專利名稱：治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及分子生物學(xué)和生長(zhǎng)因子調(diào)控的領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及用于病理狀況(諸如癌癥)治療的聯(lián)合療法。
背景技術(shù)：
癌癥仍然是對(duì)人類健康的最致命威脅之一。在美國(guó)，癌癥每年影響近130萬(wàn)新患者，而且是位于心臟病之后的第二位死因，占4例死亡中的大約I例。乳腺癌是癌癥的第二位最常見形式，而且是美國(guó)女性中的第二位癌癥殺手。還預(yù)測(cè)癌癥可能在5年內(nèi)超越心血管疾病成為第一位死因。實(shí)體瘤對(duì)大多數(shù)上述死亡負(fù)有責(zé)任。雖然某些癌癥的醫(yī)學(xué)治療中已經(jīng)取得了重大進(jìn)步，但是所有癌癥的總體5年存活率在最近20年里只改進(jìn)了約10%。癌癥(或稱作惡性腫瘤)以不受控制的方式快速生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，使得及時(shí)檢測(cè)和治療極端困難。乳腺癌是在美國(guó)每年殺死許多女性的一種疾病。根據(jù)美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)，大約40，000人會(huì)在2008年死于該疾病。每年診斷超過180，000例乳腺癌新病例，而且估計(jì)8位女性中I位會(huì)發(fā)生乳腺癌。這些數(shù)目指示乳腺癌是今天女性面對(duì)的最危險(xiǎn)疾病之一。轉(zhuǎn)移性乳腺癌一般是不能治愈的，只有少數(shù)患者在標(biāo)準(zhǔn)化療之后實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期存活(Greenberg等，J. Clin.Oncol.14:2197-2205(1996))。由于癌癥仍然是最致命威脅之一，因此患者需要?jiǎng)e的癌癥療法。本發(fā)明解決這些和其它需要，正如閱讀下述公開后會(huì)顯而易見的。通過提及完整收錄本文中引用的所有參考文獻(xiàn)(包括專利申請(qǐng)和出版物)。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供用于治療乳腺癌的方法，包括對(duì)雌激素受體(ER)陰性、孕酮受體(PR)陰性和HER2陰性(統(tǒng)稱三重陰性)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者施用有效量的抗c-met抗體和紫杉燒。一方面，本發(fā)明提供用于治療乳腺癌的方法，包括對(duì)ER陰性、PR陰性和HER2陰性(統(tǒng)稱三重陰性)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者施用有效量的抗c-met抗體、抗VEGF抗體、和紫杉烷。一方面，本發(fā)明提供用于治療乳腺癌的方法，包括對(duì)ER陰性、PR陰性、和HER2陰性(ER-、PR-、和HER2-;或三重陰性)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽，例如用于延長(zhǎng)患者的存活、降低患者 的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性。
另一方面，本發(fā)明提供宣傳抗c-met抗體(例如單價(jià)抗c_met抗體,例如MetMAb)與紫杉烷組合用于治療轉(zhuǎn)移性三重陰性乳腺癌患者的方法，例如用于延長(zhǎng)患者的存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，紫杉烷為帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療包含對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb)及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。宣傳可以通過任何可得手段來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，該宣傳通過伴隨抗c-met抗體之商業(yè)性配制劑的包裝插頁(yè)來進(jìn)行。該宣傳也可以通過伴隨紫杉烷之商業(yè)性配制劑的包裝插頁(yè)來進(jìn)行。宣傳可以通過書面或口頭告知內(nèi)科醫(yī)師或健康護(hù)理提供者來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，該宣傳通過包裝插頁(yè)來進(jìn)行，其中包裝插頁(yè)提供說明書來接受抗c-met抗體和/或紫杉烷的療法。在一些實(shí)施方案中，該宣傳之后是在有或無(wú)紫杉烷的情況中用抗c-met抗體治療患者。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。又一方面，本發(fā)明提供宣傳紫杉烷與抗c-met抗體組合用于治療轉(zhuǎn)移性三重陰性乳腺癌患者的方法，其中紫杉烷可以為例如帕利他賽，例如用于延長(zhǎng)患者的存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c_met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些方面，本發(fā)明的特征在于指導(dǎo)具有三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者的方法，其通過提供接受抗c-met抗體和紫杉烷治療以例如延長(zhǎng)患者的存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性的說明書來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。本發(fā)明提供商業(yè)方法，包括銷售抗c-met抗體，用于在人患者中治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌，例如用于延長(zhǎng)存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括銷售紫杉烷，用于在人患者中治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌。在一些實(shí)施方案中，該銷售之后是在有或無(wú)紫杉烷的情況中用抗c-met抗體治療患者。還提供商業(yè)方法，包括銷售抗c-met抗體和紫杉烷，用于在人患者中治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌，例如用于延長(zhǎng)存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該銷售之后是在有或無(wú)紫杉烷的情況中用抗c-met抗體治療患者。
還有一方面,本發(fā)明提供制品,其包含抗c-met抗體(例如單價(jià)抗c_met抗體,例如MetMAb)和/或抗VEGF抗體和/或紫杉烷，及帶有治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的說明書的包裝插頁(yè)或標(biāo)簽。在一些實(shí)施方案中，紫杉烷為帕利他賽.在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療進(jìn)一步包括以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)。還有一方面，本發(fā)明提供制造制品的方法，其中該制品包含抗c-met抗體(例如單價(jià)抗c-met抗體，例如MetMAb)和/或抗VEGF抗體和/或紫杉烷，及帶有治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的說明書的包裝插頁(yè)或標(biāo)簽。在一些實(shí)施方案中，紫杉烷為帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療進(jìn)一步包括以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單 抗)。一方面，本發(fā)明提供用于治療乳腺癌的方法，包括對(duì)ER陰性、PR陰性、和HER2陰性(ER-、PR-、和HER2-;或三重陰性)轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb)，以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單抗),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽，例如用于延長(zhǎng)存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)可能性、和/或提高患者的存活可能性。另一方面，本發(fā)明提供方法，其包括施用抗VEGF抗體。如此，在一些方面，本發(fā)明提供宣傳抗c-met抗體(例如單價(jià)抗c-met抗體,例如MetMAb)與抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)和紫杉烷組合用于治療轉(zhuǎn)移性三重陰性乳腺癌患者的方法，例如用于延長(zhǎng)患者的存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，紫杉烷為帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c_met抗體(例如MetMAb),以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單抗),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。宣傳可以通過任何可得手段來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，該宣傳通過伴隨抗c-met抗體之商業(yè)性配制劑的包裝插頁(yè)來進(jìn)行。該宣傳也可以通過伴隨抗VEGF抗體之商業(yè)性配制劑的包裝插頁(yè)來進(jìn)行。該宣傳也可以通過伴隨紫杉烷之商業(yè)性配制劑的包裝插頁(yè)來進(jìn)行。宣傳可以通過書面或口頭告知內(nèi)科醫(yī)師或健康護(hù)理提供者來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，該宣傳通過包裝插頁(yè)來進(jìn)行，其中包裝插頁(yè)提供說明書來接受抗c-met抗體、抗VEGF抗體和/或紫杉烷的療法。在一些實(shí)施方案中，該宣傳之后是在有或無(wú)紫杉烷或抗VEGF抗體的情況中用抗c-met抗體治療患者。在又一個(gè)方面，本發(fā)明提供宣傳抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)與抗c-met抗體(例如MetMAb)和紫杉烷(諸如帕利他賽)組合用于治療轉(zhuǎn)移性三重陰性乳腺癌患者的方法。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗體(例如貝伐單抗),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。又一方面，本發(fā)明提供宣傳紫杉烷與抗c-met抗體和抗VEGF抗體組合用于治療轉(zhuǎn)移性三重陰性乳腺癌患者的方法，其中紫杉烷可以例如為帕利他賽，例如用于延長(zhǎng)患者的存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)，及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些方面，本發(fā)明的特征在于指導(dǎo)具有三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者的方法，其通過提供接受抗c-met抗體、抗VEGF抗體和紫杉烷治療以例如延長(zhǎng)患者的存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和/或提高患者的存活可能性的說明書來進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天 施用抗c-met抗體(例如MetMAb),以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗體(例如貝伐單抗),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。本發(fā)明提供商業(yè)方法，包括銷售抗c-met抗體，用于在人患者中治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌，例如用于延長(zhǎng)存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb)，以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單抗),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括銷售抗VEGF抗體和紫杉烷，用于在人患者中治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌。在一些實(shí)施方案中，該銷售之后是在有或無(wú)紫杉烷和/或抗VEGF抗體的情況中用抗c-met抗體治療患者。在一些實(shí)施方案中，該銷售之后是在有或無(wú)紫杉烷或抗c-met抗體的情況中用抗VEGF抗體治療患者。還提供商業(yè)方法，其包括銷售抗c-met抗體、抗VEGF抗體、和紫杉烷，用于在人患者中治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌，例如用于延長(zhǎng)存活、降低患者的癌癥復(fù)發(fā)可能性、和/或提高患者的存活可能性。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),以IOmg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天抗VEGF抗體(例如貝伐單抗),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該銷售之后是在有或無(wú)紫杉烷或抗VEGF抗體的情況中用抗c-met抗體治療患者。在一些實(shí)施方案中，該銷售之后是在有或無(wú)紫杉烷或抗c-met抗體的情況中用抗VEGF抗體治療患者。還有一方面,本發(fā)明提供制品,其包含抗c-met抗體(例如單價(jià)抗c_met抗體,例如MetMAb)和/或抗VEGF抗體和/或紫杉烷，及帶有治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的說明書的包裝插頁(yè)或標(biāo)簽。在一些實(shí)施方案中，紫杉烷為帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療進(jìn)一步包括以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)。還有一方面，本發(fā)明提供制造制品的方法，其中該制品包含抗c-met抗體(例如單價(jià)抗c-met抗體，例如MetMAb)和/或抗VEGF抗體和/或紫杉烷，及帶有治療三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的說明書的包裝插頁(yè)或標(biāo)簽。在一些實(shí)施方案中，紫杉烷為帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療包括對(duì)三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者以10mg/kg的劑量在28天周期的第I天和第15天施用抗c-met抗體(例如MetMAb),及以90mg/m2的劑量通過IV輸注在該28天周期的第I天、第8天、和第15天施用帕利他賽。在一些實(shí)施方案中，該治療進(jìn)一步包括以10mg/kg的劑量在該28天周期的第I天和第15天施用抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)。
在一些實(shí)施方案中，三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者沒有為三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌(例如在先抗癌藥物療法)接受過在先治療。在一些實(shí)施方案中，三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者為三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌接受過在先治療。在一些實(shí)施方案中，患者具有三重陰性轉(zhuǎn)移性或局部復(fù)發(fā)性乳腺癌。在一些實(shí)施方案中，三重陰性轉(zhuǎn)移性或局部復(fù)發(fā)性乳腺癌患者沒有為三重陰性轉(zhuǎn)移性或局部復(fù)發(fā)性乳腺癌接受過在先治療(例如在先抗癌藥物療法)。在一些實(shí)施方案中，三重陰性轉(zhuǎn)移性或局部復(fù)發(fā)性乳腺癌患者為三重陰性轉(zhuǎn)移性或局部復(fù)發(fā)性乳腺癌接受過在先治療。在又一個(gè)實(shí)施方案中，并行施用抗c-met抗體和紫杉燒。在還有一個(gè)實(shí)施方案中，以任意次序序貫施用抗c-met抗體和紫杉烷。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體的施用在紫杉烷的施用之前。在又一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體(例如MetMAb)和紫杉烷(例如帕利他賽)的施用導(dǎo)致協(xié)同效應(yīng)。在還有一個(gè)實(shí)施方案中,抗c-met抗體(例如MetMAb)和紫杉烷(例如帕利他賽)的施用相對(duì)于沒有抗c-met抗體的治療延長(zhǎng)人患者的存活。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，無(wú)進(jìn)展存活(PFS)和/或總體存活(OS)得到延長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，該治療將PFS或OS比通過對(duì)患者施用紫杉烷實(shí)現(xiàn)的PFS或OS延長(zhǎng)至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%或更多。在又一個(gè)實(shí)施方案中，并行施用抗c-met抗體、抗VEGF抗體和紫杉燒。在還有一個(gè)實(shí)施方案中，以任意次序序貫施用抗c-met抗體、抗VEGF抗體和紫杉烷。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體的施用在抗VEGF抗體和紫杉烷的施用之前。在又一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體(例如MetMAb)、抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)和紫杉烷(例如帕利他賽)的施用導(dǎo)致協(xié)同效應(yīng)。在還有一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體(例如MetMAb)、抗VEGF抗體(例如貝伐單抗)和紫杉烷(例如帕利他賽)的施用相對(duì)于沒有抗c-met抗體的治療延長(zhǎng)人患者的存活。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，無(wú)進(jìn)展存活(PFS)和/或總體存活(OS)得到延長(zhǎng)。在一些實(shí)施方案中，該治療將PFS或OS比通過對(duì)患者施用抗VEGF抗體和紫杉烷實(shí)現(xiàn)的PFS (progression free survival)或 OS (overallsurvival)延長(zhǎng)至少約 5%、至少約 10%、至少約15%、至少約20%或更多。雖然本發(fā)明的方法可以在沒有癌癥治療的任何其它手段的情況中，例如在沒有另一種治療劑(包括化療劑)的情況中實(shí)施，但是該方法可以任選包含施用另一種選自下組的治療劑化療劑，不同的抗c-met抗體，不同的抗VEGF抗體，針對(duì)腫瘤相關(guān)抗原的抗體，抗激素化合物，心臟保護(hù)劑，細(xì)胞因子，抗血管發(fā)生劑，酪氨酸激酶抑制劑，COX抑制劑，非類固醇抗炎藥，法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，結(jié)合癌胚蛋白CA125的抗體，Raf或ras抑制劑，脂質(zhì)體多柔比星，拓?fù)涮婵?，不同的紫杉烷，治療惡心的藥物，預(yù)防或治療皮疹的藥物或標(biāo)準(zhǔn)痤瘡療法，治療或預(yù)防腹瀉的藥物，降體溫藥物，和造血生長(zhǎng)因子。在本發(fā)明的又一個(gè)方面，依照本文中任何實(shí)施方案的紫杉烷為例如TAXOLC 帕利他賽(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J. ) > ΓΛΧΟ ! LRIiA多西他賽(Rh6ne -Poulenc Rorer, Antony, France) > 或 ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造納米顆粒劑型帕利他賽(American PharmaceuticalPartners, Schaumberg, Illinois)。在一些實(shí)施方案中，紫杉燒為帕利他賽，以90mg/m2的劑量通過IV輸注在每一個(gè)28天周期的第I天、第8天、和第15天施用?？梢栽谝┯玫幕旌衔镏惺褂脙煞N或更多種紫杉烷，與抗c-met抗體和抗VEGF抗體的施用組合。在本發(fā)明的又一方面，依照本文中任何實(shí)施方案的抗體是單克隆抗體，包括嵌合、人源化或人抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體、單臂抗體、或F(ab’ )2片段。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是全長(zhǎng)抗體，例如完整IgG抗體或 其它抗體類或同種型，如本文中定義的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是裸抗體。在又一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是與藥物偶聯(lián)的。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，抗c-met抗體是單價(jià)、單臂抗體。本申請(qǐng)公開在人中施用單價(jià)單臂抗體，其包含與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比提高所述抗體片段穩(wěn)定性的Fe區(qū)。參見例如W02005/063816。全長(zhǎng)抗體可以在一些情況中在結(jié)合靶抗原時(shí)展現(xiàn)激動(dòng)效應(yīng)(這可能是不想要的)，盡管它作為Fab片段是拮抗性抗體。參見例如美國(guó)專利No. 6，468，529。在拮抗效應(yīng)是想要的治療功能時(shí)，這種現(xiàn)象是不幸的。在這些情況中，單臂抗體(即包含單一抗原結(jié)合臂的抗體)的單價(jià)性狀在抗體結(jié)合靶分子時(shí)導(dǎo)致和/或確保拮抗功能，適合于治療需要拮抗功能和抗體的二價(jià)性導(dǎo)致不想要的激動(dòng)效應(yīng)的病理狀況。此外，包含本文所述Fe區(qū)的單臂抗體特征在于與具有相似/基本上相同的抗原結(jié)合特征的Fab形式相比卓越的藥動(dòng)學(xué)屬性(諸如延長(zhǎng)的半衰期和/或降低的體內(nèi)清除速率)，如此克服使用常規(guī)單價(jià)Fab抗體時(shí)的主要缺點(diǎn)。因而，在一些實(shí)施方案中，抗c-met抗體是包含F(xiàn)e區(qū)的單臂抗體(即重鏈可變域和輕鏈可變域形成單一抗原結(jié)合臂)，其中Fe區(qū)包含第一和第二Fe多肽，其中第一和第二Fe多肽以復(fù)合物存在且形成與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比提高所述抗體片段穩(wěn)定性的Fe區(qū)。在一些實(shí)施方案中,抗c-met抗體為抗c_met抗體或其抗體片段,其中該抗體包含(a)第一多肽，其包含重鏈可變域、CHl序列和第一 Fe多肽，所述重鏈可變域含有序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1) ; (b)第二多肽，其包含輕鏈可變域和CLl序列，所述輕鏈可變域含有序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:2);和(c)第三多肽，其包含第二 Fe多肽，其中重鏈可變域和輕鏈可變域作為復(fù)合物存在且形成單一抗原結(jié)合臂，其中第一和第二 Fe多肽以復(fù)合物存在且形成與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比提高所述抗體片段穩(wěn)定性的Fe區(qū)。在一些實(shí)施方案中，第一多肽包含

圖1(SEQ ID NO: 3)所繪Fe序列且第二多肽包含圖2 (SEQ ID NO: 4)所繪Fe序列。在一些實(shí)施方案中，第一多肽包含圖2 (SEQ ID NO:4)所繪Fe序列且第二多肽包含圖1(SEQ ID NO: 3)所繪 Fe 序列。在一些實(shí)施方案中,抗c-met抗體為抗c_met抗體或其抗體片段,其中該抗體包含(a)包含重鏈可變域的第一多肽，該多肽包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYWLHWVRQAPGKGLEWVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:21) ; (b)包含輕鏈可變域的第二多肽，該多肽包含序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNN·FYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO: 22);和包含F(xiàn)e序列的第三多肽，該多肽包含序列DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)，其中重鏈可變域和輕鏈可變域作為復(fù)合物存在且形成單一抗原結(jié)合臂，其中第一和第二 Fe多肽以復(fù)合物存在且形成與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比提高所述抗體片段穩(wěn)定性的Fe區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體包含重鏈可變域，其包含圖1 (SEQ IDNO: 5, 6, 7)所繪⑶R1-HC、⑶R2-HC和⑶R3-HC序列中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含輕鏈可變域，其包含圖1 (SEQ ID NO:8，9，10)所繪CDR1-LC、CDR2-LC和CDR3-LC序列中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，重鏈可變域包含圖1 (SEQ ID NO: 11，12，13，14)所繪FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和FR4-HC序列。在一些實(shí)施方案中，輕鏈可變域包含圖1 (SEQIDNO: 15，16，17，18)所繪 FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC 和 FR4-LC 序列。在一些實(shí)施方案中，抗c-met抗體為onartuzumab (可互換稱作MetMAb)。本文中描述了且本領(lǐng)域知道其它適合于在本發(fā)明方法中使用的抗c-met抗體?？垢渭?xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)抗體也適合于在涉及抗c-met抗體的本發(fā)明方法中使用(與抗c-met抗體組合或作為抗c-met抗體的替代)。正如本領(lǐng)域知道的，HGF是c_met受體的配體。在一些實(shí)施方案中，抗c-met抗體包含至少一項(xiàng)促進(jìn)抗體片段內(nèi)的Fe序列異二聚化，同時(shí)將同二聚化降至最低的特征。此類特征改善免疫球蛋白群的收率和/或純度和/或同質(zhì)性。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含構(gòu)成“結(jié)”和“穴”的Fe突變，如記載于W02005/063816。例如，穴突變可以是Fe多肽中的T366A、L368A和/或Y407V中的一項(xiàng)或多項(xiàng)，而結(jié)突變可以是T366W。還有一方面，依照本文中任何實(shí)施方案的抗VEGF抗體可以用VEGF特異性拮抗劑來替代，例如VEGF受體分子或嵌合VEGF受體分子，如下文描述的。在本發(fā)明方法的某些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體為貝伐單抗。在本發(fā)明方法中有用的例示性抗體包括貝伐單抗(AVASTIN )、G6抗體、B20抗體、及其片段。在某些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體具有包含下述氨基酸序列的重鏈可變區(qū)EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGYTFT NYGMNWVRQAPGKGLEffVGffINTYTGEPTY AADFKRRFTF SLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS (SEQID NO: 31)和包含下述氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQYSTVPffTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:32)。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，在本文中提供的方法的一些實(shí)施方案中，患者的癌表達(dá)c-met。在一些實(shí)施方案中，來自患者的血清表達(dá)高水平的IL8(展示高水平的IL8表達(dá)，諸如IL8蛋白質(zhì)表達(dá))。在一些實(shí)施方案中，來自患者的血清表達(dá)比約150pg/ml要多的IL8，或在一些實(shí)施方案中，比約50pg/ml要多的IL8。在一些實(shí)施方案中，來自患者的血清表達(dá)比約10pg/ml、20pg/ml、30pg/ml或更多要多的IL8。用于測(cè)定IL8血清濃度的方法是本領(lǐng)域已知的。在一些實(shí)施方案中，來自患者的血清表達(dá)高水平的HGF (展示高水平的HGF表達(dá)，諸如HGF蛋白質(zhì)表達(dá))。在一些實(shí)施方案中，來自患者的血清表達(dá)比約5，000、10，000、或50, 000pg/ml 要多的 HGF。附圖簡(jiǎn)述
圖1 :描繪 MetMAb (onartuzumab 或 0Α 5ν2)的框架(FR)、CDR、第一恒定域(CL或CHl)和Fe區(qū)(Fe)的氨基酸序列。描繪的Fe序列包含“穴”(空穴)突變T366S、L368A和 Y407V，如記載于 W02005/063816。圖2 :描繪包含“結(jié)”(突起)突變T366W的Fe多肽的序列，如記載于W02005/063816。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含這種序列的Fe多肽與包含圖1Fc序列的Fe多肽形成復(fù)合物以生成Fe區(qū)。圖3 :描繪患者診斷、治療分組和給藥周期。BEV=貝伐單抗(bevacizumab) ;CR=完全響應(yīng)；*=劑量限制毒性(dose-limiting toxicity)。圖4 :描繪腫瘤負(fù)荷自基線起的變化及最佳響應(yīng)，所有患者。SLD=最長(zhǎng)直徑之和；*=因劑量限制毒性而無(wú)數(shù)據(jù)；**=未進(jìn)行。發(fā)明詳述I 定義如本文中所使用的，除非另有說明，術(shù)語(yǔ)“肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子”或“HGF”指能夠在容許HGF/c-met信號(hào)途經(jīng)發(fā)生的條件下激活所述過程的任何天然或變異的(或是天然的或是合成的)HGF多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型HGF” 一般指包含天然發(fā)生HGF蛋白質(zhì)的氨基酸序列的多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型HGF序列”一般指在天然發(fā)生HGF中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。c-met是HGF的一種已知受體，HGF細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)經(jīng)由c-met實(shí)施生物學(xué)作用。如本文中所使用的，除非另有說明，術(shù)語(yǔ)“雌激素受體”或“ER”指任何天然或變異的(或是天然的或是合成的)ER多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型ER” 一般指包含天然發(fā)生ER蛋白質(zhì)的氨基酸序列的多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型ER序列” 一般指在天然發(fā)生ER中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。表述“ErbB2”和“HER2”在本文中可互換使用，指例如Semba等，PNAS (USA) 82:6497-6501 (1985)和 Yamamoto 等 Nature319:230-234 (1986)中記載的人HER2蛋白質(zhì)(Genebank登錄號(hào)X03363)。術(shù)語(yǔ)“erbB2”指編碼人ErbB2的基因，而“neu”指編碼大鼠Pl85neu的基因。優(yōu)選的HER2是天然序列人HER2。如本文中所使用的，除非另有說明，術(shù)語(yǔ)“孕酮受體”或“PR”指任何天然或變異的(或是天然的或是合成的)PR多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型PR” 一般指包含天然發(fā)生PR蛋白質(zhì)的氨基酸序列的多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型PR序列”一般指在天然發(fā)生PR中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。
“天然序列”多肽包括與衍生自自然界的多肽具有相同氨基酸序列的多肽。如此，天然序列多肽可以具有來自任何哺乳動(dòng)物的天然存在多肽的氨基酸序列。此類天然序列多肽可以從自然界分離，或者可以通過重組或合成手段來生產(chǎn)。術(shù)語(yǔ)“天然序列”多肽明確涵蓋該多肽的天然存在的截短或分泌形式(例如胞外結(jié)構(gòu)域序列)、天然存在的變體形式(例如可變剪接形式)、及天然存在的等位變體。多肽“變體”意指與天然序列多肽具有至少約80%氨基酸序列同一性的生物學(xué)活性多肽。此類變體包括例如在多肽的N-末端或C-末端添加或刪除一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的多肽。通常，變體與天然序列多肽將具有至少約80%的氨基酸序列同一性，更優(yōu)選的是，至少約90%的氨基酸序列同一性，和甚至更優(yōu)選的是，至少約95%的氨基酸序列同一性。“抗c-met抗體”指任何以足夠親和力和特異性結(jié)合c_met的抗體。所選擇的抗體正常情況下會(huì)具有足夠強(qiáng)的對(duì)c-met的結(jié)合親和力，例如抗體可以以介于IOOnM-1pM之間的Kd值結(jié)合人c-met。抗體親和力可通過例如基于表面等離振子共振的測(cè)定法(諸如BIAcore測(cè)定法，如PCT申請(qǐng)公開文本No. W02005/012359中所記載的)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA);和競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法(例如RIA)來測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，抗c-met抗體能在靶向 和干擾涉及c-met活性的疾病或狀況中用作治療劑。還有，可以將所述抗體提交其它生物學(xué)活性測(cè)定法，例如為了評(píng)估它作為治療劑的效力。此類測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的，而且取決于抗體的靶抗原和預(yù)定用途?！袄野彼峒っ敢种苿敝敢欢ǔ潭纫种评野彼峒っ?諸如c-met受體)的酪氨酸激酶活性的分子。蛋白質(zhì)“表達(dá)”指基因中編碼的信息轉(zhuǎn)換成信使RNA(mRNA)，然后轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)。在本文中，“表達(dá)”感興趣蛋白質(zhì)(諸如c-met蛋白質(zhì))的樣品或細(xì)胞指其中測(cè)定出存在編碼該蛋白質(zhì)的mRNA或蛋白質(zhì)(包括其片段)的樣品或細(xì)胞。如本文中所使用的，除非另有說明，術(shù)語(yǔ)“白介素8”或“ IL8”或“ IL-8”指能夠在容許IL8信號(hào)途經(jīng)發(fā)生的條件下激活所述過程的任何天然或變異的(或是天然的或是合成的)IL8多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型IL8”一般指包含天然發(fā)生IL8蛋白質(zhì)的氨基酸序列的多肽。術(shù)語(yǔ)“野生型IL8序列”一般指在天然發(fā)生IL8中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。 術(shù)語(yǔ)“ VEGF”或“ VEGF-A”用于指165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子及相關(guān)的121個(gè)、189個(gè)和206個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，如Leung等Science, 246:1306 (1989);及 Houck 等 Mol. Endocrin. , 5:1806 (1991)所述，及其天然存在的等位基因形式和加工形式。VEGF-A是包括VEGF-B、VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F和PlGF在內(nèi)的基因家族的一部分。VEGF-A主要結(jié)合兩種高親和力受體酪氨酸激酶，即VEGFR-1 (Flt-1)和VEGFR-2 (Flk-1/KDR)，后者是VEGF-A血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂信號(hào)的主要遞質(zhì)。另外，神經(jīng)氈蛋白-l(neim)pilin-l)已經(jīng)被鑒定為肝素結(jié)合VEGF-A同種型(isoform)的受體，而且可在血管發(fā)育中發(fā)揮作用。術(shù)語(yǔ)“VEGF”或“VEGF-A”還指來自非人物種諸如小鼠、大鼠或靈長(zhǎng)類動(dòng)物的VEGF。有時(shí)，來自特定物種的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF，mVEGF表示鼠VEGF。術(shù)語(yǔ)“VEGF”還用于指包含165個(gè)氨基酸的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的截短形式多肽。本申請(qǐng)中可能通過例如“VEGF(8-109) ”、“VEGF(1-109) ”或“VEGF165”來鑒別任何此類形式VEGF?！敖囟痰摹碧烊籚EGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示編號(hào)。例如，截短的天然VEGF中的第17位氨基酸(甲硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(甲硫氨酸)。截短的天然VEGF具有與天然VEGF相當(dāng)?shù)膶?duì)KDR和Flt-1受體的結(jié)合親和力。術(shù)語(yǔ)“VEGF變體”如本文中所使用的指在天然VEGF序列中包括一處或多處氨基酸突變的VEGF多肽。任選的是，所述一處或多處氨基酸突變包括氨基酸替代。為了本文中所描述的VEGF變體的速記名稱的目的，應(yīng)注意數(shù)字指沿推定天然VEGF氨基酸序列的氨基酸殘基位直(在Leung等，見上文和Houck等，見上文中提供)?！癡EGF生物學(xué)活性”包括對(duì)任何VEGF受體的結(jié)合或任何VEGF信號(hào)傳導(dǎo)活性，諸如調(diào)節(jié)正常的和異常的血管發(fā)生(angiogenesis)和脈管發(fā)生(vasculogenesis) (Ferrara和 Davis-Smyth(1997)Endocrine Rev.18:4-25;Ferrara(1999)J. Mol. Med. 77:527-543)；促進(jìn)胚胎脈管發(fā)生和血管發(fā)生(Carmeliet等(1996) Nature380:435-439; Ferrara等(1996) Nature380:439-442);及調(diào)控雌性生殖道中的和為了骨生長(zhǎng)和軟骨形成的周期性血管增殖(Ferrara 等(1998)Nature Med. 4:33 6-340;Gerber 等(1999)NatureMed. 5:623-628)。在作為血管發(fā)生和脈管發(fā)生中的血管發(fā)生因子之外，VEGF，作為多效生長(zhǎng)因子，在生理過程諸如內(nèi)皮細(xì)胞存活、血管通透性和血管舒張、單核細(xì)胞趨化性和鈣流入中展現(xiàn)出多種生物學(xué)效應(yīng)(Ferrara和Davis-Smyth (1997)，見上文；及Cebe-Suarez等Cell. Mol. LifeSc1. 63:601-615 (2006))。此外，最近的研究報(bào)道了 VEGF對(duì)少數(shù)非內(nèi)皮細(xì)胞類型諸如視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、胰導(dǎo)管細(xì)胞、和許旺(Schwann)細(xì)胞的促有絲分裂效應(yīng)(Guerrin 等(1995)J. Cell Physiol. 164:385-394;Oberg-Welsh 等(1997)Mol. Cell.Endocrinol. 126:125-132;Sondell 等(1999)J. Neurosc1. 19:5731-5740)?！把馨l(fā)生抑制劑”或“抗血管發(fā)生劑”指或直接或間接抑制血管發(fā)生(angiogenesis)、血管生成(vasculogenesis)、或不想要的血管通透性的小分子量物質(zhì)、多核苷酸、多肽、分離的蛋白質(zhì)、重組蛋白、抗體、或其偶聯(lián)物或融合蛋白。應(yīng)當(dāng)理解，抗血管發(fā)生劑包括那些結(jié)合并阻斷血管發(fā)生因子或其受體的血管發(fā)生活性的藥劑。例如，抗血管發(fā)生劑是上文定義的血管發(fā)生劑的抗體或其它拮抗劑，例如VEGF-A的抗體、VEGF-A受體(例如KDR受體或Flt-1受體)的抗體、抗TOGFR抑制劑諸如GLEEVEC (Imatinib Mesylate)。抗血管發(fā)生劑還包括天然血管發(fā)生抑制劑，例如血管他丁(angiostatin)、內(nèi)皮他丁(endostatin)等。參見例如 Klagsbrun 和 D’Amore, Annu. Rev.Physiol. 53:217-39 (1991) ; Streit 和 Detmar, 0ncogene22:3172-3179 (2003)(例如列舉惡性黑素瘤中抗血管發(fā)生療法的表3) ; Ferrara和Alitalo, Nature Medicine5 (12) : 1359-1364(1999) ;Tonini等，0ncogene22:6549-6556 (2003)(例如列舉已知抗血管發(fā)生因子的表2) ; Sato, Int. J. Clin. Oncol. 8:200-206 (2003)(例如列舉臨床試驗(yàn)中所使用的抗血管發(fā)生劑的表I)?！癡EGF拮抗劑”指能夠中和、阻斷、抑制、消除、降低或干擾VEGF活性(包括其與一種或多種VEGF受體的結(jié)合)的分子(肽基或非肽基分子)。在某些實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑將VEGF的表達(dá)水平或生物學(xué)活性降低或抑制了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一個(gè)實(shí)施方案中，受到VEGF拮抗劑抑制的VEGF是VEGF(8-109)、VEGF(1-109)、或VEGF165。在本發(fā)明的方法中有用的VEGF拮抗劑包括特異性結(jié)合VEGF的肽基或非肽基化合物，諸如抗VEGF抗體及其抗原結(jié)合片段、特異性結(jié)合VEGF的多肽或其片段、和特異性結(jié)合VEGF由此使其隔絕與一種或多種受體(例如可溶性VEGF受體蛋白質(zhì)或其VEGF結(jié)合片段，或嵌合VEGF受體蛋白質(zhì))結(jié)合的受體分子及衍生物、至少與編碼VEGF多肽的核酸分子的片段互補(bǔ)的反義核酸寡聚物；至少與編碼VEGF多肽的核酸分子的片段互補(bǔ)的小RNA ;祀向VEGF的核酶；針對(duì)VEGF的肽體；及VEGF適體?！翱筕EGF抗體”指以足夠親和力和特異性結(jié)合VEGF的抗體。所選擇的抗體通常會(huì)具有足夠強(qiáng)的對(duì)VEGF的結(jié)合親和力，例如，該抗體可以以介于IOOnM-1pM之間的Kd值結(jié)合hVEGF?？贵w親和力可通過例如基于表面等離振子共振的測(cè)定法(諸如PCT申請(qǐng)公開文本No. W02005/012359中所記載的BIAcore測(cè)定法);酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA);和競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法(例如RIA)來測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗VEGF抗體可用作治療劑，用于靶向和干擾其中涉及VEGF活性的疾病或疾患。還有，可對(duì)該抗體進(jìn)行其它生物學(xué)活性測(cè)定法，例如為了評(píng)估其作為治療劑的效力所進(jìn)行的生物學(xué)活性測(cè)定法。此類測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的，而且取決于抗體的靶抗原和預(yù)定用途。例子包括HUVEC抑制測(cè)定法(如下文實(shí)施例中所描述的);腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制測(cè)定法(如例如W089/06692中所記載的);抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)和補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(CDC)測(cè)定法(美國(guó)專利5，500，362);及激動(dòng) 活性或造血測(cè)定法(參見W095/27062)?？筕EGF抗體通常不會(huì)結(jié)合其它VEGF同系物，諸如VEGF-B或VEGF-C，也不會(huì)結(jié)合其它生長(zhǎng)因子，諸如P1GF、PDGF或bFGF。在某些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體包括與雜交瘤ATCC HB10709所生成的單克隆抗 VEGF 抗體 A4. 6.1 ;依照 Presta 等 Cancer Res. 57:4593-4599 (1997)生成的重組人源化抗VEGF單克隆抗體結(jié)合相同表位的單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗VEGF抗體是“貝伐單抗” (Bevacizumab, BV)，也稱作“rhuMAbVEGF”或.''''STiN(護(hù)，它包含突變的人IgGl框架區(qū)和來自鼠抗hVEGF單克隆抗體A. 4. 6.1 (其阻斷人VEGF對(duì)其受體的結(jié)合)的抗原結(jié)合互補(bǔ)決定區(qū)。貝伐單抗大約93%的氨基酸序列，包括大部分框架區(qū)，衍生自人IgGl，而大約7%的序列衍生自鼠抗體A4. 6.1。貝伐單抗具有約149，000道爾頓的分子量，而且是糖基化的。貝伐單抗已經(jīng)被FDA批準(zhǔn)與化療方案聯(lián)合用于治療轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌(CRC)和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) (Hurwitz等，N. Engl.J. Med. 350:2335-42 (2004) ; Sandler 等，N. Engl. J. Med. 355:2542-50 (2006))。當(dāng)前，許多正在進(jìn)行的用于治療各種癌癥適應(yīng)癥的臨床試驗(yàn)中正在研究貝伐單抗(Kerbel，J.Clin. Oncol. 19 : 45S-51S (2001) ; De Vore 等，Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 19 : 485a.(2000);Hurwitz 等,Clin. Colorectal Cancer6:66-69(2006);Johnson 等,Proc. Am. Soc.Clin. Oncol. 20:315a(2001);Kabbinavar 等，J. Clin. Oncol. 21:60-65(2003) ;Miller等,Breast Can. Res. Treat. 94:Suppl1:S6 (2005))。貝伐單抗和其它人源化抗VEGF抗體進(jìn)一步記載于2005年2月26日公告的美國(guó)專利No. 6，884，879。別的抗體包括G6或B20系列抗體(例如，G6-31、B20-4. 1)，如PCT公開文本 No. W02005/012359、PCT 公開文本 No. W02005/044853、和 US 專利申請(qǐng) 60/991，302中所記載的，通過述及將這些專利申請(qǐng)的內(nèi)容明確收入本文。關(guān)于別的抗體，參見美國(guó)專利 No. 7，060，269;6, 582，959;6, 703，020;6, 054，297;W098/45332;W096/30046;W094/10202; EP0666868B1;美國(guó)專利申請(qǐng)公開文本 No. 2006009360, 20050186208, 20030206899, 20030190317, 20030203409,和 20050112126;及 Popkov 等，Journal of ImmunologicalMethods288:149-164 (2004)。其它抗體包括那些結(jié)合人VEGF上功能性表位的抗體，所述功能性表位包含殘基？17、] 18、019、￥21、￥25、089、191、K101、E103、和C104或者包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183 和 Q89。依照本發(fā)明的“G6系列抗體”指自G6抗體的序列衍生的抗VEGF抗體或依照PCT公開文本No. W02005/012359的圖7、24_26、和34-35之任一的G6衍生抗體，通過述及將其整個(gè)公開內(nèi)容收入本文。還可參見PCT公開文本No. W02005/044853，通過述及將這些專利申請(qǐng)的內(nèi)容明確收入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，G6系列抗體結(jié)合人VEGF上的功能性表位，該表位包含殘基 F17、Y21、Q22、Y25、D63、183 和 Q89。依照本發(fā)明的“B20系列抗體”指自B20抗體的序列衍生的抗VEGF抗體或依照PCT公開文本No. W02005/012359的圖27-29之任一的B20衍生抗體，通過述及將其整個(gè)公開內(nèi)容收入本文。還可參見PCT公開文本No. W02005/044853和美國(guó)專利申請(qǐng)60/991，302，通過述及將這些專利申請(qǐng)的內(nèi)容明確收入本文。在一個(gè)實(shí)施方案中，B20系列抗體結(jié)合人VEGF上的功能性表位，其包含殘基？17、] 18、019、￥21、￥25、089、191、K101、E103、和 C104。依照本發(fā)明的“功能性表位”指抗原中有力地促進(jìn)抗體結(jié)合的氨基酸殘基。有力促 進(jìn)抗原中殘基任一個(gè)的突變(例如，通過丙氨酸或同系物突變對(duì)野生型VEGF進(jìn)行的突變)會(huì)破壞抗體的結(jié)合，使得抗體的相對(duì)親和力比值(突變型VEGF IC50/野生型VEGF IC50)會(huì)大于5(參見W02005/012359的實(shí)施例2)。在一個(gè)實(shí)施方案中，相對(duì)親和力比是通過溶液結(jié)合噬菌體展示ELISA測(cè)定的。簡(jiǎn)言之，將96孔Maxisorp免疫板(NUNC)用Fab形式的待測(cè)試抗體以PBS中2ug/ml的濃度于4° C包被過夜，并用ros、0. 5%BSA、和O. 05%Tween20 (PBT)于室溫封閉2小時(shí)。首先將展示hVEGF丙氨酸點(diǎn)突變體(殘基8-109形式)或野生型hVEGF (8-109)的噬菌體在PBT中的連續(xù)稀釋液在Fab包被的板上于室溫溫育15分鐘，并用PBS,O. 05%Tween20 (PBST)清洗板。用在PBT中1:5000稀釋的抗M13單克隆抗體辣根過氧化物酶(AmershamPharmacia)偶聯(lián)物檢測(cè)所結(jié)合的曬菌體,用3，3’，5，5’ -四甲基聯(lián)苯胺(TMB, Kirkegaard&Perry Labs, Gaithersburg, MD)底物顯色大約 5 分鐘，用1. 0MH3P04 淬滅，并以分光光度法于450nm讀數(shù)。IC50值的比(IC50, ala/IC50, wt)代表了結(jié)合親和力的降低倍數(shù)(相對(duì)結(jié)合親和力)?！懊庖吲悸?lián)物”(可互換地稱作“抗體-藥物偶聯(lián)物”或“ADC”)指抗體偶聯(lián)至一種或多種細(xì)胞毒劑，諸如化療劑，藥物，生長(zhǎng)抑制劑，毒素(例如蛋白質(zhì)毒素，細(xì)菌，真菌，植物，或動(dòng)物起源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素(即放射偶聯(lián)物)。貫穿本說明書和權(quán)利要求書，免疫球蛋白重鏈中的殘基編號(hào)方式是如Kabat 等,Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. PublicHealthService, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)(通過述及明確收入本文)中的EU索引的編號(hào)方式。“如Kabat中的EU索引”指人IgGlEU抗體的殘基編號(hào)方式。術(shù)語(yǔ)“抗體”以最廣義使用，明確覆蓋單克隆抗體(包括全長(zhǎng)單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、單價(jià)抗體、多價(jià)抗體、及抗體片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性?！翱贵w片段”只包含完整抗體的一部分，其中所述部分優(yōu)選保留該部分存在于完整抗體中時(shí)通常與之有關(guān)的至少一項(xiàng)、優(yōu)選大多數(shù)或所有功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，如此保留結(jié)合抗原的能力。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段，例如包含F(xiàn)e區(qū)的抗體片段，保留通常與Fe區(qū)存在于完整抗體中時(shí)通常與之有關(guān)的至少一項(xiàng)生物學(xué)功能，諸如FcRn結(jié)合、抗體半衰期調(diào)控、ADCC功能和補(bǔ)體結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段是體內(nèi)半衰期與完整抗體基本上相似的單價(jià)抗體。例如，此類抗體片段可包含一個(gè)抗原結(jié)合臂且其與能夠賦予該片段以體內(nèi)穩(wěn)定性的Fe序列相連。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體是如W02005/063816中所記載的單臂抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，單臂抗體包含如W02005/063816中所記載的構(gòu)成“結(jié)(knob) ”和“穴(hole) ”的Fe突變。例如，穴突變可以是Fe多肽中的T366A、L368A和/或Y407V中的一個(gè)或多個(gè)，而結(jié)突變可以是T366W?！白钄嘈浴笨贵w或抗體“拮抗劑”指抑制或降低其所結(jié)合的抗原的生物學(xué)活性的抗體。在一些實(shí)施方案中，阻斷性抗體或拮抗性抗體完全抑制抗原的生物學(xué)活性。除非另有說明，貫穿本說明書，表述“多價(jià)抗體”用于指包含三個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗體。多價(jià)抗體優(yōu)選改造成具有三個(gè)或更多個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，而且一般不是天然序列IgM或IgA抗體。“Fv”片段是包含完整抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的抗體片段。該區(qū)域由緊密結(jié)合(該結(jié)合的本質(zhì)可以是共價(jià)的，例如在scFv中)的一個(gè)重鏈可變域和一個(gè)輕鏈可變域的二聚體組 成。正是在這種構(gòu)造中，每個(gè)可變域的三個(gè)⑶R相互作用而在Vh-' 二聚體表面上限定了一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個(gè)CDR或其子集(subset) —起賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(或是只包含對(duì)抗原特異性的三個(gè)CDR的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，只是通常親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。在用于本文時(shí)，“抗體可變域”指抗體分子的輕鏈和重鏈中包含互補(bǔ)決定區(qū)(CDR;即CDR1、CDR2、和CDR3)和框架區(qū)(FR)氨基酸序列的那部分。重鏈可變域。八指輕鏈可變域。依照本發(fā)明所使用的方法，歸為CDR和FR的氨基酸位置可以依照Kabat (Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(National Institutes ofHealth, Bethesda, Md.，1987和1991))來限定?？贵w或抗原結(jié)合片段的氨基酸編號(hào)方式也依照Kabat。在用于本文時(shí)，術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R;即⑶R1、⑶R2、和⑶R3)指抗體可變域中其存在是抗原結(jié)合所必需的氨基酸殘基。每個(gè)可變域通常具有三個(gè)CDR，鑒定為CDR1、⑶R2和⑶R3。每個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)可以包含來自如Kabat定義的“互補(bǔ)決定區(qū)”的氨基酸殘基(即大約是輕鏈可變域的殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97 (L3)及重鏈可變域的殘基 31-35(HI)、50_65(H2)和 95-102(H3) ；Kabat 等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes ofHealth，Bethesda，MD. (1991))和/或來自“高變環(huán)”的殘基(即大約是輕鏈可變域的殘基 26-32 (LI)、50-52 (L2)和 91-96 (L3)及重鏈可變域的殘基 26-32 (Hl)、53-55 (H2)和96-101 (H3) ;Chothia 和 Lesk, J.Mol.Biol. 196:901-917(1987))。在有些情況中，互補(bǔ)決定區(qū)可以包含來自Kabat定義的⑶R區(qū)和高變環(huán)二者的氨基酸。例如，抗體4D5重鏈的⑶RH I包含氨基酸26-35?！翱蚣軈^(qū)”(以下的FR)指可變域中⑶R殘基以外的殘基。每個(gè)可變域通常具有四個(gè)FR，鑒定為FR1、FR2、FR3和FR4。如果CDR是依照Kabat定義的，那么輕鏈FR殘基位于大約輕鏈殘基 1-23 (LCFRl) ,35-49 (LCFR2) ,57-88 (LCFR3)、和 98-107 (LCFR4)，而重鏈 FR殘基位于大約重鏈殘基 1-30 (HCFRl) ,36-49 (HCFR2)、66_94 (HCFR3)、和 103-113 (HCFR4)。如果⑶R包含來自高變環(huán)的氨基酸殘基，那么輕鏈FR殘基位于大約輕鏈殘基1-25 (LCFRl)、33-49 (LCFR2)、53-90 (LCFR3)、和97-107 (LCFR4)，而重鏈FR殘基位于大約重鏈殘基1-25 (HCFRl)、33-52 (HCFR2)、56-95 (HCFR3)、和 102-113 (HCFR4)。在有些情況中，在 CDR包含來自Kabat定義的⑶R和高變環(huán)二者的氨基酸時(shí)，F(xiàn)R殘基將做相應(yīng)的調(diào)整。例如，當(dāng)CDRHl包含氨基酸H26-H35時(shí)，重鏈FRl殘基位于1_25位，而FR2殘基位于36-49位?！癋ab”片段包含輕鏈的可變域和恒定域及重鏈的可變域和第一恒定域(CHl)。F(ab' )2抗體片段包含一對(duì)Fab片段，這對(duì)Fab片段一般通過它們之間的鉸鏈半胱氨酸在它們羧基末端附近共價(jià)連接。本領(lǐng)域還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)形式。如本文中使用的，短語(yǔ)“抗原結(jié)合臂”指本發(fā)明的抗體片段有能力特異性結(jié)合感興趣靶分子的組成部分。一般地且優(yōu)選地，抗原結(jié)合臂是免疫球蛋白多肽序列(例如免疫球蛋白輕鏈和重鏈CDR和/或可變域序列)的復(fù)合物。如本文中使用的，短語(yǔ)“N端截短的重鏈”指包含部 分但非整個(gè)全長(zhǎng)免疫球蛋白重鏈的多肽，其中缺失的部分是那些在正常情況中位于重鏈N端區(qū)的。缺失的部分可包括但不限于可變域、CH1、和部分或整個(gè)鉸鏈序列。一般地，如果野生型鉸鏈序列不存在，那么N端截短的重鏈中的剩余恒定域會(huì)包含能夠連接另一 Fe序列(即本文中描述的“第一” Fe多肽)的成分。例如，所述成分可以是能夠形成二硫化物連接的添加的半胱氨酸殘基或經(jīng)修飾殘基。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“Fe區(qū)” 一般指包含免疫球蛋白重鏈C端多肽序列的二聚體復(fù)合物，其中C端多肽序列是通過木瓜蛋白酶消化完整抗體可獲得的。Fe區(qū)可包含天然或變體Fe序列。雖然免疫球蛋白重鏈的Fe序列的邊界可以有所變化,但是人IgG重鏈Fe序列通常定義為Fe序列自位于大約位置Cys226的氨基酸殘基,或自大約位置Pro230,至羧基端的區(qū)段。Fe區(qū)的C端賴氨酸(依照EU編號(hào)系統(tǒng)的殘基447)可以消除，例如在抗體純化期間，或者通過對(duì)編碼抗體的核酸進(jìn)行重組工程改造消除。因而，依照本發(fā)明包含具有Fe區(qū)的抗體的組合物可包含具有K447的抗體、消除了所有K447的抗體、或有和無(wú)K447殘基的抗體的混合物。免疫球蛋白的Fe序列一般包含兩個(gè)恒定域，CH2域和CH3域，且任選包含CH4域?！癋e多肽”在本文中指構(gòu)成Fe區(qū)的多肽之一?？梢宰匀魏魏线m的免疫球蛋白獲得Fe多肽，諸如IgG1, IgG2, IgG3,或IgG4亞型，IgA, IgE, IgD或IgM0在一些實(shí)施方案中，F(xiàn)e多肽包含部分或整個(gè)野生型鉸鏈序列(一般位于其N端)。在一些實(shí)施方案中，F(xiàn)e多肽不包含功能性或野生型鉸鏈序列。術(shù)語(yǔ)“Fe受體”和“FcR”用于描述能結(jié)合抗體Fe區(qū)的受體。例如，F(xiàn)cR可以是天然序列人FcR。一般地，F(xiàn)cR是能結(jié)合IgG抗體的FcR( Y受體)，包括Fe Y R1、Fe Y RII和Fe Y RIII亞類的受體，包括這些受體的各等位變體和各可變剪接形式。FcyRII受體包括Fe YRIIA(“活化受體”)和Fe Y RIIB (“抑制受體”)，它們具有相似的氨基酸序列，區(qū)別主要在于其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域。某些FcR還能結(jié)合其它同種型的免疫球蛋白(參見例如Janeway等，ImmunoBiology:the immunesystem in health and disease, (Elsevier Science Ltd. , NY)(4thed.，1999))?；罨荏wFe Y RIIA在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受體Fe Y RIIB在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(綜述見 Da e ron, Annu. Rev.1mmunol. 15:203-234 (1997) )。FcR 的綜述參見 Ravetch和 Kinet, Annu. Rev.1mmunol. 9:457-492 (1991) ; Capel 等，Immunomethods4:25-34 (1994);及 de Haas 等，J. Lab. Clin. Med. 126: 330-341 (1995)。術(shù)語(yǔ)“FcR”在本文中涵蓋其它 FcR,包括那些未來將會(huì)鑒定的。該術(shù)語(yǔ)還包括新生兒受體，F(xiàn)cRn，其負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移給胎兒(Guyer 等,J.1mmunol. 117:587 (1976);及 Kim 等,J.1mmunol. 24:249 (1994))。如本文中所使用的，“鉸鏈區(qū)”，“鉸鏈序列”，及其變化形式包括本領(lǐng)域知道的含義，其例不于例如 Janeway 等，Immuno Biology: the immune system inhealth anddisease, (Elsevier Science Ltd.，NY)(第 4 版，1999) ;Bloom 等，ProteinScience (1997)
,6:407-415 !Humphreys 等，J.1mmunol. Methods(1997), 209:193-202?！皢捂淔v”或“scFv”抗體片段包含抗體的Vh和\結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于一條多肽鏈上。一般而言，F(xiàn)v多肽在Vh與\結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含多肽接頭，其使得scFv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于scFv的綜述參見Pluckthun,于《The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies》，第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 編，Springer-Verlag, New York,第 269-315 頁(yè)，1994。術(shù)語(yǔ)“雙抗體”指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小型抗體片段，該片段在同一條多肽鏈(%及')中包含相連的重鏈可變域(Vh)和輕鏈可變域(')。通過使用過短的接頭使得同一條鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間不能配對(duì)，迫使這些結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，從而產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙抗體更完整的記載于例如EP404，097 ；W093/11161 ；Hollinger等，Proc. Natl. Acad. Sc1. USA90:6444-6448 (1993)。表述“線性抗體”指Zapata 等，Protein Eng.，8 (10) : 1057-1062 (1995)中所描述的抗體。簡(jiǎn)言之，這些抗體包含一對(duì)串聯(lián)的Fd區(qū)段(Vh-Ch1-Vh-ChI),該區(qū)段與互補(bǔ)的輕鏈多肽一起形成一對(duì)抗原結(jié)合區(qū)。線性抗體可以是雙特異性的，或者是單特異性的。修飾語(yǔ)“單克隆”指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生成抗體。例如，有待依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括例如雜交瘤法(例如Kohler和Milstein. , Nature, 256:495-97(1975) ；Hongo 等,Hybridoma, 14(3):253-260(1995), Harlow 等,Antibodies:ALaboratory Manual, (Cold Spring Harbor LaboratoryPress, 2nd ed. 1988) ；HammerIing等，in:Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas563-681(Elsevier, N. Y. , 1981))>重組DNA法(參見例如美國(guó)專利No. 4，816，567)、噬菌體展示技術(shù)(參見例如Clackson等，Nature352:624-628(1991) ；Marks 等，J.Mol. Biol. 222:581-597 (1992) ；Sidhu 等，J.Mol. Biol. 338(2) : 299-310 (2004) ；Lee 等，J. Mol. Biol. 340 (5) : 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Nat. Acad. Sc1. USAlOl (34) : 12467-12472 (2004) ；Lee 等,J.1mmunol.Methods284 (1-2) : 119-132 (2004))、及用于在具有部分或整個(gè)人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動(dòng)物中生成人或人樣抗體的技術(shù)(參見例如W01998/24893 ；W01996/34096 ；W01996/33735 ；W01991/10741 Jakobovits 等,Proc. Natl.Acad. Sc1. USA90:2551 (1993) ；Jakobovits 等，Nature362:255-258(1993) ；Bruggemann等，Yearinlmmunol. 7:33(1993);美國(guó)專利 No. 5，545，807 ;5，545，806 ;5，569，825 ;5，625，126 ;5，633，425 ;5，661，016 ;Marks 等,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg 等，Nature368:856-859 (1994) ；Morrison, Nature368:812-813 (1994)；FishwiId 等，Nature Biotechnol. 14:845-851 (1996) ；Neuberger,NatureBiotechnol. 14:826(1996) ;Lonberg 和 Huszar,Intern.Rev.1mmunol. 13:65-93(1995))。單克隆抗體在本文中明確包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(參見例如美國(guó)專利No. 4，816，567 ;及Morrison 等，Proc. Natl. Acad. Sc1. USA81:6851-6855 (1984))。嵌合抗體包括“靈長(zhǎng)類化”抗體，其中抗體的抗原結(jié)合區(qū)衍生自通過用感興趣抗原免疫短尾猴(macaque monkey)而生成的抗體。非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長(zhǎng)類的高變區(qū)殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn)行這些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。通常，人源化抗體包含至少一個(gè)、通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下可變區(qū)，其中所有或基本上所有高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白 的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR區(qū)是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗體任選還包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones等,Nature321:522-525(1986) ；Riechmann 等,Nature332:323-329(1988) ；Presta, Curr.Op.Struct. Biol. 2:593-596(1992)?！叭丝贵w”指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列和/或使用本文所公開的用于生成人抗體的任何技術(shù)生成的抗體。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。人抗體可使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)來生成。在一個(gè)實(shí)施方案中，人抗體是從噬菌體文庫(kù)選擇的，該噬菌體文庫(kù)表達(dá)人抗體(Vaughan 等，Nature Biotechnology14:309-314(1996) ； Sheets 等，Proc. Natl. Acad.Sc1. 95:6157-6162(1998) ；Hoogenboom 和 Winter, J. Mol. Biol.227:381 (1991) ；Marks等，J.Mol.Biol. 222:581 (1991))。人抗體還可通過將人免疫球蛋白基因座導(dǎo)入內(nèi)源免疫球蛋白基因已經(jīng)部分或完全滅活的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)來生成。在受到攻擊時(shí)，觀察到人抗體生成，它在所有方面與在人體中看到的極其相似，包括基因重排、裝配和抗體全集。這種方法記載于例如美國(guó)專利No. 5，545，807 ;5，545，806 ;5，569，825 ;5，625，126 ；5，633，425 ;5，661，016，及以下科學(xué)出版物=Marks 等，Bio/TechnologylO: 779-783 (1992)；Lonberg 等，Nature368:856-859(1994) ；Morrison,Nature368:812-13(1994)；Fishwild 等,Nature Biotechno Iogy14:845-5 I (1996) ；Neuberger, NatureBiotechnologyl4:826(1996) ；Lonberg 和 Huszar, Intern. Rev.1mmunol. 13:65-93(1995)。或者，人抗體可通過生成針對(duì)靶抗原的抗體的人B淋巴細(xì)胞的永生化來制備(此類B淋巴細(xì)胞可從個(gè)體回收，或者可在體外免疫)。參見例如Cole等，Monoclonal Antibodies andCancerTherapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985) ;Boerner 等，J.1mmunol. 147 (I) : 86-95 (1991)；及美國(guó)專利No. 5，750, 373?！奥憧贵w(裸露的抗體)”指未偶聯(lián)異源分子諸如細(xì)胞毒性模塊或放射性標(biāo)記物的抗體?！坝H和力成熟的”抗體指在抗體的一個(gè)或多個(gè)CDR中具有一處或多處改變、導(dǎo)致該抗體對(duì)抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進(jìn)的抗體。優(yōu)選的親和力成熟的抗體將具有納摩爾或甚至皮摩爾量級(jí)的對(duì)靶抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過本領(lǐng)域已知規(guī)程來生成。Marks等，Bio/TechnologylO: 779-783 (1992)記載了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組進(jìn)行的親和力成熟。以下文獻(xiàn)記載了 CDR和/或框架殘基的隨機(jī)誘變Barbas 等,Proc. Nat. Acad. Sc1. USA91:3809-3813 (1994) ；Schier等，Genel69:147-155 (1995) ；Yelton 等，J.1mmunol. 155:1994-2004 (1995) Jackson等，J.1mmunol. 154(7):3310-9(1995) ；Hawkins 等，J. Mol. Biol. 226:889-896(1992)。具有指定抗體的“生物學(xué)特征”的抗體指擁有該指定抗體區(qū)別于其它結(jié)合相同抗原的抗體的一項(xiàng)或多項(xiàng)生物學(xué)特征的抗體。為了篩選結(jié)合抗原上感興趣抗體所結(jié)合的表位的抗體，可以實(shí)施常規(guī)交叉阻斷測(cè)定法，諸如 Antibodies, ALaboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory, Ed Harlow和David Lane (1988)中所記載的。
抗體的“功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)”指能夠結(jié)合靶抗原的位點(diǎn)?？乖Y(jié)合位點(diǎn)的抗原結(jié)合親和力不必像衍生該抗原結(jié)合位點(diǎn)的親本抗體那樣強(qiáng)，但是結(jié)合抗原的能力必須是使用已知用于評(píng)估抗體對(duì)抗原結(jié)合的多種方法之任一可測(cè)量到的。此外，本文中多價(jià)抗體的每個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗原結(jié)合親和力不必在量上相同。對(duì)于本文中的多聚體抗體，功能性抗原結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目可以使用超速離心分析來評(píng)估，如美國(guó)專利申請(qǐng)公開文本No. 20050186208中所記載的。依照這種分析方法，將靶抗原與多聚體抗體以不同比例混合，并計(jì)算復(fù)合物的平均分子量，其中假設(shè)不同數(shù)目的功能性結(jié)合位點(diǎn)。將這些理論值與得到的實(shí)際實(shí)驗(yàn)值進(jìn)行比較以評(píng)估功能性結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目?！拔锓N依賴性抗體”指這樣一種抗體，其對(duì)來自第一哺乳動(dòng)物物種的抗原具有強(qiáng)于對(duì)來自第二哺乳動(dòng)物物種的該抗原同系物的結(jié)合親和力。通常，物種依賴性抗體“特異性結(jié)合”人類抗原(即具有不超過約1χ10_7Μ，優(yōu)選不超過約1χ10_8Μ，最優(yōu)選不超過約1x10_9M的結(jié)合親和力(Kd))，但對(duì)來自第二非人哺乳動(dòng)物物種的該抗原同系物具有比其對(duì)人類抗原的結(jié)合親和力弱至少約50倍，或至少約500倍，或至少約1000倍的結(jié)合親和力。物種依賴性抗體可以是如上定義的各種類型的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，物種依賴性抗體是人源化抗體或人抗體。在用于本文時(shí)，“抗體突變體”或“抗體變體”指物種依賴性抗體的氨基酸序列變體，其中物種依賴性抗體的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基發(fā)生了修飾。此類突變體與物種依賴性抗體必然具有小于100%的序列同一性或相似性。在一個(gè)的實(shí)施方案中，抗體突變體所具有的氨基酸序列與物種依賴性抗體的重鏈可變域或輕鏈可變域的氨基酸序列具有至少75%、更優(yōu)選至少80%、更優(yōu)選至少85%、更優(yōu)選至少90%、最優(yōu)選至少95%的氨基酸序列同一'丨生或相似性。關(guān)于此序列的同一性或相似性在本文中定義為在比對(duì)序列并在必要時(shí)引入缺口以實(shí)現(xiàn)最大百分比序列同一性后，候選序列中與物種依賴性抗體殘基相同(即相同殘基)或相似(即根據(jù)共同側(cè)鏈特性來自同一組的氨基酸殘基，見下文)的氨基酸殘基的百分比。N-末端、C-末端、或?qū)勺冇?區(qū))之外的抗體序列內(nèi)部的延伸、刪除、或插入都不應(yīng)視為影響序列同一'I"生或相似性?！扒逗蟅EGF受體蛋白”指具有衍生自至少兩種不同蛋白質(zhì)(其中至少一種是VEGF受體蛋白)的氨基酸序列的VEGF受體分子。在某些實(shí)施方案中，嵌合VEGF受體蛋白能夠結(jié)合VEGF并抑制VEGF的生物學(xué)活性。
“分離的”多肽或“分離的”抗體指已經(jīng)鑒定且與/由其天然環(huán)境的一種成分分開和/或回收的。多肽或抗體的天然環(huán)境的污染性成分指將會(huì)干擾其診斷或治療用途的物質(zhì)，可包括酶、激素、和其它蛋白質(zhì)性質(zhì)或非蛋白質(zhì)性質(zhì)的溶質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，將多肽或抗體純化至(I)根據(jù)Lowry法的測(cè)定，多肽或抗體重量超過95%且最優(yōu)選重量超過99%，(2)足以通過使用轉(zhuǎn)杯式測(cè)序儀獲得至少15個(gè)殘基的N-末端或內(nèi)部氨基酸序列的程度，或(3)根據(jù)使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選的銀染色的還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE，達(dá)到同質(zhì)。既然多肽的天然環(huán)境的至少一種成分不會(huì)存在，那么分離的多肽或抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位多肽或抗體。然而，分離的多肽或抗體通常通過至少一個(gè)純化步驟來制備。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“生物標(biāo)志物”或“標(biāo)志物” 一般指其在哺乳動(dòng)物組織或細(xì)胞中或上的表達(dá)或分泌可以通過已知方法(或本文中所公開的方法)來檢測(cè)且預(yù)示或可用于預(yù)測(cè)(或幫助預(yù)測(cè))細(xì)胞、組織或患者對(duì)治療方案的響應(yīng)性的分子，包括基因、mRNA、蛋白質(zhì)、碳水化合物結(jié)構(gòu)、或糖脂?！盎颊邩悠贰敝笍陌┌Y患者得到的相似細(xì)胞的集合。組織或細(xì)胞樣品的來源可以是實(shí)體組織，像來自新鮮的、冷凍的和/或保存的器官或組織樣品或 活檢樣品或穿刺樣品；血液或任何血液組分；體液，諸如腦脊液、羊膜液(羊水)、腹膜液(腹水)、或間隙液；來自受試者的妊娠或發(fā)育任何時(shí)間的細(xì)胞。組織樣品可能包含在自然界中天然不與組織混雜的化合物，諸如防腐劑、抗凝劑、緩沖劑、固定劑、營(yíng)養(yǎng)物、抗生素、等等。腫瘤樣品的例子在本文中包括但不限于腫瘤活檢、循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞、血清或血漿、循環(huán)中的血漿蛋白質(zhì)、腹水、衍生自腫瘤或展現(xiàn)出腫瘤樣特性的原代細(xì)胞培養(yǎng)物或細(xì)胞系，以及保存的腫瘤樣品，諸如福爾馬林固定的、石蠟包埋的腫瘤樣品或冷凍的腫瘤樣品。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述樣品包含3N MBC腫瘤樣品?；颊邔?duì)藥物治療的“有效響應(yīng)”或“響應(yīng)性”及類似用語(yǔ)指在施用癌癥藥物后對(duì)處于癌癥(例如3N MBC)風(fēng)險(xiǎn)或患有癌癥(例如3N MBC)的患者給予的臨床或治療好處。此類好處包括如下任何一項(xiàng)或多項(xiàng)延長(zhǎng)存活(包括總體存活和無(wú)進(jìn)展存活)；導(dǎo)致客觀響應(yīng)(包括完全響應(yīng)或部分響應(yīng));或改善癌癥體征或癥狀，等。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用生物標(biāo)志物(例如c-met表達(dá)，例如使用IHC測(cè)定的)來鑒定預(yù)期在用藥物(例如抗c-met抗體)治療時(shí)相對(duì)于不以相同水平表達(dá)該生物標(biāo)志物的患者具有更大無(wú)進(jìn)展存活(PFS)的患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用生物標(biāo)志物來鑒定預(yù)期在用藥物治療時(shí)相對(duì)于不以相同水平表達(dá)該生物標(biāo)志物的患者具有更大總體存活(OS)的患者。本文中生物標(biāo)志物的發(fā)生有效預(yù)測(cè)或以高靈敏度預(yù)測(cè)此類有效響應(yīng)?！疤幚怼焙汀爸委煛?treatment)指治療性處理和預(yù)防性措施二者。需要治療的受試者包括那些早就患有良性、癌前、或非轉(zhuǎn)移性腫瘤的以及要預(yù)防發(fā)生或復(fù)發(fā)的。術(shù)語(yǔ)“治療有效量”指在哺乳動(dòng)物中治療或預(yù)防疾病或病癥的治療劑量。在癌癥的情況中，治療有效量的治療劑可減少癌細(xì)胞的數(shù)目；縮小原發(fā)性腫瘤的尺寸；抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選阻止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)入周圍器官；抑制(即一定程度的減緩，優(yōu)選阻止)腫瘤轉(zhuǎn)移；一定程度的抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或一定程度的減輕一種或多種與病癥有關(guān)的癥狀。根據(jù)藥物可阻止現(xiàn)有癌細(xì)胞生長(zhǎng)和/或殺死現(xiàn)有癌細(xì)胞的程度，它可以是細(xì)胞抑制性的和/或細(xì)胞毒性的。對(duì)于癌癥療法，體內(nèi)功效可以通過例如評(píng)估存活持續(xù)時(shí)間、距疾病進(jìn)展的時(shí)間(TTP)、響應(yīng)率(RR)、響應(yīng)持續(xù)時(shí)間、和/或生活質(zhì)量來測(cè)量。術(shù)語(yǔ)“癌(癥)”和“癌(性)的”指向或描述哺乳動(dòng)物中典型的以不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)為特征的生理疾患。此定義中包括良性和惡性癌癥。“早期癌癥”或“早期腫瘤”指非侵入性的或轉(zhuǎn)移性的，或者歸為O期、I期、或II期癌癥的癌癥。癌癥的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母細(xì)胞瘤(包括髓母細(xì)胞瘤和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細(xì)胞肉瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(包括類癌瘤、胃泌素瘤和胰島細(xì)胞癌)、間皮瘤、施旺氏細(xì)胞瘤(包括聽神經(jīng)瘤)、腦膜瘤、腺癌、黑素瘤、和白血病或淋巴樣惡性腫瘤。此類癌癥的更具體例子包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)、肺癌包括小細(xì)胞肺癌(SCLC)、非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、肺的腺癌和肺的鱗癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌(gastric或stomach cancer)包括胃腸癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer或hepaticcarcinoma)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌(包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌)、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌(kidney或renal cancer)、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肛門癌、陰莖癌、睪丸癌、食道癌、膽管腫瘤、及頭和頸癌。在一些實(shí)施方案中，癌癥是三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌，包括任何經(jīng)組織學(xué)確認(rèn)的具有局部復(fù)發(fā)性轉(zhuǎn)移性疾病的三 重陰性(ER-、PR-、HER2_)乳腺癌，例如局部復(fù)發(fā)疾病不適合具有治愈目的的切除術(shù)的情況?！稗D(zhuǎn)移”指癌自其原發(fā)部位傳播至身體中的其它位置。癌細(xì)胞能脫離原發(fā)性腫瘤，滲透入淋巴和血管，經(jīng)由血流而循環(huán)和在身體中其它地方的正常組織中的遠(yuǎn)端病灶(轉(zhuǎn)移)中生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)移可以是局部的或遠(yuǎn)端的。轉(zhuǎn)移是一個(gè)連續(xù)過程，視腫瘤細(xì)胞自原發(fā)性腫瘤脫落、經(jīng)由血流而傳播、并在遠(yuǎn)端部位停止而定。在新的部位，該細(xì)胞建立血供且能生長(zhǎng)至形成危及生命的團(tuán)塊。在本文中“病情進(jìn)展前時(shí)間”(time to disease progression)或“TTP”指自初始治療(例如使用抗c-met抗體,諸如MetMAb)時(shí)起,到癌癥進(jìn)展(progress)或惡化(worsen)止的時(shí)間，一般以周或月計(jì)。這樣的進(jìn)展可以由熟練臨床醫(yī)師來評(píng)估。例如，在三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌的情況中，可以通過RECIST來評(píng)估進(jìn)展?！把娱L(zhǎng)TTP”意味著使接受治療的患者的病情進(jìn)展前時(shí)間相對(duì)于未接受治療的患者(即相對(duì)于未用抗C-met抗體,諸如MetMAb治療的患者)、和/或相對(duì)于用已獲批準(zhǔn)的抗腫瘤劑治療的患者有延長(zhǎng)?！按婊睢?survival)指患者保持存活,而且包括總體存活(overall survival)和無(wú)進(jìn)展存活(progress free survival)?！翱傮w存活”指保持一定時(shí)期諸如I年、5年等存活的患者，自診斷或治療時(shí)起計(jì)
笪
ο“無(wú)進(jìn)展存活”指保持存活且癌癥沒有進(jìn)展或惡化的患者。“延長(zhǎng)存活”意味著使接受治療的患者的總體存活或無(wú)進(jìn)展存活相對(duì)于未接受治療的患者(即相對(duì)于未用抗c-met抗體,諸如MetMAb治療的患者),和/或相對(duì)于用已獲批準(zhǔn)的抗腫瘤劑治療的患者有延長(zhǎng)。“客觀響應(yīng)”(objective response)指可測(cè)量的響應(yīng),包括完全響應(yīng)(CR)或部分響應(yīng)?！巴耆憫?yīng)"(complete response)或“CR”指癌癥的所有體征響應(yīng)治療而消失。這并不總是意味著癌癥已經(jīng)治愈?！安糠猪憫?yīng)”(partial response)指一處或多處腫瘤或損害的大小或體內(nèi)癌癥的程度響應(yīng)治療而減小。
“原發(fā)性腫瘤”或“原發(fā)性癌”指初始的癌癥，而不是位于受試者身體中另一組織、器官、或位置中的轉(zhuǎn)移病灶?！笆茉囌摺敝覆溉閯?dòng)物，包括但不限于人或非人哺乳動(dòng)物，諸如牛，馬，犬，綿羊，或貓。優(yōu)選地，受試者是人。在本文中，患者也是受試者。術(shù)語(yǔ)“抗癌療法”指在治療癌癥中有用的療法?？拱┲委焺┑睦影ǖ幌抻诶缁焺⑸L(zhǎng)抑制劑、細(xì)胞毒劑、放射療法中所使用的藥劑、抗血管發(fā)生劑、凋亡劑、抗微管蛋白劑、和其它治療癌癥的藥劑，抗CD20抗體、血小板衍生生長(zhǎng)因子抑制劑(例如Gleevec (Imatinib Mesylate) )、C0X-2 抑制劑(例如 celecoxib)、干擾素、細(xì)胞因子、結(jié)合一種或多種以下靶物的拮抗劑(例如中和性抗體)(ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR- β、BlyS、APRIL、BCMA受體、TRAIL/Apo2)、和其它生物活性和有機(jī)化學(xué)劑，等。本發(fā)明還包括它們的組合。術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒劑”在用于本文時(shí)指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語(yǔ)意圖包括放射性同位素(例如Im、I125、Y9°和Re186)、化療劑、和毒素諸如細(xì)菌、真 菌、植物或動(dòng)物起源的酶活毒素或其片段?！盎焺敝缚捎糜谥委煱┌Y的化學(xué)化合物?；焺┑睦影捎糜谥委煱┌Y的化學(xué)化合物。化療劑的例子包括燒化劑類(alkylating agents),諸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN 環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);磺酸燒基酯類(alkyl sulfonates)，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙唳類(aziridines),諸如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和烏瑞替派(uredepa);乙撐亞胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines),包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐磷酰胺(triethyIenephosphoramide)、三乙撐硫代憐酉先胺(triethyIenethiophosphoramide)和三輕甲蜜胺(trimethylolomelamine);番蒸枝內(nèi)酯類(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));喜樹喊(camptothecin)(包括合成類似物托泊替康(topotecan));苔蘚抑素(bryostatin) ；callystatin ；CC-1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物);隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素I和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin) ；duocarmycin(包括合成類似物，Kff-2189 和 CB1-TM1);艾槽塞洛素(eleutherobin) ；pancratistatin ；sarcodictyin ;海綿抑素(spongistatin);氮芥類(nitrogen mustards),諸如苯丁酸氣芥(chlorambucil)、蔡氣芥(chlornaphazine)、膽憐酸胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)憐酸胺(ifosfamide)、雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽留醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿卩密唳氮芥(uracil mustard);亞硝脲類(nitrosoureas),諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(例如加利車霉素(calicheamicin),尤其是加利車霉素Y II 和加利車霉素 ω Il (參見例如 Agnew(1994)Chem.1ntl. Ed. Engl. 33:183-186);蒽環(huán)類抗生素(dynemicin),包括dynemicin A ; 二膦酸鹽類(bisphosphonates),諸如氯0 _ (StrePtOZOCin) Λ^雖貧 _ (tubercidin) > 啦講#迎(UbenimeX) Λ)#·^#τ(ZinOStatin) y^BttM (ZOrUbiCin) ；ifc^ili#狀，i錄咎霜厚(methotrexate)菩 5-ρ 細(xì)羅潘(5-FU)；尋驟狀競(jìng)?cè)囟浘蘦^p+驟 (denopterin) λ 霜厚(methotrexate) λ霜相厚(PterOPterin) λ⑴ ￥ ^(trimetrexate) ； 厚E競(jìng)?cè)?，i錄咎麯辟?gòu)楎T(fludarabine) λ6丨鐵_礙厚(mercaptopurine) >薪# 厚(thiamiprine) >薪娘 厚(thioguanine) ；&!'潘E競(jìng)?cè)?、i錄咎艱到#.騎(ancitabine) ^_ (azacitidine) λ6- ^0_ (SaUridine) λIw-M^ (CarmOfUr) λν"ιι^_ (Qytarabine) >^薄 細(xì) _ (dideoxyuridine) Λ^ ρ 細(xì)_ (doxifluridine) λ 貧釀#騎(enocitabine) >麯細(xì) _ (fpoxuridine);潘簿 ^, i錄咎木#搬園(CalUSterOne) Λ3Μ_#潘 (dromostanolone propionate) >^薪^ (epitiostanol) λ#^§5(mepitiostane) >*^1廳(Γ+① 5cH-*sr+ 口①);郭^_^編^,釀咎娜·沐雄(旨Μ·口 cgH-1口Γ+① ι曰IQ-①r^^lffi(mitotane) λ ^^[ffi(trilostane) ；^驟^^逢二撕咎^尋驟(folinic acid);職趣廳^1蹈雕(ace glatone) ；mBs猜離_ (^0-。^。3^口曰IQ-①glycoside) ; _ ZJsaM(aminolevulinic acid) ;5S^0B1S(eniluracil) ；^PY潘(amsacrine) ;bestrabucil ;bcvHi^(bisantrene);貧^ ^(edatraxate) ；SBS猜(Q-gfsfamide);薛#^#(demecolcine);薛 PYms (diaziquone) ;elf〇rnithine ;|對(duì)連職雜(elliptinium acetate)；游結(jié)獅 (epothilone)；貧^茶· (etoglucid)；哉驟瀟； IR (hydroxyurea) ；#甜^|| (Ientinan) ； ^辟潘(IOnidamine) ；^^7K 姊味蓉EE(maytansinoids), i撕咎#§ (maytansine)菩^隊(duì)爾 (ansamitocin);沐弟箕攝(mitoglmzone);沐^_畫酬(mitoxantrone) ；M??；ii SI (mopidamol) - Π 0哉^潘(nitracrine) ;_^#τ (PentOStatin) ；ΜΜ 鐵？f (Phenamet) ; Ptt 洲 bcv_(PirarUbiCin) ； _ pt畫酬(IOSOXantrOne) ； ^,rcM(Podophyllinic acid) ；2| Zj ^薄每(ethylhydrside);刻士 EJ# (procarbazine) ; PSKK 娘 φ#(JHS NaturalProducts, Eugene, OR) ;_爾味(rsoxane) ；|網(wǎng)獅 (rhizoxin) ;m爾S-(gs*〇f iran);藏靜碟(SPirOgermaniUm)；笛)<>潘^爾園驟(tenuazonic acid) ；m^猜 IS (triaziquone);luk -mMmsi 難菡 _ 滌 arichothecenes) Ot 斛裥 TI2 挪 .淨(jìng)菡 _ (VerrUCarin)>1-HS爾 (roridin)A^^AMlffl^ (anguidin)) ；JPi^[ffi(Urethan)；沐#薛#(VindeSine) ;; ^Ε (ts『l3azine) ；4職觸迎 tM(曰 annomustine) th0^0
25醇(mitobronitol) ;二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);哌泊溴燒(pipobroman) ；gacytosine ;阿糖胞苷(arabinoside) ( “Ara_C”)；環(huán)憐酸胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa)；紫杉燒類(taxanes),例如 TAXOL 帕利他賽(paclitaxel) (Bristol-Myers SquibbOncology, Princeton, N. J.)、ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造納米顆粒劑型帕利他賽(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)和TAXOTERE 多西他賽(doxetaxel) ( Rhone -Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥(chlorambucil) ； GEMZAR 吉西他濱(gemcitabine) ；6-硫鳥嘌呤(thioguanine);巰基嘌呤(mercaptopurine);甲氨蝶呤(methotrexate);鉬類似物，諸如順鉬(cisplatin)和卡鉬(carboplatin);長(zhǎng)春喊(vinblastine);鉬(platinum);依托泊苷(etoposide) (VP-16);異環(huán)磷酰胺(ifosfamide);米托蒽酉昆(mitoxantrone);長(zhǎng)春新堿(vincristine) ； NAVELBINE 長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine);能滅瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide);依達(dá)曲沙(edatrexate);道諾霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);希羅達(dá)(xeloda);伊本勝酸鹽(ibandronate);伊立替康(irinotecan)(Camptosar, CPT-1I)(包括伊立替康及5-FU和亞葉酸的治療方案)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制 劑RFS2000 ;二氟甲基鳥氨酸(DMFO);類視黃酸類(retinoids),諸如視黃酸(retinoic acid);卡培他濱(capecitabine);考布他汀(combretastatin);亞葉酸(Ieucovorin)(LV);奧沙利鉬(oxaliplatin)，包括奧沙利鉬治療方案(FOLFOX) ;PKC-a、Raf、H-Ras、EGFR(例如Erlotinib (Tarceva )和VEGF-A的、降低細(xì)胞增殖的抑制劑；及任何上述物質(zhì)的藥劑學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物。該定義還包括作用于調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤作用的抗激素劑諸如抗雌激素類和選擇性雌激素受體調(diào)控物類(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADLX: 他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4_輕基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene);抑制在腎上腺中調(diào)節(jié)雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE 醋酸甲地孕酮(megestrolacetate) > AROMASIN 依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozolc)、RIV丨S( )R伏羅唑(vorozole)、FEMARA 來曲唑(letrozole)和 ARlMiDEX 阿那曲唑(anastrozole);抗雄激素類，諸如氟他米特(fIutamide)、尼魯米特(niIutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)、和戈舍瑞林(goserelin);以及曲沙他濱(troxacitabine) (1，3_ 二氧戍環(huán)核苷胞喃唳類似物)；反義寡核苷酸,特別是抑制牽涉異常(abherant)細(xì)胞增殖的信號(hào)途經(jīng)中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，諸如例如PKC-α、Raf和H-Ras ;核酶，諸如VEGF表達(dá)抑制劑(例如ANGIOZYME 核酸)和HER2表達(dá)抑制劑；疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和 VAXID 疫苗；PROLEUMN rIL-2 ; LURTOTECAN 拓?fù)洚悩?gòu)酶 I 抑制劑；ABAREL1X rmRH ;長(zhǎng)春瑞濱(Vinorelbine)和埃斯波霉素(Esperamicins)(見美國(guó)專利No. 4，675，187);及任何上述物質(zhì)的藥劑學(xué)可接受的鹽、酸或衍生物。術(shù)語(yǔ)“前體藥物”在用于本申請(qǐng)時(shí)指與母藥(parent drug)相比對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性較小并能夠酶促活化或轉(zhuǎn)變?yōu)楦呋钚阅杆幮问降乃幱没钚晕镔|(zhì)的前體和衍生物形式。參見例如 Wilman, “Prodrugs in CancerChemotherapy^ , Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615thMeeting Belfast (1986)和 Stella 等，“Prodrugs: AChemical Approach to TargetedDrug Delivery，，，Directed Drug Delivery, Borchardt等，(ed. )，pp. 247-267，Humana Press (1985)。本發(fā)明的前體藥物包括但不限于含磷酸鹽/酯前體藥物、含硫代磷酸鹽/酯前體藥物、含硫酸鹽/酯前體藥物、含肽前體藥物、D-氨基酸修飾前體藥物、糖基化前體藥物、含β_內(nèi)酰胺前體藥物、含任選取代苯氧基乙酰胺的前體藥物或含任選取代苯乙酰胺的前體藥物、可轉(zhuǎn)化為更具活性而無(wú)細(xì)胞毒性的藥物的5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苷前體藥物?？裳苌鸀楸景l(fā)明使用的前體藥物形式的細(xì)胞毒性藥物的例子包括但不限于上文描述的那些化療劑。術(shù)語(yǔ)“并行”在本文中用于指使用兩種或更多種治療劑，其中至少部分施用在時(shí)間上交疊。因而，并行施用包括如下的劑量給藥方案，一種或多種藥劑的施用中斷后施用一種或多種其它藥劑。“放射療法”或“放療”指使用定向伽馬射線或貝塔射線來誘發(fā)對(duì)細(xì)胞的足夠損傷，以限制細(xì)胞正常發(fā)揮功能的能力或全然破壞細(xì)胞。應(yīng)當(dāng)領(lǐng)會(huì)，本領(lǐng)域知道許多方式來 確定治療的劑量和持續(xù)時(shí)間。典型的治療作為一次施用來給予，而典型的劑量范圍為每天10-200個(gè)單位(戈瑞(Gray))。“ 降低或抑制”指引起 20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或更多的總體降低的能力。降低或抑制可以指所治療的病癥的癥狀、轉(zhuǎn)移的存在或大小、或原發(fā)性腫瘤的大小?！把娱L(zhǎng)存活(extending survival) ”或“提高存活可能性”意味著使接受治療的患者的PFS和/或OS相對(duì)于未接受治療的患者(例如相對(duì)于未用抗c-met抗體治療的患者)或相對(duì)于對(duì)照治療方案(諸如只用化療劑的治療，諸如乳腺癌的標(biāo)準(zhǔn)治療中使用的那些)有延長(zhǎng)或提高。存活在治療啟動(dòng)之后或在初始診斷之后監(jiān)測(cè)至少約I個(gè)月、2個(gè)月、4個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、或至少約I年、或至少約2年、或至少約3年、或至少約4年、或至少約5年、或至少約10年、等。對(duì)于本發(fā)明的方法，術(shù)語(yǔ)“指導(dǎo)”患者意味著通過任何手段，但是優(yōu)選書面地，諸如以包裝插頁(yè)或其它書面推廣材料的形式提供關(guān)于可應(yīng)用療法、藥療、處理、處理方案、等等的指導(dǎo)。對(duì)于本發(fā)明的方法，術(shù)語(yǔ)“宣傳(promoting) ”意味著通過任何手段，包括書面地，諸如以包裝插頁(yè)的形式提供、登廣告、出售、或描述特定藥物、藥物組合、或治療模態(tài)。宣傳在本文中指治療劑，諸如抗c-met抗體、抗VEGF抗體和紫杉燒或諸如抗c_met抗體和紫杉烷用于適應(yīng)證，諸如乳腺癌治療的宣傳，其中此類宣傳得到食品和藥品管理局(FDA)批準(zhǔn)，認(rèn)為已證明與受試者群體中統(tǒng)計(jì)上顯著的治療功效和可接受的安全性有關(guān)。術(shù)語(yǔ)“銷售”在本文中用于描述產(chǎn)品(例如藥物)的宣傳、出售或分發(fā)。銷售具體包括目的在于包裝、登廣告、和任何使產(chǎn)品商業(yè)化的商業(yè)活動(dòng)。受試者“群體”指一組癌癥受試者，諸如臨床試驗(yàn)中的，或?qū)μ囟ㄟm應(yīng)證諸如乳腺癌療法FDA批準(zhǔn)之后腫瘤學(xué)家看到的。術(shù)語(yǔ)“靜脈內(nèi)輸注”指以超過約5分鐘的一段時(shí)間，優(yōu)選30-90分鐘，將藥物導(dǎo)入動(dòng)物或人患者的靜脈，盡管依照本發(fā)明，靜脈內(nèi)輸注或可施用10小時(shí)或更短時(shí)間。
術(shù)語(yǔ)“靜脈內(nèi)推注”或“靜脈內(nèi)快速注射”指在約15分鐘內(nèi)或更短時(shí)間，優(yōu)選5分鐘或更短時(shí)間，將藥物施用到動(dòng)物或人的靜脈中使得機(jī)體接受藥物。術(shù)語(yǔ)“皮下施用”指通過自藥物容器的相對(duì)較慢的、持續(xù)遞送，將藥物導(dǎo)入動(dòng)物或人患者的皮膚下，優(yōu)選在皮膚和皮下組織間的袋內(nèi)。所述袋可通過夾起或拉起皮膚并遠(yuǎn)離皮下組織來創(chuàng)建。術(shù)語(yǔ)“皮下輸注”指以一段時(shí)間，包括但不限于30分鐘或更短，或者90分鐘或更短，通過自藥物容器的相對(duì)較慢的、持續(xù)遞送，將藥物導(dǎo)入動(dòng)物或人患者的皮膚下，優(yōu)選在皮膚和皮下組織間的袋內(nèi)。任選的是，輸注可通過植入動(dòng)物或人患者皮膚下的藥物遞送泵的皮下植入來進(jìn)行，其中所述泵以預(yù)定的一段時(shí)間，諸如30分鐘、90分鐘、或跨越治療方案持續(xù)時(shí)間的一段時(shí)間，遞送預(yù)定量的藥物。術(shù)語(yǔ)“皮下推注”指將藥物施用至動(dòng)物或人患者的皮膚下，其中推注藥物遞送優(yōu)選 短于約15分鐘，更優(yōu)選短于5分鐘，最優(yōu)選短于60秒。施用優(yōu)選在皮膚和皮下組織間的袋內(nèi)，其中所述袋可通過例如夾起或拉起皮膚并遠(yuǎn)離皮下組織來創(chuàng)建。治療劑本發(fā)明的特征在于例如抗c-met抗體和紫杉烷在治療患者中病理狀況(諸如三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌)的聯(lián)合療法中的用途。本發(fā)明的特征還在于例如抗c-met抗體、VEGF拮抗劑(諸如抗VEGF抗體)和紫杉烷在治療患者中病理狀況(諸如三重陰性轉(zhuǎn)移性乳腺癌)的聯(lián)合療法中的用途?？筩-met 抗體在本發(fā)明的方法中有用的抗c-met抗體包括任何以足夠親和力和特異性結(jié)合c-met且能降低或抑制一種或多種c-met活性的抗體?？筩_met抗體可用于調(diào)控HGF/c-met相關(guān)效應(yīng)的一個(gè)或多個(gè)方面，包括但不限于c-met活化、下游分子信號(hào)傳導(dǎo)(例如絲裂原活化的蛋白激酶(MAPK)磷酸化)、細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移、細(xì)胞存活、細(xì)胞形態(tài)發(fā)生和血管發(fā)生。這些效應(yīng)可通過任何生物學(xué)相關(guān)機(jī)制來調(diào)控，包括破壞配體(例如HGF)結(jié)合c-met、c-met磷酸化和/或c-met多聚化。所選擇的抗體正常情況下會(huì)具有足夠強(qiáng)的對(duì)c-met的結(jié)合親和力，例如抗體會(huì)以介于IOOnM-1pM之間的Kd值結(jié)合人c-met?？贵w親和力可通過例如基于表面等離振子共振的測(cè)定法(諸如BIAcore測(cè)定法，如PCT申請(qǐng)公開文本No. W02005/012359中所記載的)；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA);和競(jìng)爭(zhēng)測(cè)定法(例如RIA)來測(cè)定。優(yōu)選地，本發(fā)明的抗c-met抗體能在靶向和干擾涉及c-met/HGF活性的疾病或狀況中用作治療劑。還有，可以將所述抗體提交其它生物學(xué)活性測(cè)定法，例如為了評(píng)估它作為治療劑的效力。此類測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的，而且取決于抗體的靶抗原和預(yù)定用途?？筩-met抗體(可以作為單臂抗體來提供)是本領(lǐng)域已知的。參見例如Martens, T, et al(2006)Clin Cancer Resl2(20Ptl):6144 ；US6, 468, 529 ；W02006/015371 ；W02007/063816。本申請(qǐng)公開了在人中施用onartuzumab(可互換稱作“MetMAb”)，一種包含F(xiàn)e區(qū)的單臂抗體。MetMAb的序列顯不于圖1和2。MetMAb(也稱作0Α 5ν2和onartuzumab)還記載于例如 W02006/015371 ；Jin et al, Cancer Res (2008) 68:4360。本發(fā)明還涵蓋施用MetMAb的生物學(xué)相似形式。本文中還描述和例示了抗c-met抗體的實(shí)例。本發(fā)明還涵蓋抗肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)抗體的使用。HGF是c-met受體的配體。抗HGF 抗體是本領(lǐng)域已知的。參見例如 Kim KJ,等 Clin Cancer Res. (2006) 12 (4) : 1292-8 ；W02007/115049 ；W02009/002521；W02007/143098；W02007/017107 ；W02005/017107 ；L2G7 ；AMG-102 (rilotumumab) ,AV-299?？梢宰鳛榭筩-met抗體的補(bǔ)充或替代來施用抗HGF抗體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供本文中描述的或本領(lǐng)域已知的、單臂形式的抗c-met抗體的使用。因而,一方面,抗c-met抗體是包含F(xiàn)e區(qū)的單臂抗體(即重鏈可變域和輕鏈可變域形成單一抗原結(jié)合臂)，其中Fe區(qū)包含第一和第二 Fe多肽，其中第一和第二 Fe多肽以復(fù)合物存在且形成與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比提高所述抗體片段穩(wěn)定性的Fe區(qū)。為了治療需要拮抗功能且抗體的二價(jià)性導(dǎo)致不想要的激動(dòng)效應(yīng)的病理狀況，單臂抗體(即包含單一抗原結(jié)合臂的抗體)的單價(jià)性狀在抗體結(jié)合靶分子時(shí)導(dǎo)致和/或確保拮抗功能。此外，包含F(xiàn)e區(qū)的單臂抗體特征在于與具有相似/基本上相同的抗原結(jié)合特征的Fab形式相比卓越的藥動(dòng)學(xué)屬性(諸如延長(zhǎng)的半衰 期和/或降低的體內(nèi)清除速率)，如此克服使用常規(guī)單價(jià)Fab抗體時(shí)的主要缺點(diǎn)。單臂抗體披露于例如W02005/063816 ；Martenset al, Clin Cancer Res(2006)，12:6144。在一些實(shí)施方案中,抗c-met抗體是抗c_met抗體或其抗體片段,其中抗c_met抗體包含(a)含有重鏈可變域的第一多肽，所述多肽包含序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYffLHWVRQAPGKGLEffVGMIDPSNSDTRFNPNFKDRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATYRSYVTPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:21) ; (b)包含輕鏈可變域的第二多肽，所述多肽包含序列 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKSSQSLLYTSSQKNYLAWYQQKPGKAPKLLIYWASTRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYAYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 22);和包含F(xiàn)e區(qū)的第三多肽，所述多肽包含序列DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)，其中重鏈可變域和輕鏈可變域作為復(fù)合物存在且形成單一抗原結(jié)合臂，其中第一和第二 Fe多肽以復(fù)合物存在且形成與包含所述抗原結(jié)合臂的Fab分子相比提高所述抗體片段穩(wěn)定性的Fe區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗c-met抗體包含重鏈可變域，其包含圖1 (SEQ IDN05-7)所繪⑶R1-HC、⑶R2-HC和⑶R3-HC序列中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，抗體包含輕鏈可變域，其包含圖1 (SEQ ID N08-10)所繪CDR1_LC、CDR2_LC和CDR3-LC序列中的一項(xiàng)或多項(xiàng)。在一些實(shí)施方案中，重鏈可變域包含圖1 (SEQ ID N011-14)所繪FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和FR4-HC序列。在一些實(shí)施方案中，輕鏈可變域包含圖1(SEQ ID N015-18)所繪FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC 和 FR4-LC 序列。在其它實(shí)施方案中，抗體包含由以美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心登錄號(hào)ATCCHB-11894 (雜交瘤1A3. 3. 13)或HB-11895 (雜交瘤OT5. 11. 6)保藏的雜交瘤細(xì)胞系生成的單克隆抗體的一種或多種CDR序列。一方面,抗c-met抗體包含(a)至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)選自下組的高變區(qū)(CDR)序列(i)CDR-Ll，其包含序列 A1-A17，其中 A1-A17 為 KSSQSLLYTSSQKNYLA(SEQID NO:23) ;(ii)CDR-L2，其包含序列Bl-B7，其中Bl-B7為WASTRES(SEQ ID NO:24) ； (iii)CDR-L3，其包含序列 C1-C9，其中 C1-C9 為 QQYYAYPWT(SEQ ID NO:25) ; (iv)CDR-Hl，其包含序列 D1-D10，其中 Dl-DlO 為 GYTFTSYWLH(SEQ ID NO:26) ; (v)CDR-H2，其包含序列 E1-E18，其中 E1-E18 為 GMIDPSNSDTRFNPNFKD(SEQ IDNO: 27);和(vi) CDR-H3，其包含序列 F1-F11，其中Fl-Fll為XYGSYVSPLDY(SEQ ID NO: 28)且X不是R ;和(b)至少一個(gè)變體CDR，其中變體⑶R序列包含SEQ ID NO: 23, 24，25，26，27或28所繪序列中的至少一個(gè)殘基的修飾。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體的⑶R-Ll包含SEQ ID N0:23的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，CDR-L2包含SEQ ID NO:24的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，CDR-L3包含SEQ ID NO:25的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-Hl包含SEQ ID NO:26的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-H2包含SEQ ID N0:27的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-H3包含SEQ ID N0:28的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-H3包含TYGSYVSPLDY(SEQ ID N0:29)。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-H3包 含SYGSYVSPLDY(SEQ ID NO: 30)。在一個(gè)實(shí)施方案中，包含這些序列(以本文中描述的組合)的抗體是人源化的或人的。一方面，本發(fā)明提供包含一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或六個(gè)⑶R的抗體，其中每個(gè)CDR包含選自SEQ ID NO:23, 24，25，26，27，28和29中的任一序列、由選自SEQ ID N0:23，24，25，26，27，28和29中的任一序列組成或基本上由選自SEQ IDNO: 23，24，25，26，27，28 和 29 中的任一序列組成，且其中 SEQ ID NO: 23 對(duì)應(yīng)于 CDR-Ll，SEQID N0:24對(duì)應(yīng)于CDR-L2，SEQ ID NO:25 對(duì)應(yīng)于 CDR-L3，SEQ ID NO:26 對(duì)應(yīng)于 CDR-Hl，SEQID N0:27對(duì)應(yīng)于CDR-H2，且SEQ ID NO:26，27或28對(duì)應(yīng)于CDR-H3。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含⑶R-L1、⑶R-L2、⑶R-L3、⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其中每項(xiàng)依次包含SEQ ID NO:23，24，25，26，27 和 29。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含 CDR-L1、CDR-L2、CDR_L3、CDR-Hl、CDR-H2 和 CDR-H3，其中每項(xiàng)依次包含 SEQ ID NO: 23，24，25，26，27 和 30。變體⑶R可具有⑶R內(nèi)一個(gè)或多個(gè)殘基的修飾。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-L2變體在下述位置的任意組合中包含1-5 (1、2、3、4或5)處替代B1 (Μ或L)，B2 (P、T、G或S)，B3 (N、G、R 或 T)，B4 (1、N 或 F)，B5 (P、1、L 或 G)，B6 (A、D、T 或 V)和 B7 (R、1、M 或 G)。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-Hl變體在下述位置的任意組合中包含1_5(1、2、3、4或5)處替代D3 (N、P、L、S、A、I)，D5 (1、S 或 Y)，D6 (G、D、T、K、R)，D7 (F、H、R、S、T 或 V)和 D9 (M 或V)。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-H2變體在下述位置的任意組合中包含1-4 (1、2、3或4)處替代Ε7 (Υ)，Ε9 (I), ElO (Ι)，Ε14 (Τ 或 Q)，E15 (D、K、S、T 或 V)，E16 (L)，E17 (E、H、N 或D)和E18 (Y、E或H)。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-H3變體在下述位置的任意組合中包含1-5(1、2、3、4 或 5)處替代F1 (T、S)，F(xiàn)3 (R、S、H、T、A、K)，F(xiàn)4 (G), F6 (R、F、Μ、Τ、Ε、K、A、L、ff), F7 (L、1、T、R、K、V)，F(xiàn)8 (S、A)，F(xiàn)10 (Y、N)和 Fll (Q、S、H、F)。每個(gè)位置后面的括號(hào)中的字母指明例示性的替代(即替換)氨基酸；正如對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，其它氨基酸作為本文所述背景中替代氨基酸的合適性可以使用本領(lǐng)域已知的和/或本文中描述的技術(shù)例行評(píng)估。在一個(gè)實(shí)施方案中，⑶R-Ll包含SEQ ID N0:23的序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體CDR-H3中的Fl為T。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體CDR-H3中的Fl為S。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體CDR-H3中的F3為R。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體CDR-H3中的F3為S。在一個(gè)實(shí)施方案中，變體CDR-H3中的F7為T。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體CDR-H3，其中Fl為T或S，F(xiàn)3為R或S，且F7為T。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體⑶R-H3，其中Fl為T，F(xiàn)3為R且F7為T。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體CDR-H3，其中Fl為S。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體CDR-H3，其中Fl為T且F3為R。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體⑶R-H3，其中Fl為S，F(xiàn)3為R且F7為T。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體⑶R-H3，其中Fl為T，F(xiàn)3為S，F(xiàn)7為T，且F8為S。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體⑶R-H3，其中Fl為T，F(xiàn)3為S，F(xiàn)7為T，且F8為A。在一些實(shí)施方案中，所述變體⑶R-H3抗體進(jìn)一步包含⑶R-Ll、⑶R-L2、CDR-L3、⑶R-Hl和⑶R-H2，其中每項(xiàng)依次包含SEQ ID NO: 1，2，3，4和5所繪序列。在一些實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人亞組III重鏈框架共有序列。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位處的替代。在這些抗體的一些實(shí)施方案中，第71位為A，第73位為T且/或第78位為A。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包 含人K I輕鏈框架共有序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體CDR-L2，其中B6為V。在一些實(shí)施方案中，所述變體⑶R-L2抗體進(jìn)一步包含⑶R-L1、⑶R-L3、CTR-Hl、⑶R-H2和⑶R-H3，其中每項(xiàng)依次包含SEQ ID NO:23，25，26，27和28所繪序列。在一些實(shí)施方案中，所述變體CDR-L2抗體進(jìn)一步包含⑶R-Ll、⑶R-L3、⑶R-Hl、⑶R-H2和⑶R-H3，其中每項(xiàng)依次包含SEQ IDNO:23, 25，26，27和29所繪序列。在一些實(shí)施方案中，所述變體⑶R-L2抗體進(jìn)一步包含CDR-L1、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2 和 CDR-H3，其中每項(xiàng)依次包含 SEQ IDNO: 23, 25，26，27 和30所繪序列。在一些實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人亞組III重鏈框架共有序列。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位處的替代。在這些抗體的一些實(shí)施方案中，第71位為A，第73位為T且/或第78位為A。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人K I輕鏈框架共有序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體包含變體⑶R-H2，其中E14為T，E15為K且E17為E。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體包含變體CDR-H2，其中E17為E。在一些實(shí)施方案中，所述變體⑶R-H3抗體進(jìn)一步包含⑶R-L1、⑶R-L2、⑶R-L3、⑶R-H1、和⑶R-H3，其中每項(xiàng)依次包含SEQID NO:23，24，25，26和28所繪序列。在一些實(shí)施方案中，所述變體⑶R-H2抗體進(jìn)一步包含 CDR-Ll、CDR-L2、CDR-L3、CDR-Hl、和 CDR-H3，其中每項(xiàng)依次包含 SEQID NO:23, 24，25，26和29所繪序列。在一些實(shí)施方案中，所述變體⑶R-H2抗體進(jìn)一步包含⑶R-Ll、⑶R-L2、CDR-L3、CDR-H1、和CDR-H3，其中每項(xiàng)依次包含SEQ ID NO: 23，24，25，26和30所繪序列。在一些實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人亞組III重鏈框架共有序列。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，框架共有序列包含第71位、第73位和/或第78位處的替代。在這些抗體的一些實(shí)施方案中，第71位為A，第73位為T且/或第78位為A。在這些抗體的一個(gè)實(shí)施方案中，這些抗體進(jìn)一步包含人K I輕鏈框架共有序列。在其它實(shí)施方案中，c-met抗體特異性結(jié)合c-met Sema結(jié)構(gòu)域或其變體的至少一部分。在一個(gè)例子中，拮抗性抗體特異性結(jié)合至少一種選自下組的序列LDAQT(SEQID NO:33)(例如 c-met 的殘基 269-273)，LTEKRKKRS(SEQID NO:34)(例如 c-met 的殘基300-308)，KPDSAEPM(SEQ ID NO:35)(例如 c_met 的殘基 350-357)和 NVRCLQHF(SEQ IDNO:36)(例如c-met的殘基381-388)。在一個(gè)實(shí)施方案中，拮抗性抗體特異性結(jié)合由至少一種選自下組的序列的部分或整個(gè)形成的構(gòu)象表位LDAQT(SEQ ID NO:33)(例如c-met的殘基 269-273)，LTEKRKKRS (SEQ ID NO: 34)(例如 c-met 的殘基 300-308)，KPDSAEPM (SEQID NO: 35)(例如 c-met 的殘基 350-357)和 NVRCLQHF (SEQ ID NO: 36)(例如 c-met 的殘基381-388)。在一個(gè)實(shí)施方案中，拮抗性抗體特異性結(jié)合與序列LDAQT(SEQ ID NO:33),LTEKRKKRS(SEQ ID NO:34)、KPDSAEPM(SEQ ID NO:35)和 / 或 NVRCLQHF(SEQ ID NO:36)具有至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%序列同一性或相似性的氨基酸序列。一方面，抗c-met抗體包含至少一項(xiàng)促進(jìn)抗體片段內(nèi)的Fe序列異二聚化，同時(shí)將同二聚化降至最低的特征。此類特征改善免疫球蛋白群的收率和/或純度和/或同質(zhì)性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體包含構(gòu)成“結(jié)”和“穴”的Fe突變，如W02005/063816 ；Ridgeway, J等，Prot Eng (1996) 9:617-21 ；Zhu Z 等 Prot Sci (1997)6:781-8 所描述的。例如，穴突變可以是Fe多肽中的T366A、L368A和/或Y407V中的一項(xiàng)或多項(xiàng)，而結(jié)突變可以是T366W?？筕EGF抗體和VEGF拮抗劑 要用于生成抗體的VEGF抗原可以是例如VEGF165分子以及VEGF的其它同等型或其含有期望表位的片段?？捎糜谏杀景l(fā)明的抗VEGF抗體的其它形式的VEGF對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)是顯而易見的。人VEGF首先是使用牛VEGF cDNA作為雜交探針篩選自人細(xì)胞制備的cDNA文庫(kù)而獲得的。Leung等(1989) Science，246 :1306。一種由此鑒定出的cDNA編碼一種165個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，其與牛VEGF具有超過95%的同源性；此165個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)通常稱作人VEGF (hVEGF)或VEGF165。人VEGF的促有絲分裂活性通過在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中表達(dá)人VEGF cDNA得到了驗(yàn)證。由經(jīng)人VEGF cDNA轉(zhuǎn)染的細(xì)胞條件化的培養(yǎng)基促進(jìn)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，而對(duì)照細(xì)胞不然。Leung等(1989) Science,見上文。雖然可以自天然來源分離和純化血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，隨后用于治療用途，但是該蛋白質(zhì)在濾泡細(xì)胞中相對(duì)低的濃度和回收VEGF所需要的努力和費(fèi)用兩個(gè)方面的高成本證明在商業(yè)上是無(wú)益的。因而，進(jìn)行進(jìn)一步努力來經(jīng)重組DNA技術(shù)克隆和表達(dá)VEGF。(參見例如 Ferrara, LaboratoryInvestigation72 :615_618 (1995)及其中引用的參考文獻(xiàn))。源自可變RNA剪接，VEGF在多種組織中作為多種同二聚體形式(每個(gè)單體121、145、165、189、和206個(gè)氨基酸)表達(dá)。VEGF121是一種可溶性絲裂原，不結(jié)合肝素；更長(zhǎng)形式的VEGF以越來越高的親和力結(jié)合肝素。肝素結(jié)合形式的VEGF可以在羧基末端被纖溶酶切割以釋放可擴(kuò)散形式的VEGF。纖溶酶切割后鑒定出的羧基末端肽的氨基酸測(cè)序是Arg110-Alamo作為同二聚體分離到的氨基末端“核心”蛋白，VEGF (1-110)以與完整VEGF165同二聚體相比相似的親和力結(jié)合中和性單克隆抗體(諸如稱作4. 6.1和3. 2E3.1.1的抗體)和可溶性形式的VEGF受體。最近還鑒定出數(shù)種在結(jié)構(gòu)上與VEGF有關(guān)的分子，包括胎盤生長(zhǎng)因子(PIGF)、VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D 和 VEGF-E0 Ferrara 和 Davis-Smyth (1987) Endocr. Rev.，見上文；Ogawa 等 J. Biological Chem. 273 :31273_31281(1998)；Meyer 等 EMBO J.，18 :363_374(1999)。受體酪氨酸激酶Flt-4 (VEGFR-3)鑒定為VEGF-C和VEGF-D的受體。Joukov等ΕΜΒ0. J. 15 1751 (1996);Lee 等 Proc. Natl. Acad. Sc1. USA93 :1988-1992 (1996);Achen 等(1998) Proc. Natl. Acad. Sc1. USA95 :548_553。VEGF-C 顯示出涉及對(duì)淋巴管發(fā)生的調(diào)節(jié)。Jeltsch 等 Science276 1423-1425 (1997)。已經(jīng)鑒定出兩種VEGF受體，即Flt-1 (也稱作VEGFR-1^P KDR (也稱作VEGFR-2)。Shibuya 等(1990) 0ncogene8 :519_527 ；de Vries 等(1992) Science255 :989_991 ；Terman等(1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 187 :1579-1586。神經(jīng)租蛋白-1 顯不為選擇性VEGF受體，能夠結(jié)合肝素結(jié)合性VEGF同等型(Soker等(1998) Ce 1192:735-45)。Flt-1和KDR都屬于受體酪氨酸激酶(RTK)家族。RTK包含具有多樣生物學(xué)活性的跨膜受體的大家族。目前，鑒定出至少十九(19)個(gè)獨(dú)特RTK亞家族。受體酪氨酸激酶(RTK)家族包括對(duì)于多種細(xì)胞類型的生長(zhǎng)和分化至關(guān)重要的受體(Yarden和Ullrich (1988) Ann. Rev.Biochem. 57 :433_478 ;Ullrich 和 SchlessingeK 1990)Cell61 :243_254)。RTK 的內(nèi)在功能在配體結(jié)合后被活化，導(dǎo)致受體和多種細(xì)胞底物磷酸化，隨后導(dǎo)致多種細(xì)胞應(yīng)答(Ullrich和Schlessinger (1990) Cell61 :203_212)。如此，受體酪氨酸激酶介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通過·與特定生長(zhǎng)因子(配體)的細(xì)胞外相互作用而啟動(dòng)，通常接著是受體二聚化、刺激內(nèi)在蛋白質(zhì)酪氨酸激酶活性和受體轉(zhuǎn)磷酸。由此為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子創(chuàng)建結(jié)合位點(diǎn)，并導(dǎo)致與一系列細(xì)胞質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子的復(fù)合物形成，推動(dòng)適宜細(xì)胞應(yīng)答。(例如細(xì)胞分裂、分化、代謝影響、細(xì)胞外微環(huán)境的變化)參見Schlessinger和Ullrich( 1992)Neuron9 :1_20。在結(jié)構(gòu)上，F(xiàn)lt-1和KDR都具有胞外域中的七個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域、單個(gè)跨膜區(qū)、和被激酶插入域中斷的共有酪氨酸激酶序列。Matthews 等(1991) Proc. Natl. Acad. Sc1. USA88 :9026_9030 ；Terman 等(1991) 0ncogene6 1677-1683。在本發(fā)明的方法中有用的抗VEGF抗體包括任何抗體或其抗原結(jié)合片段，它們以足夠親和力和特異性結(jié)合VEGF且能降低或抑制VEGF的生物學(xué)活性?？筕EGF抗體通常不會(huì)結(jié)合其它VEGF同源物，諸如VEGF-B或VEGF-C，也不會(huì)結(jié)合其它生長(zhǎng)因子，諸如P1GF、PDGF、或bFGF。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，抗VEGF抗體包括但不限于與由雜交瘤ATCCHB10709 生成的單克隆抗 VEGF 抗體 A4. 6.1 ;依照 Presta 等(1997) Cancer Res. 57 4593-4599生成的重組人源化抗VEGF單克隆抗體結(jié)合相同表位的單克隆抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗VEGF抗體是“貝伐單抗(BV)”，也稱作“rhuMAb VEGF”或“AVASTIN ” >它包含經(jīng)過突變的人IgGl框架區(qū)和來自小鼠抗hVEGF單克隆抗體A. 4. 6.1的抗原結(jié)合互補(bǔ)決定區(qū)，阻斷人VEGF結(jié)合其受體。貝伐單抗大約93%的氨基酸序列(包括大部分框架區(qū))是自人IgGl衍生，而且約7%的序列是自小鼠抗體A4. 6.1衍生的。貝伐單抗和其它人源化抗VEGF抗體進(jìn)一步記載于2005年2月26日公告的美國(guó)專利No. 6，884，879。別的抗體包括G6或B20系列抗體(例如G6_31、B20_4.1),如記載于PCT公開號(hào) W02005/012359、PCT
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