專(zhuān)利名稱(chēng)：用于減輕汞毒性的組合物和方法
用于減輕汞毒性的組合物和方法相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考本申請(qǐng)要求2010年5月25日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)朥S 61/347，819的利益，將該文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容完整地引入本文參考。
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孤獨(dú)性譜群疾病(autism spectrum disorder, “ASD”)是一系列心理性病癥，其特征在于社會(huì)關(guān)系和溝通廣泛異常以及受限的興趣和反復(fù)性行為。ASD的5種形式包括典型孤獨(dú)癥、阿斯波哥爾綜合征(Asperger syndrome)、未有特殊說(shuō)明的廣泛性發(fā)育障礙(PervasiveDevelopmental Disorder, “FOD-NOS”)、雷特綜合征和童年瓦解性障礙。孤獨(dú)癥形成了孤獨(dú)性譜群疾病的核心。阿斯波哥爾綜合征在體征和有可能的原因方面最接近孤獨(dú)癥，然而，不同于孤獨(dú)癥，患有阿斯波哥爾綜合征的人在語(yǔ)言發(fā)展方面沒(méi)有顯著的遲緩。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)不滿(mǎn)足更具體的障礙時(shí)，診斷為roD-NOS。一些來(lái)源還包括雷特綜合征和童年瓦解性障礙，其與孤獨(dú)癥共有幾個(gè)體征，但可能具有不相關(guān)的原因，其他來(lái)源將ASD與這兩種病癥合并成廣泛性發(fā)育障礙。根據(jù)英國(guó)國(guó)家孤獨(dú)癥協(xié)會(huì)(National Autistic Society)的規(guī)定，病理性要求回避綜合征屬于并且正在逐步地被視為孤獨(dú)性譜群。孤獨(dú)癥是特征在于社會(huì)關(guān)系和溝通受損以及受限的和反復(fù)性行為的神經(jīng)發(fā)育障礙。這些體征均在兒童3歲以前開(kāi)始。孤獨(dú)癥通過(guò)改變神經(jīng)細(xì)胞及其突觸如何連接和組織化影響腦中的信息加工，這種情況是如何發(fā)生的尚不了解。褪黑激素是在動(dòng)物、植物和微生物中發(fā)現(xiàn)的天然存在的化合物。在動(dòng)物中，激素褪黑激素的循環(huán)水平在每日周期中可變，由此能夠傳輸幾種生物學(xué)功能的晝夜節(jié)律。褪黑激素的許多生物效應(yīng)通過(guò)活化褪黑激素受體產(chǎn)生，而其他效應(yīng)是因其作為普遍的和強(qiáng)有力的抗氧化劑的作用導(dǎo)致，其中在保護(hù)核和線(xiàn)粒體DNA中具有特別的作用。在哺乳動(dòng)物中，褪黑激素由腦中的松果腺分泌入血液。它還可以由各種周?chē)?xì)胞例如骨髓細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生。通常褪黑激素在這些細(xì)胞中的濃度遠(yuǎn)高于在血 液中發(fā)現(xiàn)的濃度，但其似乎不通過(guò)光周期調(diào)節(jié)。此外，褪黑激素在整個(gè)胃腸道(GI)中產(chǎn)生。不同于在松果體中，在其中褪黑激素的產(chǎn)生和釋放由環(huán)境光的減少刺激(即“睡眠”信號(hào))，GI褪黑激素的釋放由食物的存在刺激。褪黑激素與細(xì)胞傳導(dǎo)有兩種主要機(jī)制。一種是直接，通過(guò)其與膜與核受體的相互作用。此外，數(shù)據(jù)表明，褪黑激素是所謂核的“類(lèi)視黃醇的孤兒受體”(retinoidorphanrececeptor, R0R)的內(nèi)源性激動(dòng)劑。受褪黑激素刺激,ROR是調(diào)節(jié)許多生化過(guò)程的重要組成部分。從ROR開(kāi)始，過(guò)多的基因被激活/調(diào)節(jié)，因此，激素、細(xì)胞因子、神經(jīng)遞質(zhì)和生物學(xué)相關(guān)的大分子以協(xié)調(diào)的、周期性的(晝夜)方式在白天/晚上整個(gè)過(guò)程中產(chǎn)生和釋放?？傊?，大腦松果體褪黑激素所發(fā)揮的作用是以胃腸系統(tǒng)為中心的更大的系統(tǒng)的一部分。萊(由符號(hào)Hg表示)是毒性重金屬。衛(wèi)生和人類(lèi)服務(wù)部(Department of Healthand Human Services)內(nèi)的毒性物質(zhì)和疾病登記聯(lián)邦管理局(The federal Agency forToxic Substances andDisease Registry) (ATSDR)舉出了萊作為在美國(guó)最具有毒性的物質(zhì)。它并非罕見(jiàn)或分離出的化合物，就絕對(duì)量而言，它被分類(lèi)為位于鉛和砷之后的第三最普遍的環(huán)境毒物。它所呈現(xiàn)出的危險(xiǎn)是通過(guò)以下事實(shí)多次倍增的幾乎任何和所有類(lèi)型的在其自身食物來(lái)源中攝入低水平汞的魚(yú)、家禽和家畜類(lèi)將汞集中于其肉和/或脂肪沉積中。這導(dǎo)致大量類(lèi)型的主要是人類(lèi)膳食成分的肉中汞處于潛在危險(xiǎn)的水平。簡(jiǎn)言之，汞主要通過(guò)兩種不同機(jī)制殺傷細(xì)胞。(i)它可以使幾乎所有類(lèi)型的蛋白質(zhì)“變性”(且由此使其失活)；和(ii)它生成“活性氧”(ROS)，其然后攻擊和損傷或破壞大量類(lèi)型的生物分子。此外，研究已將汞毒性與一些病癥關(guān)聯(lián)起來(lái)，包括但不限于孤獨(dú)性譜群疾病。發(fā)明概述在一些方面，本發(fā)明涉及包含褪黑激素和鋅的組合物。 在其他方面，本發(fā)明涉及包含所述組合物的劑型。本發(fā)明的另外的方面涉及從受試者體內(nèi)除去汞的方法。本發(fā)明的其他方面涉及治療和/或預(yù)防與汞毒性相關(guān)的病癥的方法。本發(fā)明的其他方面涉及本文所述組合物和劑型的制備方法。發(fā)明詳述 本發(fā)明的一些實(shí)施方案涉及用于從受試者體內(nèi)除去汞的組合物和方法。在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，提供了治療和預(yù)防與汞毒性相關(guān)的病癥的營(yíng)養(yǎng)方法。研究證明在GI道中，存在生成和維持的平衡，其中腸的腸嗜鉻細(xì)胞產(chǎn)生的褪黑激素進(jìn)入內(nèi)臟循環(huán)并且轉(zhuǎn)運(yùn)至肝；由此肝將褪黑激素分泌入膽汁，轉(zhuǎn)運(yùn)回腸以重復(fù)該循環(huán)。這種所謂的"腸肝循環(huán)"是GI道中褪黑激素的主要間接激素作用的基礎(chǔ)。在這種腸肝循環(huán)內(nèi)，褪黑激素在它與痕量金屬(主要是鋅和銅)復(fù)合時(shí)作為"金屬伴侶"("metal Iochaperone")起作用，有利于其從GI道中吸收且遞送至肝。一旦在肝內(nèi)，則褪黑激素-金屬?gòu)?fù)合物解離，以釋放脫輔蛋白質(zhì)附近的金屬，最終產(chǎn)生全功能金屬蛋白質(zhì)。鋅金屬蛋白質(zhì)包括大量重要的大分子；例如，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalIoprotinase)、DNA/RNA聚合酶和修復(fù)酶、碳酸酐酶、氨基/羧基轉(zhuǎn)肽酶和醇脫氫酶。作為二價(jià)陽(yáng)離子，汞有效地與鋅(和銅)競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合褪黑激素，當(dāng)汞結(jié)合褪黑激素時(shí)，相對(duì)重的復(fù)合物不被重吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)至肝，而是保留在腸的糞便內(nèi)容物中，以便消除。通過(guò)防止汞(和其他重金屬)對(duì)GI道的有害效應(yīng)，使褪黑激素從體內(nèi)消失，這就必須產(chǎn)生更多的褪黑激素以維持內(nèi)源性濃度。盡管不期望受到任何操作理論約束，但是由于多種原因，所以一種或多種亞群可能缺乏再生足量褪黑激素以維持平衡的能力，且由此代表了傾向于發(fā)生疾病(包括但不限于孤獨(dú)癥、阿爾茨海默病和帕金森病)的那些群體，它們部分是因環(huán)境重金屬所致。這種亞群還代表了那些可以得益于給予包含褪黑激素的組合物的那些群體。攝入本文所述的包含褪黑激素的組合物可以(a)給治療的受試者提供有效的螯合汞和除去汞的化合物；和/或(b)給治療的受試者提供足夠供給的胃腸褪黑激素以恢復(fù)適當(dāng)和健康的胃腸褪黑激素功能和活性，它們可以與鋅和一些其他礦物質(zhì)發(fā)生相互作用。照此，本發(fā)明的一些實(shí)施方案涉及使用褪黑激素治療和/或預(yù)防一些病癥的組合物和方法。這樣的組合物和方法可以恢復(fù)褪黑激素在胃腸道內(nèi)的天然和健康濃度。在一些實(shí)施方案中，褪黑激素可以與一些另外的成分結(jié)合使用。另外的成分包括但不限于鋅和銅。不同的實(shí)施方案可以包括褪黑激素與礦物質(zhì)以特定比例的組合。
一些實(shí)施方案提供了包含褪黑激素-鋅復(fù)合物的組合物。另外，在一些實(shí)施方案中，所述的組合物還可以包含益生菌材料。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案包括包含褪黑激素和鋅的組合物。優(yōu)選鋅可以作為至少一種其藥學(xué)可接受的鹽提供。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，鋅的形式可以選自鋅、乙酸鋅、葡糖酸鋅、檸檬酸鋅、氯化鋅及其組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，褪黑激素和鋅以約1:1 一約1:1. 2的摩爾比(即二價(jià)鋅的可能的摩爾過(guò)量)混合。優(yōu)選褪黑激素和鋅以約1:1的摩爾比存在。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，褪黑激素和鋅是粉末形式且混合成粉狀混合物?？梢詫⑺龇蹱罨旌衔锱c足以產(chǎn)生顆粒的量的至少一種賦形劑配制?？梢杂糜谠撃康牡某Ｓ觅x形劑包括但不限于碳水化合物材料。優(yōu)選碳水化合物材料是粉末形式。可以用于該目的的碳水化合物的一個(gè)實(shí)例是乳糖(lactose),也稱(chēng)作乳糖(milk sugar)。另外的實(shí)例包括但不限于纖維素衍生物和馬鈴薯淀粉。應(yīng)關(guān)注將肌醇六磷酸也稱(chēng)作植酸(或作為其離子化形式，植酸鹽)的存在減至最少。已知該化合物與鋅和其他二價(jià)陽(yáng)離子形成復(fù)合物，且由此可 以干擾其生物利用度。由于這一原因，一些材料可能較不適合于該目的，例如，玉米淀粉，因?yàn)橐阎〈剂姿嵊捎衩桩a(chǎn)生且可以作為污染物存在于玉米中。優(yōu)選可以用腸溶衣給所述顆粒包衣。在一些實(shí)施方案中，可以將腸溶包衣顆粒包囊在膠囊內(nèi)。優(yōu)選明膠膠囊可以用于包囊。在一些實(shí)施方案中，將鋅和褪黑激素彼此預(yù)混合，然后使其變得有效地彼此結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用腸溶衣給所述混合物包衣，能夠無(wú)損地通過(guò)胃酸，然后在小腸內(nèi)吸收，這可以防止褪黑激素受到胃酸降解，還可以將胃中酸驅(qū)動(dòng)的鋅離子與褪黑激素解離減少到最低限度?！澳c溶衣”是指施加于口服藥物上的屏障，它能夠控制在其被吸收所在的消化系統(tǒng)中的位置?！澳c”是指小腸，由此腸溶衣防止藥物在其達(dá)到小腸前釋放。大部分腸溶衣通過(guò)提供一種表面起作用，該表面在胃中發(fā)現(xiàn)的高度酸性pH下穩(wěn)定，而在酸性較低(相對(duì)更堿性)pH下快速崩解。例如，它們?cè)谒嵝晕敢?ρ!Γ3)中不溶解，而小腸中存在的堿性(約PH 5-9)環(huán)境中溶解。就本發(fā)明的實(shí)施方案而言，用于腸溶衣的材料可以包含任何適合的包衣衣料，其優(yōu)先在腸中溶解(即在高于胃內(nèi)容物的PH下)。這種材料包括但不限于脂肪酸、蠟、蟲(chóng)膠、塑料、植物纖維、聚合物及其組合。優(yōu)選的材料是PH-敏感性丙烯酸聚合物樹(shù)脂的分散體；例如EASTACRYL30D (Eastman Chemical Co.)。在一些實(shí)施方案中，所述的組合物還可以包含治療有效量的銅。因此，本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案涉及包含褪黑激素、鋅和銅的組合物。在不同的實(shí)施方案中，褪黑激素、鋅和銅成分的摩爾比分別為約5:5:1 ;約6:6:1、約7:7:1、約8:8:1、約9:9:1或約10:10:1。優(yōu)選分別以約5:5:1的摩爾比混合褪黑激素、鋅和銅成分。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，褪黑激素、鋅和銅成分是粉末形式且混合成粉狀混合物。可以將所述粉狀混合物與足以產(chǎn)生顆粒的量的至少一種賦形劑配制。優(yōu)選可以用腸溶衣給所述顆粒包衣。優(yōu)選腸溶衣包含EASTACRYL'優(yōu)選腸溶衣還可以包含另外的溶于小腸上部的包衣衣料。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，將包腸溶衣的顆粒包囊在膠囊中，優(yōu)選包囊在明膠膠囊中?？梢詫⒆懔康念w粒放入每粒膠囊中以維持最終的褪黑激素、Zn和Cu的摩爾比。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)作為元素重量測(cè)定時(shí)，基于其分子量，遞送適合的摩爾比的相應(yīng)的褪黑激素、乙酸鋅和Cu的量分別為約50mg、約15mg和約3mg。在其他實(shí)施方案中，可以調(diào)整這些重量，以補(bǔ)償可以用于所述組合物的各種鋅鹽的分子量差異。當(dāng)用腸溶衣配制本文所述的組合物時(shí)，腸溶衣防止組合物中的成分受到胃的有害酸性環(huán)境影響。在通過(guò)胃輸送后，腸溶包衣顆粒進(jìn)入十二指腸(小腸的上部)，在那里它們遇到膽汁分泌物。膽汁分泌物富含碳酸氫鹽，它中和從胃中出現(xiàn)的來(lái)自胃內(nèi)容物的酸，并且導(dǎo)致十二指腸的腔中的物質(zhì)變成弱酸性，其中PH大于約5。因此，在這種相對(duì)較高pH下，腸溶衣溶解，從而能夠溶解顆粒，導(dǎo)致從小腸腔中吸收例如褪黑激素、Zn和Cu這樣的成分。在本發(fā)明另外的實(shí)施方案中，組合物中提供的褪黑激素和鋅可以是褪黑激素-鋅復(fù)合物形式。適合于口服給藥的穩(wěn)定的含鋅復(fù)合物的實(shí)例是美國(guó)專(zhuān)利US4，981，846中所述的聚普瑞鋅(polaprez inc )。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，可以通過(guò)在過(guò)量堿的存在下將可溶性鋅鹽加入到褪黑激素的堿性溶液中形成褪黑激素-鋅復(fù)合物。盡管不期望受到任何操作理論以約束，但是這種復(fù)合物可以如下形成。褪黑激素的結(jié)構(gòu)具有氮和氧原子，它們因非共 享電子對(duì)而是負(fù)電性的。在褪黑激素結(jié)構(gòu)中，氧上的電子對(duì)可用于與其他分子發(fā)生相互作用(例如與水分子的氫鍵合)，并且通過(guò)離子相互作用形成共振結(jié)構(gòu)。然而，二價(jià)鋅帶有兩個(gè)正電荷，且為了形成共振-穩(wěn)定復(fù)合物，它需要兩個(gè)與大分子發(fā)生相互作用的位點(diǎn)。就褪黑激素而言，與鋅相互作用的第二個(gè)位點(diǎn)由附近雜環(huán)中的仲氮的電子提供。不同于穩(wěn)定雙鍵中的這些電子的氧，氮以質(zhì)子化形式存在(即帶有氫原子，其與氮共有離子鍵)。為了暴露這些電子以便為鋅提供停泊位點(diǎn)(docking site)，氫需要從氮上除去，且這一過(guò)程通過(guò)將褪黑激素溶于堿性介質(zhì)(即含有氫氧化鈉、氫氧化鈣或其他適合的堿性物質(zhì)的水溶液)來(lái)進(jìn)行。在這種環(huán)境中，堿有效地從氮上除去氫，由此暴露了可用于與隨后加入的鋅發(fā)生相互作用的電子。另外的實(shí)施方案包括從受試者體內(nèi)除去汞的方法。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及使用益生菌營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的組合物和治療方法，所述益生菌營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑包含或表達(dá)一些類(lèi)型的微生物酶，這些酶能夠?qū)⒂泻Φ墓x子形式(Hg+和Hg2+)轉(zhuǎn)化成不帶電荷的汞原子(Hg°)，其可以被身體以氣態(tài)形式排出，例如從肺中排泄在空氣中。在一些實(shí)施方案中，組合物可以包含酶制劑，其具有防止酶受到胃酸降解的腸溶衣。在另外的實(shí)施方案中，組合物可以包含在小腸內(nèi)再生并且表達(dá)解汞毒的酶的活腸細(xì)菌細(xì)胞。已經(jīng)鑒定了特定群體的細(xì)菌酶，它們由稱(chēng)作“mer操縱子”的一組基因產(chǎn)生。由該操縱子編碼的一種酶是“汞還原酶”(“MR”)。它催化高度毒性的二價(jià)離子Hg 2+還原成不帶電荷和毒性遠(yuǎn)低的Hg°。MR酶由命名為merA的基因表達(dá)。此外，一些類(lèi)型的細(xì)菌還表達(dá)稱(chēng)作有機(jī)汞裂解酶(“0L”)的酶。該酶將裂解汞的有機(jī)形式，例如甲基汞，以釋放Hg2+陽(yáng)離子，其然后可以被汞還原酶轉(zhuǎn)化成Hg°。OL由merB基因編碼和表達(dá)。mer操縱子內(nèi)的一些其他基因編碼移位酶蛋白質(zhì)，包括命名為merB和merC的蛋白質(zhì)，它們有利于汞化合物移動(dòng)通過(guò)細(xì)胞膜，由此促進(jìn)它們與OL和MR酶的相互作用。因此，由merB和merC基因表達(dá)的蛋白質(zhì)通過(guò)多步驟過(guò)程對(duì)MR活性提供協(xié)同作用支持，包括(i)汞化合物的細(xì)胞吸收增加；(ii)有機(jī)汞化合物裂解以釋放Hg2+離子；和(iii)將毒性Hg2+離子還原成毒性遠(yuǎn)低的Hg°元素形式，它可以被身體以氣態(tài)形式從肺排泄在空氣中。本發(fā)明的一些實(shí)施方案包括包含褪黑激素、鋅和益生菌材料的組合物。益生菌材料可以包括但不限于細(xì)菌和/或酵母的天然、半合成或轉(zhuǎn)基因菌株。益生菌材料可以包含或表達(dá)一些解汞毒性的酶，例如但不限于有機(jī)汞裂解酶和汞還原酶。在一些實(shí)施方案中，提供了包含褪黑激素、鋅、銅和益生菌材料的組合物。另外的實(shí)施方案提供了包含褪黑激素-鋅復(fù)合物和益生菌材料的組合物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含本文所述的組合物的劑型。用于口服給藥的固體劑型可以包括但不限于膠囊、片劑、丸劑和顆粒。優(yōu)選將顆粒用于一些患者，例如兒童，他們對(duì)較大劑型可能存在吞咽困難。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，為了便于精確給藥，將所需數(shù)量的顆粒轉(zhuǎn)入標(biāo)準(zhǔn)膠囊，并且在攝入時(shí)，患者可以選擇打開(kāi)膠囊并且將內(nèi)容物分散于適合的食物，例如蘋(píng)果沙司，其具有足夠的酸性以便在攝入前即刻保護(hù)顆粒腸溶衣。或者，可以將具有顆粒內(nèi)容物的完整的標(biāo)準(zhǔn)膠囊作 為單劑量攝入，從而推定該患者不存在吞咽膠囊的困難。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述的劑型包含膠囊內(nèi)包含的活性成分的組合。優(yōu)選膠囊包含明膠。所述膠囊可以是硬膠囊或軟膠囊。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括治療和/或預(yù)防與汞毒性相關(guān)的病癥的方法。這種病癥可能與褪黑激素和/或鋅耗盡相關(guān)。實(shí)施方案包括治療和/或預(yù)防受試者病癥，所述的病癥選自孤獨(dú)癥、孤獨(dú)性譜群疾病、阿爾茨海默病和帕金森病。另外的實(shí)施方案包括治療和/或預(yù)防選自炎癥、線(xiàn)粒體功能障礙和鋅缺乏的病癥的方法。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案包括治療和/或預(yù)防與接觸環(huán)境重金屬相關(guān)的病癥的方法。上述治療/預(yù)防方法可以包括對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的本文公開(kāi)的任意組合物。本文所用的術(shù)語(yǔ)"受試者"用于指動(dòng)物，包括但不限于魚(yú)、鳥(niǎo)類(lèi)和哺乳動(dòng)物，包括人。術(shù)語(yǔ)"患者"和"受試者"可以互換使用。另外，本文所用的“治療有效量”應(yīng)指對(duì)有這種治療需要的大量受試者給予的活性劑或成分的提供特定的藥理學(xué)響應(yīng)的劑量。需要強(qiáng)調(diào)的是，在具體情況中對(duì)特定受試者給予的“治療有效量”并非始終在治療或預(yù)防本文所述的病癥中有效，即使本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為這種劑量是“治療有效量”。本申請(qǐng)的治療組合物的配制和給藥技術(shù)可以在最新版“Remington ' sPharmaceutical Sciences, ”Mack Publishing Co.，Easton, Pa 中找到。當(dāng)以單獨(dú)給藥的方式給個(gè)體施用各活性成分或活性劑時(shí)，治療有效劑量是指該單獨(dú)的成分。當(dāng)應(yīng)用于組合時(shí)，治療有效劑量是指產(chǎn)生治療效果的活性成分的合并用量，無(wú)論是以組合方式、依次方式還是同時(shí)方式給藥。當(dāng)治療或預(yù)防任意舉出的病癥或癥狀時(shí)，可以?xún)?yōu)選通過(guò)口服給予本文所述的組合物。優(yōu)選可以每日一次、兩次、三次或四次給予所述組合物。優(yōu)選與膳食一起口服攝入所述組合物，以模擬在GI道中食物的存在下褪黑激素的生理釋放。優(yōu)選的劑量為每日四次；優(yōu)選與每次膳食一起一次和在睡時(shí)一次。在不同的實(shí)施方案中，可以對(duì)受試者給予本文所述劑量的組合物，根據(jù)每劑量每kg重量受試者的組合物中褪黑激素的量計(jì)算的其用量至少為約O. Olmg ;例如，提供每劑量約O. O lmg/kg 一約10mg/kg褪黑激素或約O. 02mg/kg 一約O. 5mg/kg褪黑激素的組合物的劑量范圍。優(yōu)選的劑量是提供約O. lmg/kg褪黑激素。根據(jù)提供的摩爾比，在本文所述的組合物中可以包括一種或多種另外 的成分(例如鋅、銅)。優(yōu)選可以將所述劑量每日給予一次、兩次、三次或四次。例如，正如根據(jù)醫(yī)師所確定的，確切劑量方案依賴(lài)于個(gè)體患者的響應(yīng)。本發(fā)明的其他實(shí)施方案包括本文所述的不同組合物和劑型的制備方法。優(yōu)選通過(guò)一種方法制備劑型，該方法包括組合粉末形式的褪黑激素和鋅以形成粉狀混合物。摩爾比可以在約1:1 一約1:1.2。優(yōu)選褪黑激素和鋅之比為約1:1。優(yōu)選可以將所述粉狀混合物與足以形成顆粒的量的至少一種惰性賦形劑組合。優(yōu)選可以用在大于或等于約5的pH下的介質(zhì)中溶解的材料給所述顆粒包衣。在一些實(shí)施方案中，可以將包衣顆粒包囊在膠囊中。優(yōu)選膠囊包含明膠。下文舉出的下列非限制性實(shí)施例示例本發(fā)明的一些方面。
實(shí)施例實(shí)施例I.褪黑激素和鋅在A(yíng)SD患者中的效力評(píng)價(jià)方案本實(shí)施例包括可以基于在提交本申請(qǐng)時(shí)本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本說(shuō)明書(shū)的描述進(jìn)行的模擬試驗(yàn)和預(yù)測(cè)結(jié)果。患有孤獨(dú)癥或ASD的年齡在3 - 10歲之間的具有父母或教師關(guān)注表面行為和父母或臨床醫(yī)師關(guān)注胃腸病學(xué)問(wèn)題的男性和女性?xún)和糜诒绢A(yù)示性實(shí)施例。特別地，兒童顯示如下特征(I)兒童年齡在3 — 10歲且被診斷為ASD ; (2)父母或教師關(guān)注表面行為(具有CBCL外表表現(xiàn)t分?jǐn)?shù)>65) ；(3)父母或臨床醫(yī)師具有胃腸病學(xué)方面的關(guān)切(便秘、腹瀉、惡心、嘔吐、腹部疼痛、低體重指數(shù)、食物耐受不良)；(4) I周膳食日志啟示年齡典型的纖維、蛋白質(zhì)、脂肪、卡路里和營(yíng)養(yǎng)攝入(沒(méi)有數(shù)值超過(guò)2的來(lái)自平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差)O通過(guò)使用由標(biāo)準(zhǔn)行為測(cè)試方法確定的從基線(xiàn)一第7周/終止的行為評(píng)價(jià)觀(guān)察受試者中的行為改變測(cè)定褪黑激素和鋅組合物的效力，所述的測(cè)試方法包括(I)CBCL ； (2)孤獨(dú)癥治療評(píng)價(jià)清單(AutismTreatment Evaluation Checklist) (ATEC)(Lonsdale, D. , Shamberger, R. J. , and Audhya, T. (2002). Treatment of autismspectrumchildren with thiamine tetrahydrofurfuryl disulfide:apilot study.Neuro.Endocrinol. Let t. 23, 303-308. ; Charman, T. , Howl in, P. , Berry, B. , and Prince, E.(2004). Measuringdevelopmental progress of children with autism spectrumdisorderon school entry using parent report. Autism. 8, 89-100;Ratliff-Schaub, K. , Carey, T. , Reeves, G. D. , and Rogers, M. A. (2005). Randomized control ledtrial of transdermal secretin onbehavior of children with autism.Autism. 9, 256-265 ; Coben, R. , and Myers, T. E. (2010). The relative efficacyof connectivityguided and symptom based EEG biofeedback for autisticdisorders.AppI. Psychophysiol. Biofeedback. 35, 13-23;Meiri, G. , Bichovsky, Y. , and Belmaker, R. H. (2009). Omega 3 fatty acid treatment inautism. J. Child Adolesc.PsychopharmacoI. 19, 449-451) ； (3)行為-嚴(yán)重性的臨床綜合印象(Clinical GlobalImpressions ofBehavior Severity) (CGI-S)和(4)行為-改善的臨床綜合印象(Clinical Global Impressions of Behavior Improvement) (CGI-I)。 二次結(jié)果測(cè)定包括基線(xiàn)至第7周/終止值的改變，所述的改變?yōu)槿缦碌闹?1)通過(guò)測(cè)定單一口服劑量的這些碳水化合物后尿乳果糖甘露糖醇比例的改變?cè)u(píng)價(jià)的G I通透性(D' Eufemia，P.，Cellij Μ.，F(xiàn)inocchiaroj R.，Pacificoj L.，Viozzij L.，Zaccagninij Μ.，CardijΕ. ,and Giardinij O. (1996). Abnormalintestinal permeability in children withautism. Acta Paediatr. 85，1076-1079) ; (2)通過(guò)測(cè)定糞便I丐網(wǎng)蛋白水平評(píng)價(jià)的GI炎癥(Boso, M.，Emanuelej E.，Minorettij P.，Arraj M.，Politij P.，Ucellidij N. S.，andBaralej F. (2006). Alterations of circulatingendogenous secretory RAGE andS100A9 levels indicatingdysfunction of the AGE-RAGE axis in autism. Neurosci.Lett. 410，169-173; deMagistris，M. L.，F(xiàn)amiliarij V.，Pascotto，A.，Saponej A.，F(xiàn)rolli，A.，Iardinoj P.，Cartenij M.，Dej R. M.，F(xiàn)rancavillaj R.，Rieglerj G.，Militernij R.
，and Bravaccioj C. (2010). Alterations of the Intestinal Barrier in PatientsWith AutismSpectrum Disorders and in Their First-degree Relatives. J. Pediatr.Gastroenterol. Nutr.) ； (3)喂養(yǎng)和胃腸病學(xué)清單的總體和次級(jí)分?jǐn)?shù)改變；(4)高度百分?jǐn)?shù) 改變；(5)重量百分?jǐn)?shù)改變；(6)體重指數(shù)百分?jǐn)?shù)改變；(7)臨床化學(xué)參數(shù)，包括血清鋅、血漿銅的濃度和血漿5’ -核苷酸酶活性；ASMT基因中的特異性單核苷酸多態(tài)性(SNPs)的基因組評(píng)價(jià)。篩選/基線(xiàn)評(píng)估包括神經(jīng)發(fā)育/精神病的總的評(píng)價(jià)；身體障礙的評(píng)價(jià)；藥物和補(bǔ)充治療史；孤獨(dú)癥診斷的確認(rèn)(使用孤獨(dú)癥診斷觀(guān)察方案(Autism DiagnosticObservation Schedule));行為測(cè)定；特異性實(shí)驗(yàn)室測(cè)試；胃腸道問(wèn)題評(píng)價(jià)；膳食評(píng)價(jià)；自殺性評(píng)價(jià)；日間嗜睡確定。一旦確定兒童滿(mǎn)足必要的標(biāo)準(zhǔn)，則將其指定入治療組(I組)或安慰劑組(2組)。I組中的受試者接受O. IOmg褪黑激素+0. 03mg 二水合乙酸鋅/kg/每日四次劑量的目標(biāo)劑量，而2組中的受試者接受每日四次安慰劑。將藥物作為腸溶包衣顆粒提供，其可在口服給藥前分散于食物中。就第I周而言，對(duì)兒童在每日睡時(shí)給予單劑量的研究藥物，持續(xù)I周。在7天間隔(±2天)進(jìn)行劑量按比例增加的隨訪(fǎng)評(píng)價(jià)，持續(xù)至少3周；在每周隨訪(fǎng)時(shí)，評(píng)價(jià)兒童間隔期行為、胃腸病學(xué)和醫(yī)療改變；引出、記錄和控制不良反應(yīng)；引出和記錄伴隨的藥物；完成行為清單；任何自殺性趨向評(píng)價(jià)；日間嗜睡評(píng)價(jià)。在每次隨訪(fǎng)時(shí)，根據(jù)治療效果確定最適合的劑量調(diào)整(I)不耐受與研究干預(yù)相關(guān)的6或7的CGI-I分?jǐn)?shù)或存在不具有可利用的研究允許的補(bǔ)救的不良反應(yīng)(例如需要不允許的藥物)?；谘芯咳藛T的臨床決定，降低研究藥物劑量或中斷研究藥物。(2)可治療與短暫或可醫(yī)治的關(guān)切相關(guān)的6或7的CGI-I分?jǐn)?shù)或短暫或具有可利用的研究允許的藥物的不良反應(yīng)。研究藥物可以根據(jù)研究人員的判斷減少、中斷或維持。(3)不足胃腸病學(xué)或行為狀態(tài)改變程度最低或沒(méi)有顯著改變(在喂養(yǎng)和胃腸病學(xué)清單中沒(méi)有臨床顯著性改善與3、4或5的CGI-I分?jǐn)?shù))，沒(méi)有臨床顯著的不良反應(yīng)。將研究藥物增加至下一個(gè)可利用的劑量，不超過(guò)治療組的最大劑量。(4)充足胃腸病學(xué)或行為狀態(tài)臨床顯著改善(在喂養(yǎng)和胃腸病學(xué)清單中臨床顯著性改善和/或2的CGI-I分?jǐn)?shù))，沒(méi)有臨床顯著的不良反應(yīng)。根據(jù)研究人員的判斷，可以將研究藥物維持在目前劑量或可以增加(試圖達(dá)到最佳狀態(tài))至下一個(gè)可利用的劑量，不超過(guò)治療組的最大劑量。(5)最佳胃腸病學(xué)或行為狀態(tài)臨床顯著改善(在喂養(yǎng)和胃腸病學(xué)清單中臨床顯著性改善和I的CGI-I分?jǐn)?shù))，沒(méi)有臨床顯著的不良反應(yīng)。維持研究藥物。當(dāng)研究人員評(píng)價(jià)兒童符合分類(lèi)(2)的可醫(yī)治標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可以將逐步遞增的方法(titration process)再延長(zhǎng)I周以允許最佳的遞增。例如，如果在第2周增加研究藥物且兒童顯示適度的日間催眠狀態(tài)，則研究人員可以將治療分類(lèi)評(píng)價(jià)為(2)可醫(yī)治，并且可以將當(dāng)前劑量再持續(xù)一周以確定當(dāng)兒童變得“適應(yīng)”藥物時(shí)日間催眠狀態(tài)是否解決。預(yù)期的給藥方案.在基線(xiàn)，在睡時(shí)給予兒童O. lmg/kg (I組)或安慰劑(2組)，持續(xù)I周。然后在第I周隨訪(fǎng)時(shí)，在早晨和在睡時(shí)給予兒童O. lmg/kg或安慰劑,持續(xù)I周。在第2周隨訪(fǎng)時(shí)，在早晨、午餐時(shí)間和在睡時(shí)給予兒童O. lmg/kg或安慰劑，持續(xù)I周。在第3周隨訪(fǎng)時(shí)，在早晨、午餐時(shí)間、晚餐時(shí)間和在睡時(shí)給予兒童O. lmg/kg或安慰劑。表2:研究活動(dòng)計(jì)劃表
權(quán)利要求
1.包含褪黑激素和鋅的組合物。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中鋅的形式選自鋅、乙酸鋅、葡糖酸鋅、檸檬酸鋅、氯化鋅及其組合。
3.權(quán)利要求I的組合物,其中所述褪黑激素和鋅以約1:1一約1:1. 2的摩爾比存在。
4.權(quán)利要求I的組合物，其中所述褪黑激素和鋅以約1:1的摩爾比存在。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述褪黑激素和鋅是粉末形式并且混合成粉狀混合物。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中將所述粉狀混合物與足以產(chǎn)生顆粒的量的至少一種賦形劑配制。
7.權(quán)利要求6的組合物，其中用腸溶衣給所述顆粒包衣。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中所述腸溶衣選自脂肪酸、蠟、蟲(chóng)膠、塑料、植物纖維、聚合物及其組合。
9.包含褪黑激素-鋅復(fù)合物的組合物。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述褪黑激素-鋅復(fù)合物通過(guò)在過(guò)量堿的存在下將可溶性鋅鹽加入到褪黑激素的堿性溶液中形成。
11.權(quán)利要求I或9的組合物，其中所述組合物還包含益生菌材料。
12.權(quán)利要求11的組合物，其中所述益生菌材料包含細(xì)菌的至少一種天然、半合成或轉(zhuǎn)基因菌株。
13.權(quán)利要求11的組合物，其中所述益生菌材料包含酵母的至少一種天然、半合成或轉(zhuǎn)基因菌株。
14.權(quán)利要求11的組合物，其中所述益生菌材料包含細(xì)菌和酵母。
15.包含權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物的劑型。
16.權(quán)利要求15的劑型，包含所述組合物的顆粒。
17.權(quán)利要求16的劑型，其中用腸溶衣給所述顆粒包衣。
18.權(quán)利要求17的劑型，其中將所述包衣顆粒包囊。
19.治療或預(yù)防汞毒性的方法，包含對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物。
20.治療或預(yù)防選自孤獨(dú)癥、孤獨(dú)性譜群疾病、阿爾茨海默病和帕金森病的病癥的方法，包括對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物。
21.治療或預(yù)防選自炎癥、線(xiàn)粒體功能障礙和鋅缺乏的病癥的方法，包括對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物。
22.治療或預(yù)防與接觸環(huán)境重金屬相關(guān)的病癥的方法，包括對(duì)有此需要的受試者給予治療有效量的權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物。
23.權(quán)利要求20-22任一項(xiàng)的治療方法，其中通過(guò)口服給予所述組合物。
24.權(quán)利要求20-22任一項(xiàng)的治療方法，其中給予所述受試者所述組合物，所提供的用量約為O. 01mg/kg —約10mg/kg褪黑激素,每日I 一 4次。
25.權(quán)利要求20-22任一項(xiàng)的治療方法，其中給予所述受試者所述組合物，所提供的用量約為O. lmg/kg褪黑激素，每日4次。
26.劑型的制備方法，包括下列步驟組合褪黑激素和鋅，形成混合物；向所述混合物中加入至少一種賦形劑，其用量足以形成顆粒；用腸溶衣給所述顆粒包衣；和包囊所述包衣顆粒 。
全文摘要
本發(fā)明提供了包含褪黑激素和鋅的組合物。還提供了包含所述組合物的劑型和所述組合物和劑型的制備方法。提供了從受試者體內(nèi)除去汞的方法，作為治療和/或預(yù)防與汞毒性相關(guān)的一些病癥的方法。
文檔編號(hào)A61P25/00GK102970996SQ201180030203
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2011年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月25日
發(fā)明者大衛(wèi)·科索爾 申請(qǐng)人:大衛(wèi)·科索爾