專利名稱：用于治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)的nAChRα7激動(dòng)劑和nAChRα7拮抗劑的制作方法
用于治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)的nAChRa 7激動(dòng)劑和nAChR a 7拮抗劑相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本申請(qǐng)要求于2010年6月25日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)枮?1/358，481的權(quán)益，其在此通過引用全部并入。背景炎性腸病(IBD)，包括但不限于克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)，是慢性腸疾患，其僅在西方國家中就影響大約340萬人并且導(dǎo)致巨大的患病和健康護(hù)理花費(fèi)。在過去的幾十年，科學(xué)家和臨床醫(yī)生被如下觀察結(jié)果所困惑:吸煙的煙草產(chǎn)物對(duì)UC的進(jìn)程有有益的影響并且對(duì)CD的進(jìn)程有有害的影響。但是，吸煙和煙堿在UC和CD的進(jìn)程中的作用并沒有被很好地理解。概述在一些方面，本公開主題提供在有相應(yīng)治療需要的受治療者中治療炎性腸病(IBD)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)所述受治療者中至少一種細(xì)胞的nAChRa 7活性的量對(duì)所述受治療者施用煙堿型乙酰膽堿受體a7(nAChRa7)拮抗劑，借此所述至少一種細(xì)胞中nAChRa 7活性的調(diào)節(jié)治療所述受治療者的IBD。在特別的方面，IBD包括克羅恩病(CD)。在其他方面，本公開主題提供在有相應(yīng)治療需要的受治療者中治療炎性腸病(IBD)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)所述受治療者中至少一種細(xì)胞的nAChRa 7活性的量對(duì)受治療者施用nAChRa 7激動(dòng)劑，借此所述至少一種細(xì)胞中nAChRa 7活性的調(diào)節(jié)治療受治療者的IBD。在特別的方面，IBD包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。在另外的方面，本公 開主題提供用于調(diào)節(jié)至少一種免疫細(xì)胞類型中的nAChRa 7活性的方法，所述方法包括使至少一種免疫細(xì)胞類型與以有效調(diào)節(jié)至少一種免疫細(xì)胞類型中的nAChR a 7活性的量的nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑接觸。在其他方面，本公開主題提供用于減少在有慢性胃腸道炎癥的受治療者中發(fā)展結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)一種或多種胃腸道免疫細(xì)胞中nAChRa 7活性的量對(duì)所述受治療者施用nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑，借此調(diào)節(jié)nAChR a 7活性改變?cè)谝环N或多種胃腸道免疫細(xì)胞中的炎癥反應(yīng)，因此減少發(fā)展結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。在一些方面，本公開主題提供用于鑒定在表達(dá)nAChR a 7的至少一種細(xì)胞中調(diào)節(jié)nAChRa 7活性的化合物或劑的方法，所述方法包括:(i)使表達(dá)nAChRa 7的至少一種細(xì)胞與候選化合物或劑接觸；Qi)確定與所述候選化合物或劑接觸的表達(dá)nAChRa 7的至少一種細(xì)胞中nAChR a 7的活性；(iii)確定沒有與所述候選化合物或藥劑接觸的表達(dá)nAChR a 7的至少一種對(duì)照細(xì)胞中nAChRa 7的活性；和(iv)對(duì)比與所述候選化合物或劑接觸的至少一種細(xì)胞中nAChRa 7的活性和至少一種對(duì)照細(xì)胞中nAChRa 7的活性；其中在與所述候選化合物或劑接觸的至少一種細(xì)胞中的nAChR a 7活性與至少一種對(duì)照細(xì)胞中的nAChR a 7活性的差異鑒定在至少一種細(xì)胞中調(diào)節(jié)nAChRa 7活性的候選化合物或劑。仍然在其他方面，本公開主題提供用于預(yù)測(cè)對(duì)受害于由nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)的異常水平導(dǎo)致的IBD的受治療者施用nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑的治療效果的方法，其中nAChR a 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑是nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑，所述方法包括:(a)測(cè)量在施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之前受治療者的組織或細(xì)胞中nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平；(b)以有效改變受治療者的組織或細(xì)胞中nAChRa 7基因或蛋白表達(dá)水平的量對(duì)受治療者施用nAChR a 7調(diào)節(jié)劑；(C)測(cè)量來自于施用nAChR a 7調(diào)節(jié)劑之后的受治療者的組織或細(xì)胞中的nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平；和(d)確定施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之后的組織或細(xì)胞中nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平相比較于施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之前的組織或細(xì)胞中的基因或蛋白表達(dá)水平的改變；其中在組織或者細(xì)胞中的nAChR a 7基因或蛋白表達(dá)水平的改變預(yù)測(cè)nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑對(duì)受害于IBD的受治療者的治療效果。在一些方面，本公開主題提供藥物組合物，其包括有效調(diào)節(jié)nAChR a 7的功能以治療或預(yù)防有相應(yīng)治療需要的受治療者的炎性腸病(IBD)的量的煙堿型乙酰膽堿受體a 7 (nAChR a 7)的特異性激動(dòng)劑或特異性拮抗劑。本公開主題的某些方面已在上文中陳述，其被本公開主題全部或部分地提及；當(dāng)與下文中最佳描述的所附實(shí)施例和附圖聯(lián)系起來時(shí)，其他方面將隨著描述進(jìn)行而變得明顯。附圖簡述已用一般術(shù)語這樣描述了本公開主題，現(xiàn)在將參考附圖，附圖不一定按比例繪制，并且其中:

圖1顯示來自微陣列譜的代表性的分級(jí)聚類(hierarchical clustering),顯示IBD中不同的表達(dá)模式。每一行表不基因，且每一列表不獨(dú)立的生物樣品。免疫細(xì)胞中基因表達(dá)圖譜的聚類分析顯示了差異模式，其被聚類為如下顯示的四組:正常(N)，CD，UCjPE常(N)。陰影表示下調(diào)或者過度表達(dá)，而黑色表示類似的表達(dá)；圖2顯示由DFA鑒定的10個(gè)基因的判別潛力。DFA被用于選擇最大判別變量(maximal discriminatory variable),并且UC、⑶和健康對(duì)照被分組為3個(gè)不同的位置；圖3顯示由基因微陣列鑒定并由QRT-PCR確認(rèn)的nAChRa 7在UC、⑶和未受影響的對(duì)照中的差異基因表達(dá)模式。左圖:微陣列數(shù)據(jù):來自免疫細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)化的nAChRa 7表達(dá)水平描述在UC和CD中獨(dú)特的差異基因表達(dá)模式。N:嗜中性粒細(xì)胞；P =PMBC ；Ctrl:對(duì)照。右圖=QRT-PCR對(duì)微陣列結(jié)果的驗(yàn)證。QRT-PCR確認(rèn)了 nAChRa 7的基因表達(dá)結(jié)果和來自PBMC的五(5)個(gè)其他選擇的基因的基因表達(dá)結(jié)果(數(shù)據(jù)未顯示)；圖4證明在⑶相對(duì)于UC的淋巴細(xì)胞中nAChRa 7介導(dǎo)不同的免疫調(diào)節(jié)圖譜。顯示了來自于UC和⑶中處理過的轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞相比于未處理的細(xì)胞的上清液中的細(xì)胞因子圖譜的比例(至少三個(gè)類似實(shí)驗(yàn)中的一個(gè))。處理包括煙堿[2μΜ(+)和20μΜ(++)]以及在添加煙堿之前使用選擇性拮抗劑α -環(huán)蛇毒素(a -bungarotoxin) [2nM(+)和20nM(++)]的預(yù)處理。A圖:細(xì)胞因子IL-10和細(xì)胞因子/趨化因子IL-8。圖B:趨化因子。對(duì)于所有未受影響的對(duì)照，加入煙堿或α -環(huán)蛇毒素自身表現(xiàn)了非顯著性的細(xì)胞因子/趨化因子的改變(未顯示)。Nic:煙堿。Antg:選擇性拮抗劑α -環(huán)蛇毒素；圖5顯示煙堿和nAChR α 7特異性激動(dòng)劑對(duì)“⑶樣”TNBS結(jié)腸炎和“UC樣"DSS結(jié)腸炎的進(jìn)程的相反的效果。這些IBD小鼠模型被認(rèn)為是“CD樣”或“UC樣”不僅因?yàn)樗鼈兊募膊”硇头謩e與人類CD或UC相類似， 而且因?yàn)樗鼈兊募?xì)胞因子圖譜與人類CD或UC相類似，尤其是TNBS或DSS模型的慢性模型，如前所述的(Alex等人，2009 IBD, 15 (3)，341-352)。這些實(shí)驗(yàn)性小鼠結(jié)腸炎模型如前所述的產(chǎn)生(Alex等人，2009 IBD, 15 (3)，341-352)。乙醇:TNBS 的對(duì)照；Nic:煙堿；a 7Ag:nAChR α 7 激動(dòng)劑 PNU282987 (PNU)；圖6顯示了 nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)于UC樣DSS結(jié)腸炎不僅是預(yù)防性的，而且是治療性的。在急性模型中，小鼠用或不用nAChR a 7激動(dòng)劑藥物處理，持續(xù)5天。然后給予DSS，持續(xù)7天。評(píng)價(jià)臨床活動(dòng)性評(píng)分(clinical activity score)。在慢性模型中，小鼠被給予DSS，持續(xù)7天，然后給予七天的水。這些DSS-水的循環(huán)被繼續(xù)重復(fù)再3次。在第四個(gè)循環(huán)的末尾，甚至沒有DSS下，小鼠發(fā)展為慢性結(jié)腸炎，其有大約3的臨床活動(dòng)性評(píng)分。在這時(shí)，nAChRa 7激動(dòng)劑被給予一組小鼠(one set of mice)并且跟蹤所有小鼠11天。在急性模型和慢性模型中，疾病(結(jié)腸炎)基本上消失并且小鼠看起來與對(duì)照小鼠(無DSS處理)沒有差別。箭頭指示在慢性模型中nAChRa 7激動(dòng)劑處理的開始(第53天)；圖7顯示MLA藥物(nAChR a 7特異性拮抗劑)的預(yù)處理可以有效預(yù)防小鼠發(fā)展⑶樣TNBS結(jié)腸炎。用PBS (對(duì)照)、或煙堿、PNU ( a 7激動(dòng)劑)、或MLA藥物通過腹腔注射每天一次持續(xù)5天預(yù)處理C57BL/6小鼠。然后使用TNBS (在50%乙醇中)或僅50%乙醇作為對(duì)照誘導(dǎo)小鼠發(fā)展結(jié)腸炎，持續(xù)7天。每天監(jiān)控所有小鼠的疾病活動(dòng)。在使用MLA(a7拮抗劑+TNBS)預(yù)處理的TNBS處理的小鼠中，疾病(結(jié)腸炎)基本上消失。這些MLA處理的小鼠看起來與無TNBS的對(duì)照小鼠(乙醇)沒有差別。相反，使用煙堿(煙堿+TNBS)或PNU ( a 7激動(dòng)劑+TNBS)預(yù)處理的小鼠，與僅TNBS處理(TNBS)相比，顯示均沒有治療性益處，甚至惡化疾病活動(dòng)。圖8顯示使用nAChR a 7特異性拮抗劑(Antg ；MLA)處理有效逆轉(zhuǎn)慢件CD樣TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的疾病進(jìn)程。慢性TNBS結(jié)腸炎模型的誘導(dǎo)如前所述(Alex等人，2009IBD，15 (3)，341-352) 。拮抗劑處理的結(jié)腸炎小鼠的DAI與對(duì)照小鼠(使用乙醇(E-OH)處理)相似。nAChRa 7激動(dòng)劑(Ag5PNU)和煙堿顯示無顯著性效果。使用ANOVA和Tukey檢驗(yàn)(Tukeyj s test)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；p < 0.05。N ^ 12每組；圖9顯示使用nAChR a 7拮抗劑的處理逆轉(zhuǎn)TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥:(A)來自于具有處理的慢性TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的小鼠的結(jié)腸是更短的，發(fā)炎的，并充滿了血性和軟的糞便；(A-c)，而來自于拮抗劑處理的結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸是完全正常的外觀(A-d)，與對(duì)照小鼠(A-a&b)相比幾乎沒有差別；(B)使用H&E染色進(jìn)行的組織學(xué)分析顯示拮抗劑處理的TNBS小鼠有正常的結(jié)腸粘膜并且?guī)缀鯖]有炎癥跡象(B-c)，如在未經(jīng)TNBS處理過的小鼠中看到的一樣(B-b)。顯示了至少十個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的代表；圖10顯示nAChR α 7特異性激動(dòng)劑和拮抗劑都對(duì)nAChR α 7缺陷性小鼠的DSS或TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎無任何治療性效果，表明這些藥物的特異性。野生型(WT)nAChRa 7缺陷性(nAChRa 7敲除；a 7K0)小鼠，均以C57B/6為背景，使用DSS(A)或TNBS(B)誘導(dǎo)發(fā)展結(jié)腸炎。盡管在野生型小鼠中激動(dòng)劑(PNU)和拮抗劑(MLA)分別有效預(yù)防DSS和TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎，在nAChR a 7K0小鼠中它們對(duì)任何一種結(jié)腸炎都完全沒有展現(xiàn)出任何效果。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步說明這些激動(dòng)劑和拮抗劑對(duì)nAChRa 7的靶特異性；測(cè)量值中的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異通過ANOVA和Tukey檢驗(yàn)以5%顯著性水平評(píng)價(jià)。N彡6每組；圖11顯示經(jīng)歷了迷走神經(jīng)切斷術(shù)的小鼠完全喪失了 nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)結(jié)腸炎發(fā)展的保護(hù)作用:(A)在迷走神經(jīng)切斷術(shù)之前和之后:基于在之前的報(bào)道(Verma-Gandhu等人，Gut 2007:56:358-364)基礎(chǔ)上修改的方案進(jìn)行迷走神經(jīng)切斷術(shù)。簡單而言，C57B/6小鼠(7周齡)的胃食管連接處(以白色箭頭標(biāo)出)的左迷走神經(jīng)分支(大約5-10mm;以雙頭箭頭表示)在顯微鏡放大下(IOX)被使用電灼術(shù)切斷(S，胃；E，食管)。手術(shù)開口使用可吸收的縫合線縫合。假手術(shù)包括除了迷走神經(jīng)切斷以外同樣的步驟(僅暴露)。給予經(jīng)歷了迷走神經(jīng)切斷術(shù)的小鼠7天的時(shí)間恢復(fù)。經(jīng)歷了手術(shù)(迷走神經(jīng)切斷術(shù)和假手術(shù))的所有30只小鼠100%存活而沒有并發(fā)癥，并且恢復(fù)至正常。然后以IP給予小鼠nAChRa7激動(dòng)劑，持續(xù)5天，之后進(jìn)行DSS處理(7天)以誘導(dǎo)結(jié)腸炎；(B)經(jīng)歷了迷走神經(jīng)切斷術(shù)的小鼠(迷走神經(jīng)切斷術(shù))沒有展現(xiàn)nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)結(jié)腸炎的任何保護(hù)性效果，而經(jīng)歷了假手術(shù)的小鼠(假手術(shù))反應(yīng)與沒有經(jīng)歷任何手術(shù)的小鼠反應(yīng)一樣良好(見圖5和6)。測(cè)量值的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異使用Wilcoxon鐵和檢驗(yàn)(Wilcoxon rank-sums test) (P < 0.05)評(píng)價(jià)。N彡5每組；圖12顯示nAChR α 7激動(dòng)劑對(duì)于GPX 1/2DK0結(jié)腸炎有治療效果。缺乏兩個(gè)谷胱甘肽過氧化物酶(GPX) Gpxl和Gpx2的小鼠[Gpxl/2雙敲除(DKO)小鼠]在混合的C57BL/6和129Sl/SvJ(B6.129)基因背景下有回結(jié)腸炎的傾向。評(píng)價(jià)臨床活動(dòng)性評(píng)分。對(duì)照(來自于混合的C57BL/6和129Sl/SvJ(B6.129)基因背景)未發(fā)展嚴(yán)重的結(jié)腸炎，而GPX1/2 DKO小鼠被發(fā)現(xiàn)發(fā)展臨床活動(dòng)性評(píng)分大約為9的嚴(yán)重結(jié)腸炎。在用nAChRa 7激動(dòng)劑處理的GPX1/2 DKO小鼠中，疾病(結(jié)腸炎)的發(fā)展顯著減少。然而使用nAChR a 7拮抗劑或鹽水處理的GPX1/2 DKO小鼠在結(jié)腸炎評(píng)分上沒有展現(xiàn)顯著性改變；圖13 顯不判別功能分析(Discriminant Functional Analysis) (DFA)鑒定細(xì)胞因子/趨向因子的變量，其可以充分的區(qū)分一個(gè)疾病類型與其他疾病類型以及區(qū)分治療響應(yīng)者(therapeutic responder)與對(duì)照。DSS誘導(dǎo)的和TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎形成不同的組，其在圖譜上與對(duì)照相遠(yuǎn)離，并且彼此相遠(yuǎn)離。另一方面，用激動(dòng)劑處理的DSS誘導(dǎo)的小鼠和用拮抗劑處理的TNBS誘導(dǎo)的小鼠在圖譜上非?？拷趯?duì)照和彼此——在各自藥物的有效處理后，細(xì)胞因子圖譜從疾病狀態(tài)向正常狀態(tài)清楚的轉(zhuǎn)移；和圖14顯示強(qiáng)迫游泳 實(shí)驗(yàn)顯示nAChR α 7激動(dòng)劑(PNU)對(duì)小鼠行為沒有可測(cè)量的效果。通過在圓柱形容器中強(qiáng)迫小鼠游泳6分鐘進(jìn)行測(cè)試。小鼠被分為4組:(a)對(duì)照；(b)接受IP激動(dòng)劑的小鼠；(c)用DSS誘導(dǎo)的小鼠；和(d)接受IP激動(dòng)劑并用DSS誘導(dǎo)的小鼠(]1 = 6每組)。在25°C有13cm水的容器中不動(dòng)(immobility)的總持續(xù)時(shí)間被評(píng)分。不動(dòng)被定義為當(dāng)小鼠在水中停止掙扎并保持漂浮靜止，僅做出維持其頭在水面上所必需的動(dòng)作時(shí)。第O天和第7天表示DSS處理的天。詳細(xì)描述本公開主題現(xiàn)在將在下文根據(jù)附圖被更完全的描述，在附圖中顯示本公開主題的一些但不是所有實(shí)施方案。貫穿全文類似的數(shù)字指相似的要素。本公開主題可以以很多不同形式被實(shí)施并不應(yīng)該解釋為限于本文陳述的實(shí)施方案；反而，提供這些實(shí)施方案以使本公開滿足適用的法律要求。的確，受益于前述描述和相關(guān)附圖中呈現(xiàn)的教導(dǎo)的本公開主題所屬領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)想到本文陳述的本公開主題的很多修改和其他實(shí)施方案。因此，要理解，本公開主題不受限于所公開的具體的實(shí)施方案，并且旨在將修改和其他實(shí)施方案包括在所附加權(quán)利要求的范圍內(nèi)。1.用于治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)的nAChR α 7激動(dòng)劑和nAChR α 7拮抗劑在一些實(shí)施方案中，本公開主題鑒定了煙堿型乙酰膽堿受體α 7 (nAChRa 7)是調(diào)節(jié)吸煙(煙堿)對(duì)CD相比于UC的相反效果的主要的調(diào)節(jié)因子。因此，本公開主題將nAChRa 7鑒定為IBD的新治療靶。本公開主題提供nAChR a 7的特異性激動(dòng)劑和拮抗劑，以及它們作為用于治療和管理UC和CD的治療劑的用途。A.在IBD中吸煙(煙堿)的作用炎性腸病(IBD)是一種流行的慢性進(jìn)行性多因子的胃腸(GI)道炎性疾患，其表現(xiàn)在兩個(gè)不同的常見實(shí)體中:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(⑶)。Xavier R.J.，PodolskyD.K，“Unravelling the pathopenesis of inflammatory bowel disease，，，Nature 488:427-434(2007)。正如本文使用的短語“炎性腸病”或“IBD”旨在包括兩種影響胃腸道的慢性疾病，稱為克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。術(shù)語克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎的含義是被醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員所普遍接受的定義。僅在美國就有超過一百萬被診斷的患者，IBD在西方人口中有大約0.2%的患病率并且有大量的患病和健康護(hù)理花費(fèi)。Loftus E.V.，Jr.，“°C linical epidemiologyof inflammatory bowel disease !Incidence，prevalence, and environmentalinfluences, ”Gastroenterology 126:1504-1517 (2004)。結(jié)腸的 IBD 的主要并發(fā)癥是增加的發(fā)展結(jié)直腸癌(CRC)的風(fēng)險(xiǎn)，主要是由于慢性GI炎癥。Shanahan F.，“Review article:colitis-associated cancer—time for new strategies 1，，，Aliment Pharmacol Ther18 Suppl 2:6-9(2003) ； Campbe 11 B.J.，Yu LG.,Rhodes J.M.,“Altered glycosylationin inflammatory bowel disease:a possible role in cancer development，，，GlycoconjJ 18:851-858(2001)。有趣的是，吸煙對(duì)UC的進(jìn)程有有益的影響，并且對(duì)CD的進(jìn)程有有害的影響。Birrenbach T.，Bocker U.，“ Inflammatory bowel disease and smoking:areview of epidemiology, pathophysiology, and therapeutic implication，，，InfIammBowel Dis 10:848-85 9(2004) ；Rubin D.T.，Hanauer S.B.，“Smoking and inflammatorybowel disease，’’Eur J Gastroenterol Hepatol 12:855-862(2000) ；Thomas G.A.，Rhodes J., Ingram J.R.，“Mechanisms of disease:nicotine—a review of its actionsin the context of gastrointestinal disease，，，Nat Clin Pract GastroenterolHepatol 2:536-544 (2005)；和 Ingram J.R.，Rhodes J.，Evans B.K.，Thomas G.A.，“Preliminary observations of oral nicotine therapy for inflammatory boweldisease:an open-label phase 1-1I study of tolerance，，，InfIamm Bowel Dis 11:1092-1096(2005)。潰瘍性結(jié)腸炎(UC)已經(jīng)被鑒定為主要是非吸煙者和/或曾吸煙者的疾病，并且，盡管吸煙的開始保護(hù)和改善UC的進(jìn)程，但吸煙的終止惡化UC的進(jìn)程。盡管煙堿，吸煙中的活性部分，作為治療在臨床試驗(yàn)中展示了對(duì)UC的顯著臨床療效，但是其應(yīng)用被可觀的耐受性變化和副作用所限制。相反，大約72%的CD患者是吸煙者，而且，盡管吸煙增加了 CD的風(fēng)險(xiǎn)并且惡化了 CD的進(jìn)程使其達(dá)到更嚴(yán)重的形式(結(jié)構(gòu)化或者瘺管化)，但是吸煙的終止顯著改善 CD。Birrenbach T.，Bocker U.，‘‘Inflammatory bowel disease and smoking:a review of epidemiology,pathophysiology,and therapeutic implication，，，InfIammBowel Dis 10:848-859(2004)。吸煙在CD和UC上的相反效果的分子機(jī)制數(shù)十年來仍保持神秘。
B.煙堿型乙酰膽堿受體(nAChR)煙堿已被闡明通過其對(duì)nAChR的活性觸發(fā)炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，nAChR是一個(gè)配體門控離子通道家族，該家族由多種同源五聚體(homopentameric)或異源五聚體(heteropentameric)受體亞基形成，其由兩個(gè)亞家族9 α ( α 2- α 10)和3β (β 2-β 4)組成并在神經(jīng)系統(tǒng)和非神經(jīng)組織(如免疫細(xì)胞和腸上皮細(xì)胞)中均有表達(dá)。Gaimairi Α.，Moretti M.,Riganti L ,Zanardi A.,Clementi F.，Gotti C.，“Regulation of neuronalnicotinic receptor traffic and expression，，，Brain Res Rev 55:134-143(2007)。煙堿是對(duì)UC相比于⑶起相反效果的主要的藥理成分。Thomas G.A.，Rhodes J.，IngramJ.R.，“Mechanisms of disease:nicotine—a review of its action in the context ofgastrointestinal disease，，^Nat Clin Prac Gastroenterol Hepatol 2:536-544(2005)。煙堿在UC治療中的臨床療效表明NAChR是基于煙堿的治療的最有可能的靶。然而其臨床應(yīng)用，被可觀的耐受性的變化和副作用所限制，這很可能是因?yàn)闊焿A對(duì)nAChR的配體特異性。近期研究表明，煙堿特別地通過抑制巨噬細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生而充當(dāng)抗炎劑。Gallowitsch-Puerta M., Tracey K.J., " Immunologic role of thecholinergic ant1-1nflammatory pathway and the nicotinic acetylcholine alpha7 receptor, " Ann N Y Acad Sci 1062:209-219(2005)。這個(gè)現(xiàn)象被定義為“膽堿能抗炎通路”，其中神經(jīng)肽作為神經(jīng)免疫軸的分子基礎(chǔ)，該通路通過自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)向免疫系統(tǒng)提供抗炎反饋。Tracey K.J.，" The inflammatory reflex，" Nature 420:853-859(2002)。這個(gè)通路已知通過傳出迷走神經(jīng)從神經(jīng)膽堿能抗炎信號(hào)傳遞并且受到nAChR的特異性調(diào)節(jié)；特別是免疫細(xì)胞上表達(dá)的nAChRa 7。Wang H.，Yu M.，Ochani M.，Amelia C.A.，Tanovic Μ.，Susarla S.，Li J.H.，Wang H.，Yang H.，Ulloa L，Al-AbedY.，Czura C.J.，Tracey K.J.，" Nicotinic acetylcholine receptor alpha7 subunitis an essential regulator of inflammation，" Nature 421:384-388 (2003) ；de JongeW.J.，van der Zanden E.P.，The F.0.，Bijlsma M.F.，van Westerloo D.J.，BenninkR.J.，Berthoud H.R.，Uematsu S.，Akira S.，van den Wijngaard R.M.，BoeckxstaensG.E.， " Stimulation of the vagus nerve attenuates macrophage activation byactivating the Jak2_STAT3 signaling pathway, " Nat Immunol 6:844-851(2005)；Floto R.A.，Smith K.G.，" The vagus nerve, macrophages，and nicotine，" Lancet361:1069-1070(2003) ；Ghia J.E.，Blennerhassett P.，Kumar-Ondiveeran H.，VerduE.F., Collins S.Μ., " The vagus nerve:a tonic inhibitory influence associatedwith inflammatory bowel disease in a murine model，" Gastroenterology 131:1122-1130(2006)。nAChR a 7 是近年來最被廣泛研究的 nAChR。Mazurov A.，Hauser T.，Miller
C.Η., " Selective alpha7 nicotinic acetylcholine receptor ligands，" Curr MedChem 13:1567-1584(2006)。最近增加了對(duì)nAChR a 7配體和它們的用途的興趣，并且這些劑中很多在進(jìn)行臨床試驗(yàn)(但不是針對(duì)IBD)。這些進(jìn)展提供鑒定和設(shè)計(jì)/合成nAChRa 7特異性藥物的分子基礎(chǔ)。C.代表性實(shí)施方案
本公開主題鑒定了 nAChR α 7作為調(diào)節(jié)吸煙(即煙堿暴露)對(duì)⑶相對(duì)于UC的相反的效果的主要調(diào)節(jié)因子。首先，通過來自于IBD患者的淋巴細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞的基因表達(dá)圖譜發(fā)現(xiàn)煙堿型乙酰膽堿受體α7亞型(nAChRa 7)，相比于未受影響的對(duì)照而言，在克羅恩病(CD)患者中顯著過度表達(dá)，但在潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者中被下調(diào)。不期望受到任何一種具體理論束縛，假設(shè)吸煙可能通過nAChR a 7對(duì)UC相比于⑶導(dǎo)致相反的效果。為檢驗(yàn)此假設(shè)，使用非特異性配體(煙堿)和若干特異性配體(包括PNU 282987 (PNU)，GTS-21，和MLA，如下文所定義的)以檢測(cè)它們對(duì)小鼠IBD模型中UC樣DSS結(jié)腸炎和CD樣TNBS結(jié)腸炎的效果，這些小鼠模型是在基本上所有IBD的治療性藥物的臨床前研究中最普遍使用的動(dòng)物模型。在一些實(shí)施方案中，本公開主題闡明了 nAChRa 7激動(dòng)劑PNU282987 (N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛_3_基]-4-氯苯甲酰胺)和3_(2，4_ 二甲氧基苯亞甲基)假木賊因(3_(2,4-dimethoxybenzylidene) anabaseine,GTS-21,本文也被稱為DMXB-A)對(duì)UC樣結(jié)腸炎是高度有效的治療藥，但惡化CD樣結(jié)腸炎，該觀察結(jié)果與吸煙對(duì)人類UC相比于⑶的效果極其類似。另一方面，在其他的實(shí)施方案中，本公開主題闡明了 nAChRa 7拮抗劑甲基牛扁亭(MLA)是對(duì)CD樣結(jié)腸炎高度有效的治療劑，但對(duì)UC樣結(jié)腸炎無效果。再次重申，不期望受到任何一種具體理論束縛，相信這些激動(dòng)劑和拮抗劑通過調(diào)節(jié)抗炎細(xì)胞因子和促炎細(xì)胞因子的作用而發(fā)揮作用。例如，激動(dòng)劑能夠刺激抗炎細(xì)胞因子，而抑制促炎細(xì)胞因子。而且，本公開主題闡明了 PNU和MLA的效果是特異性通過nAChR a 7的，因?yàn)槠湫Ч诒徽T導(dǎo)產(chǎn)生IBD的nAChRa 7缺陷小鼠中沒有被觀察到。因此，本公開主題不僅表征吸煙對(duì)IBD的效應(yīng)，而且鑒定了 nAChRa 7作為用于⑶和UC的治療干預(yù)的分子靶。更特別地，在一些實(shí)施方案中，本公開主題提供了用于治療有相應(yīng)治療需要的受治療者的炎性腸病(IBD)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)所述受治療者中至少一種細(xì)胞中的nAChR a 7的活性的量對(duì)受治療者施用煙堿型乙酰膽堿受體a 7 (nAChR a 7)拮抗劑，借此至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性的調(diào)節(jié)治療受治療者的IBD。在一些實(shí)施方案中，IBD包括克羅恩病(⑶)。在其他實(shí)施方案中，本公開主題提供用于治療有相應(yīng)治療需要的受治療者的炎性腸病(IBD)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)所述受治療者中至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7的活性的量對(duì)受治療者施用煙堿型乙酰膽堿受體a7(nAChRa7)激動(dòng)劑，借此至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性的調(diào)節(jié)治療受治療者的IBD。在一些實(shí)施方案中，IBD包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。術(shù)語活性劑的“有效量”指引出期望的生物學(xué)反應(yīng)所必需的量。正如將被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所了解的，劑的有效量可能隨各種因素而改變，這些因素例如期望的生物學(xué)終點(diǎn)，被遞送的劑，藥物組合物的組成，靶組織或細(xì)胞，諸如此類。更特別地，術(shù)語“有效量”指足以產(chǎn)生期望效果的量，所述期望效果例如減少或改善嚴(yán)重性、持續(xù)時(shí)間、進(jìn)程，或疾病、病癥或疾患(例如與喪失細(xì)胞功能相關(guān)的疾病，病癥或疾患)的發(fā)作或其一個(gè)或多個(gè)癥狀；預(yù)防疾病、病癥或疾患的進(jìn)展；導(dǎo)致疾病、病癥或疾患的消退；預(yù)防與疾病、病癥或疾患有關(guān)的癥狀的復(fù)發(fā)、發(fā)展、發(fā)作或進(jìn)展；或增強(qiáng)或改善另一種治療的預(yù)防或治療效果。根據(jù)本公開方法，化合物的有效量的范圍可以是，例如從約0. 0Olmg/kg到約1000mg/kg，或在某些實(shí)施方案中，從約0.0lmg/kg到約100mg/kg,或在某些實(shí)施方案中，從約0.lmg/kg到約50mg/kg。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員意識(shí)到的，有效劑量還隨如下而變化:治療的疾患，施用途徑，賦形劑使用，受治療者的年齡和性別，和與其他治療性治療(例如使用其他藥劑)共同使用的可能性。應(yīng)了解，為到達(dá)期望生物學(xué)反應(yīng)所需要的化合物的量可能與化合物對(duì)于其他目的有效的量不同。正如本文使用的，術(shù)語“激動(dòng)劑”被定義為刺激或誘導(dǎo)nAChR α 7活性的物質(zhì)。術(shù)語“拮抗劑”被定義為阻斷或抑制nAChRa 7活性的物質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，nAChR a 7受體激動(dòng)劑或拮抗劑包括小分子抑制劑，其包括但不限于如下提供的示例性的激動(dòng)劑和拮抗齊U。但是，nAChRa 7活性可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法調(diào)節(jié)，包括但不限于生物劑例如特異性抗體的使用，通過基因療法增加基因表達(dá)，或通過RNAi抑制基因表達(dá)。在特別的實(shí)施方案中，選擇性的nAChR a 7激動(dòng)劑選自由以下組成的組:PNU 282987 (N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-氯苯甲酰胺)、MEM3454、PH-399733、AR-R1779、SSR180711A(4-溴苯基 1，4 二氮雜雙環(huán)(3.2.2)壬烷-4-羧酸酯，單鹽酸鹽(4-bromophenyl 1,4diazabicyclo(3.2.2)nonane-4-carboxylate,monohydrochloride))、ABT_418 (3-甲基 _5_ [ (2S)-1-甲基吡咯烷 _2_ 基]-1，2-噁唑)、甲鵬可卡因(cocaine methiodide)、3-2,4_二甲氧基苯亞甲基假木賊因(GTS-21或DMXB-A)、
3-(4-羥基苯亞甲基)假木賊因、3-(4-甲氧基苯亞甲基)假木賊因、3-(4-氨基苯亞甲基)假木賊因、3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)假木賊因、3-(4-甲氧基-2-羥基苯亞甲基)假木賊因、反式-3-亞肉桂基假木賊因、反式-3-(2-甲氧基-亞肉桂基)假木賊因、和反式-3-(4-甲氧基亞肉桂基)假木賊因。在其他實(shí)施方案中，選擇性的nAChRa 7激動(dòng)劑選自由以下組成的組:N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥基苯氧基)苯甲酰胺、N_[ (3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3- 基]-4-(4-乙酰氨基苯氧基)苯甲酰胺、N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]羊 _3_ 基]_4_ (苯基硫燒基苯氧基)苯甲酸胺(N_[ (3R)-l-azabicyclo [2.2.2]oct-3-yl]-4-(phenylsulfanylphenoxy) benzamide)、N_[ (3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4_(3_氯苯磺?；?苯甲酰胺、和(1-氮雜_雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基)氨基甲酸1- (2-氟苯基)-乙酯。在下列專利申請(qǐng)中描述了適用于本公開主題的選擇性nAChRa7激動(dòng)劑:PCT/US2006/022136 ；PCT/US1998/17850 ；PCT/EP2007/005724；W099/62505 ；W099/03859 ；W097/30998 ；W001/36417 ；W002/15662 ；W002/16355 ；W002/16356 ；W002/16357 ；W002/16358 ；W002/17358,美國專利申請(qǐng)公開第 2006/0166974 號(hào)；2006/0128676 號(hào)；2005/0282823 號(hào)；2005/0165047 號(hào)；2004/0044026 號(hào)；2004/0229868 號(hào)，以及 MazurovA.，Hauser Τ., Miller C.H.,“Selective alpha7 nicotinic acetylcholine receptorligands, ” Curr Med Chem 13:1567-1584 (2006),上述每一個(gè)均被通過引用全部并入本文。在某些實(shí)施方案中，nAChR α 7激動(dòng)劑選自由nAChR α 7特異性抗體、nAChR α 7特異性抑制性RNA或其組合所組成的組。在一些實(shí)施方案中，選擇性nAChRa 7拮抗劑包括a-環(huán)蛇毒素和甲基牛扁亭(MLA)。在下列文獻(xiàn)中描述了另外的選擇性nAChRa 7拮抗劑的實(shí)例:Mazurov A.,Hauser Τ., Miller C.Η.,“Selective alpha7 nicotinic acetylcholine receptorligands, ^Curr Med Chem 13:1567-1584(2006)，其在此通過引入全部并入。在某些實(shí)施方案中，nAChR α 7拮抗劑選自由nAChR α 7特異性抗體、nAChR α 7特異性抑制性RNA或其組合組成的組。在其他實(shí)施方案中，nAChRa 7受體的配體包括但不限于二氮雜雙環(huán)烷衍生物，例如如 W02005/028477 中描述的；螺環(huán)奎寧環(huán)醚(spirocyclic quinuclidinic ether)衍生物，例如如W02005/066168中描述的；稠合的雙環(huán)雜環(huán)取代的奎寧環(huán)衍生物，例如如美國專利申請(qǐng)公開第 US2005/0137184 號(hào)；US2005/0137204 號(hào)；和 US2005/0245531 號(hào)中描述的；
3-奎寧環(huán)基氨基-取代的聯(lián)芳衍生物，例如如W02005/066166中描述的；3_奎寧環(huán)基雜原子橋接的聯(lián)芳衍生物，例如如W02005/066167中描述的；和氨基取代的三環(huán)衍生物,例如如W02005/077899中描述的，上述的每一個(gè)都被通過引用全部并入。貫穿說明書和權(quán)利要求書，給定的化學(xué)式或名稱應(yīng)該包括所有互變異構(gòu)體、同源化合物(congener)、以及光學(xué)和立體異構(gòu)體，和其中存在這種異構(gòu)體和混合物的消旋混合物。在一些實(shí)施方案中，治療包括預(yù)防受治療者的IBD的發(fā)展或預(yù)防受治療者的IBD的進(jìn)展。術(shù)語“治療(treating)”或“治療(treatment) ”及其語法衍生物旨在包括疾病狀態(tài)和病癥的治療、管理、預(yù)防和治愈。術(shù)語“受治療者”指生物體、組織或細(xì)胞。受治療者可以包括用于醫(yī)學(xué)目的的人類受治療者，醫(yī)學(xué)目的例如現(xiàn)存病癥或疾病的診斷和/或治療，或預(yù)防病癥或疾病的發(fā)作的預(yù)防性治療，或用于醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)目的或發(fā)育目的的動(dòng)物受治療者。受治療者還可以包括來自于組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、器官復(fù)制、干細(xì)胞生產(chǎn)諸如此類的樣品材料。合適的動(dòng)物受治療者包括哺乳動(dòng)物和禽類。本文使用的術(shù)語“哺乳動(dòng)物”包括但不限于靈長類，例如人，猴子，猿，和諸如此類；牛類，例如牛，閹牛(ox)，和諸如此類；綿羊類(ovines)，例如綿羊(sheep)和諸如此類；山羊類(caprines),例如山羊(goat)和諸如此類；豬類，例如豬，肉豬(hog)和諸如此類；馬類，例如馬，驢，斑馬和諸如此類；貓類，包括野生和家養(yǎng)的貓；犬類，包括狗；兔類，包括家兔(rabbit),野兔(hare)和諸如此類；和嚙齒類,包括小鼠,大鼠,和諸如此類。本文使用的術(shù)語“禽類”包括但不限于，雞，鴨，鵝，鵪鶉，火雞和野雞。優(yōu)選地，受治療者為哺乳類動(dòng)物或哺乳類細(xì)胞。更優(yōu)選地，受治療者是人類或人類細(xì)胞。人類受治療者包括但不限于，胎兒，新生兒，嬰兒，青少年，和成人受治療者。而且，“受治療者”可以包括受害于或懷疑正受害于病癥或疾病的患者。因此，術(shù)語“受治療者”和“患者”在本文可互換使用。受治療者還可以指實(shí)驗(yàn)室中的細(xì)胞或細(xì)胞收集物或用于活性、分化、標(biāo)志物生產(chǎn)、表達(dá)和諸如此類的測(cè)試中的生物處理培養(yǎng)物。在一些實(shí)施方案中，受治療者是嚙齒類，例如小鼠，其已被化學(xué)誘導(dǎo)為IBD模型。在特定的實(shí)施方案中，小鼠模型是下列的一個(gè)或多個(gè):(a)暴露于葡聚糖硫酸鈉(DSS)以誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎樣病癥的 小鼠；(b)暴露于三硝基苯磺酸(TNBS)以誘導(dǎo)克羅恩病樣病癥的小鼠；(C)誘導(dǎo)產(chǎn)生結(jié)腸炎的nAChRa 7缺陷小鼠；或(d)缺失兩種谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)Gpxl和Gpx2，[Gpxl/2-雙敲除(DKO)小鼠]，并進(jìn)而發(fā)展出回結(jié)腸炎的小鼠。在其他的實(shí)施方案中，本公開方法針對(duì)真核細(xì)胞，優(yōu)選哺乳動(dòng)物細(xì)胞，且更優(yōu)選人類細(xì)胞。細(xì)胞或細(xì)胞系可以通過商業(yè)獲得或可以從哺乳動(dòng)物組織中分離。適合用于本公開方法的細(xì)胞還可以作為組織或器官制備物的一部分存在。細(xì)胞不限于可以從大鼠、貓、馬、小鼠、倉鼠、雞、綿羊、山羊、豬、牛、兔、非人類靈長類、和人類中獲得。在其他的實(shí)施方案中，本公開主題提供用于調(diào)節(jié)至少一種免疫細(xì)胞類型中的nAChRa 7活性的方法，所述方法包括使至少一種免疫細(xì)胞類型與有效調(diào)節(jié)至少一種免疫細(xì)胞類型中的nAChR a 7活性的量的nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑接觸。正如本文使用的，短語“免疫細(xì)胞”意在表示在哺乳動(dòng)物免疫反應(yīng)中發(fā)揮功能的那些細(xì)胞，免疫反應(yīng)包括細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)。該短語包括但不限于，淋巴細(xì)胞、抗原特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞(PBMC)、巨噬細(xì)胞、和自然殺傷細(xì)胞。還在其他的實(shí)施方案中，本公開主題提供用于減少有慢性胃腸道炎癥的受治療者發(fā)展結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)一種或多種胃腸道免疫細(xì)胞中的nAChRa 7活性的量對(duì)受治療者施用nAChRa 7拮抗劑或nAChRa 7激動(dòng)劑，借此調(diào)節(jié)nAChR a 7活性改變一種或多種胃腸道免疫細(xì)胞中的炎癥反應(yīng)，因此減少發(fā)展結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。在另外的實(shí)施方案中，本公開主題提供用于鑒定調(diào)節(jié)表達(dá)nAChRa 7的至少一種細(xì)胞中nAChRa 7活性的化合物或劑的方法，所述方法包括:(i)使表達(dá)nAChR a 7的至少一種細(xì)胞與候選化合物或劑接觸；Qi)確定與所述候選化合物或劑接觸的表達(dá)nAChRa 7的至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7的活性；(iii)確定沒有與所述候選化合物或劑接觸的表達(dá)nAChRa 7的至少一種對(duì)照細(xì)胞中nAChRa 7的活性；和(iv)對(duì)比與所述候選化合物或劑接觸的至少一種細(xì)胞中nAChRa 7的活性和至少一種對(duì)照細(xì)胞中nAChRa 7的活性；其中在與所述候選化合物或劑接觸的至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性與至少一種對(duì)照細(xì)胞中的nAChRa 7活性的差異鑒定調(diào)節(jié)至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性的候選化合物或劑。還在另外的實(shí)施方案中，本公開主題提供用于預(yù)測(cè)對(duì)受害于由nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)的異常水平導(dǎo)致的IBD的受治療者施用nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑的治療效果的方法，其中所述nAChR a 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑是nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑，所述方法包括:
(a)測(cè)量在施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之前受治療者的組織或細(xì)胞中nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平；(b)以有效改變受治療者的組織或細(xì)胞中nAChRa 7基因或蛋白表達(dá)水平的量對(duì)受治療者施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑；(c)測(cè)量來自于施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之后的受治療者的組織或細(xì)胞中的nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平；和(d)確定施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之后的組織或細(xì)胞中nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平相比較于施用nAChR a 7調(diào)節(jié)劑之前的組織或細(xì)胞中的基因或蛋白表達(dá)水平的改變；其中在組織或者細(xì)胞中的nAChR a 7基因或蛋白表達(dá)水平的改變預(yù)測(cè)nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑對(duì)受害于IBD的受治療者的治療效果。在一些實(shí)施方案中，在受害于IBD的受治療者中nAChRa 7被過度表達(dá)至異常水平，且基因或蛋白表達(dá)水平的降低預(yù)測(cè)對(duì)施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑的正反應(yīng)。在其他實(shí)施方案中，在受害于IBD的受治療者中nAChRa 7的表達(dá)被下調(diào)至異常水平，且基因或蛋白水平的增加預(yù)測(cè)對(duì)施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑的正反應(yīng)。
在一些實(shí)施方案中，使用一種或多種方法確定基因表達(dá)水平的改變，所述方法選自由RNA印跡法、RT-PCR、實(shí)時(shí)RT-PCR、原位雜交和微陣列組成的組。在其他的實(shí)施方案中，蛋白表達(dá)水平的改變使用選自由以下組成的組的一種或多種方法確定:蛋白質(zhì)印跡法、ELI SA、質(zhì)譜、免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)陣列。因此，在一些實(shí)施方案中，本公開方法可以用于診斷，用于預(yù)后或疾病狀態(tài)或病癥的監(jiān)控。正如本文使用的，術(shù)語“診斷”指預(yù)測(cè)性的過程，其中評(píng)價(jià)了疾病、疾患或其他醫(yī)學(xué)病癥的存在、不存在、嚴(yán)重性或治療進(jìn)程。為了本文的目的，診斷還包括用于確定治療結(jié)果的預(yù)測(cè)性的過程。類似的，術(shù)語“診斷”指確定受治療者是否展現(xiàn)病癥或疾病的一個(gè)或多個(gè)特征。術(shù)語“診斷”包括確立例如靶抗原或結(jié)合試劑的靶的存在或不存在，或確立或以其他方式確定病癥或疾病的一個(gè)或多個(gè)特征，包括類型、等級(jí)、階段、或類似情況。正如本文使用的，術(shù)語“診斷”可以包括區(qū)分疾病的一個(gè)形式與另一個(gè)形式。術(shù)語“診斷”包括最初的診斷或檢測(cè)，預(yù)后，和病癥或疾病的監(jiān)控。另外，例如在“疾病或病癥進(jìn)程的監(jiān)控”中的術(shù)語“監(jiān)控”指進(jìn)行中的對(duì)從具有或疑似具有疾病或病癥的受治療者獲得的樣品的診斷。術(shù)語“預(yù)后”及其衍生形式指確定或預(yù)測(cè)疾病或病癥的進(jìn)程。疾病或病癥的進(jìn)程可以例如基于生命預(yù)期或生命質(zhì)量來確定?！邦A(yù)后”包括接受治療或不接受治療的情況下，疾病或病癥的時(shí)間進(jìn)程的確定。在考慮治療的情況下，預(yù)后包括確定對(duì)于疾病或病癥的療效。正如本文使用的，術(shù)語“風(fēng)險(xiǎn)”指預(yù)測(cè)性過程，其中評(píng)價(jià)特定結(jié)果的可能性。因此，本公開主題包括監(jiān)控nAChRa 7基因表達(dá)和/或蛋白水平作為IBD患者治療性反應(yīng)的預(yù)后性測(cè)量。響應(yīng)于治療劑的對(duì)nAChRa 7基因表達(dá)和/或蛋白水平的效果可以提供用于確定患者是 否對(duì)治療有反應(yīng)的手段。在nAChR a 7過度表達(dá)的情況下，例如克羅恩病(CD)的患者，基因/蛋白表達(dá)水平的降低應(yīng)該指示對(duì)于治療的正反應(yīng)。在nAChRa 7下調(diào)的情況下，例如潰瘍性結(jié)腸炎的患者，基因/蛋白的表達(dá)水平的增加應(yīng)該指示對(duì)于治療的正反應(yīng)?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法完成檢測(cè)基因表達(dá)水平的方法，包括但不限于上文中剛公開的那些方法。這些方法可以使用任何感興趣的組織樣品中的RNA或蛋白，例如IBD組織活檢，新鮮的或存檔的外科標(biāo)本，存在于血液中的循環(huán)細(xì)胞，血清，尿液，和細(xì)胞系。I1.藥物組合物、藥盒和施用在另一方面，本公開提供了藥物組合物，其包括與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合的單獨(dú)或與一種或多種額外的治療劑組合的一種或多種nAChR a 7拮抗劑和/或nAChR a 7激動(dòng)劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員將意識(shí)到，藥物組合物包括上述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。更特別的，在一些實(shí)施方案中，本公開主題提供了藥物組合物，其包括有效調(diào)節(jié)nAChRa 7功能以治療或預(yù)防有相應(yīng)治療需要的受治療者的炎性腸病(IBD)的量的煙堿型乙酰膽堿受體a7(nAChRa7)的特異性激動(dòng)劑或特異性拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，所述藥物組合物包括與一種或多種無毒的藥學(xué)上可接受的載體、佐劑、或賦形劑配制在一起的治療有效量的nAChRa 7激動(dòng)劑/拮抗劑。本文所述組合物或其藥學(xué)上可接受的加成鹽或水合物可以根據(jù)本公開方法使用各種各樣的施用途徑或方式被遞送至受治療者以避免或減少不必要的副作用。所述藥物組合物可以被配制成以固體或液體形式口服施用。不干擾藥學(xué)上可接受的載體的功能的本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種成分可以以有效量任選地被包括在藥物組合物中。概括的說，潤滑劑、粘合劑、明膠、和/或崩解劑是合適的。其他任選的成分包括緩沖液，防腐劑，張力調(diào)節(jié)劑，抗氧化劑，用于調(diào)節(jié)粘度或用作于增量劑的聚合物，和賦形劑，和諸如此類。藥學(xué)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員已知的其他傳統(tǒng)添加劑包括但不限于，濕潤劑，軟化劑，穩(wěn)定劑，和染料，且只要這些添加劑不干擾藥物組合物的治療性質(zhì)就可以被使用。使用藥學(xué)領(lǐng)域普遍已知的方法容易制備所述藥物組合物?？梢詥为?dú)或與其他本公開的化合物組合和/或與其他治療或預(yù)防IBD的治療劑組合施用所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽和/或水合物。在其他的實(shí)施方案中，本公開主題提供了包括本公開的藥物組合物的藥盒。藥盒包括至少一種包含激動(dòng)劑或拮抗劑、或其鹽的藥物組合物。藥盒還包括用于容納組合物的容器。在一些實(shí)施方案中，藥盒還包括對(duì)受治療者施用至少一種包含激動(dòng)劑或拮抗劑、或其鹽的藥物組合物的指南。合適的施用途徑包括但不限于，吸入，經(jīng)皮，口服，直腸，經(jīng)粘膜，腸道，和腸胃外施用，包括肌肉內(nèi)，皮下，和靜脈注射。在治療和/或診斷應(yīng)用中，本公開的化合物可以被配制成用于各種施用方式，包括系統(tǒng)的和外用的(topical)或局部的(localized)施用。技術(shù)和配方通?？梢栽?Remington:The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.)Lippincott, Williams & Wilkins (2000)中找到。根據(jù)本公開的化合物在一個(gè)寬的劑量范圍內(nèi)有效。例如，在治療成年人時(shí)，劑量從
0.01到lOOOmg，從0.5到lOOmg，和從I到50mg每天。確切的劑量依賴于施用途徑，化合物被施用的形式，待治療的受治療者，待治療的受治療者的體重，以及主治醫(yī)生的偏好和經(jīng)驗(yàn)。藥學(xué)上可接受的鹽一般是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的，且可包括，例如但不限于，醋酸鹽，苯磺酸鹽(benzenesulfonate),苯磺酸鹽(besylate),苯甲酸鹽,碳酸氫鹽，酒石酸氫鹽，溴化物，乙二胺四乙酸鈣，右旋樟腦磺酸鹽，碳酸鹽，檸檬酸鹽，乙二胺四乙酸鹽，乙二磺酸鹽(edisylate),丙酸酯十二燒基硫酸鹽(estolate),乙磺酸鹽(esylate),延胡索酸鹽，葡庚糖酸鹽(glue印tate)，葡萄糖酸鹽，谷氨酸鹽，對(duì)羥乙酰氨基苯胂酸鹽(glycollylarsanilate),己基間苯二酸鹽(hexylresorcinate),海巴明鹽,氫溴酸鹽,鹽酸鹽，輕萘酸鹽(hydroxynaphthoate),碘化物，輕乙基磺酸鹽(isethionate),乳酸鹽，乳糖酸鹽,蘋果酸鹽,馬來酸鹽,扁 桃酸鹽，甲磺酸鹽,粘酸鹽(mucate)，萘磺酸鹽(napsylate)，硝酸鹽，巴莫酸鹽(pamoate)(雙輕萘酸鹽(embonate)),泛酸鹽,磷酸/ 二磷酸鹽,聚半乳糖醛酸鹽，水楊酸鹽，硬脂酸鹽，堿式醋酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，單寧酸鹽，酒石酸鹽，或8-氯茶堿鹽(teoclate)。其他藥學(xué)上可接受的鹽可以在比如Remington:The Science andPractice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000)中找到。藥學(xué)上可接受的鹽包括，比如，醋酸鹽，苯甲酸鹽，溴化物，碳酸鹽，檸檬酸鹽，葡萄糖酸鹽，氫溴酸鹽，鹽酸鹽，馬來酸鹽，甲磺酸鹽，萘磺酸鹽，巴莫酸鹽(雙羥萘酸鹽)，磷酸鹽，水楊酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，或酒石酸鹽。根據(jù)被治療的具體病癥，這些劑可以被配制成液體或固體劑型并被系統(tǒng)或局部地施用。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知，這些劑可以以比如定時(shí)或持續(xù)的緩釋形式被遞送。用于配制和施用的技術(shù)可以在 Remington:The Science and Practice of Pharmacy (20thed.) Lippincott, Williams & Wilkins (2000)中找到。適當(dāng)?shù)耐緩娇砂诜⒖谇?、吸入式噴劑、舌下、直腸、經(jīng)皮的、陰道、經(jīng)粘膜、鼻部或腸施用；腸胃外遞送，包括肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射，以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、胸骨內(nèi)、滑膜內(nèi)、肝內(nèi)、病灶內(nèi)(intralesional)、盧頁內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、或眼內(nèi)注射或其他遞送方式。對(duì)于注射，本公開的藥劑可以被配制并稀釋于水溶液中，比如生理學(xué)相容的緩沖液例如Hank’s液，林格氏溶液，或生理鹽水緩沖液。對(duì)于經(jīng)粘膜施用，在制劑中使用適合于所需穿透的屏障的滲透劑。這些滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的。使用藥學(xué)上可接受的惰性載體將用于本公開實(shí)踐的本文所公開的化合物配制成適于系統(tǒng)施用的劑量(dosage)在本公開的范圍內(nèi)。使用適當(dāng)選擇的載體和合適的制造實(shí)踐，本公開的組合物，特別是那些配制成為溶液的組合物，可以在腸胃外施用，比如通過靜脈注射?？梢允褂帽槐绢I(lǐng)域熟知的藥學(xué)上可接受的載體容易地將化合物配制成適用于口服施用的劑量。這些載體使得本公開的化合物可配制為片、丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿液、懸浮液和諸如此類的，以使待治療的受治療者(比如患者)口服攝入。對(duì)于鼻部或吸入遞送，本公開的劑也可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法配制，且可能包括但不限于，例如溶解、稀釋、或分散物質(zhì)例如鹽水，防腐劑(例如苯甲基醇)、吸收促進(jìn)劑、和碳氟化合物。適合用于本公開的藥物組合物包括如下組合物:其中包括有效量的活性成分以達(dá)到其預(yù)期目的。有效量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，特別是根據(jù)本文提供的詳細(xì)公開內(nèi)容。除了活性成分之外，這些藥物組合物可以包括幫助活性化合物加工成藥學(xué)可用的制品的合適的藥學(xué)上可接受的載體，包括賦形劑和輔助劑。配制成口服施用的制品可以是片劑、糖衣劑、膠囊、或溶液的形式?？诜褂玫乃?物制品可以通過混合活性化合物和固體賦形劑，任選地研磨得到的混合物，并且如果需要，在加入合適的輔助劑之后，加工顆?；旌衔?，得到藥片或糖衣核。合適的賦形劑，特別是，填充劑如糖，包括乳糖，蔗糖，甘露醇，或山梨醇；纖維素制品，例如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基鈉纖維素(CMC)、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP:聚維酮)。如果需要，可以添加崩解劑，例如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或藻酸或其鹽例如藻酸鈉。給糖衣核提供合適的包衣。為此目的，可使用濃縮的糖溶液，其可任選包括阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡伯波凝膠(carbopol gel)、聚乙二醇(PEG)、和/或二氧化鈦、漆用溶液(lacquer solution),和合適的有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？梢越o藥片或糖衣包衣添加染料或色素，以鑒別或表征活性化合物劑量的不同的組合。可口服使用的藥物制品包括由明膠制成的推入配合膠囊，以及由明膠和增塑劑(如甘油或山梨醇)制成的軟的密封的膠囊。推入配合膠囊可以包括與填充劑(如乳糖)、粘合劑(如淀粉)、和/或潤滑劑(如滑石或硬脂酸鎂)和任選的穩(wěn)定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可被溶解于或懸浮于合適的液體，例如脂肪油、液體石蠟、或液體聚乙二醇(PEG)。另外，可添加穩(wěn)定劑。根據(jù)要治療或預(yù)防的具體的病癥或疾病狀態(tài)，通常被施用來治療或預(yù)防病癥的額外的治療劑可以與本公開的激動(dòng)劑和/或拮抗劑一起施用。因此，額外的劑可以與本公開的nAChR α 7拮抗劑和/或nAChR α 7激動(dòng)劑合并在藥物組合物中。這些額外的劑可以作為多次給藥方案(multiple dosage regimen)的一部分與包含抑制劑的組合物分開施用?？蛇x地，這些劑可以是與在單一組合物中的抑制劑混合在一起的單劑型的一部分。盡管在此使用了具體的術(shù)語，它們僅在普通的和描述的意義上使用且并非出于限制的目的。除非另外定義，在此使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與描述的本主題所屬的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所通常理解的相同的含義。遵循長時(shí)間存在的專利法律傳統(tǒng)，術(shù)語“一個(gè)(a) ”、“一 (an) ”和“該”當(dāng)在本申請(qǐng)包括權(quán)利要求中使用時(shí)指“一個(gè)或多個(gè)”。因此，例如提到“一個(gè)受治療者”包括多個(gè)受治療者，除非上下文清楚地指向相反(例如多個(gè)受治療者)，等等。貫穿此說明書和權(quán)利要求書，術(shù)語“包括(comprise) ”、“包括(comprises) ”、和“包括(comprising)”在非排除的意義上使用，除非上下文另外要求。類似地，術(shù)語“包含”及其語法變形旨在不限定，以使列舉的事項(xiàng)枚舉不排除可以被替代或添加至所列舉的事項(xiàng)中的其他類似的事項(xiàng)。出于本說明書和所附的權(quán)利要求書的目的，除非另外指明，所有在本說明書和權(quán)利要求書中使用的表示量、大小、尺寸、比例、形狀、配方、參數(shù)、百分比、參數(shù)、數(shù)量、特征、和其他數(shù)值的數(shù)字，應(yīng)理解為在所有情況下均以術(shù)語“大約”修飾，即使術(shù)語“大約”可能沒有明確地與數(shù)值、量或范圍同時(shí)出現(xiàn)。因此，除非作出相反的說明，在下述說明書和所附的權(quán)利要求書中陳述的數(shù)字參數(shù)不是也不需要是準(zhǔn)確的，但可以按需要是近似的和/或更大或更小于所預(yù)期的，取決于尋求通過本公開主題得到的所需的性質(zhì)，其反映公差，轉(zhuǎn)換因素，舍入，測(cè)量誤差和諸如此類，和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其他因素。例如，術(shù)語“大約”，當(dāng)指值時(shí)可旨在包括距指定量值的如下變動(dòng):在一些實(shí)施方案中為±100%，在一些實(shí)施方案中為±50%，在一些實(shí)施方案中為±20%，在一些實(shí)施方案中為±10%，在一些實(shí)施方案中為±5%，在一些實(shí)施方案中為±1%，在一些實(shí)施方案中為±0.5%，和在一些實(shí)施方案中為±0.1%，此類變動(dòng)適于進(jìn)行本公開的方法或應(yīng)用本公開的組合物。而且，當(dāng)與一個(gè)或多個(gè)數(shù)字或數(shù)字的范圍聯(lián)合使用時(shí)，術(shù)語“大約”應(yīng)該被理解為指所有這些數(shù)字，包括所有在范圍內(nèi)的數(shù)字并且通過延伸其界限高于或低于所述數(shù)值而修改其范圍。借助終點(diǎn)進(jìn)行的數(shù)字范圍的枚舉包括所有數(shù)字，例如全部整數(shù)，包括其被包括入所述范圍的分?jǐn)?shù)，(例如，I到5的枚舉包括1，2，3，4和5，和其分?jǐn)?shù)，例如1.5，2.25，3.75，
4.1，和諸如此類)和在所述范圍內(nèi)的任何范圍。 實(shí)施例包括下列實(shí)施例以向本領(lǐng)域普通技術(shù)人員實(shí)踐本公開主題的代表性實(shí)施方案提供指導(dǎo)?？紤]到本公開內(nèi)容和本領(lǐng)域的大致技術(shù)水平，技術(shù)人員可以理解，下列實(shí)施例僅旨在示例，并且許多的變化、修改和改變可以被應(yīng)用而不脫離本公開主題的范圍。下述的合成描述和具體的實(shí)施例僅旨在出于闡明的目的，并不應(yīng)被解釋為對(duì)以其他方法制備本公開的化合物的任何形式的限制。實(shí)施例1某閔表汰圖譜顯示在IBD中的不同表汰樽式從17個(gè)患者中得到外周血和結(jié)腸活檢，患者平均年齡為46.53 (95%置信水平，
39.65-53.41)且患有記錄的IBD (9個(gè)⑶和8個(gè)UC)。該群組還包括17個(gè)年齡和性別匹配的未受影響的健康對(duì)照。分離嗜中性粒細(xì)胞和外周血單核細(xì)胞(PBMC)，并提取總RNA。Cy標(biāo)記的cDNA與基因組規(guī)模的微陣列雜交，所述微陣列包含21，329個(gè)基因的探針。將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化后，在進(jìn)行相關(guān)性分析之前，每個(gè)樣品中大約9，500個(gè)基因被表達(dá)為在背景值之上的三(3)個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。分級(jí)聚類顯示用于樣品分類的分析方法的穩(wěn)健性，其顯示，在每個(gè)亞組中存在基因表達(dá)圖譜的不同聚類(見圖1)。使用判別功能分析(DFA)來鑒定在免疫細(xì)胞中的表達(dá)最大程度區(qū)分該群組的基因。Alex P., Szodoray P., Knowlton N., Dozmorov
1.M., Turner M., Frank Μ.B., Arthur R.E., Willis L., Flinn D., Hynd R.F., Carson C,Kumar A.,El-Gabalawy H.S.,Centola M.,“Multiplex serum cytokine monitoring as aprognostic tool in rheumatoid arthritis, ^Clin Exp Rheumatol 25:584-592(2007)。96個(gè)差異表達(dá)的基因中，使用嚴(yán)格的DFA選擇10個(gè)基因作為具有最高權(quán)力用于患者和對(duì)照之間的類別判別。有趣的是，在DFA根值的3D圖中，UC和CD患者和對(duì)照被分組到3個(gè)不同的位置，表明這是直接與全部基因表達(dá)和疾病病理的組間基因表達(dá)變化和組內(nèi)異質(zhì)性成比例的(圖2)。nAChRa 7是10個(gè)差異表達(dá)的基因中的一個(gè)。實(shí)施例2在⑶相比于UC中鑒定的差異的nAChR a 7表汰樽式基因微陣列分析顯示，與對(duì)照相比，在⑶患者的嗜中性粒細(xì)胞和PBMC中的nAChR a 7被顯著上調(diào)了，而UC患者的嗜中性粒細(xì)胞和PBMC中的nAChR a 7被下調(diào)了(圖3，左圖)。使用QRT-PCT證實(shí)在⑶相比于UC中的nAChR a 7的表達(dá)水平(圖3，右圖:⑶相比于UC的變化倍數(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上是相同的)。因?yàn)闊焿A是吸煙中的主要活性組分，并且nAChR a 7是僅有的在UC相比于⑶中被差異表達(dá)的nAChR，這些數(shù)據(jù)顯示nAChR a 7可能是調(diào)節(jié)在吸煙者和非吸煙者中不同的對(duì)CD的促炎作用和對(duì)UC中的抗炎作用的關(guān)鍵參與者。實(shí)施例3在CD相比于UC中通過nAChRa 7介導(dǎo)產(chǎn)生的煙堿的不同免疫調(diào)節(jié)圖譜考慮到⑶相比于UC和健康者中獨(dú)特的nAChRa 7差異表達(dá)(圖3)，進(jìn)行初步的研究以調(diào)查nAChRa 7的功 能貢獻(xiàn)及其在⑶相比于UC中的免疫調(diào)節(jié)圖譜。盡管IBD大致上被研究為T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，同族腸道微生物/B/Τ細(xì)胞相互作用對(duì)于疾病的發(fā)病機(jī)理是重要的。研究UC、CD患者和未受影響的對(duì)照的永生化(EBV-轉(zhuǎn)化的)B淋巴細(xì)胞，以評(píng)價(jià)nAChR a 7的免疫調(diào)節(jié)圖譜。對(duì)細(xì)胞進(jìn)行煙堿(2 μ M和20 μ Μ)和nAChR a 7選擇性拮抗劑a -環(huán)蛇毒素(Sigma.St.Louis) (2nM和20nM)的刺激和抑制研究，所述細(xì)胞被培養(yǎng)并維持在IX IO6個(gè)細(xì)胞的終濃度?；趭A心免疫測(cè)定的蛋白陣列系統(tǒng)(生物測(cè)定夾心ELISA，其包括與針對(duì)祀蛋白的特異性單克隆抗體偶聯(lián)的染色的微球)，如前所述，Alex P., SzodorayP.，Knowlton N.，Dozmorov 1.M.，Turner Μ.，F(xiàn)rank Μ.B.，Arthur R.Ε.，Willis L，F(xiàn)linn D.，Hynd R.F.，Carson C，Kumar A.，El-Gabalawy H.S.，Cento la M.，“Multiplexserum cytokine monitoring as a prognostic tool in rheumatoid arthritis，，，ClinExp Rheumatol 25:584-592(2007) ；Nakayama T.，Hieshima K.，Nagakubo D.，Sato E.，Nakayama M.,Kawa K.，Yoshie 0.，‘‘Selective induction of Th2_attracting chemokinesCCLI7 and CCL22 in human B cells by latent membrane protein I of Epstein-Barrviiois，”J Virol 78:1665-1674(2004),被用于測(cè)定在剌激后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)(24、48、72、96和120小時(shí))釋放到培養(yǎng)基的22個(gè)細(xì)胞的、細(xì)胞毒的、體液的細(xì)胞因子和趨化因子的水平(圖4)。使用單一蛋白ELISA進(jìn)行多個(gè)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。在這22個(gè)變量中，EBV轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞的免疫介質(zhì)(immune mediator)的分泌在未受影響的對(duì)照和IBD之間的顯著變化只在5個(gè)細(xì)胞因子/趨化因子中是明顯的(圖4)(在兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)中再現(xiàn))。這一圖譜是報(bào)道的“低Thl，高Th2趨化性nB淋巴母細(xì)胞的免疫生成的典型。Nakayama T.,Hieshima K., NagakuboD.,Sato Ε.,Nakayama Μ.,Kawa K.,Yoshie 0.,“Selective induction of Th2_attractingchemokines CCLI7 and CCL22 in human B cells by latent membrane protein I ofEpstein-Barr virus,，，J Virol 78:1665-1674(2004) ；Burdin N.,Peronne C,BanchereauJ., Rousset F.,“Epstein-Barr virus transformation induces B lymphocytes toproduce human interleukin 10,，，J Exp Med 177:295-304(1993) ；Vockerodt M.,Pinkert
D., Smola-Hess S., Michels A., RansohoffR.Μ., Tesch Η., Kube D.,“The Epstein-Barrvirus oncoprotein latent membrane protein I induces expression of the chemokineIP-10:importance of mRNA half-life regulation,^Int J Cancer 114:598-605(2005)。使用不同劑量的煙堿預(yù)處理120小時(shí)顯示,在⑶相比于UC中，促炎細(xì)胞因子/趨化因子IL-8和MIP-1的顯著的產(chǎn)生，并且在⑶相比于⑶中，抗炎細(xì)胞因子IL-1O生成的顯著抑制(圖4A)，這表明煙堿在CD中有不同的促炎和趨化效果。煙堿在CD中抑制IL-1O的效果(圖4A)還表明了一個(gè)潛在的機(jī)制,其還與已被廣泛驗(yàn)證的在基因革巴向IL-1O敲除的小鼠中發(fā)展的慢性CD樣回結(jié)腸炎相一致，并且與報(bào)告的IL-1O對(duì)若干結(jié)腸炎的動(dòng)物模型中的療效相一致。Kuhn R.，Lohler J.，Rennick D.，Rajewsky K.，MullerW.,“Interleukin-lO-deficient mice develop chronic enterocolitis 2, ^ Cell 75:263-274 (1993) ；Ribbons K.A., Thompson J.FL, Liu X., Pennline Κ., Clark D.A.,Miller M.J., “Ant1-1nflammatory properties of interleukin-10 administration inhapten-1nduced colitis,，，Eur J Pharmacol 323:245-254(1997)。由于在 CD 中 α-環(huán)蛇毒素以100%顯著地逆轉(zhuǎn)煙堿的效果，這些數(shù)據(jù)還表明⑶中通過nAChRa 7介導(dǎo)的機(jī)制的促炎效果。在新鮮分離的淋巴細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞中研究nAChRa 7介導(dǎo)的細(xì)胞因子圖譜的類似的實(shí)驗(yàn)正在進(jìn)行中。上述的發(fā)現(xiàn)強(qiáng)烈表明nAChRa 7在調(diào)節(jié)煙堿效果方面的關(guān)鍵性作用，并且表明nAChRa 7作為⑶治療的治療靶的顯著潛力。使用煙堿或nAChRa 7特異性激動(dòng)劑預(yù)處理預(yù)防DSS誘導(dǎo)的“UC樣”小鼠結(jié)腸炎(疾病表型與人類UC類似)的發(fā)展，而顯著惡化“CD樣” TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎(疾病表型與人類CD類似)。

為得到nAChRa 7作為協(xié)調(diào)煙堿在CD和UC進(jìn)程中的相反效果的主要調(diào)節(jié)者的直接證據(jù)；使用已建立好的化學(xué)誘導(dǎo)的小鼠IBD模型(DSS和TNBS結(jié)腸炎)進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)(圖5-13)，所述小鼠IBD模型被廣泛用于IBD治療性藥物的臨床前研究。對(duì)于CD樣小鼠模型，使用BALB/c小鼠誘導(dǎo)DSS結(jié)腸炎。對(duì)于CD樣小鼠模型，使用BALB/c小鼠誘導(dǎo)TNBS結(jié)腸炎。C57/B6或BALB/c小鼠，6-8周齡，使用煙堿(nAChRa 7非特異性配體；6mg/kg)或nAChR a 7特異性激動(dòng)劑(PNU ；8.3mg/kg)預(yù)處理(每天腹膜內(nèi)注射)一星期。對(duì)照是沒有預(yù)處理的小鼠(每個(gè)處理組總共有大于10只小鼠)。然后，使用TNBS(600yg)誘導(dǎo)小鼠發(fā)展CD樣結(jié)腸炎，或者使用DSS(2.5%)誘導(dǎo)小鼠發(fā)展UC樣結(jié)腸炎。如圖5所示，對(duì)于急性結(jié)腸炎模型的疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)，煙堿或PNU預(yù)處理5天嚴(yán)重惡化⑶樣TNBS結(jié)腸炎。截然相反，然而煙堿和PNU預(yù)防DSS誘導(dǎo)的UC樣結(jié)腸炎，其中PNU稍微更有效。結(jié)腸的形態(tài)學(xué)和組織學(xué)檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)了 DAI的變化(數(shù)據(jù)未顯示)。這些小鼠模型的臨床前研究結(jié)果準(zhǔn)確模擬了臨床上被良好表征的吸煙對(duì)人類IBD的相反效果，即吸煙對(duì)CD有害卻在UC中有益。這些數(shù)據(jù)確立:⑴煙堿對(duì)CD的發(fā)病機(jī)理的作用和對(duì)UC的治療性益處；和(2)nAChRa7作為主要的開關(guān)控制煙堿(吸煙)的不同反應(yīng)，或者為促炎(如在CD中)或者為抗炎(如在UC中)。激動(dòng)劑GTS-21具有類似的預(yù)防DSS誘導(dǎo)的CD樣結(jié)腸炎的發(fā)展的效果。實(shí)施例4nAChR α 7激動(dòng)劑在慢性“UC樣” DSS結(jié)腸炎的治療中高度有效nAChR α 7激動(dòng)劑(PNU和GTS-21)不僅有能力在急性結(jié)腸炎模型中預(yù)防DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎(圖5)，它們還可以在慢性結(jié)腸炎模型中有效逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)程(圖6)，所述慢性結(jié)腸炎模型被認(rèn)為與人類UC更類似。圖6的圖例中描述了慢性UC樣結(jié)腸炎的誘導(dǎo)。如圖6所示，顯示了 PNU對(duì)急性和慢性結(jié)腸炎模型的DAI的影響。PNU處理基本上消除了兩種模型中的炎癥。實(shí)施例5nAChR α 7拮抗劑MLA對(duì)預(yù)防CD樣TNBS結(jié)腸炎高度有效基于nAChR α 7在UC中下調(diào)并在⑶中上調(diào)的觀察結(jié)果，不期望受到任何一種特定的理論束縛，假設(shè)nAChR α 7特異性拮抗劑會(huì)使nAChR α 7的功能失活，并因此對(duì)⑶有治療性效果。因此，使用BALB/c小鼠檢測(cè)了 nAChR α 7特異性拮抗劑MLA對(duì)⑶樣TNBS結(jié)腸炎的效果。的確，如圖7所示，發(fā)現(xiàn)對(duì)小鼠使用nAChRa 7特異性拮抗劑MLA預(yù)處理5天可以有效預(yù)防小鼠發(fā)展TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎(圖7)。重要地，nAChRa 7激動(dòng)劑PNU處理不僅對(duì)結(jié)腸炎的發(fā)展沒有效果，而且惡化疾病。對(duì)nAChRa 7特異性較弱的激動(dòng)劑煙堿對(duì)預(yù)防UC樣DSS結(jié)腸炎有效，但對(duì)疾病發(fā)展也沒有效果(圖5)。這些結(jié)果模擬了吸煙在UC和⑶中的效果。合并圖5和圖6所示的數(shù)據(jù)，這些結(jié)果顯示nAChRa 7特異性拮抗劑(MLA)對(duì)⑶有有效的治療性益處，但nAChR a 7特異性激動(dòng)劑(PNU和GTS)對(duì)UC有有效的治療性效果。還表明了 MLA對(duì)CD樣慢性 TNBS結(jié)腸炎(使用BALB/c小鼠)的高度治療性效果(數(shù)據(jù)未顯示)，其效力與PNU對(duì)UC樣DSS結(jié)腸炎的效力相類似(圖6)。實(shí)施例6nAChR a 7拮抗劑對(duì)慢性“CD樣” TNBS結(jié)腸炎的治療高度有效nAChRa 7拮抗劑(MLA)不僅有能力預(yù)防急性TNBS結(jié)腸炎(圖7)，它們還可以有效逆轉(zhuǎn)慢性TNBS結(jié)腸炎模型的疾病進(jìn)程(圖8)，其中慢性TNBS結(jié)腸炎模型被認(rèn)為與人類CD更相似。慢性CD樣結(jié)腸炎的誘導(dǎo)如前所述(Alex等人，2009 IBD, 15 (3)，341-352)。激動(dòng)劑處理對(duì)疾病活動(dòng)沒有影響，然而拮抗劑處理基本上消除了兩種模型中的炎癥。小鼠看起來正常并與乙醇處理的對(duì)照小鼠是不可區(qū)分的。使用H&E染色進(jìn)行的組織學(xué)分析(圖9)進(jìn)一步顯示了 nAChRa 7特異性拮抗劑對(duì)⑶樣結(jié)腸炎的高度有效的治療性效果。還可以通過生物化學(xué)方法看出治療性效果，因?yàn)閷?duì)DSS結(jié)腸炎使用激動(dòng)劑或?qū)NBS結(jié)腸炎使用拮抗劑處理，劇烈改變細(xì)胞因子圖譜從疾病狀態(tài)至正常健康狀態(tài)(圖13)。實(shí)施例7激動(dòng)劑PNU和拮抗劑MLA在被誘導(dǎo)產(chǎn)生結(jié)腸炎的nAChRa 7敲除小鼠中沒有治療性效果，進(jìn)一步闡明了所述藥物對(duì)nAChRa 7受體是特異性的。盡管來自于細(xì)胞模型和小鼠結(jié)腸炎模型的本公開的數(shù)據(jù)清楚鑒定了 nAChRa 7作為CD響應(yīng)于煙堿的發(fā)病機(jī)理的關(guān)鍵點(diǎn)，然而其他nAChR未被包括的可能性不能被完全排除，因?yàn)槭褂玫膎AChR a 7激動(dòng)劑/拮抗劑的特異性可能不限于僅nAChR a 7。為了排除這個(gè)可能性，在nAChR a 7敲除小鼠(nAChR a 7-K0)中測(cè)試nAChR a 7激動(dòng)劑和拮抗劑，在所述敲除小鼠中，如果所述劑是僅對(duì)nAChR α 7特異性的，則化學(xué)誘導(dǎo)結(jié)腸炎的發(fā)展不會(huì)被這些劑所影響。發(fā)現(xiàn)，nAChRa 7-Κ0小鼠對(duì)DSS或TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎更加敏感(圖10)。更重要的是，激動(dòng)劑(PNU)或拮抗劑(MLA)都不能在nAChRa 7-KO小鼠中作為有效的DSS或TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的治療劑(圖10)。這些數(shù)據(jù)顯示，這些藥物的靶是對(duì)nAChRa 7特異性的。實(shí)施例8nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)DSS結(jié)腸炎的抗炎效果被迷走神經(jīng)切斷術(shù)完全消除，提供在IBD中迷走神經(jīng)在nAChRa 7介導(dǎo)的抗炎通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用的第一個(gè)確定性的體內(nèi)證據(jù)迷走神經(jīng)的傳出信號(hào)可以被大腦網(wǎng)絡(luò)所控制，通過膽堿能抗炎通路抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生，其中膽堿能抗炎通路依賴于非神經(jīng)細(xì)胞特別是巨噬細(xì)胞上的nAChRa 7。通過這條通路，迷走神經(jīng)的刺激預(yù)防在多種炎性疾病中細(xì)胞因子釋放的損害效應(yīng)，炎性疾病包括敗血癥、內(nèi)毒素血癥、缺血、出血性休克、關(guān)節(jié)炎、和術(shù)后腸閉塞。盡管已顯示經(jīng)歷了迷走神經(jīng)切除術(shù)的小鼠對(duì)DSS和TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎更敏感，但是沒有直接的實(shí)驗(yàn)性證據(jù)將迷走神經(jīng)和nAChR a 7對(duì)IBD的調(diào)節(jié)特定地聯(lián)系起來。由于之前所展示的數(shù)據(jù)清楚顯示nAChR a 7對(duì)UC的抗炎效果和CD的發(fā)病機(jī)理的特異性參與，進(jìn)一步確定這種nAChRa 7的特異性效果是否依賴于迷走神經(jīng)。對(duì)麻醉下的C57B/6小鼠(7周齡)的膈下迷走神經(jīng)的胃食管連接處的左迷走神經(jīng)分支(大約5-10_)進(jìn)行迷走神經(jīng)切斷術(shù)(圖11A)。給予經(jīng)歷了迷走神經(jīng)切斷術(shù)的小鼠7天的時(shí)間恢復(fù)，然后以IP施用nAChR a 7激動(dòng)劑，持續(xù)5天，之后進(jìn)行DSS處理(7天)以誘導(dǎo)結(jié)腸炎。如圖1lB所示，經(jīng)歷了迷走神經(jīng)切斷術(shù)的小鼠完全喪失了 nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)結(jié)腸炎的保護(hù)作用。這些數(shù)據(jù)顯示，nAChR a 7介導(dǎo)的對(duì)IBD的抗炎效果完全依賴于具有功能的迷走神經(jīng)。實(shí)施例9激動(dòng)劑PNU對(duì)治療GPX 1/2 DKO介導(dǎo)的結(jié)腸炎高度有效由于之前的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的大部分是在實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型中進(jìn)行的，檢驗(yàn)了 nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)治療由基因缺陷介導(dǎo)的結(jié)腸炎有效的假設(shè)。兩個(gè)谷胱甘肽過氧化物酶(GPX)Gpxl和Gpx2缺陷的小鼠[Gpxl/2-雙敲除(DKO)小鼠]在混合的C57BL/6和129Sl/SvJ (B6.129)基因背景下自發(fā)發(fā)展回結(jié)腸炎。Lee D.H., Esworthy R.S., Chu C, Pfeifer G.P., ChuF.F.,“Mutation accumulation in the intestine and colon of mice deficient in twointracellular glutathione peroxidases,，，Cancer Res.66 (20):9845-51(2006 年 10 月15日)。B6.129 Gpxl/2-DK0小鼠的亞組到6-8周發(fā)展回結(jié)腸炎癥，并且到6-9個(gè)月發(fā)展回結(jié)腸腫瘤。然而對(duì)照(來自于混合的C57BL/6和129Sl/SvJ(B6.129)基因背景)不發(fā)展結(jié)腸炎的體征，發(fā)現(xiàn)GPX1/2DK0小鼠發(fā)展具有臨床活動(dòng)性評(píng)分大約為9的嚴(yán)重的結(jié)腸炎(圖
12)。一旦結(jié)腸炎體征立即明顯，施用nAChR α 7激動(dòng)劑和nAChR α 7拮抗劑于GPX1/2DK0小鼠。在使用nAChRa 7激動(dòng)劑處理的GPX1/2DK0小鼠中，疾病(結(jié)腸炎)的發(fā)展顯著降低，表明nAChRa 7激動(dòng)劑PNU對(duì)治療由GPX1/2DK0介導(dǎo)的結(jié)腸炎高度有效(圖12)。然而使用nAChR a 7拮抗劑或鹽水處理的GPX1/2DK0小鼠未顯示在結(jié)腸炎的評(píng)分上的顯著性變化。這些數(shù)據(jù)表明nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)結(jié)腸炎的化學(xué)和基因模型的治療都高度有效。實(shí)施例10 PNU對(duì)小鼠的主要器官和行為沒有可觀察到的副作用.
在臨床前研究使用的劑量下，PNU藥物對(duì)小鼠展示無副作用。所有主要器官，包括心臟，腎臟，肝臟，小腸和大腸，脾臟，外觀均看起來正常。強(qiáng)制游泳實(shí)驗(yàn):老鼠被強(qiáng)迫在圓柱形容器內(nèi)游泳 6 分鐘，如 Porsolt R.D.，Bertin A.，Jalfre M.，“Behavioral despairin mice:a primary screening test for antidepressants，，，Arch Int PharmacodynTher 229:327-336(1977)所描述的，以評(píng)價(jià)藥物是否改變小鼠的行為(活動(dòng)作為讀數(shù))。ZomkowskiA.D., Santos A.R., Rodrigues A.L，“Evidence for the involvement of theopioid system in the agmatine antidepressant-like effect in the forced swimmingtest，”Neurosci Lett 381:279-283(2005)。如圖14所示，沒有觀察到顯著性的小鼠行為變化，無論經(jīng)過或未經(jīng)過藥物處理。僅DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的小鼠表現(xiàn)顯著性的不動(dòng)。使用激動(dòng)劑PNU的處理預(yù)防結(jié)腸炎，并且因此完全逆轉(zhuǎn)DSS小鼠的不動(dòng)。這個(gè)結(jié)果顯示，nAChRa 7激動(dòng)劑對(duì)研究的小鼠的行為不具有副作用。這些nAChR a 7特異性藥物的其他研究，包括毒性和藥物動(dòng)力學(xué)，正在研究進(jìn)行中。綜上所述，本公開的化合物對(duì)⑶和UC提供了單個(gè)治療靶，nAChRa 7:nAChRa 7激動(dòng)劑(例如PNU和GTS-21)是對(duì)UC高度有效的治療性藥物，而nAChRa 7拮抗劑(例如MLA)對(duì)CD具有顯著性的治療潛力。參考文獻(xiàn)在本說明書中提到的所有出版物、專利申請(qǐng)、專利、和其他參考文獻(xiàn)是對(duì)本公開主題所屬的領(lǐng)域的技術(shù)人員的 水平的指示。所有出版物、專利申請(qǐng)、專利、和其他參考文獻(xiàn)均以引用并入本文，與每一個(gè)單獨(dú)的出版物、專利申請(qǐng)、專利、和其他參考文獻(xiàn)被具體地和單獨(dú)地指出以引用而并入一樣。要理解，盡管本文提到大量專利申請(qǐng)、專利、和其他參考文獻(xiàn)，但這種引用不構(gòu)成對(duì)這些文件中的任何一個(gè)形成本領(lǐng)域常見的普通知識(shí)的一部分的承認(rèn)。Xavier RJ, Podolsky DK.Unravelling the pathogenesis of inflammatorybowel disease.Nature 2007;448:427-434.
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盡管出于清楚理解的目的通過闡述和實(shí)例的方法以一些細(xì)節(jié)描述了前述的主題，本領(lǐng)域技術(shù)人員要理解某些改變和修改可以在所附的權(quán)利要求的范圍內(nèi)被實(shí)踐。
權(quán)利要求
1.一種用于給有相應(yīng)治療需要的受治療者治療炎性腸病(IBD)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)所述受治療者的至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性的量對(duì)所述受治療者施用煙堿型乙酰膽堿受體a 7 (nAChR α 7)拮抗劑，借此所述至少一種細(xì)胞中的nAChR α 7活性的調(diào)節(jié)治療所述受治療者的IBD。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述IBD包括克羅恩病(⑶)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述nAChRa7拮抗劑選自由以下組成的組:α -環(huán)蛇毒素、甲基牛扁亭(MLA)、nAChRa 7特異性抗體、nAChR a 7特異性抑制性RNA、和其藥學(xué)上可接受的鹽、或組合。
4.一種用于給有相應(yīng)治療需要的受治療者治療炎性腸病(IBD)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)所述受治療者的至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性的量對(duì)所述受治療者施用nAChR a 7激動(dòng)劑,借此所述至少一種細(xì)胞中的nAChR a 7活性的調(diào)節(jié)治療所述受治療者的IBD。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述IBD包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述nAChRa7激動(dòng)劑選自由以下組成的組:PNU282987, MEM3454, P H-399733，AR-R1779, SSR180711A, ABT-418，甲碘可卡因，3-2，4-二甲氧基苯亞甲基新煙堿(GTS-21或DMXB-A)，3-(4-羥基苯亞甲基)假木賊因，3-(4-甲氧基苯亞甲基)假木賊因，3-(4-氨基苯亞甲基)假木賊因，3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)假木賊因，3-(4-甲氧基-2-羥基苯亞甲基)假木賊因，反式-3-亞肉桂基假木賊因，反式-3-(2-甲氧基-亞肉桂基)假木賊因，和反式-3-(4-甲氧基亞肉桂基)假木賊因，N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥基苯氧基)苯甲酰胺，N_[(3R)_1_氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(4_乙酰氨基苯氧基)苯甲酰胺，N-[(3R)_1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(苯基硫烷基)苯甲酰胺，和N-[(3R)-1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基]-4-(3-氯苯磺?；?苯甲酰胺，(1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛-3-基)氨基甲酸1- (2-氟苯基)-乙酯，nAChR a 7特異性抗體，nAChR a 7特異性抑制性RNA，和藥學(xué)上可接受的鹽，或其組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述治療包括預(yù)防IBD在所述受治療者中的發(fā)展或預(yù)防IBD在所述受治療者中的進(jìn)展。
8.一種調(diào)節(jié)至少一種免疫細(xì)胞類型中的nAChR a 7活性的方法，所述方法包括使所述至少一種免疫細(xì)胞類型與以有效調(diào)節(jié)所述至少一種免疫細(xì)胞類型中的nAChRa 7活性的量的nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑接觸。
9.一種減少在具有慢性胃腸道炎癥的受治療者中發(fā)展結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)的方法，所述方法包括以有效調(diào)節(jié)一種或多種胃腸道免疫細(xì)胞中的nAChR a 7活性的量對(duì)受治療者施用nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑，借此調(diào)節(jié)nAChR a 7活性改變?cè)谒鲆环N或多種胃腸道免疫細(xì)胞中的炎癥反應(yīng)，因此減少發(fā)展結(jié)直腸癌的風(fēng)險(xiǎn)。
10.一種鑒定在表達(dá)nAChR a 7的至少一種細(xì)胞中調(diào)節(jié)nAChR a 7活性的化合物或劑的方法，所述方法包括: (i)使所述表達(dá)nAChR a 7的至少一種細(xì)胞與候選化合物或劑接觸； ( )確定與所述候選化合物或劑接觸的所述表達(dá)nAChRa 7的至少一種細(xì)胞中的nAChR a 7 活性；(iii)確定沒有與所述候選化合物或劑接觸的表達(dá)nAChRa7的至少一種對(duì)照細(xì)胞中的nAChRa7活性；和 (iv)對(duì)比與所述候選化合物或劑接觸的所述至少一種細(xì)胞中的nAChRa7活性和所述至少一種對(duì)照細(xì)胞中的nAChRa 7活性； 其中在與所述候選化合物或劑接觸的所述至少一種細(xì)胞中的nAChRa 7活性與所述至少一種對(duì)照細(xì)胞中的nAChR a 7活性的差異鑒定在至少一種細(xì)胞中調(diào)節(jié)nAChR a 7活性的候選化合物或劑。
11.一種預(yù)測(cè)對(duì)受害于由nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)的異常水平導(dǎo)致的IBD的受治療者施用nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑的治療效果的方法，其中所述nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑是nAChR a 7拮抗劑或nAChR a 7激動(dòng)劑，所述方法包括: (a)測(cè)量在施用nAChRa7調(diào)節(jié)劑之前所述受治療者的組織或細(xì)胞中nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平； (b)以有效改變所述受治療者的組織或細(xì)胞中nAChRa7基因或蛋白表達(dá)水平的量對(duì)所述受治療者施用nAChRa 7調(diào)節(jié)劑； (C)測(cè)量來自于施用所述nAChR a 7調(diào)節(jié)劑之后的受治療者的組織或細(xì)胞中的nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平；和 (d)確定施用所述nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之后的組織或細(xì)胞中nAChRa 7的基因或蛋白表達(dá)水平相比較于施用所述nAChRa 7調(diào)節(jié)劑之前的組織或細(xì)胞中基因或蛋白表達(dá)水平的改變； 其中在所述組織或者細(xì)胞中的nAChRa 7基因或蛋白表達(dá)水平的改變預(yù)測(cè)所述nAChRa 7表達(dá)調(diào)節(jié)劑對(duì)于受害于IBD的受治療者的治療效果。`
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中nAChRa 7在受害于IBD的受治療者中被過度表達(dá)至異常水平，并且其中基因或蛋白表達(dá)水平的降低預(yù)測(cè)對(duì)施用所述nAChRa 7調(diào)節(jié)劑的正反應(yīng)。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中nAChRa7在受害于IBD的受治療者中被下調(diào)至異常表達(dá)水平，并且其中基因或蛋白表達(dá)水平的增加預(yù)測(cè)對(duì)施用所述nAChRa 7調(diào)節(jié)劑的正反應(yīng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中基因表達(dá)水平的改變是使用一種或多種方法確定的，所述方法選自由以下組成的組:RNA印跡法，RT-PCR,實(shí)時(shí)RT-PCR，原位雜交，和微陣列。
15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中蛋白表達(dá)水平的改變是使用一種或者多種方法確定的，所述方法選自以下組成的組:蛋白質(zhì)印跡法，ELISA，質(zhì)譜，免疫組織化學(xué)，和蛋白質(zhì)陣列。
16.一種藥物組合物，包括有效調(diào)節(jié)nAChR a 7的功能以治療或預(yù)防有相應(yīng)治療需要的受治療者的炎性腸病(IBD)的量的煙堿型乙酰膽堿受體a 7 (nAChR a 7)的特異性激動(dòng)劑或特異性拮抗劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的組合物，還包括藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
公開了nAChRα7的激動(dòng)劑和拮抗劑以及它們作為用以治療和管理炎性腸病(IBD)例如克羅恩病(Crohn’s disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的治療劑的用途。公開了nAChRα7的激動(dòng)劑和拮抗劑以及它們作為用以治療和管理炎性腸病(IBD)例如克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的治療劑的用途。
文檔編號(hào)A61P1/04GK103200954SQ201180039320
公開日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2011年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月25日
發(fā)明者旭航·李, 菲利普·亞歷克斯, 邁克爾·B·森托拉 申請(qǐng)人:約翰霍普金斯大學(xué), 俄克拉荷馬州醫(yī)學(xué)研究基金會(huì)