專利名稱：用于抵抗衰老作用的口服制劑的制作方法
用于抵抗衰老作用的口服制劑相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2010年5月24日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/347，789的權(quán)益，其以其整體通過(guò)引用被并入本文。背景衰老過(guò)程可以在生物體水平證明其本身的一種方式是在一些領(lǐng)域一包括性性能、代謝效率和能力、認(rèn)知能力和感覺(jué)動(dòng)態(tài)范圍中功能下降。雖然這種下降的潛在基礎(chǔ)沒(méi)有被充分了解，但人們認(rèn)識(shí)到這些常常部分歸于器官和組織中的年齡相關(guān)變化。例如，人和嚙齒動(dòng)物心臟的年齡相關(guān)變化包括肌細(xì)胞數(shù)目的減少、肌細(xì)胞肥大、心纖維化、脂褐素色素積累、跨肌質(zhì)網(wǎng)膜的鈣運(yùn)輸?shù)臏p少和對(duì)腎上腺素能刺激的應(yīng)答變化?？傊@些變化可以促進(jìn)與年齡有關(guān)的心臟病。這種變化反過(guò)來(lái)可以是構(gòu)成組織的各種細(xì)胞類型變化的作用，并促進(jìn)它們?cè)谄鞴傧到y(tǒng)中的作用。細(xì)胞的活性、結(jié)構(gòu)和同一性源于其特定的蛋白質(zhì)補(bǔ)充，如由基因表達(dá)調(diào)節(jié)的。因此，細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的年齡相關(guān)變化很可能在遺傳表達(dá)的變化中找到基礎(chǔ)。因此，衰老可以反映在遺傳功能中。通過(guò)越來(lái)越復(fù)雜的測(cè)量基因表達(dá)的方法，有可能鑒定衰老的遺傳相關(guān)性。例如，全基因組轉(zhuǎn)錄概況分析、DNA微陣列和定量PCR(qPCR)的應(yīng)用，有可能鑒定衰老的轉(zhuǎn)錄生物標(biāo)記并量化衰老對(duì)其表 達(dá)的作用。阻礙或抵抗(counteract)這些作用的干預(yù)因而在抵抗生物體衰老中是有益的。發(fā)明概述根據(jù)實(shí)施方式，口服制劑可以包括石榴提取物、人參(panax ginseng)提取物和冬蟲(chóng)夏草(c.sinensis)，其中每一種在被施用給對(duì)象時(shí)以有效抵抗所述對(duì)象中衰老作用的量存在。在實(shí)施方式的一個(gè)方面，所述制劑比石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草中的任何一種以更大的程度更有效地抵抗對(duì)象中的所述作用。在另一實(shí)施方式中，口服制劑可以包括石榴提取物，約0.09wt%至約80.32wt% ;冬蟲(chóng)夏草，約13.46wt%至約99.67wt% ;和人參提取物，約 0.19wt% 至約 67.72wt%0根據(jù)實(shí)施方式，抵抗對(duì)象中衰老作用的方法包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制齊 ，所述口服制劑包括石榴提取物、人參提取物和/或冬蟲(chóng)夏草。在方法的一個(gè)方面，施用有效量的制劑比施用相等量的石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草中的任意一種更有效地抵抗對(duì)象中的所述作用。在另一實(shí)施方式中，抵抗對(duì)象肌肉組織中基因表達(dá)的年齡相關(guān)變化的方法包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制劑，所述口服制劑包括冬蟲(chóng)夏草。在再一實(shí)施方式中，抵抗對(duì)象腦組織中基因表達(dá)的年齡相關(guān)變化的方法包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制劑，所述口服制劑包括石榴提取物。附圖簡(jiǎn)述

圖1是直方圖，其比較接受根據(jù)實(shí)施方式的制劑的小鼠與僅接受載體的小鼠的耐力；
圖2是直方圖，其比較接受根據(jù)實(shí)施方式的制劑的小鼠與僅接受載體的小鼠的肝
糖原含量；圖3是直方圖，其比較圖2所示出的小鼠組中的骨骼肌糖原含量；圖4是直方圖，其比較圖2所示出的小鼠組中的骨骼肌超氧化物含量；和圖5是直方圖，其比較圖2所示出的小鼠組中骨骼肌的線粒體氧化磷酸化蛋白質(zhì)水平。示例性實(shí)施方式的詳述在描述和主張本發(fā)明的過(guò)程中，將應(yīng)用以下術(shù)語(yǔ)。單數(shù)形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the) ”包括復(fù)數(shù)指代，除非上下文另有明確說(shuō)明。因此，例如，提及“運(yùn)載體”包括涉及一個(gè)或多個(gè)這種運(yùn)載體，提及“賦形劑”包括涉及一個(gè)或多個(gè)這種賦形劑。如本文中所使用的，“衰老”和“老化”對(duì)于活生物體中隨時(shí)間發(fā)生的變化的積累可以互換使用。這種變化的范圍可以從影響遺傳和細(xì)胞功能的變化到影響器官、器官系統(tǒng)或整個(gè)生物體功能的那些變化。老化尤其指這樣的變化，其在生物體已經(jīng)達(dá)到生物學(xué)成熟后發(fā)生并且可以發(fā)展直到生物體最終死亡。術(shù)語(yǔ)“衰老作用”在本文中尤其指基因功能的年齡相關(guān)變化，如單個(gè)基因轉(zhuǎn)錄以及基因群體轉(zhuǎn)錄概況的變化。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“衰老的生物標(biāo)記”一般指這樣的基因或基因群體，其表達(dá)一直被發(fā)現(xiàn)隨著年齡和其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物而變化。這種基因和基因群體可以被稱為“遺傳生物標(biāo)記”，而轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以被稱為“轉(zhuǎn)錄生物標(biāo)記”。如本文中所使用的，“上調(diào)”和“下調(diào)”分別指通常在響應(yīng)一些信號(hào)或狀況時(shí)一個(gè)或多個(gè)基因的提聞的或降低的表達(dá)，以及因此由這些基因編碼的蛋白質(zhì)的提聞的或降低的表達(dá)。尤其在涉及衰老的生物標(biāo)記時(shí)，上調(diào)和下調(diào)分別指響應(yīng)年齡的這種提高或降低。如本文中所使用的，“制劑”和“組合物”可以互換使用，并且指代兩種或多種成分或物質(zhì)的組合。在一些實(shí)施方式中，組合物可以包括與運(yùn)載體或其賦形劑、佐劑等組合的活性劑。如本文中所使用的，“有效量”是指在被包含到組合物中時(shí)成分的量，其足以獲得預(yù)期的組合或生理作用。因此，“治療有效量”是指活性劑的非毒性、但足夠的量，以在治療或預(yù)防已知該活性劑對(duì)其有效的狀況中實(shí)現(xiàn)治療結(jié)果。應(yīng)該理解，各種生物因子可影響物質(zhì)執(zhí)行其預(yù)期任務(wù)的能力。因此，“有效量”或“治療有效量”在一些情況下可以取決于這樣的生物因子。此外，雖然治療效果的實(shí)現(xiàn)可以通過(guò)醫(yī)師或其他有資格的醫(yī)務(wù)人員利用本領(lǐng)域中已知的評(píng)價(jià)方法來(lái)測(cè)量，但是人們認(rèn)識(shí)到個(gè)體差異和對(duì)治療的響應(yīng)可能使得治療效果的實(shí)現(xiàn)成為一種主觀決策。有效量的測(cè)定為藥學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的普通技術(shù)人員所悉知。如本文中所使用的，“藥學(xué)上可接受的載體”和“載體”可互換使用，并指代任何惰性和藥學(xué)上可接受的材料，其可以與生物活性劑或營(yíng)養(yǎng)劑組合以獲得特定的劑量制劑用于遞送給對(duì)象。作為一般的原則，載體必須不與生物活性劑以充分降解或以另外不利地影響生物活性劑的方式進(jìn)行反應(yīng)。如本文中所使用的，“冬蟲(chóng)蟲(chóng)草屬真菌”或“冬蟲(chóng)夏草”是指真菌物種冬蟲(chóng)夏草(Cordyceps sinensis),包括所有無(wú)性型、菌株及其雜種。如本文中所使用的，“蝙蝠蛾擬青霉(p.hepialid) ”或“蝙蝠蛾擬青霉(hepialid) ”是指真菌蝙蝠蛾擬青霉(Paecilomyces hepialid),包括所有菌株及其雜種。如本文中所使用的，“中國(guó)被毛孢(H.sinensis) ”或“中國(guó)被毛孢(hirsutella) ”是指真菌中國(guó)被毛孢(Hirsutella sinensis),包括所有菌株及其雜種。如本文中所使用的，“賦形劑”是指基本上惰性的物質(zhì)，其可以與活性劑和載體組合，以獲得特定的劑量制劑，用于遞送給對(duì)象，或提供具有特定性能特點(diǎn)的劑型。例如，賦形劑可以包括粘合劑、潤(rùn)滑劑等，但特別排除活性劑和載體。如本文中所使用的，“對(duì)象”是指哺乳動(dòng)物，其可以得益于本文所述的組合物或方法的施用。該對(duì)象常常是人。如本文中所使用的，“施用(administration) ”和“施用(administering) ”是指將活性劑或含有其的組合物給予對(duì)象的方式。施用可以通過(guò)本領(lǐng)域中悉知的各種途徑諸如口服和非口服方法來(lái)完成。如本文中所使用的，“口服施用”是指施用途徑，其可以通過(guò)吞咽、咀嚼或吸吮包含藥物的口服劑型來(lái)實(shí)現(xiàn)。悉知的口服劑型的實(shí)例包括片劑、膠囊、囊片(caplets)、粉劑、顆粒劑、飲料、糖衆(zhòng)、酏劑、糖果劑(confection)或其他食品等。濃度、量、溶解度和其他數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)在本文中可以以范圍的形式呈現(xiàn)。應(yīng)該理解，這種范圍形式僅為了方便和簡(jiǎn)潔的目的而使用，并且應(yīng)該被靈活地解釋為不僅包括作為范圍的界限被明確敘述的數(shù)值，而且還包括包含在該范圍內(nèi)的所有單個(gè)數(shù)值或亞范圍，如同每一數(shù)值和亞范圍均被明確敘述一樣。例如，0.5到400的濃度范圍應(yīng)該被解釋為不僅包括明確敘述的濃度界限0.5和400，而且還包括該范圍內(nèi)的單個(gè)濃度，如0.5,0.7,1.0,5.2,8.4,11.6,14.2、100、200、300 和亞范圍如 0.5-2.5,4.8-7.2,6-14.9、55、85、100-200、117、175、200_300、225、250 和300-400等。這種解釋?xiě)?yīng)該適應(yīng)而不考慮范圍的寬度或被描述的特點(diǎn)。如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)“約”意為尺寸、配方、參數(shù)以及其他量和特點(diǎn)不是而且不必是確切的，但如所期望地，可以是接近的和/或更大或更小，反映公差、轉(zhuǎn)換系數(shù)、四舍五入、測(cè)量誤差等等和技術(shù)人員已知的其他因素。此外，除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“約”將明確包括“準(zhǔn)確地(exactly) ”，這與上面關(guān)于范圍和數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)的論述一致。如本文中所使用的，多個(gè)項(xiàng)目(item)、結(jié)構(gòu)元件、組合元件和/或材料為了方便可以呈現(xiàn)在共同的列表中。然而，這些列表應(yīng)該被解釋為如同列表的每一成員被單獨(dú)識(shí)別為獨(dú)立的和唯一的成員。因此，這種列表中的單個(gè)成員均不應(yīng)該僅基于它們呈現(xiàn)在相同組中而沒(méi)有相反說(shuō)明被解釋為相同列表的任意其他成員的事實(shí)上的等同物。抵抗對(duì)象中衰老作用的方法可以包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制劑，所述口服制劑包括有效提供這種結(jié)果的活性劑。尤其地，抵抗或阻礙對(duì)象中衰老作用的口服制劑可以包括一個(gè)或多個(gè)活性劑，其有效阻礙或抵抗基因表達(dá)中年齡相關(guān)變化。根據(jù)實(shí)施方式，這種口服制劑可以包括石榴提取物，和任選地，人參提取物和/或冬蟲(chóng)夏草，每一種在被施用給對(duì)象時(shí)均以有效抵抗所述對(duì)象中衰老作用的量存在。在給定生物體 中，可以鑒定充當(dāng)裳老生物標(biāo)記的基因和基因廣物。特定基因和基因群體的表達(dá)有時(shí)被發(fā)現(xiàn)隨生物體年齡而顯著改變。這些基因可以通過(guò)可用的方法測(cè)定其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物而被鑒定。衰老的特定生物標(biāo)記可以取決于生物體。即，顯示年齡相關(guān)作用基因的鑒定根據(jù)物種而不同。另外，生物標(biāo)記的鑒定和對(duì)每一生物標(biāo)記表達(dá)的年齡相關(guān)作用的程度在生物體的組織類型中可以不同。例如，基因或基因群體在肌肉組織中可以一直是衰老的生物標(biāo)記而在腦組織中顯示較少的年齡相關(guān)作用，并且在其它組織中根本不顯示年齡相關(guān)作用。衰老對(duì)基因表達(dá)的作用部分取決于基因本身，尤其取決于與基因有關(guān)的功能。因此，在一些基因中，發(fā)現(xiàn)表達(dá)隨著年齡而上調(diào)，而在其它基因中，表達(dá)隨年齡下調(diào)。另外，觀察到的上調(diào)或下調(diào)的程度根據(jù)基因可以不同，其中一些顯示劇烈的變化，而其它的顯示更細(xì)微、但仍顯著的變化?；虮磉_(dá)可以根據(jù)組織而不同。例如，基因諸如PPARalpha在肝中可以隨著年齡被上調(diào)，但在骨骼肌中可以隨著年齡被下調(diào)。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本文實(shí)施方式的制劑在衰老的遺傳生物標(biāo)記之間在抵抗年齡相關(guān)變化中是有效的。在具體方面，在顯示年齡相關(guān)上調(diào)的基因中，制劑可以降低或逆轉(zhuǎn)所述上調(diào)。在另一方面，制劑可以在顯示這樣的下調(diào)的基因中降低或逆轉(zhuǎn)這種下調(diào)。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑可以包括多種不同的活性劑，其被選擇，以抵抗一些不同組織中的年齡相關(guān)作用。在另一實(shí)施方式中，用于抵抗與對(duì)象衰老有關(guān)的基因表達(dá)變化的方法可以包括給所述對(duì)象施用有效量的制劑，所述制劑包括石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草。在具體實(shí)施方式
中，這種變化可以發(fā)生在體外。在一些方面，人參提取物和冬蟲(chóng)夏草成分是任選的，并且，任意之一或另一種或者兩種均可以被加入，以實(shí)現(xiàn)期望的結(jié)果。本文描述的成分在以組合提供時(shí)可以顯示增強(qiáng)的效力。在具體方面，含有石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草的組合的制劑比根據(jù)所述成分的單獨(dú)功效期望地更有效抵抗衰老相關(guān)基因表達(dá)變化。例如，制劑的量可以比相等量的石榴提取物、人參提取物或冬蟲(chóng)夏草中的任意一種更有效抵抗基因表達(dá)的裳老相關(guān)變化。在另一實(shí)例中，制劑的量可以比相等量的這些成分中的任意兩種更有效。為了確定生物體中衰老的生物標(biāo)記，可以利用高密度寡核苷酸陣列通過(guò)監(jiān)測(cè)多個(gè)基因的mRNA水平來(lái)獲得總的基因 表達(dá)概況分析。更具體而言，寡核苷酸陣列可被用于分析年齡不斷增長(zhǎng)的對(duì)象的樣本，并且，所得信號(hào)被比較，以查明哪一個(gè)檢測(cè)的基因顯示隨年齡而改變的表達(dá)。利用該方法，可以鑒定遺傳生物標(biāo)記以及量化年齡相關(guān)作用。還可以查明各種治療如何可以修改這些年齡相關(guān)作用。例如，已發(fā)現(xiàn)在不同物種中增加最大壽命并減緩衰老過(guò)程的多個(gè)方面的一種治療是飲食熱量限制。然而，堅(jiān)持低熱量飲食常常困難，并且出現(xiàn)維生素缺乏和營(yíng)養(yǎng)不良的危險(xiǎn)，致使其不能成為廣泛可用的方法來(lái)抵抗衰老。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本文描述的劑在降低對(duì)基因表達(dá)的年齡相關(guān)作用中與熱量限制一樣有效或者甚至超過(guò)熱量限制。包括這些劑的口服制劑可以提供抗衰老措施，其可用于各種對(duì)象。口服制劑可以包括有效量的石榴提取物。在具體實(shí)施方式
中，石榴提取物可以以總制劑的約0.09wt%至約80.32wt%存在。在更具體的實(shí)施方式中，石榴提取物可以以約3.0wt%至約20.0wt%存在。在仍然更具體的實(shí)施方式中，石榴提取物以約6.5wt%至約
8.0wt%存在。制劑中應(yīng)用的石榴提取物可以通過(guò)已知的提取方法獲自石榴果實(shí)。在具體實(shí)例中，石槽提取物提取自用熱水新鮮壓榨的全石槽果實(shí)固體(石槽(Punica granatum),神奇的栽培種)。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，石榴中存在的多酚可以提供許多健康的益處，包括有效抵抗對(duì)基因表達(dá)的年齡相關(guān)作用。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑包含至少85%石榴多酚?？诜苿┮部梢园ㄓ行Я康恼婢x(chóng)夏草。在具體實(shí)施方式
中，冬蟲(chóng)夏草以總制劑的約13.46wt%至約99.67被％存在于制劑中。在更具體的實(shí)施方式中，冬蟲(chóng)夏草以約50.0wt%至約95.0wt%存在。在仍然更具體的實(shí)施方式中，冬蟲(chóng)夏草以約83.0wt%至約89.0wt%存在。發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，冬蟲(chóng)夏草也可以抵抗對(duì)基因表達(dá)的年齡相關(guān)作用。在冬蟲(chóng)夏草屬真菌的菌絲體中發(fā)現(xiàn)的兩種無(wú)性型菌株——中國(guó)被毛孢和蝙蝠蛾擬青霉(P.hepialid)在提供與冬蟲(chóng)夏草屬真菌有關(guān)的有益結(jié)果中是有效的，并且可以獲自人工培養(yǎng)的菌絲體。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑可以包括蝙蝠蛾擬青霉和/或中國(guó)被毛孢中的任意一種，或者可選地，其提取物。口服制劑還可以包括人參提取物。在具體實(shí)施方式
中，人參提取物以總制劑的約0.19wt%至約67.72被％存在于制劑中。在更具體的實(shí)施方式中，人參提取物以約1.0wt%至約20.0wt%存在。在仍然更具體的實(shí)施方式中，人參提取物以約3.5wt%至約5.0wt%存在。人參包括介導(dǎo)其在施用其的對(duì)象中的作用的活性人參皂苷水平。在一個(gè)方面中，提取物可以來(lái)自人參根的一個(gè)或多個(gè)部分。自然地，人參主根包含1.0的Rgl皂苷(原人參萜三醇)與皂苷Rbl (原人參萜二醇)的人參皂苷比率。相反地，較不豐富的人參根毛具有較高濃度的Rbl，導(dǎo)致約4.6的Rbl/Rgl。人參皂苷Rbl可以提供益處諸如鎮(zhèn)靜、焦慮減少、身體性能和精神集中，而過(guò)量水平的Rgl被認(rèn)為促進(jìn)較少的積極副作用。在具體實(shí)施方式
中，可以混合主根提取物和根毛提取物，以控制Rgl的水平同時(shí)提高Rbl的水平，以便維持期望的Rbl/Rgl比。結(jié)果是具有這種比率的生物活性人參皂苷Rbl和Rgl的人參提取物，該比率支持智力和身體性能并提供抗應(yīng)激益處而沒(méi)有副作用。在具體實(shí)施方式
中，存在于口服制劑中的人參提取物包括約3:1到約5:1比率的人參皂苷Rbl和人參皂苷Rgl。在更具體的實(shí)施方式中，Rbl與Rgl比率為約4.5:1至約4.7:1。口服制劑可以被配制，以根據(jù)具體劑量方案提供有效量的活性劑。本文的口服制劑可以根據(jù)期望的日劑量提供活性劑中的每一種。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑被提供在劑型中，所述劑型包含約140mg至約200mg石槽提取物、約70mg至約130mg人參提取物和約1800mg至約2200mg冬蟲(chóng)夏草。在其它方面，口服制劑可以給對(duì)象施用，以遞送以每一體重基計(jì)期望量的活性劑。施用可以根據(jù)對(duì)象的種類(例如，哺乳動(dòng)物對(duì)象，或更具體地，人對(duì)象)以及其它因素諸如性別、年齡、醫(yī)學(xué)狀況等等來(lái)設(shè)置。在具體實(shí)施方式
中，有效量的口服制劑向所述對(duì)象遞 送日劑量，其包括約0.15mg/kg至約30.0mg/kg石槽提取物、約0.35mg/kg至約15mg/kg人參提取物和約15.0mg/kg至約150.0mg/kg冬蟲(chóng)夏草。除了主要的劑諸如石榴提取物、人參和冬蟲(chóng)夏草之外，制劑還可包括另外的活性齊U。這些可以包括尤其還有效抵抗衰老的劑以及在施用給對(duì)象時(shí)提供其它健康益處的劑。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑可以包括北五味子(Schizandra berry)提取物、全葡萄提取物、輔酶Q1C1、紅景天(Rhodiola rosacea)提取物、酸樓桃(Tart cherry)提取物和L-肉堿酒石酸鹽中的至少一種。這些劑每一種均具有有益特性，這使得它們一般適于包含在健康補(bǔ)充劑中，并且，作為具體實(shí)例，適于包含在抗衰老制劑中。然而，列舉并不意圖是窮盡性的，而且本領(lǐng)域中已知的其它藥學(xué)上可接受的添加劑被考慮包含在制劑中。在具體實(shí)例中，另外的活性劑被選擇，以提供有助于抵抗衰老作用的效果?？诜苿┛梢砸赃m于口服施用的任意遞送型或劑型被制備。例如，制劑中的活性劑可以與液態(tài)載體組合，然后被濃縮或稀釋，以制備液態(tài)型?？蛇x地，活性劑可以被干燥、加工并與適當(dāng)?shù)牟牧现T如填料、壓片劑、增塑劑等組合，以制備固態(tài)劑型。在食品和藥學(xué)領(lǐng)域中已知的固態(tài)和液態(tài)劑型被考慮使用，諸如膠囊、片劑、粉劑、飲料、薄片(wafer)、糖果劑(confectionaries)、咀嚼劑、凝膠、糊劑、酏劑、糖衆(zhòng)、滴劑、錠劑等。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑被加工成粉劑，其可以任選地包括增甜劑和香料，并且在水中或其它液體中可溶，以生成飲料。在另一個(gè)具體實(shí)施方式
中，口服制劑被加工并置入膠囊諸如明膠膠囊中?？诜苿┻€可以包括制備遞送型所需的一種或多種賦形劑?？梢允褂糜糜谥苽涓鞣N劑型的藥物和食品工業(yè)中通常已知的各種賦形劑。這些包括例如，液態(tài)載體、溶劑、填料、粘合劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、調(diào)味劑和染料(coloring)。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑包括食品級(jí)樹(shù)膠、防結(jié)塊劑、卵磷脂、微晶纖維素、硅膠、調(diào)味劑和增甜劑中的一種或多種。食品級(jí)樹(shù)膠包括黃單胞菌膠(xanthar gum)和瓜爾膠。防結(jié)塊劑包括但不限于二氧化硅、硬脂酸、磷酸三鈣、硅酸鈣、硅鋁酸鈉、碳酸鎂、滑石、皂土、亞鐵氰化鈉、亞鐵氰化鉀和骨質(zhì)磷酸鹽。雖然不期望被具體理論所束縛，但預(yù)期衰老對(duì)特定基因表達(dá)的作用與老化在生物體水平的表現(xiàn)有關(guān)。換言之，據(jù)信衰老的遺傳生物標(biāo)記的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物涉及隨年齡退化的生理功能。因此，通過(guò)施用制劑給對(duì)象而獲得的衰老對(duì)基因表達(dá)的作用的阻礙也可以在對(duì)象中以生理結(jié)果實(shí)現(xiàn)。在具體實(shí)施方式
中，口服制劑抵抗衰老作用諸如身體活力和耐力、性性能、性能力、能量代謝、認(rèn)知功能、睡眠時(shí)間和質(zhì)量、記憶形成和保持等的年齡相關(guān)的下降。在實(shí)施方式中，如本文所述的口服制劑可以抵抗對(duì)象特定組織中或多個(gè)組織中的衰老作用。在一方面，所述制劑可以減輕或逆轉(zhuǎn)在特定組織中發(fā)現(xiàn)的衰老的生物標(biāo)記的基因表達(dá)中年齡的作用。這種作用可以通過(guò)施用制劑給對(duì)象，或者可選地，通過(guò)直接用制劑處理組織來(lái)產(chǎn)生。在另一方面，制劑可以抵抗在特定組織中出現(xiàn)的對(duì)生理功能的年齡相關(guān)作用。在再一方面，通過(guò)作用于有助于功能的一個(gè)或多個(gè)組織，制劑可以在生物體水平抵抗年齡對(duì)所述功能的作用。不同類型的功能衰退可以與特定組織或系統(tǒng)的退化有關(guān)。例如，降低的體力和耐力可部分由于肌肉組織和總體代謝能力中的年齡相關(guān)作用，而降低的認(rèn)知功能可以與腦中相關(guān)區(qū)域中的變化有關(guān)。本文描述的口服制劑可以包括在特定組織中提供特定抗衰老作用的劑，所述特定組織包括但不限于腦、骨骼肌、心肌、性腺組織、結(jié)締組織、皮膚、消化系統(tǒng)和內(nèi)分泌腺。

通過(guò)以下示例性實(shí)施方式，本發(fā)明的方面將進(jìn)一步被闡釋。這些實(shí)施例不應(yīng)該被認(rèn)為是對(duì)本公開(kāi)內(nèi)容的限制，而是僅僅準(zhǔn)備指示本領(lǐng)域的技術(shù)人員實(shí)施本發(fā)明?？梢詫?duì)實(shí)施的形式、用法和細(xì)節(jié)進(jìn)行各種修改而不運(yùn)用發(fā)明創(chuàng)造才能并且不背離本發(fā)明的原理和概念，這對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將是顯而易見(jiàn)的。因此，并不意圖限制本發(fā)明，除非由下面示出的權(quán)利要求限定。
實(shí)施例實(shí)施例1-檢測(cè)冬蟲(chóng)夏草屬(Cordyc印s)施用對(duì)骨骼肌(腓腸肌)中基因表達(dá)的
作用，一般方案獲得18月齡大的C57BL/6J小鼠，單獨(dú)安置于鞋盒式籠具中并每周提供24克C84kcal)的AIN-93M飲食(周一和周三，7克，周五，10克)。從21月齡開(kāi)始并繼續(xù)到25月齡，小鼠或者以AIN93M飲食供養(yǎng)(老年對(duì)照，0C)或被配給補(bǔ)充有冬蟲(chóng)夏草的AIN93M飲食(酶千克飲食3.063克)。獲得六周齡的年輕對(duì)照C57BL/6J小鼠(YC)，并以AIN93M飲食供養(yǎng)直到5月齡。在特定的年齡，從小鼠的腓腸骨骼肌采集組織，迅速冰凍在液氮中并儲(chǔ)存于-80° C用于稍后分析。
基因表達(dá)概況分析被用于鑒定隨年齡和/或冬蟲(chóng)夏草屬處理而改變的單獨(dú)的基因和基因的功能類別?？俁NA通過(guò)利用 TRIZ0L 試劑(LifeTechnologies, Grand Island, NY)提取自冰凍組織。聚腺苷?；痆聚(A)+]RNA通過(guò)寡(dT)_連接的oligotex樹(shù)脂(Qiagen, Valencia, CA)純化自總 RNA。通過(guò)利用 SuperScript Choice System (LifeTechnologies),用含有T7RNA聚合酶啟動(dòng)子(Genset，La Jolla1CA)的寡(dT)引物將一微克聚(A)+RNA轉(zhuǎn)換成雙鏈cDNA(dScDNA)。dscDNA用酚氯仿-異戊基醇提取，并利用沉淀涂料共沉淀劑(pelletpaint coprecipitant) (Novagen)進(jìn)行沉淀。通過(guò)利用 BioArray High Yield RNA 轉(zhuǎn)錄標(biāo)記試劑盒(Enzo, Farmingdale, NY),在體外合成生物素標(biāo)記的RNA。利用RNeasy親和層析柱(Qiagen)純化生物素標(biāo)記的反義cRNA，并將其隨機(jī)片段化。將含有IOyg片段化cRNA 的雜交混合物(200 μ I)注入 Mousel.0GeneST 陣列(Affymetrix, Santa Clara, CA)。將基因芯片放入45° C烤箱中，60rpm，16h。雜交后，洗滌基因芯片，并利用抗體用信號(hào)擴(kuò)增方案將其在流體站(fluidic station) (Model800101, Affymetrix)中染色。通過(guò)利用Hewlett - Packard GeneArray Scanner (Model900154, Affymetrix)以 3μηι 分辨率掃描DNA芯片兩次，并將平均化的圖像用于進(jìn)一步分析。Affymetrix Algorith·m 軟件被用于確定mRNA在樣本中的存在,并計(jì)算探針組的信號(hào)。為了鑒定隨年齡發(fā)生的表達(dá)變化，將OC樣本的平均值與YC的平均值進(jìn)行比較；為了測(cè)定用冬蟲(chóng)夏草屬處理的表達(dá)變化，將冬蟲(chóng)夏草屬處理的樣本的平均值與年齡匹配的OC樣本的平均值進(jìn)行比較。雙尾t-檢驗(yàn)(假設(shè)方差相等)被用于確定是否單個(gè)基因的表達(dá)變化是統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的。表達(dá)變化的大小被報(bào)告為“倍數(shù)變化”(Fe)值，其是1g2調(diào)節(jié)的以擬合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的正態(tài)性假定。為了鑒定隨年齡和/或冬蟲(chóng)夏草屬而變化的基因的功能類別，使用ParametricAnalysis of Gene set Enrichment(PAGE),如 Kim 和 Volsky(2005)，PAGE:ParametricAnalysis of Gene Set Enrichment, BMC Bioinformatics, 6:144 中所述。當(dāng)基因表達(dá)改變適度但穩(wěn)定時(shí)，該方法對(duì)于鑒定由處理調(diào)節(jié)的路徑是有用的。來(lái)自基因本體論(GO)協(xié)會(huì)(Gene Ontology (GO) consortium) (http://www.geneontology.0rg)的注釋被用于聯(lián)系單個(gè)基因與其功能，盡管僅限于“等級(jí)3”或更高的那些注釋，并且，其由10個(gè)以上但1000個(gè)以下的基因表示。在分析時(shí)，存在符合這些標(biāo)準(zhǔn)的2，884個(gè)GO項(xiàng)(term)。PAGE技術(shù)也計(jì)算每一 GO項(xiàng)的Z-分?jǐn)?shù)，其中正值表示GO項(xiàng)隨著處理被上調(diào)，負(fù)值表示通過(guò)處理下調(diào)GO項(xiàng)。實(shí)施例2-冬蟲(chóng)夏草屬施用對(duì)抗與行為和性活力有關(guān)的骨骼肌基因群體的年齡相關(guān)變化的作用利用實(shí)施例1的方案檢測(cè)冬蟲(chóng)夏草屬施用對(duì)與性活力有關(guān)的骨骼肌中功能基因群體的表達(dá)的作用。結(jié)果(年齡和處理的Z-分?jǐn)?shù)、統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性和由于處理而年齡相關(guān)作用的變化)顯示在表I中:表I
權(quán)利要求
1.口服制劑，其包括石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草(c.sinensis)，每一種在被施用給對(duì)象時(shí)均以有效抵抗所述對(duì)象中衰老作用的量存在，其中所述口服制劑比石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草中的任何一種以更大的程度更有效地抵抗所述對(duì)象中的所述作用。
2.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述冬蟲(chóng)夏草包括選自蝙蝠蛾擬青霉(p.hepialid)和中國(guó)被毛孢(h.sinensis)的至少一個(gè)菌株。
3.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述人參提取物包括約3:1到約5:1比率的人參皂苷Rbl和人參皂苷Rgl。
4.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述石榴提取物包括至少80wt%多酚。
5.權(quán)利要求1所述的口服制劑，還包括選自以下的至少一種添加劑:樹(shù)膠、防結(jié)塊劑、卵磷脂、微晶纖維素、硅膠和調(diào)味劑。
6.權(quán)利要求1所述的口服制劑，還包括選自以下的至少一種另外的活性劑:北五味子提取物、全葡萄提取物、輔酶Qltl、紅景天提取物、酸櫻桃提取物和L-肉堿酒石酸鹽。
7.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其以選自以下的劑型存在:膠囊、片劑、粉劑、飲料、薄片、糖果劑、咀嚼劑、凝膠、糊劑、酏劑、糖漿、滴劑和錠劑。
8.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其是包含約140mg至約200mg石槽提取物、約70mg至約130mg人參提取物和約1800mg至約2200mg冬蟲(chóng)夏草的劑型。
9.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述作用是能量代謝下降。
10.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述作用是性性能下降。
11.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述作用包括基因表達(dá)中年齡相關(guān)的變化。
12.權(quán)利要求11所述的口服制劑，其中所述基因表達(dá)是針對(duì)衰老的生物標(biāo)記。
13.權(quán)利要求11所述的口服制劑，其中所述基因表達(dá)發(fā)生在肌肉組織中。
14.權(quán)利要求11所述的口服制劑，其中所述基因表達(dá)發(fā)生在腦組織中。
15.權(quán)利要求1所述的口服制劑，其中所述制劑以等于或大于相同對(duì)象中熱量限制的程度抵抗所述對(duì)象中的所述作用。
16.口服制劑，其包括: 石槽提取物，約0.09wt%至約80.32wt% ； 冬蟲(chóng)夏草，約13.46wt%至約99.67wt% ;和 人參提取物，約0.19wt%至約67.72wt%。
17.權(quán)利要求16所述的口服制劑，其中石榴提取物以約6.5wt%至約8.0wt%存在、人參提取物以約3.5wt%至約5.0wt%存在和冬蟲(chóng)夏草以約83.0wt%至約89wt%存在。
18.權(quán)利要求16所述的口服制劑，其中所述口服制劑在被施用給對(duì)象時(shí)抵抗所述對(duì)象中的衰老作用。
19.權(quán)利要求18所述的口服制劑，其中所述作用是能量代謝下降。
20.權(quán)利要求18所述的口服制劑，其中所述作用是性性能下降。
21.權(quán)利要求18所述的口服制劑，其中所述作用包括基因表達(dá)中年齡相關(guān)的變化。
22.權(quán)利要求21所述的口服制劑，其中所述基因表達(dá)是針對(duì)衰老的生物標(biāo)記。
23.權(quán)利要求21所述的口服制劑，其中所述基因表達(dá)發(fā)生在肌肉組織中。
24.權(quán)利要求21所述的口服制劑，其中所述基因表達(dá)發(fā)生在腦組織中。
25.權(quán)利要求18所述的口服制劑，其中所述制劑以類似于或大于相同對(duì)象中熱量限制的程度抵抗所述對(duì)象中的所述作用。
26.權(quán)利要求18所述的口服制劑，其中，所述口服制劑的量以比相等量的石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草中的任意一種更大的程度抵抗所述所述對(duì)象中的所述作用。
27.權(quán)利要求16所述的口服制劑，其中所述冬蟲(chóng)夏草包括選自蝙蝠蛾擬青霉和中國(guó)被毛孢的至少一個(gè)菌株。
28.權(quán)利要求16所述的口服制劑，其中所述人參提取物包括約3:1到約5:1比率的人參皂苷Rbl和人參皂苷Rgl。
29.權(quán)利要求16所述的口服制劑，其中所述石榴提取物包括至少80wt%多酚。
30.權(quán)利要求16所述的口服制劑，還包括選自以下的至少一種添加劑:樹(shù)膠、防結(jié)塊齊U、卵磷脂、微晶纖維素、硅膠和調(diào)味劑。
31.權(quán)利要求16所述的口服制劑，還包括選自以下的至少一種另外的活性劑:北五味子提取物、全葡萄提取物、輔酶Qltl、紅景天提取物、酸櫻桃提取物和L-肉堿酒石酸鹽。
32.權(quán)利要求16所述的口服制劑，其以選自以下的劑型存在:膠囊、片齊[J、粉齊[J、飲料、薄片、糖果劑、咀嚼劑、凝膠、糊劑、酏劑、糖漿、滴劑和錠劑。
33.抵抗對(duì)象中衰老作用的方法，其包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制劑，所述口服制劑包括石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草，其中所述施用以比施用相等量的石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草中的任意一種更大的程度抵抗所述對(duì)象中的所述作用。
34.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述有效量向所述對(duì)象遞送日劑量，其包括約0.15mg/kg至約30.0mg/kg的石槽提取物、約0.35mg/kg至約15mg/kg的人參提取物和約15.0mg/kg至約150.0mg/kg的冬蟲(chóng)夏草。
35.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述口服制劑包括石榴提取物，約0.09wt%至約80.32wt% ;冬蟲(chóng)夏草，約13.46wt%至約99.67wt% ;和人參提取物，約0.19wt%至約67.72wt%0
36.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述對(duì)象是人。
37.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述冬蟲(chóng)夏草包括選自蝙蝠蛾擬青霉和中國(guó)被毛孢的至少一個(gè)菌株。
38.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述人參提取物包括約3:1到約5:1比率的人參皂苷Rb I和人參皂苷Rgl。
39.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述石榴提取物包括至少80wt%多酚。
40.權(quán)利要求33所述的方法，還包括選自以下的至少一種添加劑:樹(shù)膠、防結(jié)塊劑、卵磷脂、微晶纖維素、硅膠和調(diào)味劑。
41.權(quán)利要求33所述的方法，還包括選自以下的至少一種另外的活性劑:北五味子提取物、全葡萄提取物、輔酶Qltl、紅景天提取物、酸櫻桃提取物和L-肉堿酒石酸鹽。
42.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述口服制劑以選自以下的劑型存在:膠囊、片劑、粉劑、飲料、薄片、糖果劑、咀嚼劑、凝膠、糊劑、酏劑、糖漿、滴劑和錠劑。
43.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述作用是能量代謝下降。
44.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述作用是性性能下降。
45.權(quán)利要求33所述的方法，其中所述作用包括基因表達(dá)中年齡相關(guān)的變化。
46.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述基因表達(dá)是針對(duì)衰老的生物標(biāo)記。
47.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述基因表達(dá)發(fā)生在肌肉組織中。
48.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述基因表達(dá)發(fā)生在腦組織中。
49.權(quán)利要求45所述的方法，其中所述制劑以類似于或大于相同對(duì)象中熱量限制的程度抵抗所述對(duì)象中的所述作用。
50.抵抗對(duì)象肌肉組織中基因表達(dá)的年齡相關(guān)變化的方法，其包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制劑，所述口服制劑包括冬蟲(chóng)夏草。
51.權(quán)利要求50所述的方法，其中所述冬蟲(chóng)夏草包括選自蝙蝠蛾擬青霉和中國(guó)被毛孢的至少一個(gè)菌株。
52.權(quán)利要求50所述的方法，其中所述有效量向所述對(duì)象遞送日劑量，其包括約15.0mg/kg至約150.0mg/kg的冬蟲(chóng)夏草。
53.抵抗對(duì)象腦組織中基因表達(dá)的年齡相關(guān)變化的方法，其包括給所述對(duì)象施用有效量的口服制劑，所述口服制劑包括石榴提取物。
54.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述石榴提取物包括至少80wt%多酚。
55.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述有效量向所述對(duì)象遞送日劑量，其包括約0.15mg/kg至約30.0mg/kg的石槽提取物。
56.抵抗組織中基因表達(dá)變化的方法，其包括用包含石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草的制劑處理所述組織。
57.權(quán)利要求56所述的方法，其中所述基因表達(dá)變化是獲得所述組織的對(duì)象年齡的函數(shù)。
58.權(quán)利要求56所述的方法，其中所述冬蟲(chóng)夏草包括選自蝙蝠蛾擬青霉和中國(guó)被毛孢的至少一個(gè)菌株。
59.權(quán)利要求56所述的方法，其中所述石榴提取物包括至少80wt%多酚。
60.權(quán)利要求56所述的方法，其中所述人參提取物包括約3:1到約5:1比率的人參皂苷Rbl和人參皂苷Rg l。
61.權(quán)利要求5 6所述的方法，其中所述口服制劑包括石榴提取物，約0.09被％至約80.32wt% ;冬蟲(chóng)夏草，約13.46wt%至約99.67wt% ;和人參提取物，約0.19wt%至約67.72wt%0
全文摘要
如本文所述的口服制劑可以包含石榴提取物、人參提取物和冬蟲(chóng)夏草，其中每一種在被施用給對(duì)象時(shí)均以有效抵抗和/或防止對(duì)象中衰老作用的量存在。衰老作用可以包括基因表達(dá)中年齡相關(guān)的變化。
文檔編號(hào)A61K9/20GK103153320SQ201180035847
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2011年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月24日
發(fā)明者A·瑪斯塔咯迪斯, S·伍德, R·溫德魯奇, T·A·保羅拉, J·L·巴杰, M·巴特利特, S·B·弗格森, J·昌 申請(qǐng)人:Nse產(chǎn)品公司