聚糖(glycaminoglycan)、硫酸化的多糖；及其共混物和共聚物。在另一實施方案中，所述成分選自白蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明膠、羥丙基-β-環(huán)糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。在另一方面，本發(fā)明提供TNF-α結(jié)合蛋白構(gòu)建體，所述構(gòu)建體包含本發(fā)明的TNF-a結(jié)合蛋白和選自接頭和免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域的多肽。在實施方案中，結(jié)合蛋白具有人糖基化方式。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白構(gòu)建體為結(jié)晶的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體。在又一實施方案中，結(jié)晶的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體為無載體的藥用控制釋放結(jié)晶的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體。在特定實施方案中，TNF-α結(jié)合蛋白構(gòu)建體比結(jié)合蛋白構(gòu)建體的可溶性對應(yīng)物具有更長的體內(nèi)半衰期。在另一實施方案中，結(jié)合蛋白構(gòu)建體保留生物學(xué)活性。在另一方面，本發(fā)明提供TNF-a結(jié)合蛋白綴合物，所述綴合物包含本發(fā)明的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體和進一步包含選自以下的劑(agent):免疫粘附分子、成像劑、治療劑和細(xì)胞毒素劑。在實施方案中，所述劑為選自放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性標(biāo)記和生物素的成像劑。在實施方案中，成像劑為選自以下的放射性標(biāo)記3H、14C、35S、9°Y、99Tc、mIn、125I、mI、177Lu、166Ho 和 153Sm0 在另一實施方案中，所述劑為選自以下的治療劑或細(xì)胞毒性劑抗代謝物、烷化劑、抗生素、生長因子、細(xì)胞因子、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)類抗生素、毒素和細(xì)胞凋亡劑。在另一方面，本發(fā)明提供編碼本發(fā)明結(jié)合蛋白的分離的核酸。在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明分離的核酸的載體。在實施方案中，載體選自pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV和pBJ。在實施方案中，本發(fā)明提供包含本發(fā)明載體的宿主細(xì)胞。在另一實施方案中，宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞，例如，大腸桿菌coif)。在另一實施方案中，宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞，例如，原生生物細(xì)胞、動物細(xì)胞、植物細(xì)胞或真菌細(xì)胞。在另一實施方案中，真核細(xì)胞為選自哺乳動物細(xì)胞、禽類細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞的動物細(xì)胞。例如，宿主細(xì)胞為CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞、酵母細(xì)胞例如釀酒酵母i^etcchetiromycGS cerevisiae)或昆蟲Sf9細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供產(chǎn)生結(jié)合TNF-α的蛋白質(zhì)的方法以及通過所述方法產(chǎn)生的TNF-a結(jié)合蛋白，所述方法包括在足以產(chǎn)生結(jié)合TNF-a的結(jié)合蛋白的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明宿主細(xì)胞的步驟。在另一方面，本發(fā)明提供包含本發(fā)明的結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。在實施方案中，藥學(xué)上可接受的載體充當(dāng)對增加結(jié)合蛋白的吸收和分散有用的輔助齊U。在另一實施方案中，輔助劑為透明質(zhì)酸酶。在另一實施方案中，藥物組合物進一步包含至少一種用于治療其中TNF-a活性有害的病癥的另外的治療劑，例如，治療劑、成像劑、細(xì)胞毒素劑、血管生成抑制劑、激酶抑制劑、共刺激分子阻滯劑、粘附分子阻滯劑、抗-細(xì)胞因子抗體或其功能性片段、甲氨蝶呤、環(huán)孢菌素、雷帕霉素(rapamycin)、FK506、可檢測的 標(biāo)記、可檢測的報告物、TNF-α拮抗劑、抗風(fēng)濕藥；肌肉松弛藥、麻醉藥、非留體類抗炎藥(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉藥、神經(jīng)肌肉阻滯劑、抗微生物劑、抗銀屑病藥、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、紅細(xì)胞生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥品、抗抑郁劑、抗精神病藥、刺激劑、哮喘藥、β -激動劑、吸入式類固醇、口服類固醇、腎上腺素或其類似物、細(xì)胞因子和細(xì)胞因子拮抗劑。在另一方面，本發(fā)明提供治療哺乳動物的方法，所述方法包括將有效量的本發(fā)明的藥物組合物給予哺乳動物的步驟。在另一實施方案中，本發(fā)明提供用于降低人TNF-α活性的方法，所述方法包括讓人TNF-α與本發(fā)明的結(jié)合蛋白接觸以降低人TNF-a活性的步驟。在另一實施方案中，本發(fā)明提供用于降低罹患其中TNF-a活性有害的病癥的人受試者的人TNF-a活性的方法，該方法包括將本發(fā)明的結(jié)合蛋白給予人受試者以降低人受試者的人TNF-a活性的步驟。在另一實施方案中，本發(fā)明提供用于治療具有其中TNF-a活性有害的疾病或病癥的受試者的方法，該方法包括將本發(fā)明的結(jié)合蛋白給予受試者以實現(xiàn)治療的步驟。在另一實施方案中，本發(fā)明提供治療罹患其中TNF-a有害的病癥的患者的方法，所述方法包括在給予第二種劑之前、同時或之后給予本發(fā)明的結(jié)合蛋白的步驟，其中第二種劑選自能夠結(jié)合人IL-12的抗體或其片段；PGE2 ；LPA ；NGF ；CGRP ；SubP ；RAGE ;組胺；組胺受體阻滯劑；緩激肽；IL_1 a ；IL-1 β ；VEGF ；PLGF ；甲氨蝶呤；皮質(zhì)類固醇、糖皮質(zhì)激素受體調(diào)節(jié)劑；環(huán)孢菌素、雷帕霉素、FK506、非留體類抗炎藥和硬骨素(sclerostin)。在實施方案中，所述病癥選自呼吸病癥；哮喘；變應(yīng)性哮喘和非變應(yīng)性哮喘；因感染所致的哮喘；因感染呼吸道合胞體病毒(RSV)所致的哮喘；慢性阻塞性肺病(COPD);涉及氣道炎癥的病況；嗜酸性粒細(xì)胞增多癥；纖維化和過多粘液產(chǎn)生；囊性纖維化；肺纖維化；特應(yīng)性病癥；特應(yīng)性皮炎；蕁麻疹；濕疹；變應(yīng)性鼻炎；變應(yīng)性腸胃炎；皮膚的炎癥和/或自身免疫病況；胃腸器官的炎癥和/或自身免疫病況；炎性腸病(IBD);潰瘍性結(jié)腸炎；克羅恩氏(Crohn's)?。桓闻K的炎癥和/或自身免疫病況；肝硬化；肝纖維化；乙型和/或丙型肝炎病毒引起的肝纖維化；硬皮??；腫瘤或癌癥；肝細(xì)胞癌；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；淋巴瘤；何杰金氏(Hodgkin’s)淋巴瘤；病毒感染；細(xì)菌感染；寄生蟲感染；HTLV-1感染；1型保護性免疫應(yīng)答的表達(dá)抑制和疫苗接種中I型保護性免疫應(yīng)答的表達(dá)抑制。在實施方案中，所述病癥選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、青少年慢性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊椎關(guān)節(jié)病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、變應(yīng)性疾病、銀屑病、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、與器官移植相關(guān)的急性或慢性免疫性疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、彌散性血管內(nèi)凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、腎病綜合征、慢性疲乏綜合征、韋格納氏肉芽腫病、過敏性紫癜(Henoch-Schoenlein purpurea)、腎顯微血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、膿毒性休克、中毒性休克綜合征、膿毒病綜合征、惡病質(zhì)、傳染病、寄生蟲病、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬變、溶血性貧血、惡性腫瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏病、散發(fā)性多腺性I型缺乏和多腺性II型缺乏、Schmidt氏綜合征、成人(急性)呼吸窘迫綜合征、禿頭、斑禿、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、Reiter氏病、銀屑病性關(guān)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶爾森氏菌和沙門氏菌相關(guān)性關(guān)節(jié)病、脊椎關(guān)節(jié)病、動脈粥樣化疾病/動脈硬化、特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性大皰性疾病、尋常天皰瘡、落葉狀天皰瘡、類天皰瘡、線性IgA疾病、自身免疫性溶血性貧血、Coombs陽性溶血性貧血、獲得性惡性貧血、青少年性惡性貧血、肌痛腦炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮膚念珠菌病、巨細(xì)胞性動脈炎、原發(fā)性硬化性肝炎、隱原性自身免疫性肝炎、獲得性免疫缺陷疾病綜合征、獲得性 免疫缺陷相關(guān)病、乙型肝炎、丙型肝炎、常見的各種免疫缺陷(常見的可變低丙種球蛋白血癥)、擴張型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、過早卵巢衰竭、纖維化肺疾病、隱原性纖維化肺泡炎、炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)性肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、混合型結(jié)締組織病相關(guān)性肺病、全身性硬皮病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性間質(zhì)性肺病、全身性紅斑狼瘡相關(guān)性肺病、皮肌炎/多肌炎相關(guān)性肺病、SjSgren氏病相關(guān)性肺病、強直性脊柱炎相關(guān)性肺病、脈管炎性彌散性肺病、含鐵血黃素沉著病相關(guān)性肺病、藥物誘導(dǎo)的間質(zhì)性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴細(xì)胞性浸潤性肺病、傳染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、I型自身免疫性肝炎(傳統(tǒng)自身免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、具有黑棘皮癥的B型胰島素耐受性、甲狀旁腺機能減退、與器官移植相關(guān)的急性免疫性疾病、與器官移植相關(guān)的慢性免疫性疾病、骨關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、I型銀屑病、2型銀屑病、特發(fā)性白細(xì)胞減少(Ieucopaenia)、自身免疫性嗜中性白細(xì)胞減少癥、腎臟病N0S、腎小球腎炎(glomerulonephritides)、腎顯微血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發(fā)性男性不育癥或N0S、精子自身免疫性、多發(fā)性硬化(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病繼發(fā)的肺動脈高壓、Goodpasture氏綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎的肺表現(xiàn)、急性風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性脊椎炎、Sti 11氏病、全身性硬皮病、SjSrgren氏綜合征、Takayasu氏病/動脈炎、自身免疫性血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少癥、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進、甲狀腺腫性(goitrous)自身免疫性甲狀腺功能減退(Hashimoto氏病)、萎縮性自身免疫性甲狀腺功能減退、原發(fā)性粘液性水腫、晶狀體性(phacogenic)葡萄膜炎、原發(fā)性血管炎、白癜風(fēng)急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬變、酒精誘導(dǎo)的肝損傷、膽汁郁積(choleostasis)、特應(yīng)性肝病、藥物誘導(dǎo)的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、變態(tài)反應(yīng)和哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神障礙(例如，抑郁和精神分裂癥)、Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病、急性和慢性痛(不同形式的疼痛)、以及癌癥例如肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌和直腸癌以及造血惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)、無β脂蛋白血癥、手足發(fā)紺、急性和慢性寄生或感染過程、急性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、急性髓細(xì)胞樣白血病(AML)、急性或慢性細(xì)菌感染、急性胰腺炎、急性腎功能衰竭、腺癌、心房(aerial)異位搏動、AIDS癡呆復(fù)征、酒精誘導(dǎo)的肝炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、過敏性接觸性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、同種異體移植物排斥、α -I-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側(cè)索硬化、貧血、心絞痛、角質(zhì)細(xì)胞(horn cell)變性、抗CD3治療、抗磷脂綜合征、抗受體超敏反應(yīng)、主動脈和周圍性動脈瘤、主動脈壁夾層形成、高動脈壓、動脈硬化、動靜脈瘺、共濟失調(diào)、心房纖維顫動(持續(xù)性或陣發(fā)性)、心房撲動、房室傳導(dǎo)阻滯、B細(xì)胞淋巴瘤、骨移植物排斥、骨髓移植(BMT)排斥、束支傳導(dǎo)阻滯、Burkitt氏淋巴瘤、燒傷、心律失常、心臟震暈綜合征、心臟腫瘤、心肌病、心肺分流術(shù)炎癥應(yīng)答、軟骨移植排斥、小腦皮質(zhì)變性、小腦病癥、紊亂性或多源性房性心動過速、化學(xué)療法相關(guān)病癥、慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性炎性病理學(xué)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結(jié)腸直腸癌、充血性心力衰竭、結(jié)膜炎、接觸性皮炎、肺源性心臟病、冠狀動脈疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培養(yǎng)物陰性膿毒病、囊性纖維化、細(xì)胞因子療法相關(guān)病癥、拳擊員癡呆(Dementia pugilistica)、脫髓鞘病、登革出血熱、皮炎、皮膚病學(xué)病況、多尿癥(diabetes)、糖尿病、糖尿病性動脈硬化性疾病、彌漫性Lewy小體病、擴張性充血性心肌病、基底神經(jīng)節(jié)病癥、中年唐氏綜合征、由阻斷CNS多巴胺受體的藥物誘導(dǎo)的 藥物誘導(dǎo)的運動障礙、藥物敏感性、濕疹、腦脊髓炎、心內(nèi)膜炎、內(nèi)分泌病、會厭炎、EB病毒感染、紅斑性肢痛病、錐體外束和小腦病癥、家族性噬血細(xì)胞性(hemophagocytic)淋巴組織細(xì)胞增多癥、胎兒胸腺移植排斥、Friedreich氏共濟失調(diào)、功能性外周性動脈病癥、真菌性膿毒病、氣性壞疽病、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織的移植物排斥、革蘭氏陰性膿毒病、革蘭氏陽性膿毒病、由于細(xì)胞內(nèi)生物的肉芽腫、毛細(xì)胞性白血病、Hal Iervorden-Spatz病、Hashimoto氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥、血色素沉著癥、血液透析、溶血性尿毒性綜合征/血栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律失常、HIV感染/HIV神經(jīng)病、何杰金氏病、運動過度性運動障礙、超敏反應(yīng)、超敏感性肺炎、高血壓、運動機能減退性運動障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸評價、特發(fā)性Addison氏病、特發(fā)性肺纖維化、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、虛弱、嬰兒型脊髓性肌萎縮、主動脈炎癥、A型流感、電離輻射照射、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、缺血性再灌注損傷、缺血性中風(fēng)、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年脊髓性肌萎縮、卡波西氏肉瘤、腎移植排斥、軍團桿菌、利什曼病、麻風(fēng)病、皮層脊髓系統(tǒng)損傷、脂肪水腫、肝移植排斥、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細(xì)胞增多癥、惡性黑素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血癥、代謝性/特發(fā)性、偏頭痛、線粒體多系統(tǒng)病癥、混合型結(jié)締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發(fā)性骨髓瘤、多系統(tǒng)變性(Menzel Dejerine-ThomasShy-Drager和Machado-Joseph)、重癥肌無力、鳥胞內(nèi)分支桿菌、結(jié)核分支桿菌、骨髓異常增生綜合征、心肌梗死、心肌缺血性病癥、鼻咽癌、新生兒慢性肺病、腎炎、腎變病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)原性I肌萎縮、嗜中性粒細(xì)胞減少性發(fā)燒、非何杰金淋巴瘤、腹主動脈及其分支閉塞、閉塞性動脈病癥、0KT3 治療、睪丸炎/附睪炎(epidydimitis)、睪丸炎/輸精管切除術(shù)逆轉(zhuǎn)操作、器官巨大癥、骨質(zhì)疏松癥、胰移植排斥、胰癌、惡性腫瘤的類腫瘤性綜合征/高鈣血癥、甲狀旁腺移植排斥、盆腔炎癥性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性動脈粥樣硬化疾病、外周血管病癥、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺囊蟲性肺炎、肺炎、POEMS綜合征(多發(fā)性神經(jīng)病、器官巨大癥、內(nèi)分泌病、單克隆丙種球蛋白病、和皮膚變化綜合征)、灌注后綜合征、泵后綜合征、MI心切開術(shù)后綜合征、先兆子癇、進行性核上(supranucleo)麻痹、原發(fā)性肺動脈高壓、放射治療、Raynaud氏現(xiàn)象和疾病、Raynaud氏病、Refsum氏病、常規(guī)狹窄QRS心動過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小體型老年性癡呆、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、休克、鐮狀細(xì)胞貧血、皮膚同種異體移植物排斥、皮膚變化綜合征、小腸移植排斥、實體瘤、特殊心律失常、脊髓性共濟失調(diào)、脊髓小腦變性、鏈球菌肌炎、小腦結(jié)構(gòu)損傷、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統(tǒng)梅毒、全身性過敏反應(yīng)、全身炎癥反應(yīng)綜合征、全身發(fā)作性青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T細(xì)胞或FAB ALL、毛細(xì)血管擴張、血栓閉 塞性脈管炎、血小板減少癥、毒性、移植物、創(chuàng)傷/出血、III型超敏反應(yīng)、IV型超敏反應(yīng)、不穩(wěn)定心絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻疹、心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒和真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關(guān)性曬血細(xì)胞性綜合征、Wernicke-Korsakoff綜合征、Wilson氏病、任何器官或組織的異種移植排斥、急性冠狀動脈綜合征、急性特發(fā)性多神經(jīng)炎、急性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根性神經(jīng)病、急性缺血、成人Still氏病、斑禿、過敏反應(yīng)、抗磷脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、動脈硬化、特應(yīng)性濕疹、特應(yīng)性皮炎、自身免疫性皮炎、與鏈球菌感染相關(guān)的自身免疫性病癥、自身免疫性腸病、自身免疫性聽力喪失、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征(ALPS)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性過早卵巢衰竭、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天皰瘡、心血管病、災(zāi)變性抗磷脂綜合征、乳糜瀉、頸椎關(guān)節(jié)強硬、慢性缺血、疤痕性類天皰瘡、具有多發(fā)性硬化風(fēng)險的臨床孤立綜合征(clinically isolated syndrome) (CIS)、結(jié)膜炎、兒童期發(fā)病性精神病(childhood onset psychiatric disorder)、慢性阻塞性肺病(COPD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病、椎間盤突出(disk herniation)、盤脫垂(disk prolapse)、藥物誘導(dǎo)的免疫性溶血性貧血、心內(nèi)膜炎、子宮內(nèi)膜異位、眼內(nèi)炎、鞏膜外層炎、多形性紅斑、重型多形性紅斑、妊娠期類天皰瘡、Guillain-Barr6綜合征(GBS)、枯草熱、Hughes綜合征、特發(fā)性帕金森病、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)、免疫性溶血性貧血、內(nèi)含體肌炎、傳染性眼炎性疾病、炎性脫髓鞘疾病、炎性心臟病、炎性腎病、IPF/UIP、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜結(jié)膜炎(kerato junctivitis sicca)、Kussmaul 病或 Kussmaul-Meier 病、Landry氏麻痹、朗格漢斯(Langerhan’ s)細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥、網(wǎng)狀青斑、黃斑變性、顯微鏡下多脈管炎、morbus bechterev、運動神經(jīng)元病癥、粘膜類天皰瘡、多器官衰竭、重癥肌無力、脊髓異常增生綜合征、心肌炎、神經(jīng)根障礙、神經(jīng)病、非甲非乙型肝炎、視神經(jīng)炎、骨質(zhì)溶解、卵巢癌、少關(guān)節(jié)的JRA、周圍動脈閉塞性疾病(PAOD)、周圍血管疾病(PVD)、外周動脈疾病(PAD)、靜脈炎、結(jié)節(jié)性多動脈炎(或結(jié)節(jié)性動脈外膜炎)、多軟骨炎、風(fēng)濕性多肌痛、白發(fā)癥、多關(guān)節(jié)的JRA、多發(fā)性內(nèi)分泌缺陷綜合征、多肌炎、風(fēng)濕性多肌痛(PMR)、泵后綜合征(post-pump syndrome)、原發(fā)性帕金森綜合征、前列腺和直腸癌以及造血惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)、前列腺炎、單純紅細(xì)胞再生障礙、原發(fā)性腎上腺機能不足、復(fù)發(fā)型視神經(jīng)脊髓炎、再狹窄、風(fēng)濕性心臟病、sapho (滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、繼發(fā)性淀粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經(jīng)痛、繼發(fā)性腎上腺機能不足、聚硅氧烷相關(guān)的結(jié)締組織病、Sneddon-ffiIkinson皮膚病、關(guān)節(jié)強硬性脊椎炎、Stevens-Johnson綜合征(SJS)、全身性炎癥應(yīng)答綜合征、顳動脈炎、弓形體視網(wǎng)膜炎、中毒性表皮壞死松解、橫貫性脊髓炎、TRAPS(腫瘤壞死因子受體相關(guān)的周期性綜合征)，I型變態(tài)反應(yīng)，II型糖尿病、蕁麻疹、普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)、脈管炎、春季結(jié)膜炎、病毒性視網(wǎng)膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada綜合征(VKH綜合征)、濕黃斑變性、傷口愈合、耶爾森氏菌(yersinia)和沙門氏菌(salmonella)相關(guān)的關(guān)節(jié)病。
在另一實施方案中，本發(fā)明提供治療罹患其中TNF-α有害的病癥的患者的方法，該方法包括在給予第二種劑之前、同時或之后給予本發(fā)明的結(jié)合蛋白的步驟，其中所述第二種劑選自吸入式類固醇；β_激動劑；短效或長效β_激動劑；白三烯或白三烯受體的拮抗劑；ADVAIR ;IgE抑制劑；抗-IgE抗體；X0LAIR ;磷酸二酯酶抑制劑；H)E4抑制劑；黃嘌呤；抗膽堿藥；肥大細(xì)胞-穩(wěn)定劑；色甘酸；IL_4抑制劑；IL-5抑制劑；嗜酸細(xì)胞活化趨化因子(eotaxin)/CCR3抑制劑；包括H1、H2、H3和H4在內(nèi)的組胺或其受體的拮抗劑；前列腺素D或其受體DPl和CRTH2的拮抗劑；TNF拮抗劑；TNF受體的可溶性片段；ENBREL ；TNF酶拮抗劑；TNF轉(zhuǎn)換酶(TACE)抑制劑；毒蕈堿性受體拮抗劑JGF-β拮抗劑；干擾素Y ;吡非尼酮(perfenidone);化療劑，甲氨蝶呤；來氟米特(Ieflunomide);西羅莫司(sirolimus)(雷帕霉素)或其類似物、CCI-779 ;C0X2或cPLA2抑制劑；NSAID ;免疫調(diào)節(jié)劑；p38抑制劑；TPL-2、MK-2和NFkB抑制劑；布地奈德(budenoside);表皮生長因子；皮質(zhì)類固醇；環(huán)孢菌素；柳氮磺胺吡啶；氨基水楊酸鹽；6_巰基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂氧合酶抑制劑；美沙拉秦(mesalamine);奧沙拉秦(olsalazine);巴柳氮；抗氧化劑；血栓燒抑制劑；IL_1受體拮抗劑；抗-幾-10抗體；抗-幾-6抗體；生長因子；彈性蛋白酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物；LT、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-IUIL-12、IL-14、IL-15、 IL-16、 IL-17、 IL-18、 IL-19、 IL-20、 IL-21、 IL-22、 IL-23、 IL-24、 IL-25、 IL-26、 IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-II, GM-CSF, FGF 或 PDGF 的抗體或激動劑；CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、CD45、CD69、CD90 或其配體的抗體；FK506 ;雷帕霉素；麥考酹酸嗎乙酯；布洛芬(ibuprofen);潑尼松龍；磷酸二酯酶抑制劑；腺苷激動劑；抗血栓劑；補體抑制劑；腎上腺素能藥物；IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑轉(zhuǎn)換酶抑制劑；TNF_a轉(zhuǎn)換酶抑制劑；T_細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑；金屬蛋白酶抑制劑；6_巰基嘌呤；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；可溶性細(xì)胞因子受體；可溶性p55 TNF受體;可溶性p75 TNF受體；sIL-lRI ；sIL-lRII ;sIL_6R ;抗炎細(xì)胞因子;IL_4 ;IL_10；和 TGF- β。在實施方案中，通過選自以下的至少一種方式來將本發(fā)明的結(jié)合蛋白給予受試者胃腸外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜的、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、推注、陰道、直腸、含服、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮。發(fā)明詳述
本發(fā)明涉及TNF-a結(jié)合蛋白，尤其是抗-TNF-a抗體或其結(jié)合TNF-a (即腫瘤壞死因子、腫瘤壞死因子-阿爾法、腫瘤壞死因子-a、TNF和惡病質(zhì)素)的抗原-結(jié)合部分。本發(fā)明的不同方面涉及抗體和抗體片段及其藥物組合物，以及用于制備所述抗體和片段的核酸、重組表達(dá)載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明亦包括使用本發(fā)明抗體檢測人TNF-a、在體外或體內(nèi)抑制人TNF-a和調(diào)控基因表達(dá)或TNF-a相關(guān)功能的方法。亦闡述了包含本發(fā)明抗體的組合物以及使用所述抗體的方法。除非本文另外定義，否則與本發(fā)明一起使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的意思。術(shù)語的意思和范圍應(yīng)該很清楚，然而，在有任何潛在歧義的情況下，本文所提供的定義優(yōu)先于任何詞典或外部的定義。而且，除非上下文需要，否則單數(shù)的術(shù)語應(yīng)包括復(fù)數(shù)，復(fù)數(shù)的術(shù)語應(yīng)包括單數(shù)。在本申請中，除非另外指出，否則使用"或"意為〃和/或〃。此外，使用術(shù)語〃包括〃以及該術(shù)語的其它形式例如〃包含〃和〃包涵〃，是無限制的。同樣，除非另外明確指出，否則術(shù)語例如〃元件〃或〃組分〃包括包含一個單位的元件或組分和包含多于一個亞單元的元件或組分。連同本文描述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)、病理學(xué)、腫瘤學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)及蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)和雜交使用的術(shù)語及其技術(shù)，通常為本領(lǐng)域所熟知和常用的術(shù)語和技術(shù)。除非另外指出，否則通常根據(jù)本領(lǐng)域熟知的常規(guī)方法并如本說明書通篇所引用和論述的各種一般和更具體的參考文獻中所述，來實施本發(fā)明的方法和技術(shù)。如本領(lǐng)域通常所完成或如本文所述，根據(jù)廠家說明書來實施酶促反應(yīng)和純化技術(shù)。與本文所述的分析化學(xué)、有機合成化學(xué)和醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)一起使用的術(shù)語及實驗程序和技術(shù)，為本領(lǐng)域所熟知并通常使用的那些。將標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送及治療患者。將精選的術(shù)語定義如下，本發(fā)明可更加容易了解。術(shù)語〃多肽”指氨基酸的任何多聚鏈。術(shù)語〃肽〃和“蛋白質(zhì)”可與術(shù)語多肽互換使用，亦指氨基酸的多聚鏈。術(shù)語"多肽"包括天然和人工蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段和蛋白質(zhì)序列的多肽類似物。多肽可為單體或多聚體。術(shù)語〃分離的蛋白質(zhì)〃或〃分離的多肽〃為這樣的蛋白質(zhì)或多肽由于其衍生起源或來源而不與在其天然狀態(tài)中與其相伴的天然締合組分締合；基本上沒有來自同一物種的其它蛋白質(zhì)；由來自不同物種的細(xì)胞來表達(dá)；或不是天然存在的。因此，化學(xué)合成的或在不同于其天然產(chǎn)生的細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的多肽，將是與其天然締合組分"分離的"。通過使用本領(lǐng)域熟知的蛋白純化技術(shù)分離亦可使蛋白質(zhì)基本上沒有天然締合組分。術(shù)語“回收”指通過分離(例如使用本領(lǐng)域熟知的蛋白純化技術(shù))使化學(xué)物質(zhì)例如多肽基本上沒有天然締合組分的過程。術(shù)語“人TNF-α”(本文縮寫為hTNF_ a )，包括三聚體細(xì)胞因子蛋白質(zhì)。該術(shù)語包括包含三個17. 5 kD TNF-a蛋白質(zhì)的同源三聚體蛋白質(zhì)。同源三聚體蛋白質(zhì)稱作〃TNF-a蛋白〃。術(shù)語人“TNF-a ”意欲包括可通過標(biāo)準(zhǔn)重組表達(dá)方法來制備的重組人TNF-a(rhTNF- a )。表I顯示了人TNF- a的序列。表I :人TNF a的序列
權(quán)利要求
1.人源化結(jié)合蛋白，其包含能夠結(jié)合人腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含含有以下氨基酸序列的至少一個⑶R :SEQ ID N0:22的殘基31-35、SEQ ID NO:22 的殘基 50-65、SEQ ID NO:22 的殘基 98-106、SEQ ID NO:23 的殘基24-34,SEQ ID NO: 23的殘基50-56或SEQ ID NO: 23的殘基89-97，其中所述結(jié)合蛋白包含人接納體構(gòu)架。
2.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含至少3個CDR。
3.權(quán)利要求2的結(jié)合蛋白，其中所述至少3個CDR包含可變結(jié)構(gòu)域CDR集合，所述可變結(jié)構(gòu)域CDR集合為(a) SEQ ID NO: 22的殘基31_35、SEQ ID NO: 22的殘基50-65和SEQID NO: 22 的殘基 98-106 ;和(b) SEQ ID NO: 23 的殘基 24-34、SEQ ID NO: 23 的殘基 50-56或 SEQ ID NO: 23 的殘基 89-97。
4.權(quán)利要求3的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列包含以下殘基SEQ ID NO:22 的殘基 31-35、SEQ ID NO:22 的殘基 50-65、SEQ ID NO:22的殘基 98-106、SEQ ID NO: 23 的殘基 24-34、SEQ ID NO: 23 的殘基 50-56 和 SEQ ID NO: 23的殘基89-97。
5.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含VH區(qū)。
6.權(quán)利要求5的結(jié)合蛋白，其中所述VH區(qū)包含SEQID NO: 24、25、28、29、30、31、32或33的氨基酸序列。
7.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含VL區(qū)。
8.權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其中所述VL區(qū)的氨基酸序列為SEQID NO: 26、27、34、35或36。
9.權(quán)利要求7的結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含VH區(qū)和VL區(qū)。
10.權(quán)利要求9的結(jié)合蛋白，其中所述VH區(qū)包含SEQID NO: 24、25、28、29、30、31、32或33的氨基酸序列，所述VL區(qū)包含SEQ ID NO: 26、27、34、35或36的氨基酸序列。
11.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含SEQID NO: 6_21的至少一種氨基酸序列。
12.權(quán)利要求11的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含SEQID NO: 9、10、11、12、15、16、17或21的氨基酸序列。
13.權(quán)利要求11或12的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架包含至少一個構(gòu)架區(qū)氨基酸取代，其中所述構(gòu)架的氨基酸序列與所述人接納體構(gòu)架的序列至少65%相同，并包含至少70個與所述人接納體構(gòu)架相同的氨基酸殘基。
14.權(quán)利要求13的結(jié)合蛋白，其中所述人接納體構(gòu)架在關(guān)鍵殘基上包含至少一個構(gòu)架區(qū)氣基酸取代，所述關(guān)鍵殘基為Btt鄰CDR的殘基、糖基化位點殘基、稀有殘基、能夠與人TNF-α相互作用的殘基、能夠與CDR相互作用的殘基、規(guī)范殘基、重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間的接觸殘基、游標(biāo)區(qū)中的殘基、在Chothia-定義的可變重鏈⑶Rl或Kabat-定義的第一重鏈構(gòu)架之間重疊的區(qū)域中的殘基。
15.權(quán)利要求14的結(jié)合蛋白，其中所述關(guān)鍵殘基為Hl、H12、H24、H27、H29、H37、H48、H49、H67、H71、H73、H76、H78、L13、L43、L58、L70 或 L80。
16.權(quán)利要求15的結(jié)合蛋白，其中所述VH突變?yōu)镼1E、I12V、A24V、G27F、I29L、V29F、F29L、I37V、I48L、V48L、S49G、V67L、F67L、V71K、R71K、T73N、N76S、L78I 或 F78I。
17.權(quán)利要求15的結(jié)合蛋白，其中所述￥1^突變?yōu)椋?31^、4435、158￥3700或580卩。
18.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含具有以下氨基酸序列的兩個可變結(jié)構(gòu)域SEQ ID NO: 24 和 SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 24 和 SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 25 和SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:25 或 SEQ ID NO:27。
19.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)TNF-α的生物學(xué)功能。
20.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白I，其中所述結(jié)合蛋白中和TNF-α。
21.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白1，其中所述結(jié)合蛋白減弱TNF-α結(jié)合其受體的能力。
22.權(quán)利要求21的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白減弱原-人TNF-α、成熟-人TNF-α或截短的-人TNF- α結(jié)合其受體的能力。
23.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白降低以下一種或多種TNF-依賴的細(xì)胞因子產(chǎn)生、TNF-依賴的細(xì)胞殺傷、TNF-依賴的炎癥、TNF-依賴的骨質(zhì)侵蝕和TNF-依賴的軟骨損傷。
24.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白具有至少約IO2IT1S'至少約IO3IT1S'至少約IO4M-1 S—1、至少約IO5M-1S-1或至少約IO6M-1S-1的結(jié)合速率常數(shù)(Kj，所述速率常數(shù)通過表面等離振子共振來測量。
25.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白具有最多約KT3s'最多約10、'最多約KT5iT1或最多約KTfV1的解離速率常數(shù)(Ktjff)，所述速率常數(shù)通過表面等離振子共振來測量。
26.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白具有最多約10_7M、最多約10_8 M、最多約10_9 M、最多約ΙΟ-10 M、最多約ΙΟ-11 M、最多約10_12 M或最多10_13 M的解離常數(shù)(Kd)。
27.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白包含人IgM恒定結(jié)構(gòu)域、人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG2恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG3恒定結(jié)構(gòu)域、人IgG4恒定結(jié)構(gòu)域、人IgA恒定結(jié)構(gòu)域或人IgE恒定結(jié)構(gòu)域的重鏈免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域。
28.權(quán)利要求27的結(jié)合蛋白，其中所述重鏈免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域為人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域。
29.權(quán)利要求I或27的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白進一步包含人IgK恒定結(jié)構(gòu)域或人Ig λ恒定結(jié)構(gòu)域。
30.權(quán)利要求28的結(jié)合蛋白，其中所述人IgGl恒定結(jié)構(gòu)域包含SEQID ΝΟ:2或SEQ IDNO:3的氨基酸序列。
31.權(quán)利要求29的結(jié)合蛋白，其中所述輕鏈免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域為包含氨基酸序列SEQ ID Ν0:4的人Ig κ恒定結(jié)構(gòu)域或包含氨基酸序列SEQ ID ΝΟ:5的人Ig λ恒定結(jié)構(gòu)域。
32.能夠結(jié)合人TNF-α的結(jié)合蛋白，所述結(jié)合蛋白包含 Ig恒定重區(qū)，其具有SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3的氨基酸序列； Ig恒定輕區(qū)，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO: 5的氨基酸序列； Ig可變重區(qū)，其具有SEQ ID NO: 24、25、28、29、30、31、32或33的氨基酸序列；和 Ig可變輕區(qū)，其具有SEQ ID NO: 26、27、34、35或36的氨基酸序列。
33.權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白為免疫球蛋白分子、Fv、二硫鍵連接的Fv、單克隆抗體、scFv、嵌合抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、CDR-移植的抗體、雙抗體、人源化抗體、多特異抗體、Fab、雙重特異抗體、Fab’片段、雙特異抗體、F(ab’)2片段，DVD_Ig 、包含在鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段、由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段、由抗體單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段、dAb片段、分離的互補決定區(qū)(CDR)或單鏈抗體。
34.包含權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白的結(jié)晶的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白為晶體形式。
35.權(quán)利要求34的結(jié)晶的結(jié)合蛋白，其中所述晶體為無載體的藥用控制釋放晶體。
36.權(quán)利要求34的結(jié)晶的結(jié)合蛋白，其中所述結(jié)合蛋白比所述結(jié)合蛋白的可溶性對應(yīng)物具有更長的體內(nèi)半衰期。
37.釋放TNF-α結(jié)合蛋白的組合物，所述組合物包含(a)制劑，其中所述制劑包含權(quán)利要求I或34的結(jié)合蛋白和成分；和(b)至少一種聚合載體。
38.權(quán)利要求37的組合物，其中所述成分選自白蛋白、鹿糖、海藻糖、拉克替醇、明膠、羥丙基-β -環(huán)糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
39.權(quán)利要求37的組合物，其中所述聚合載體為選自以下一種或多種的聚合物聚丙烯酸、聚腈基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酸酐、聚縮酚酸肽、聚酯、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚b-羥基丁酸酯、聚己內(nèi)酯、聚二氧雜環(huán)己酮、聚乙二醇、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚有機磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、馬來酸酐-烷基乙烯醚共聚物、Pluronic多元醇、白蛋白、藻酸鹽、纖維素和纖維素衍生物、膠原、纖維蛋白、明膠、透明質(zhì)酸、寡糖、糖胺聚糖、硫酸化的多糖及其共混物和共聚物。
40.包含權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白和接頭或免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域的TNF-α結(jié)合蛋白構(gòu)建體。
41.權(quán)利要求40的TNF-α結(jié)合蛋白構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白具有人糖基化方式。
42.權(quán)利要求40的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白構(gòu)建體為結(jié)晶的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體。
43.權(quán)利要求42的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體，其中所述結(jié)晶的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體為無載體的藥用控制釋放結(jié)晶的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體。
44.權(quán)利要求40的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白構(gòu)建體比所述結(jié)合蛋白構(gòu)建體的可溶性對應(yīng)物具有更長的體內(nèi)半衰期。
45.包含權(quán)利要求40的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體的TNF-a結(jié)合蛋白綴合物，所述TNF-a結(jié)合蛋白綴合物進一步包含免疫粘附分子、成像劑、治療劑或細(xì)胞毒素劑。
46.權(quán)利要求45的TNF-a結(jié)合蛋白綴合物，其中所述劑為成像劑，所述成像劑為放射性標(biāo)記、酶、熒光標(biāo)記、發(fā)光標(biāo)記、生物發(fā)光標(biāo)記、磁性標(biāo)記或生物素。
47.權(quán)利要求46的TNF-a結(jié)合蛋白綴合物，其中放射性標(biāo)記為3H、14C、35S、9°Y、99Tc、111In, 1251 , 131 1 , 177Lu,166Ho 和 153Sm。
48.權(quán)利要求47的TNF-a結(jié)合蛋白綴合物，其中所述劑為治療劑或細(xì)胞毒性劑，其為抗代謝物、烷化劑、抗生素、生長因子、細(xì)胞因子、抗血管生成劑、抗有絲分裂劑、蒽環(huán)類抗生素、毒素或細(xì)胞凋亡劑。
49.分離的核酸，其編碼包含權(quán)利要求I的氨基酸序列的結(jié)合蛋白。
50.分離的核酸，其編碼包含權(quán)利要求40的氨基酸序列的TNF-a結(jié)合蛋白構(gòu)建體。
51.載體,其包含權(quán)利要求49或50的分離的核酸。
52.權(quán)利要求51的載體，其中所述載體選自pcDNA、pTT、pTT3、pEFB0S、pBV、pJV和pBJ。
53.宿主細(xì)胞，其包含權(quán)利要求51的載體。
54.權(quán)利要求53的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞。
55.權(quán)利要求53的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。
56.權(quán)利要求55的宿主細(xì)胞，其中所述真核細(xì)胞為原生生物細(xì)胞、動物細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞、禽類細(xì)胞或昆蟲細(xì)胞。
57.權(quán)利要求55的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞為CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞或釀酒酵母細(xì)胞。
58.產(chǎn)生結(jié)合TNF-α的蛋白質(zhì)的方法，所述方法包括在足以產(chǎn)生結(jié)合TNF-a的結(jié)合蛋白的條件下在培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求53的宿主細(xì)胞的步驟。
59.用權(quán)利要求58的方法產(chǎn)生的TNF-a結(jié)合蛋白。
60.藥物組合物，其包含權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白和藥學(xué)上可接受的載體。
61.權(quán)利要求60的藥物組合物，其中所述藥學(xué)上可接受的載體充當(dāng)輔助劑。
62.權(quán)利要求61的藥物組合物，其中所述輔助劑為透明質(zhì)酸酶。
63.權(quán)利要求60的藥物組合物，其進一步包含至少一種另外的治療劑，所述另外的治療劑用于治療其中TNF-a活性有害的病癥。
64.權(quán)利要求63的藥物組合物，其中所述另外的劑為治療劑、成像劑、細(xì)胞毒素劑、血管生成抑制劑、激酶抑制劑、共刺激分子阻滯劑、粘附分子阻滯劑、抗-細(xì)胞因子抗體或其功能性片段、甲氨蝶呤、環(huán)孢菌素、雷帕霉素、FK506、可檢測的標(biāo)記、可檢測的報告物、TNF-a拮抗劑、抗風(fēng)濕藥；肌肉松弛藥、麻醉藥、非留體類抗炎藥(NSAID)、止痛劑、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉藥、神經(jīng)肌肉阻滯劑、抗微生物劑、抗銀屑病藥、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、紅細(xì)胞生成素、免疫劑、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長激素、激素替代藥物、放射性藥品、抗抑郁齊 、抗緊張劑、刺激齊 、哮喘藥劑、β-激動齊 、吸入式類固醇、口服類固醇、腎上腺素或其類似物、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑。
65.用于治療哺乳動物的方法，所述方法包括將有效量的權(quán)利要求60的藥物組合物給予所述哺乳動物的步驟。
66.用于降低人TNF-a活性的方法，所述方法包括讓人TNF-a與權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白接觸以使人TNF- a活性降低的步驟。
67.用于降低罹患其中TNF-a活性有害的病癥的人受試者的人TNF-a活性的方法，所述方法包括將權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白給予所述人受試者以使人受試者中的人TNF-a活性降低和/或?qū)崿F(xiàn)治療的步驟。
68.治療罹患其中TNF-a有害的病癥的患者的方法，所述方法包括在給予第二種劑之前、同時或之后給予權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白的步驟，其中所述第二種劑為能夠結(jié)合人IL-12的抗體或其片段；PGE2 ；LPA ；NGF ；CGRP ；SubP ；RAGE ;組胺；組胺受體阻滯劑；緩激肽；IL-I a ;IL-li3 ;VEGF ;PLGF ;甲氨蝶呤；皮質(zhì)類固醇、糖皮質(zhì)激素受體調(diào)節(jié)劑；環(huán)孢菌素、雷帕霉素、FK506或非留體類抗炎藥。
69.權(quán)利要求68的方法，其中所述病癥為呼吸病癥；哮喘；變應(yīng)性哮喘和非變應(yīng)性哮喘；因感染所致的哮喘；因感染呼吸道合胞體病毒(RSV)所致的哮喘；慢性阻塞性肺病(COPD);涉及氣道炎癥的病況；嗜酸性粒細(xì)胞增多癥；纖維化和過多粘液產(chǎn)生；囊性纖維化；肺纖維化；特應(yīng)性病癥；特應(yīng)性皮炎；蕁麻疹；濕疹；變應(yīng)性鼻炎；變應(yīng)性腸胃炎；皮膚的炎癥和/或自身免疫病況；胃腸器官的炎癥和/或自身免疫病況；炎性腸病(IBD);潰瘍性結(jié)腸炎；克羅恩氏??；肝臟的炎癥和/或自身免疫病況；肝硬化；肝纖維化；乙型和/或丙型肝炎病毒引起的肝纖維化；硬皮病；腫瘤或癌癥；肝細(xì)胞癌；膠質(zhì)母細(xì)胞瘤；淋巴瘤；何杰金氏淋巴瘤；病毒感染；細(xì)菌感染；寄生蟲感染；HTLV-1感染；1型保護性免疫應(yīng)答的表達(dá)抑制和疫苗接種中I型保護性免疫應(yīng)答的表達(dá)抑制。
70.權(quán)利要求68的方法，其中所述病癥選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、青少年慢性關(guān)節(jié)炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊椎關(guān)節(jié)病、全身性紅斑狼瘡、克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、變應(yīng)性疾病、銀屑病、皮炎硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、與器官移植相關(guān)的急性或慢性免疫性疾病、肉狀瘤病、動脈粥樣硬化、彌散性血管內(nèi)凝血、Kawasaki氏病、Grave氏病、腎病綜合征、慢性疲乏綜合征、韋格納氏肉芽腫病、過敏性紫癜、腎顯微血管炎、慢性活動性肝炎、葡萄膜炎、膿毒性休克、中毒性休克綜合征、膿毒病綜合征、惡病質(zhì)、傳染病、寄生蟲病、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森病、阿爾茨海默病、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬變、溶血性貧血、惡性腫瘤、心力衰竭、心肌梗死、Addison氏病、 散發(fā)性多腺性I型缺乏和多腺性II型缺乏、Schmidt氏綜合征、成人(急性)呼吸窘迫綜合征、禿頭、斑禿、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、Reiter氏病、銀屑病性關(guān)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶爾森氏菌和沙門氏菌相關(guān)性關(guān)節(jié)病、脊椎關(guān)節(jié)病、動脈粥樣化疾病/動脈硬化、特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性大皰性疾病、尋常天皰瘡、落葉狀天皰瘡、類天皰瘡、線性IgA疾病、自身免疫性溶血性貧血、Coombs陽性溶血性貧血、獲得性惡性貧血、青少年性惡性貧血、肌痛腦炎/Royal Free疾病、慢性粘膜皮膚念珠菌病、巨細(xì)胞性動脈炎、原發(fā)性硬化性肝炎、隱原性自身免疫性肝炎、獲得性免疫缺陷疾病綜合征、獲得性免疫缺陷相關(guān)病、乙型肝炎、丙型肝炎、常見的各種免疫缺陷(常見的可變低丙種球蛋白血癥)、擴張型心肌病、女性不育、卵巢衰竭、過早卵巢衰竭、纖維化肺疾病、隱原性纖維化肺泡炎、炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)性肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、混合型結(jié)締組織病相關(guān)性肺病、全身性硬皮病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性間質(zhì)性肺病、全身性紅斑狼瘡相關(guān)性肺病、皮肌炎/多肌炎相關(guān)性肺病、SjSgren氏病相關(guān)性肺病、強直性脊柱炎相關(guān)性肺病、脈管炎性彌散性肺病、含鐵血黃素沉著病相關(guān)性肺病、藥物誘導(dǎo)的間質(zhì)性肺病、纖維化、放射性纖維化、閉塞性細(xì)支氣管炎、慢性嗜酸性肺炎、淋巴細(xì)胞性浸潤性肺病、傳染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、I型自身免疫性肝炎(傳統(tǒng)自身免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、具有黑棘皮癥的B型胰島素耐受性、甲狀旁腺機能減退、與器官移植相關(guān)的急性免疫性疾病、與器官移植相關(guān)的慢性免疫性疾病、骨關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、I型銀屑病、2型銀屑病、特發(fā)性白細(xì)胞減少、自身免疫性嗜中性白細(xì)胞減少癥、腎臟病NOS、腎小球腎炎、腎顯微血管炎、萊姆病、盤狀紅斑狼瘡、特發(fā)性男性不育癥或N0S、精子自身免疫性、多發(fā)性硬化(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病繼發(fā)的肺動脈高壓、Goodpasture氏綜合征、結(jié)節(jié)性多動脈炎的肺表現(xiàn)、急性風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性脊椎炎、Still氏病、全身性硬皮病、Sjorgren氏綜合征、Takayasu氏病/動脈炎、自身免疫性血小板減少癥、特發(fā)性血小板減少癥、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺機能亢進、甲狀腺腫性自身免疫性甲狀腺功能減退(Hashimoto氏病)、萎縮性自身免疫性甲狀腺功能減退、原發(fā)性粘液性水腫、晶狀體性葡萄膜炎、原發(fā)性血管炎、白癜風(fēng)急性肝病、慢性肝病、酒精性肝硬變、酒精誘導(dǎo)的肝損傷、膽汁郁積、特應(yīng)性肝病、藥物誘導(dǎo)的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、變態(tài)反應(yīng)和哮喘、B群鏈球菌(GBS)感染、精神障礙(例如，抑郁和精神分裂癥)、Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病、急性和慢性痛(不同形式的疼痛)、以及癌癥例如肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌和直腸癌以及造血惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)、無β脂蛋白血癥、手足發(fā)紺、急性和慢性寄生或感染過程、急性白血病、急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、急性髓細(xì)胞樣白血病(AML)、急性或慢性細(xì)菌感染、急性胰腺炎、急性腎功能衰竭、腺癌、心房異位搏動、AIDS癡呆復(fù)征、 酒精誘導(dǎo)的肝炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、過敏性接觸性皮炎、變應(yīng)性鼻炎、同種異體移植物排斥、α -I-抗胰蛋白酶缺乏、肌萎縮性側(cè)索硬化、貧血、心絞痛、角質(zhì)細(xì)胞變性、抗CD3治療、抗磷脂綜合征、抗受體超敏反應(yīng)、主動脈和周圍性動脈瘤、主動脈壁夾層形成、高動脈壓、動脈硬化、動靜脈瘺、共濟失調(diào)、心房纖維顫動(持續(xù)性或陣發(fā)性)、心房撲動、房室傳導(dǎo)阻滯、B細(xì)胞淋巴瘤、骨移植物排斥、骨髓移植(BMT)排斥、束支傳導(dǎo)阻滯、Burkitt氏淋巴瘤、燒傷、心律失常、心臟震暈綜合征、心臟腫瘤、心肌病、心肺分流術(shù)炎癥應(yīng)答、軟骨移植排斥、小腦皮質(zhì)變性、小腦病癥、紊亂性或多源性房性心動過速、化學(xué)療法相關(guān)病癥、慢性髓細(xì)胞性白血病(CML)、慢性酒精中毒、慢性炎性病理學(xué)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水楊酸鹽中毒、結(jié)腸直腸癌、充血性心力衰竭、結(jié)膜炎、接觸性皮炎、肺源性心臟病、冠狀動脈疾病、Creutzfeldt-Jakob病、培養(yǎng)物陰性膿毒病、囊性纖維化、細(xì)胞因子療法相關(guān)病癥、拳擊員癡呆、脫髓鞘病、登革出血熱、皮炎、皮膚病學(xué)病況、多尿癥、糖尿病、糖尿病性動脈硬化性疾病、彌漫性Lewy小體病、擴張性充血性心肌病、基底神經(jīng)節(jié)病癥、中年唐氏綜合征、由阻斷CNS多巴胺受體的藥物誘導(dǎo)的藥物誘導(dǎo)的運動障礙、藥物敏感性、濕疹、腦脊髓炎、心內(nèi)膜炎、內(nèi)分泌病、會厭炎、EB病毒感染、紅斑性肢痛病、錐體外束和小腦病癥、家族性噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多癥、胎兒胸腺移植排斥、Friedreich氏共濟失調(diào)、功能性外周性動脈病癥、真菌性膿毒病、氣性壞疽病、胃潰瘍、腎小球腎炎、任何器官或組織的移植物排斥、革蘭氏陰性膿毒病、革蘭氏陽性膿毒病、由于細(xì)胞內(nèi)生物的肉芽腫、毛細(xì)胞性白血病、Hallervorden-Spatz病、Hashimoto氏甲狀腺炎、枯草熱、心臟移植排斥、血色素沉著癥、血液透析、溶血性尿毒性綜合征/血栓溶解性血小板減少性紫癜、出血、肝炎(A)、希氏束心律失常、HIV感染/HIV神經(jīng)病、何杰金氏病、運動過度性運動障礙、超敏反應(yīng)、超敏感性肺炎、高血壓、運動機能減退性運動障礙、下丘腦-垂體-腎上腺軸評價、特發(fā)性Addison氏病、特發(fā)性肺纖維化、抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性、虛弱、嬰兒型脊髓性肌萎縮、主動脈炎癥、A型流感、電離輻射照射、虹膜睫狀體炎/葡萄膜炎/視神經(jīng)炎、缺血性再灌注損傷、缺血性中風(fēng)、青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、青少年脊髓性肌萎縮、卡波西氏肉瘤、腎移植排斥、軍團桿菌、利什曼病、麻風(fēng)病、皮層脊髓系統(tǒng)損傷、脂肪水腫、肝移植排斥、淋巴水腫、瘧疾、惡性淋巴瘤、惡性組織細(xì)胞增多癥、惡性黑素瘤、腦膜炎、腦膜炎球菌血癥、代謝性/特發(fā)性、偏頭痛、線粒體多系統(tǒng)病癥、混合型結(jié)締組織病、單克隆丙種球蛋白病、多發(fā)性骨髓瘤、多系統(tǒng)變性(Menzel Dejerine-Thomas Shy-Drager 和 Machado-Joseph)、重癥肌無力、鳥胞內(nèi)分支桿菌、結(jié)核分支桿菌、骨髓異常增生綜合征、心肌梗死、心肌缺血性病癥、鼻咽癌、新生J L慢性肺病、腎炎、腎變病、神經(jīng)變性疾病、神經(jīng)原性I肌萎縮、嗜中性粒細(xì)胞減少性發(fā)燒、非何杰金淋巴瘤、腹主動脈及其分支閉塞、閉塞性動脈病癥、0KT3 治療、睪丸炎/附睪炎、睪丸炎/輸精管切除術(shù)逆轉(zhuǎn)操作、器官巨大癥、骨質(zhì)疏松癥、胰移植排斥、胰癌、惡性腫瘤的類腫瘤性綜合征/高鈣血癥、甲狀旁腺移植排斥、盆腔炎癥性疾病、常年性鼻炎、心包疾病、外周性動脈粥樣硬化疾病、外周血管病癥、腹膜炎、惡性貧血、卡氏肺囊蟲性肺炎、肺炎、POEMS綜合征(多發(fā)性神經(jīng)病、器官巨大癥、內(nèi)分泌病、單克隆丙種球蛋白病、和皮膚變化綜合征)、灌注后綜合征、泵后綜合征、MI心切開術(shù)后綜合征、先兆子癇、進行性核上麻痹、原發(fā)性肺動脈高壓、放射治療、Raynaud氏現(xiàn)象和疾病、Raynaud氏病、Refsum氏病、常規(guī)狹窄QRS心動過速、腎血管性高血壓、再灌注損傷、限制性心肌病、肉瘤、硬皮病、老年性舞蹈病、Lewy小體型老年性癡呆、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、休克、鐮狀細(xì)胞貧血、皮膚同種異體移植物排斥、皮膚變化綜合征、小腸移植排斥、實體瘤、特殊心律失常、脊髓性共濟失調(diào)、脊髓小腦變性、鏈球菌肌炎、小腦結(jié)構(gòu)損傷、亞急性硬化性全腦炎、暈厥、心血管系統(tǒng)梅毒、全身性過敏反應(yīng)、全身炎癥反應(yīng)綜合征、全身發(fā)作性青少年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、T細(xì)胞或FAB ALL、毛細(xì)血管擴張、血栓閉塞性脈管炎、 血小板減少癥、毒性、移植物、創(chuàng)傷/出血、III型超敏反應(yīng)、IV型超敏反應(yīng)、不穩(wěn)定心絞痛、尿毒癥、尿膿毒病、蕁麻疹、心臟瓣膜疾病、靜脈曲張、血管炎、靜脈疾病、靜脈血栓形成、心室纖維性顫動、病毒和真菌感染、病毒性腦炎/無菌性腦膜炎、病毒相關(guān)性噬血細(xì)胞性綜合征、Wernicke-Korsakoff綜合征、Wilson氏病、任何器官或組織的異種移植排斥、急性冠狀動脈綜合征、急性特發(fā)性多神經(jīng)炎、急性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根性神經(jīng)病、急性缺血、成人Still氏病、斑禿、過敏反應(yīng)、抗磷脂抗體綜合征、再生障礙性貧血、動脈硬化、特應(yīng)性濕疹、特應(yīng)性皮炎、自身免疫性皮炎、與鏈球菌感染相關(guān)的自身免疫性病癥、自身免疫性腸病、自身免疫性聽力喪失、自身免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合征(ALPS)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性過早卵巢衰竭、瞼炎、支氣管擴張、大皰性類天皰瘡、心血管病、災(zāi)變性抗磷脂綜合征、乳糜瀉、頸椎關(guān)節(jié)強硬、慢性缺血、疤痕性類天皰瘡、具有多發(fā)性硬化風(fēng)險的臨床孤立綜合征(CIS)、結(jié)膜炎、兒童期發(fā)病性精神病、慢性阻塞性肺病(COPD)、淚囊炎、皮肌炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病、椎間盤突出、盤脫垂、藥物誘導(dǎo)的免疫性溶血性貧血、心內(nèi)膜炎、子宮內(nèi)膜異位、眼內(nèi)炎、鞏膜外層炎、多形性紅斑、重型多形性紅斑、妊娠期類天皰瘡、Guillain-Barre綜合征(GBS)、枯草熱、Hughes綜合征、特發(fā)性帕金森病、特發(fā)性間質(zhì)性肺炎、IgE介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)、免疫性溶血性貧血、內(nèi)含體肌炎、傳染性眼炎性疾病、炎性脫髓鞘疾病、炎性心臟病、炎性腎病、IPF/ΠΡ、虹膜炎、角膜炎、干燥性角膜結(jié)膜炎、Kussmaul病或Kussmaul-Meier病、Landry氏麻痹、朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增多癥、網(wǎng)狀青斑、黃斑變性、顯微鏡下多脈管炎、morbus bechterev、運動神經(jīng)元病癥、粘膜類天皰瘡、多器官衰竭、重癥肌無力、脊髓異常增生綜合征、心肌炎、神經(jīng)根障礙、神經(jīng)病、非甲非乙型肝炎、視神經(jīng)炎、骨質(zhì)溶解、卵巢癌、少關(guān)節(jié)的JRA、周圍動脈閉塞性疾病(PAOD)、周圍血管疾病(PVD)、外周動脈疾病(PAD)、靜脈炎、結(jié)節(jié)性多動脈炎(或結(jié)節(jié)性動脈外膜炎)、多軟骨炎、風(fēng)濕性多肌痛、白發(fā)癥、多關(guān)節(jié)的JRA、多發(fā)性內(nèi)分泌缺陷綜合征、多肌炎、風(fēng)濕性多肌痛(PMR)、泵后綜合征、原發(fā)性帕金森綜合征、前列腺和直腸癌以及造血惡性腫瘤(白血病和淋巴瘤)、前列腺炎、單純紅細(xì)胞再生障礙、原發(fā)性腎上腺機能不足、復(fù)發(fā)型視神經(jīng)脊髓炎、再狹窄、風(fēng)濕性心臟病、sapho (滑膜炎、痤瘡、膿皰病、骨肥厚和骨炎)、硬皮病、繼發(fā)性淀粉樣變性、休克肺、鞏膜炎、坐骨神經(jīng)痛、繼發(fā)性腎上腺機能不足、聚硅氧烷相關(guān)的結(jié)締組織病、Sneddon-ffiIkinson皮膚病、關(guān)節(jié)強硬性脊椎炎、Stevens-Johnson綜合征(SJS)、全身性炎癥應(yīng)答綜合征、顳動脈炎、弓形體視網(wǎng)膜炎、中毒性表皮壞死松解、橫貫性脊髓炎、TRAPS (腫瘤壞死因子受體相關(guān)的周期性綜合征)，I型變態(tài)反應(yīng)，II型糖尿病、蕁麻疹、普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)、脈管炎、春季結(jié)膜炎、病毒性視網(wǎng)膜炎、Vogt-Koyanagi-Harada綜合征(VKH綜合征)、濕黃斑變性、傷口愈合、耶爾森氏菌或沙門氏菌相關(guān)的關(guān)節(jié)病。
71.治療罹患其中TNF-α有害的病癥的患者的方法，所述方法包括在給予第二種劑之前、同時或之后給予權(quán)利要求I的結(jié)合蛋白的步驟，其中所述第二種劑為吸入式類固醇；β -激動劑；短效或長效β -激動劑；白三烯或白三烯受體的拮抗劑；ADVAIR ；IgE抑制劑；抗-IgE抗體；X0LAIR ;磷酸二酯酶抑制劑；H)E4抑制劑；黃嘌呤；抗膽堿藥；肥大細(xì)胞_穩(wěn)定劑；色甘酸；IL_4抑制劑；IL-5抑制劑；嗜酸細(xì)胞活化趨化因子/CCR3抑制劑；包括H1、H2、H3和H4在內(nèi)的組胺或其受體的拮抗劑；前列腺素D或其受體DPl和CRTH2的拮抗劑；TNF拮抗劑；TNF受體的可溶性片段；ENBREL ；TNF酶拮抗劑；TNF轉(zhuǎn)換酶(TACE)抑制劑；毒蕈堿性受體拮抗劑JGF-β拮抗劑；干擾素Y ;吡非尼酮；化療劑，甲氨蝶呤；來氟米特；西羅莫司(雷帕霉素)或其類似物、CCI-779 ；C0X2或cPLA2抑制劑；NSAID ;免疫調(diào)節(jié)劑；p38抑制劑；TPL-2、MK-2和NFkB抑制劑；布地奈德；表皮生長因子；皮質(zhì)類固醇；環(huán)孢菌素；柳氮磺胺吡啶；氨基水楊酸鹽；6_巰基嘌呤；硫唑嘌呤；甲硝唑；脂氧合酶抑制劑；美沙拉秦；奧沙拉秦；巴柳氮；抗氧化劑；血栓烷抑制劑；IL-1受體拮抗劑；抗-IL-I β抗體；抗-IL-6抗體；生長因子；彈性蛋白酶抑制劑；吡啶基-咪唑化合物；LT、IL-U IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-IU IL-12、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、 IL-20、 IL-21、 IL-22、 IL-23、 IL-24、 IL-25、 IL-26、 IL-27、 IL-28、 IL-29、 IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、EMAP-11, GM-CSF, FGF 或 PDGF 的抗體或激動劑；CD2、CD3、CD4、CD8、⑶25、⑶28、⑶30、⑶40、⑶45、⑶69、⑶90或其配體的抗體；FK506 ;雷帕霉素；麥考酚酸嗎乙酯；布洛芬；潑尼松龍；磷酸二酯酶抑制劑；腺苷激動劑；抗血栓劑；補體抑制劑；腎上腺素能藥物；IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制劑；IL_li3轉(zhuǎn)換酶抑制劑；TNF_a轉(zhuǎn)換酶抑制劑；T-細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑；金屬蛋白酶抑制劑；6_巰基嘌呤；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑；可溶性細(xì)胞因子受體；可溶性p55 TNF受體；可溶性p75 TNF受體；sIL_lRI ；sIL-lRII ；sIL-6R ;抗炎細(xì)胞因子；IL-4 ；IL-10或 TGF-β。
72.權(quán)利要求67的方法，其中通過選自以下的至少一種方式給予所述受試者胃腸外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、推注、陰道、直腸、含服、舌下、鼻內(nèi)和經(jīng)皮。
73.通過免疫測定在受試樣品中測定TNF-a或其片段的存在情況的方法，其中所述免疫測定包含讓所述受試樣品與權(quán)利要求I的至少一種結(jié)合蛋白或其片段及至少一種可檢測的標(biāo)記接觸。
74.權(quán)利要求73的方法，其中所述方法進一步包括下列步驟 (i)讓所述受試樣品與至少一種結(jié)合蛋白或其片段接觸，其中所述結(jié)合蛋白與TNF-a或其片段上的表位結(jié)合，以形成第一復(fù)合物； ( )讓所述復(fù)合物與至少一種可檢測的標(biāo)記接觸，其中所述可檢測的標(biāo)記與所述第一復(fù)合物上或TNF-a或其片段上的表位結(jié)合，以形成第二復(fù)合物，所述表位未與所述結(jié)合蛋白或其片段結(jié)合；和 (iii)基于由第二復(fù)合物中的可檢測的標(biāo)記所產(chǎn)生的信號來檢測所述受試樣品中TNF-α或其片段的存在情況，其中所述TNF-α或其片段的存在情況與由所述可檢測的標(biāo)記所產(chǎn)生的信號直接相關(guān)。
75.權(quán)利要求73的方法，其中所述方法進一步包括下列步驟 (i)讓所述受試樣品與至少一種結(jié)合蛋白或其片段接觸，其中所述結(jié)合蛋白與TNF-a或其片段上的表位結(jié)合，以形成第一復(fù)合物； ( )讓所述復(fù)合物與至少一種可檢測的標(biāo)記接觸，其中所述可檢測的標(biāo)記與TNF-α或其片段競爭性結(jié)合所述結(jié)合蛋白或其片段，以形成第二復(fù)合物；和 (iii)基于由所述第二復(fù)合物中的可檢測的標(biāo)記所產(chǎn)生的信號來檢測所述受試樣品中TNF-α或其片段的存在情況，其中所述TNF-α或其片段的存在情況與由可檢測的標(biāo)記所產(chǎn)生的信號間接相關(guān)。
76.權(quán)利要求73的方法，其中所述方法任選進一步包括診斷、預(yù)測或評估對所述患者的治療性/預(yù)防性治療的效率。
全文摘要
公開了分離的結(jié)合蛋白，例如，結(jié)合腫瘤壞死因子-α(TNF-α)例如人TNF-α的抗體或其抗原結(jié)合部分，并公開了基于相關(guān)抗體的組合物和分子。亦公開了包含所述抗體的藥物組合物，以及使用所述抗體的治療和診斷方法。
文檔編號A61K39/395GK102958537SQ201180027969
公開日2013年3月6日 申請日期2011年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月7日
發(fā)明者L.貝納圖伊爾, T.哈于爾, C.L.古德羅, P.C.伊薩克森, J.薩爾菲爾德 申請人:Abbvie公司