專利名稱：Mdm2/4及p53相互作用抑制劑的結(jié)晶型的制作方法
MDM2/4及P53相互作用抑制劑的結(jié)晶型介紹本發(fā)明涉及一種⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4-二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸鹽的結(jié)晶型，其適用于治療與p53或其變體分別與MDM2和/或MDM4或其變體之間的相互作用(尤其與MDM2和/或MDM4或其變體結(jié)合)相關(guān)的疾病或失調(diào)；一種制備該結(jié)晶型的方法；包含該結(jié)晶型的藥物制劑；該結(jié)晶型于治療疾病或失調(diào)(包括治療和/或預(yù)防)的用途及其使用方法；和/或如下所述的相關(guān)主題內(nèi)容。p53指名稱為TP53、p53、TP73、p73、TP63、TP73L、p63的所有基因和/或其所編碼的蛋白質(zhì)。MDM2指名稱為MDM2、Mdm2、HDM2、Hdm2的所有基因和/或其所編碼的蛋白質(zhì)。MDM4指名稱為MDM4、Mdm4、HDM4、Hdm4、MDMX、MdmX、HDMX、HdmX的所有基因和/或其所編碼的蛋白質(zhì)。已知蛋白質(zhì)p53為腫瘤抑制蛋白，其有助于控制細(xì)胞完整性并藉由啟動(除其他響應(yīng)以外)生長停滯或·細(xì)胞凋亡(受控細(xì)胞死亡)，避免永久性損傷細(xì)胞的增殖。P53的介導(dǎo)作用在于其是可調(diào)節(jié)諸多調(diào)節(jié)(例如)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的基因的轉(zhuǎn)錄因子。因此，P53是重要的細(xì)胞周期抑制劑。此等活性受MDM2(p53腫瘤抑制劑的重要負(fù)調(diào)控劑)嚴(yán)格控制。“MDM2”(源自致癌基因“鼠雙微粒體2”)系指該基因及由該基因所編碼的蛋白質(zhì)的名稱。MDM2蛋白系用作識別p53腫瘤抑制劑的N末端轉(zhuǎn)活化域(TAD)且因此介導(dǎo)p53的泛素依賴性降解的E3泛素連接酶，及p53轉(zhuǎn)錄活化的抑制劑。最初自轉(zhuǎn)化小鼠細(xì)胞系克隆編碼MDM2蛋白的原始小鼠致癌基因。此蛋白的人類同源物隨后被識別且有時亦被稱為HDM2 (表示“人雙微粒體2”)。進(jìn)一步支持MDM2作為致癌基因的作用，已顯示若干人類腫瘤及增殖性疾病類型具有增加的MDM2濃度，該等類型尤其包括軟組織肉瘤、骨癌(例如骨肉瘤)、乳腺瘤、膀胱癌、李佛美尼(L1-Fraumeni)綜合征、腦腫瘤、橫紋肌肉瘤及腎上腺皮質(zhì)癌及類似者。屬于MDM2家族的另一蛋白是MDM4(亦被稱為MDMX)。因此，可在諸多增殖性疾病中發(fā)現(xiàn)MDM2/p53比例的失調(diào)，此系由于(例如)受影響細(xì)胞中的突變、多態(tài)性或分子缺陷所致。MDM2由于其所述作用而可抑制腫瘤抑制蛋白P53的活性，因此導(dǎo)致p53的腫瘤抑制活性的損失且抑制阻止細(xì)胞失控增殖的調(diào)節(jié)機(jī)制。因此，可發(fā)生失控增殖，從而導(dǎo)致腫瘤、白血病或其他增殖性疾病。本文所提及的MDM2/p53相互作用抑制包括本文的MDM2/p53相互作用和/或MDM4/p53相互作用，尤其系Hdm2/p53和/或Hdm4/p53相互作用。需要一種⑶-1- (4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2- (4_ {甲基-[4_ (4_甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1, 4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型，其可用于提供用于治療與MDM2/p53相互作用相關(guān)的疾病或失調(diào)的藥物組合物
發(fā)明內(nèi)容
已發(fā)現(xiàn)如本文所述的(S)-1-(4-氯-苯基)-7_異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1, 4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸鹽的結(jié)晶型I相比于游離堿無定形，顯著改善加工特性，并改善溶解性及穩(wěn)定性。
具體實施例方式在一實施方式中，提供一種⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1, 4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸鹽的結(jié)晶型。具體說，該硫酸鹽是硫酸氫鹽。在另一實施方式中，提供一種⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1, 4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸氫鹽的結(jié)晶型，其具有包括以下峰的粉末X射線衍射圖(使用(:111^輻射):18.8、21.3及22.7° 2 Θ 角(誤差+/-0.2° )。在另一實施方式中，本發(fā)明提供一種(S)-1-(4-氯-苯基)-1-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1,4-二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸氫鹽的結(jié)晶型，其具有與本文

圖1或圖2中所示的粉末X射線衍射圖實質(zhì)上相同的粉末X射線衍射圖(使用CuK α輻射)。
·
在其他不同的實施方式中，本發(fā)明提供: 如本文所定義的結(jié)晶型，其用作藥物。 如本文所定義的結(jié)晶型，其用于治療由MDM2和/或MDM4的活性介導(dǎo)的失調(diào)或疾病。.一種如本文所定義的結(jié)晶型在制備在個體中治療由MDM2和/或MDM4的活性介導(dǎo)的失調(diào)或疾病的藥物中的用途。.一種藥物組合物，其包含治療上有效量的如本文所定義的結(jié)晶型及一或多種藥學(xué)上可接受的載劑。 一種調(diào)節(jié)個體的MDM2和/或MDM4活性的方法，其包括對個體給予治療上有效量的如本文所定義的結(jié)晶型的步驟。 一種治療由MDM2和/或MDM4的活性介導(dǎo)的失調(diào)或疾病的方法，其包括對個體給予治療上有效量的如本文所定義的結(jié)晶型的步驟。.如本文所述的結(jié)晶型、用途或方法，其中該失調(diào)或疾病是增殖性失調(diào)或疾病。.如本文所定義的結(jié)晶型，其是與一或多種治療活性劑組合。定義已如上所述，MDM2 (尤其當(dāng)以MDM2或其變體述及時)一般是指名稱為MDM2、Mdm2、HDM2、Hdm2的所有基因和/或其所編碼的蛋白質(zhì)、或其變體。MDM4 (尤其當(dāng)以MDM4或其變體述及時)是指名稱為MDM4、Mdm4、HDM4、Hdm4、MDMX、MdmX、HDMX、HdmX的所有基因和/或其所編碼的蛋白質(zhì)、或其變體。具體說，MDM2是指如 EMBO J.10, 1565-9，F(xiàn)akharzadeh 等人，1991 中所述的 MDM2，其變體是指在以下所述的分析系統(tǒng)中仍與P53結(jié)合的其變體(例如，由于一或多個(例如，I至430個)氨基酸的缺失、插入和/或交換所產(chǎn)生的剪接變體、同種型、片段、突變體或致癌基因)，其相當(dāng)于最初所述的較佳至少具有0.5%，更佳至少具有5%、10%、20%、30%、40%或尤其是50%或更多的MDM2對p53的親和力的全長蛋白質(zhì)，且與最初所述或以下具體所述的MDM2或HDM2具有至少20%，更佳至少25%的序列相同性。在未另外提及之處，MDM2 —般是指如剛才所分別定義的MDM2、Mdm2、HDM2或Hdm2、或其變體。具體說,MDM4是指如 Genomics43, 34-42，Shvarts 等人，1997 中所述的 MDM4,其變體是指在以下所述的分析系統(tǒng)中仍與P53結(jié)合的其變體(例如，變體由于一或多個(例如，I至430個)氨基酸的缺失、插入和/或交換所產(chǎn)生的剪接變體、同種型、片段、突變體或致癌基因)，其相當(dāng)于最初所述的較佳至少具有0.5%，更佳至少具有5%、10%、20%、30%、40%或尤其是50%或更多的MDM4對p53的親和力的全長蛋白質(zhì)，且與最初所述或以下具體所述的MDM4、MDMX, HDM4或HDM2具有至少20%，更佳至少25%的序列相同性。在未另外提及之處，MDM4 一般是指如剛才所分別定義的MDM4、Mdm4、HDM4、Hdm4、MDMX、MdmX、HDMX或HdmX、或其變體。當(dāng)述及“其變體”時意指一或多種變體。如本文所使用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載劑”包括熟習(xí)此項技術(shù)者將知曉的任何及所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗細(xì)菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩(wěn)定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味齊U、調(diào)味劑、芳香劑、染料及類似物·及其組合(參見(例如)《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington’sPharmaceutical Sciences),第 18 版，馬克印刷公司(Mack Printing Company), 1990,第1289至1329頁)。除與該活性成分不兼容的任何習(xí)知載劑以外，可預(yù)期其在治療或藥物組合物中的用途?！敖M合”意指呈一種單位劑型的固定組合，或用于組合給予的部份的套組，其中該式(I)化合物及組合搭配物可同時獨立地給予，或在尤其允許組合搭配物顯示合作(例如協(xié)同)效應(yīng)的時間間隔內(nèi)分開給予。術(shù)語本發(fā)明化合物的“治療上有效量”是指將引起個體的生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)(例如，降低或抑制酶或蛋白質(zhì)活性、或改善癥狀、緩解失調(diào)、減緩或延遲疾病發(fā)展、或預(yù)防疾病等)的本發(fā)明化合物的含量。在一非限制性實施方式中，術(shù)語“治療上有效量”是指當(dāng)給予給個體時，對于(I)至少部份緩解、抑制、預(yù)防和/或改善(i)由P53/MDM2比例失調(diào)所介導(dǎo)，或
(ii)與P53/MDM2比例失調(diào)相關(guān)，或(iii)特征為p53/MDM2比例失調(diào)的病癥或失調(diào)癥或疾??；或(2)減少或抑制P53/MDM2相互作用的活性有效的本發(fā)明化合物的含量。在另一非限制性實施方式中，術(shù)語“治療上有效量”是指當(dāng)給予細(xì)胞或組織或非細(xì)胞生物物質(zhì)或介質(zhì)時，對于至少部份減少或抑制P53/MDM2相互作用有效的本發(fā)明化合物的含量。如本文所使用，術(shù)語“個體”是指動物。通常該動物是哺乳動物。個體亦是指(例如)靈長類(例如，人類)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥及類似物。在某些實施方式中，該個體是靈長類。在其他實施方式中，該個體是人類。如本文所使用，術(shù)語“抑制”是指減少或抑制特定病癥、癥狀、或失調(diào)癥、或疾病，或顯著降低生物活性或過程的基線活性。如本文所使用，術(shù)語任何疾病或失調(diào)的“治療”或“療法”在一實施方式中是指改善該疾病或失調(diào)(即，減緩或阻止或減少該疾病的發(fā)展或至少一種其臨床癥狀)。在另一實施方式中，“治療”或“療法”是指緩解或改善至少一種身體參數(shù)，其包括彼等無法由患者辨別者。在又一實施方式中，“治療”或“療法”是指在身體上(例如，穩(wěn)定可辨別癥狀)、生理上(例如，穩(wěn)定身體參數(shù))或兩者上調(diào)節(jié)該疾病或失調(diào)。在又一實施方式中，“治療”或“療法”是指預(yù)防或延遲該疾病或失調(diào)的發(fā)作或發(fā)生或發(fā)展。如本文所使用，如果個體將在生物上、醫(yī)學(xué)上或在生活質(zhì)量上自該療法獲益，則該個體“需要”此療法。除非本文另外指出或文中明確矛盾，否則如本文所使用，術(shù)語“一”、“一個”、“該”及本發(fā)明中(尤其是權(quán)利要求書中)所使用的類似術(shù)語應(yīng)被視為涵蓋單數(shù)及復(fù)數(shù)。除非本文另外指出或文中明確矛盾，否則可以任何適宜的順序進(jìn)行本文所述的所有方法。本文所提供的任何及所有實例或示例性語言(例如，“如”)意欲僅更佳闡述本發(fā)明且無意限制另外所申請的本發(fā)明的范圍?！傲蛩猁}”可意指硫酸氫鹽、或單硫酸鹽、或其混合物。藥物纟目合物本發(fā)明亦關(guān)于包含本發(fā)明結(jié)晶型的藥物組合物。因此，本發(fā)明提供:.一種藥物組合物，其包含(即，含有或由其組成)如本文所定義的結(jié)晶型及一或多種載劑/賦形劑；·.一種藥物組合物，其包含治療上有效量的如本文所定義的結(jié)晶型及一或多種藥學(xué)上可接受的載劑/賦形劑。本發(fā)明提供一種藥物組合物，其包括本發(fā)明結(jié)晶型及藥學(xué)上可接受的載劑?？蓪⒃撍幬锝M合物配制成供特定給予途徑用，如經(jīng)口給予、非經(jīng)腸給予及直腸給予等。此外，可將本發(fā)明藥物組合物制成固體形式(包括(但不限于)膠囊、片劑、丸劑、顆粒劑、粉劑或栓齊U)或呈液體形式(包括(但不限于)溶液、懸浮液或乳液)?？墒乖摰人幬锝M合物接受習(xí)知的藥學(xué)操作(如滅菌)和/或可含有習(xí)知的惰性稀釋劑、潤滑劑、或緩沖劑、及佐劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、乳化劑及緩沖劑等。通常，該等藥物組合物是包含活性成分與以下各者的片劑或明膠膠囊:a)稀釋劑，例如，乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤滑劑，例如，硅石、滑石、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；對片劑而言亦包括:c)黏合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯啶酮；如果需要，則包含:d)崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或發(fā)泡混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、香料及甜味劑。片劑可根據(jù)相關(guān)技術(shù)中已知的方法經(jīng)薄膜包衣或腸溶衣包衣。適用于經(jīng)口給予的組合物包括有效量的呈片劑、含片、水性或油性懸浮液、可分散粉劑或顆粒劑、乳液、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑形式的本發(fā)明化合物。根據(jù)制造藥物組合物技術(shù)中已知的任何方法，制備預(yù)期供口服使用的組合物，且此等組合物可含有一或多種選自甜味劑、芳香劑、著色劑及防腐劑的藥劑，以提供藥物上精致且美味的制劑。片劑可含有與適于制造片劑的藥學(xué)上可接受的無毒賦形劑混合的活性成分。此等賦形劑是(例如)惰性稀釋劑(如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)；?；氨澜鈩?例如，玉米淀粉、或海藻酸)黏合劑(例如，淀粉、明膠或阿拉伯膠)；及潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石)。該等片劑未經(jīng)包衣或藉由已知技術(shù)經(jīng)包衣，以延遲在腸道中的崩解及吸收且藉此提供在更長時間內(nèi)的持續(xù)作用。例如，可使用時間延遲材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。供口服使用的制劑可呈其中將該活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合的硬明膠膠囊，或呈其中將該活性成分與水或油性介質(zhì)(例如，花生油、液體石蠟或橄欖油)混合的軟明膠膠囊提供。某些可注射組合物是等滲水溶液或懸浮液，且栓劑宜自脂肪乳液或懸浮液制備。該等組合物可經(jīng)滅菌和/或含有佐劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑或乳化劑、溶液促進(jìn)劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。此外，其亦可含有其他治療上有用的物質(zhì)。該等組合物是分別根據(jù)習(xí)知的混合、?；虬路椒ㄖ频茫液屑s0.1至75%或含有約I至50%的活性成分。適用于透皮施用的組合物包括有效量的本發(fā)明化合物及適宜的載劑。適用于透皮遞送的載劑包括可吸收的藥學(xué)上可接受的溶劑以促進(jìn)經(jīng)由主體的皮膚的通道。例如，透皮裝置是呈繃帶形式，該繃帶包括背襯組件、含有該化合物及視情況可選的載劑的儲集器、視情況可選的速度控制障壁(用于依控制及預(yù)定速率將該化合物長時間遞送至主體的皮膚)、及將該裝置固定至皮膚的構(gòu)件。適用于局部應(yīng)用(例如，用于皮膚及眼睛)的組合物包括水溶液、懸浮液、藥膏、乳霜、凝膠或可噴霧制劑(例如，用于藉由氣溶膠或類似者的遞送)。此等局部遞送系統(tǒng)將尤其適用于皮膚應(yīng)用，例如，以治療皮膚癌，例如，供在防曬霜、洗劑、噴霧及類似物中的預(yù)防使用。因此，其特別適于以局部使用，包括相關(guān)技術(shù)中已熟知的化妝品、制劑。此等可含有增溶劑、穩(wěn)定劑、滲透性·增強(qiáng)劑、緩沖劑及防腐劑。如本文所使用，局部應(yīng)用亦可涉及吸入或鼻內(nèi)應(yīng)用?？稍谑褂没虿皇褂眠m宜推進(jìn)劑的情況下，自干粉末吸入器以干粉末形式(單獨或呈混合物(例如，與乳糖的干燥摻合物)、或與(例如)磷脂的混合組分顆粒)，或自加壓容器、泵、噴射器、噴霧器或霧化器以氣溶膠噴霧形式方便地遞送其等。本發(fā)明另外提供包含本發(fā)明化合物作為活性成分的無水藥物組合物及劑型，因為水可促進(jìn)某些化合物的降解?？墒褂脽o水或低含水成分及低水分或低濕度條件，制備本發(fā)明無水藥物組合物及劑型?？芍苽浼皟Υ鏌o水藥物組合物使得保持其無水性質(zhì)。因此，使用已知的材料包裝無水組合物以避免接觸水，使得其可含于適宜的處方藥盒中。適宜的包裝的實例包括(但不限于)密封箔、塑料、單位劑量容器(例如，小瓶)、泡罩包裝及帶包裝。本發(fā)明另外提供藥物組合物及劑型，其包含降低本發(fā)明化合物作為活性成分的分解速率的一或多種藥劑。此等藥劑(本文亦被稱為“穩(wěn)定劑”)包括(但不限于)抗氧化劑(如抗壞血酸)、PH緩沖劑或鹽緩沖劑等。藥物用涂在另一方面中，本發(fā)明涉及本發(fā)明結(jié)晶型作為藥物的用途。因此，本發(fā)明提供: 如本文所定義的結(jié)晶型，其用作藥物；.本發(fā)明結(jié)晶型，其用于治療個體的與MDM2和/或MDM4的活性相關(guān)的失調(diào)或疾?。?本發(fā)明結(jié)晶型在制備治療個體的與MDM2和/或MDM4的活性相關(guān)的失調(diào)或疾病的藥物中的用途； 如本文所定義的結(jié)晶型的用途，其是用于治療選自以下的增殖性失調(diào)或疾病:癌癥或腫瘤疾病(如良性或惡性腫瘤)、肉瘤(如脂肉瘤、橫紋肌肉瘤或骨癌，例如骨肉瘤)、癌癥(如腦癌、腎臟癌、肝癌、腎上腺癌、膀胱癌、乳癌、胃癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、直腸癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、陰道癌或甲狀腺癌)、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤、胃腸癌(尤其是結(jié)腸癌或結(jié)腸直腸腺瘤)、頭頸部腫瘤、黑色素瘤、前列腺增生、瘤形成、上皮特征的贅生物、白血病或淋巴瘤(如B或T細(xì)胞源及在其他器官中的轉(zhuǎn)移)、病毒感染(例如，皰疹、乳頭狀瘤病毒、HIV、卡波西肉瘤(Kaposi)、病毒性肝炎)； 一種調(diào)節(jié)個體的MDM2和/或MDM4活性的方法，其包括對個體給予治療上有效量的本發(fā)明結(jié)晶型的步驟； 一種治療與MDM2和/或MDM4的活性相關(guān)的失調(diào)或疾病的方法，其包括對個體給予治療上有效量的如本文所述的本發(fā)明結(jié)晶型的步驟；可如W098/01467(尤其涉及分析時以引用的方式并入本文中)中所述或較佳如下所述來顯示⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基_2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1·-基)_反式-環(huán)己基甲基]-氨基}_苯基)_1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的療效:時差式熒光能暈轉(zhuǎn)移(TR-FRET)試驗藉由時差式熒光能量轉(zhuǎn)移法(TR-FRET)，測定p53-Hdm2及p53-Hdm4相互作用的抑制。熒光能量轉(zhuǎn)移(或福斯特(Foerster)共振能量轉(zhuǎn)移)描述供體及受體熒光分子之間的能量轉(zhuǎn)移。就此分析而言，使用經(jīng)C末端生物素基團(tuán)標(biāo)記的MDM2蛋白(氨基酸2-188)及MDM4蛋白(氨基酸2-185)與銪標(biāo)記鏈霉抗生物素(美國馬薩諸塞州沃爾瑟姆的帕金埃爾默公司(Perkin Elmer, Inc., Waltham, MA, USA))的組合作為供體突光團(tuán)。由p53衍生的Cy5標(biāo)記肽Cy5-TFSDLWKLL(p53aal8-26)是能量受體。在340nm下激活供體分子后，MDM2或MDM4與p53肽之間的結(jié)合相互作用引起能量轉(zhuǎn)移及在665nm的受體發(fā)射波長下的加強(qiáng)回應(yīng)。由于抑制劑分子結(jié)合至MDM2或MDM4的p53結(jié)合位點所引起的p53_MDM2或p53_MDM4復(fù)合物形成的破壞導(dǎo)致在615nm處的高供體發(fā)射。自于時差模式中測定的兩個不同突光信號的原始數(shù)據(jù)，計算比率FRET分析讀出(665nm計數(shù)率/615nm計數(shù)率xlOOO)。在白色1536w微量滴定板(德國富力豪森的瑞納生物公司(Greiner Bio-OreGmbH, Frickenhausen, Germany))中，藉由將 IOOnl 稀釋于 90%DMS0/10%H20 (3.2% 最終 DMSO濃度)中的化合物與2 μ I銪標(biāo)記鏈霉抗生物素(最終濃度2.5ηΜ)合并于反應(yīng)緩沖液(PBS、125mM NaCl >0.001%Novexin(由碳水化合物聚合物組成(Novexin聚合物)，設(shè)計為增加蛋白質(zhì)的溶解度及穩(wěn)定性；Novexin Ltd., Cambridgeshire, United Kingdom)、明膠 0.01%、
0.2%普羅流尼克(Pluronic)(環(huán)氧乙烷與環(huán)氧丙烷的嵌段共聚物，德國路德維希港的巴斯夫公司(BASF, Ludwigshafen, Germany)) > ImM DTT)中，接著添加0.5 μ I稀釋于分析緩沖液中的MDM2-Bio或MDM4-Bio (最終濃度IOnM)，以3.1 μ I的總體積進(jìn)行該測試。允許該溶液在室溫下預(yù)培養(yǎng)15分鐘，接著添加0.5 μ I含于分析緩沖液中的Cy5-p53肽(最終濃度20nM)。在室溫下培養(yǎng)10分鐘，然后讀出該板。為了測定樣品，使用具有以下設(shè)定值的Analyst GT多模式微量板讀數(shù)器(Molecular Devices):分色鏡380nm,激發(fā)330nm,發(fā)射供體615nm及發(fā)射受體665nm。藉由使用XL配置來擬合曲線，計算IC5tl值。若未指出，則試劑是購自美國密蘇里州的西格瑪化學(xué)品公司(Sigma Chemical Co, St.Louis, MO, USA)。亦存在可顯示式(I)化合物的體內(nèi)抗腫瘤活性的實驗。例如，可使用具有皮下移植的人類骨肉瘤SJSA-1腫瘤的雌性哈蘭(Harlan，Indianapolis, Indiana, USA)無胸腺nu/nu小鼠，測定p53/MDM2相互作用抑制劑的抗腫瘤活性。第O天，使該等動物口服Forene ._ι-氯-2，2，2-三氟乙基二氟甲醚，德國威斯巴登的雅培公司(Abbot, Wiesbaden, Germany)麻醉,在該等動物的左腹皮膚下注射3xl06個細(xì)胞。當(dāng)腫瘤達(dá)到IOOmm3的體積時，將該等小鼠隨機(jī)分組_每組6至8只動物并開始處理。藉由以確定劑量每天經(jīng)口、靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給予含于適宜媒劑中的式(I)化合物兩次(或更低頻率)，進(jìn)行該處理2至3周時間。每周用滑尺測量腫瘤兩次，且計算該等腫瘤的體積。除細(xì)胞系SJSA-1以外，亦可以相同方式使用其他細(xì)胞系，例如:.HCTl 16 結(jié)腸癌細(xì)胞系(ATCC 編號 CCL-247)；.LNCaP純系FGC前列腺癌細(xì)胞系(ATCC編號CRL-1740)；.RKO 結(jié)腸癌細(xì)胞系(ATCC 編號 CRL-2577)；.HT1080纖維肉瘤細(xì)胞系(ATCC編號CCL-121)；
·
.A375惡性黑色素瘤細(xì)胞系(ATCC編號CRL-1619)；.NC1-H460大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系(ATCC編號HT8-177)；.JEG-3 絨毛膜癌(ATCC 編號 HTB-36)；.ZR-75-1 乳腺導(dǎo)管癌(ATCC 編號 CRL-1500)。(S)-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2- (4_ {甲基-[4_ (4_甲基_3_氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮游離堿:p53-Hdm2 抑制(TR-FRET)分析的 IC5Q(yM):0.0008p53-Hdm4 抑制(TR-FRET)分析的 IC5Q(yM):2.10如本文所揭示的⑶-1-(4-氯-苯基)-7_異丙氧基-6-甲氧基_2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1, 4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸氫鹽:p53-Hdm2 抑制(TR-FRET)分析的 IC5CI(yM):0.0019p53-Hdm4 抑制(TR-FRET)分析的 IC5tl ( μ Μ):2.2組僉在另一方面中，本發(fā)明涉及包含如本文所述的(S)-1-(4-氯-苯基)-7_異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型及一或多種其他活性成分的組合。因此，本發(fā)明提供:.一種組合，具體說是一種藥物組合，其包含如本文所述的⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2- (4- {甲基-[4- (4-甲基-3-氧代-哌嗪_1_基)_反式-環(huán)己基甲基]-氨基}_苯基)_1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型，及一或多種治療活性齊U，尤其是抗增殖劑；.一種適用于同時或依序給予的組合型藥物組合物，其包括如本文所述的
(S)-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基_3_氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型；治療上有效量的一或多種組合搭配物，具體說是抗增殖劑；一或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑；.如本文所定義的組合型藥物組合物，其是⑴作為藥物，(ii)用于治療由MDM2和/或MDM4的活性所介導(dǎo)的失調(diào)或疾病，(iii)用于一種治療由MDM2和/或MDM4的活性所介導(dǎo)的失調(diào)或疾病的方法。亦可有利地使用如本文所述的⑶-1-(4-氯-苯基)-7_異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)_1，4-二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型與其他抗增殖化合物的組合。此等抗增殖化合物包括(但不限于)芳香酶抑制劑；抗雌激素劑；拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑；拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑；微管活性化合物；烷基化化合物；組蛋白去乙酰酶抑制劑；誘導(dǎo)細(xì)胞分化過程的化合物；環(huán)氧合酶抑制劑；MMP抑制劑；mT0R抑制劑，如RAD001 ;抗腫瘤型抗代謝藥物；鉬化合物；靶向/減少蛋白質(zhì)或脂質(zhì)激酶活性的化合物及其他抗血管生成化合物；靶向、減少或抑制蛋白質(zhì)或脂質(zhì)磷酸酶的活性的化合物；性腺釋素激動劑；抗雄激素劑；甲硫氨酸氨基肽酶抑制劑；雙膦酸鹽；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑；抗增殖抗體，如HCD122 ;肝素酶抑制劑；Ras致癌同型異構(gòu)物抑制劑；端粒酶抑制劑；蛋白酶體抑制劑；用于治療血液惡性腫瘤的化合物，如氟達(dá)拉濱(fludarabine);祀向、減少或抑制Flt_3活性的化合物，如PKC412 ；Hsp90抑制劑，如17-AAG(17-烯丙基氨基格爾德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基氨基乙氨基-17-去甲氧基-格爾德霉·素，NSC707545)、lP1-504、CNF1010、CNF2024、CNF1010 (購自 Conforma Therapeutics)及AUY922 ;替莫唑胺(temozolomide) (TEM0DAL )；驅(qū)動蛋白紡錘體蛋白抑制劑，如SB715992或SB743921(購自GlaxoSmithKline)、或噴他脒(pentamidine) / 氯丙嗪(chlorpromazine)(購自 CombinatoRx) ；PI3K 抑制劑，如ΒΕΖ235 ；RAF抑制劑，如RAF265 ；MEK抑制劑，如ARRY142886(購自陣列先鋒制藥(ArrayPioPharma) )、AZD6244 (購自阿斯利康(AstraZeneca)), PD181461 (購自輝瑞(Pfizer))；甲酰四氫葉酸、EDG結(jié)合劑、抗白血病化合物、核糖核苷酸還原酶抑制劑、S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶抑制劑、細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)劑、抗增殖抗體或其他化療化合物。另外、或者或此外，其等可與其他腫瘤治療方法組合，該等方法包括手術(shù)、電離輻射、光動力療法、植入物(例如，含有皮質(zhì)類固醇、激素)；或其等可用作輻射敏化劑。此外，在抗炎和/或抗增殖療法中，包含與抗炎藥的組合。亦可與抗組胺原料藥、支氣管擴(kuò)張藥、NSAID或趨化因子受體拮抗劑組合。如本文所使用，術(shù)語“芳香酶抑制劑”是指抑制雌激素產(chǎn)生(即，基質(zhì)雄烯二酮及睪酮分別轉(zhuǎn)化成雌酮及雌二醇)的化合物。該術(shù)語包括(但不限于)類固醇(尤其是阿納托唑(atamestane)、依西美坦(exemestane)及福美司坦(formestane)),及具體說是非類固醇(尤其是胺魯米特(aminoglutethimide)、洛太米特(roglethimide)、(pyridoglutethimide)> 曲洛司坦(tri1stane)、睪內(nèi)酯(testolactone)、酮康唑(ketokonazole)、伏氯唑(vorozole)、法屈唑(fadrozole)、阿那曲唑(anastrozole)及來曲唑(letrozole))?？梢?例如)市售形式(例如,商標(biāo)AR0MASIN)給予依西美坦。可依(例如)市售形式(例如，商標(biāo)LENTAR0N)給予福美司坦?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)AFEMA)給予法屈唑?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)ARIMIDEX)給予阿那曲唑?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)FEMARA或FEMAR)給予來曲唑?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)ORMETEN)給予胺魯米特。包含化療劑(其是芳香酶抑制劑)的本發(fā)明組合特別適用于治療激素受體陽性腫瘤，例如乳腺腫瘤。如本文所使用，術(shù)語“抗雌激素劑”是指在雌激素受體濃度上拮抗雌激素作用的化合物。該術(shù)語包括(但不限于)他莫昔芬(tamoxifen)、氟維司群(fulvestrant)、雷洛昔芬(raloxifene)及雷洛昔芬鹽酸鹽?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)NOLVADEX)給予他莫昔芬?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)EVISTA)給予雷洛昔芬鹽酸鹽。氟維司群可如US4，659，516中所揭示地制劑，且可依(例如)其市售形式(例如，商標(biāo)FASL0DEX)給予。包含化療劑(其是抗雌激素劑)的本發(fā)明組合特別適用于治療雌激素受體陽性腫瘤，例如乳腺腫瘤。如本文所使用，術(shù)語“抗雄激素劑”是指可抑制雄性激素的生物作用的任何物質(zhì)，且包括(但不限于)比卡魯胺(bicalutamide) (CAS0DEX )，其可如US4，636，505中所揭示地制劑。如本文所使用，術(shù)語“性腺釋素”包括(但不限于)阿巴瑞克(abarelix)、戈舍瑞林(goserelin)及戈舍瑞林醋酸鹽。戈舍瑞林是揭不于US4, 100，274中，且可依(例如)其市售形式(例如，商標(biāo)Z0LADEX)給予。可如(例如)US5，843，901中所揭示地配制阿巴瑞克。如本文所使用，術(shù)語“·拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑”包括(但不限于)拓?fù)涮婵?topotecan)、吉馬替康(gimatecan)、伊立替康(irinotecan)、喜樹喊(camptothecian)及其類似物、9-硝基喜樹堿及大分子喜樹堿共軛物PNU-166148 (W099/17804中的化合物Al)?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)CAMPT0SAR)給予伊立替康?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)HYCAMTIN)給予拓?fù)涮婵?。如本文所使用，術(shù)語“拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑”包括(但不限于)蒽環(huán)類(如多柔比星(doxorubicin)(包括脂質(zhì)體制劑,例如CAELYX)、柔紅霉素(daunorubicin)、表阿霉素(epirubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)及奈莫柔比星(nemorubicin))、蒽醌類(米托蒽醌(mitoxantrone)及洛索蒽醌(1soxantrone))、及鬼曰素(podophillotoxines)(依托泊苷(etoposide)及替尼泊苷(teniposide))?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)ET0P0PH0S)給予依托泊苷?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)VM26-BRIST0L)給予替尼泊苷?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)ADRIBLASTIN或ADRIAMYCIN)，給予多柔比星?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)FARM0RUBICIN)，給予表阿霉素?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)ZAVED0S)，給予伊達(dá)比星?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)N0VANTR0N)，給予米托蒽醌。如本文所使用，術(shù)語“微管活性化合物”是指微管穩(wěn)定化、微管去穩(wěn)定化化合物及微管聚合反應(yīng)抑制劑，其包括(但不限于)紫杉醇類，例如紫杉醇(paclitaxel)及多西紫杉醇、長春花生物堿，例如長春花堿(尤其是硫酸長春花堿)、長春新堿(尤其是硫酸長春新堿)、及長春瑞濱(vinorelbine)、盤形德莫利得(discodermolide)、秋水仙堿及埃坡霉素(epothilone)及其衍生物，例如埃坡霉素B或D或其衍生物?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)TAX0L )給予紫杉醇?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)TAX0TERE)給予多西紫杉醇?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)VINBLASTIN R.P.)，給予長春花堿?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)FARMSTIN)，給予硫酸長春新堿?？扇?例如)US5，010，099中所揭示，獲得盤形德莫利得。亦包括揭示于 W098/10121、US6, 194，184、W098/25929、W098/08849、W099/43653、W098/22461及W000/31247中的埃坡霉素衍生物。以埃坡霉素A和/或B尤其佳。如本文所使用，術(shù)語“烷基化化合物”包括(但不限于)環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、馬法蘭(melphalan)或亞硝基脲(BCNU或Gliadel)?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)CYCL0STIN)給予環(huán)磷酰胺。可依(例如)市售形式(例如，商標(biāo)H0L0XAN)給予異環(huán)磷酰胺。如本文所使用，術(shù)語“抗腫瘤型抗代謝藥物”包括(但不限于)5-氟脲嘧啶或5-FU、卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱(gemcitabine)、DNA去甲基化化合物,如5_氮雜胞苷及地西他濱(decitabine)、甲胺蝶呤(methotrexate)及伊達(dá)曲沙(edatrexate)、及葉酸拮抗劑(如培美曲塞(pemetrexed)。)可依(例如)市售形式(例如，商標(biāo)XEL0DA),給予卡培他濱?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)GEMZAR)，給予吉西他濱。如本文所使用，術(shù)語“鉬化合物”包括(但不限于)卡鉬(carboplatin)、順鉬(cis-platin)、及順鉬(cisplatinum)及奧沙利鉬(oxaliplatin)?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)CARB0PLAT)給予·卡鉬?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)EL0XAT1N)給予奧沙利鉬。如本文所使用，術(shù)語“靶向/降低蛋白質(zhì)脂質(zhì)激酶活性或蛋白質(zhì)或脂質(zhì)磷酸酶活性的化合物”或“其他抗血管生成化合物”包括(但不限于)蛋白質(zhì)酪氨酸激酶和/或絲氨酸和/或蘇氨酸激酶抑制劑或脂質(zhì)激酶抑制劑，例如:a)靶向、降低或抑制血小板源生長因子受體(I3DGFR)的化合物，如靶向、降低或抑制TOGFR的活性的化合物，尤其是抑制TOGF受體的化合物，例如，N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如，伊馬替尼(imatinib)、SUlOl、SU6668 及 GFB-1ll ；b)靶向、降低或抑制成纖維細(xì)胞生長因子受體(FGFR)的活性的化合物；c)靶向、降低或抑制類胰島素生長因子受體I(IGF-1R)的活性的化合物，如靶向、降低或抑制IGF-1R的活性的化合物，尤其是抑制IGF-1受體的激酶活性的化合物，如彼等揭示于W002/092599中的化合物，或靶向IGF-1受體或其生長因子的細(xì)胞外域的抗體；d)靶向、降低或抑制Trk受體酪氨酸激酶家族、或蝶素(Ephrin)B4抑制劑的活性的化合物；e)靶向、降低或抑制Axl受體酪氨酸激酶家族的活性的化合物；f)靶向、降低或抑制Ret受體酪氨酸激酶的活性的化合物；g)靶向、降低或抑制Kit/SCFR受體酪氨酸激酶(S卩，C-kit受體酪氨酸激酶-(H)GFR家族的一部份))的活性的化合物，如，靶向、降低或抑制c-Kit受體酪氨酸激酶家族的活性的化合物，尤其是抑制c-Kit受體的化合物，例如，伊馬替尼；h)靶向、降低或抑制C-Abl家族的成員、其基因融合產(chǎn)物(例如，BCR-Abl激酶)及突變體的活性的化合物，如靶向、降低或抑制c-Abl家族成員及其基因融合產(chǎn)物的活性的化合物，例如，N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，例如伊馬替尼或尼洛替尼(nilotinib)(AMN107) ；PD180970 ；AG957 ；NSC680410 ；PD173955(購自 ParkeDavis);或達(dá)沙替尼(dasatinib)(BMS-354825)；i)靶向、降低或抑制絲氨酸/蘇氨酸激酶的蛋白質(zhì)激酶C(PKC)及Raf家族的成員、MEK、SRC、JAK, FAK, PDKU PKB/Akt、及Ras/MAPK家族成員、和/或細(xì)胞周期素依賴性激酶家族(CDK)的成員的活性的化合物，其尤其是彼等揭示于US5，093，330中的星形孢菌素衍生物，例如米哚妥林(midostaurin);其他化合物的實例包括(例如)UCN_01、沙芬戈(safingol)、BAY43-9006、苔蘚抑素 I (Bryostatinl)、哌立福新(Perifosine);伊莫福新(Ilmofosine) ；R0318220 及 R0320432 ；G06976 ；Isis3521 ；LY333531/LY379196 ;異喹啉化合物，如彼等揭示于W000/09495中者；FTI ;BEZ235 (P13K抑制劑)或AT7519 (CDK抑制劑)；j)靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶抑制劑的活性的化合物，如靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)-酪氨酸激酶抑制劑的活性的化合物包括甲磺酸伊馬替尼(GLEEVEC )或酪氨酸磷酸化抑制劑。酪氨酸磷酸化抑制劑較佳是低分子量(MK1500)化合物、或其藥學(xué)上可接受的鹽，尤其是選自苯亞甲丙二腈類或S-芳基苯丙二腈或雙基質(zhì)喹啉類化合物的化合物，更尤其是選自 Tyrphostin A23/RG-50810 ；AG99 ；Tyrphostin AG213 ；TyrphostinAG1748 ；Tyrphostin AG490 ；Tyrphostin B44 ；TyrphoStin B44 (+)對映體；TyrphostinAG555 ；AG494 ;Tyrphostin AG556、AG957 及阿達(dá)福汀(adaphostin) (4-{[(2，5- 二羥基苯基)甲基]氨基}_苯甲酸金剛烷基酯；NSC680410，阿達(dá)福汀)的任何化合物；k)靶向、降低或抑制受體酪氨酸激酶的表皮生長因子家族(呈均聚或雜二聚體形式的EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其突變體的活性的化合物，如靶向、降低或抑制表皮生長因子受體家族的活性的化合物尤其是抑·制EGF受體酪氨酸激酶家族的成員(例如，EGF受體、ErbB2、ErbB3及ErbB4或結(jié)合至EGF或EGF相關(guān)的配體)的化合物、蛋白質(zhì)或抗體，且尤其是彼等一般且具體揭示于W097/02266(例如，實例39化合物)、或EP0564409、W099/03854、EP0520722、EP0566226、EP0787722、EP0837063, US5, 747，498、W098/10767、W097/30034, W097/49688、W097/38983,且尤其是 W096/30347 (例如，化合物被稱為CP358774)、W096/33980 (例如，化合物 ZD1839)及 W095/03283 (例如，化合物 ZM105180)中的化合物、蛋白質(zhì)或單株抗體；例如，曲妥珠單抗(trastuzumab) (Herceptin )、西妥昔單抗(cetuximab) (Erbitux )、艾瑞莎(Iressa)、它賽瓦(Tarceva)、OS1-774、C1-1033、EKB-569、GW-2016、El.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3 或 E7.6.3、及 7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶衍生物(其是揭示于W003/043541中);及I)靶向、降低或抑制C-Met受體的活性的化合物，如靶向、降低或抑制C-Met的活性的化合物，尤其是抑制C-Met受體的激酶活性的化合物，或靶向C-Met的細(xì)胞外域或結(jié)合至HGF的抗體；m)靶向、降低或抑制P13K的活性的化合物，如BEZ235或BKM120 ；η)靶向、降低或抑制細(xì)胞周期素依賴性激酶家族的活性的化合物，如Η)0332991。其他抗血管生成化合物包括具有就其活性而言的另一機(jī)制的化合物，例如與蛋白質(zhì)或脂質(zhì)激酶抑制無關(guān)者，例如，沙立度胺(THAL0MID)及TNP-470。靶向、降低或抑制蛋白質(zhì)或脂質(zhì)磷酸酶的活性的化合物是(例如)磷酸酶1、磷酸酶2A的抑制劑、或CDC25，例如，網(wǎng)田井酸(okadaic acid)或其衍生物。誘導(dǎo)細(xì)胞分化過程的化合物是(例如)視黃酸、a - Y -或δ -生育酚或α - Υ -或 三烯生育酚。如本文所使用，術(shù)語“環(huán)氧合酶抑制劑”包括(但不限于)(例如)Cox-2抑制劑、經(jīng)5-烷基取代的2-芳基氨基苯基乙酸及衍生物，如塞來考昔(celecoxib) (CELEBREX )、羅非考昔(rofecoxib) (V10XX )、依托考昔(etoricoxib)、伐地考昔(valdecoxib)或 5_ 燒基_2_芳基氨基苯基乙酸,例如,5-甲基_2_(2’ -氯_6’ -氟苯胺)苯基乙酸,魯米考昔(Iumiracoxib)。如本文所使用，術(shù)語“雙膦酸鹽”包括(但不限于)伊曲膦酸(etridonic)、氯膦酸(clodronic)、替魯勝酸(tiludronic)、帕米勝酸(pamidronic)、阿侖勝酸(alendronic)、伊班勝酸(ibandronic)、利塞勝酸(risedronic)及唑來勝酸(zoledronic acid)?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)DIDR0NEL)給予“伊曲膦酸”?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)B0NEF0S)給予“氯膦酸”。可依(例如)市售形式(例如，商標(biāo)SKELID)給予“替魯膦酸”?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)AREDIA)給予“帕米膦酸”。可依(例如)市售形式(例如，商標(biāo)F0SAMAX)給予“阿侖膦酸”?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)BONDRANAT)給予“伊班膦酸”?？梢?例如)市售形式(例如，商標(biāo)ACT0NEL)給予“利塞膦酸”。可依(例如)市售形式(例如，商標(biāo)Z0META)給予“唑來膦酸”。術(shù)語“mTOR抑制劑”是指抑制哺乳動物雷帕霉素(rapamycin)靶蛋白(mTOR)及具有抗增殖活性的化合物，如，西羅莫司(sirolimus, Rapamune )、依維莫司(everolimus,Certican 或 Afinitor )、CC1-779 及 ABT578。如本文所使用，術(shù)語“肝素酶抑制劑”是指靶向、降低或抑制硫酸肝素降解的化合物。該術(shù)語包括(但·不限于)P1-88。如本文所使用，術(shù)語“生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑”是指淋巴細(xì)胞活素或干擾素，例如干擾素Y O如本文所使用，術(shù)語“Ras致癌亞型抑制劑”(例如，H-Ras, Κ-Ras、或N-Ras)是指靶向、降低或抑制Ras的致癌活性的化合物，例如，“法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑”，例如L-744832、DK8G557 或 Rl15777(Zarnestra)。如本文所使用，術(shù)語“端粒酶抑制劑”是指靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物。靶向、降低或抑制端粒酶活性的化合物尤其是抑制端粒酶受體的化合物，例如端粒霉素(telomestatin)。如本文所使用，術(shù)語“甲硫氨酸氨基肽酶抑制劑”是指靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨基肽酶活性的化合物。靶向、降低或抑制甲硫氨酸氨基肽酶活性的化合物是(例如)bengamide或其衍生物。如本文所使用，術(shù)語“蛋白酶體抑制劑”是指靶向、降低或抑制蛋白酶體的活性的化合物。祀向、降低或抑制蛋白酶體的活性的化合物包括(例如)硼替佐米(Bortezomid)(VeIcade )及 MLN341。如本文所使用，術(shù)語“基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑”或(“MMP”抑制劑)包括(但不限于)膠原蛋白肽擬似物及非肽擬似物抑制劑、四唑衍生物，例如異羥肟酸酯肽擬似物抑制劑巴馬司他(batimastat)及其口服生物可利用類似物馬立馬司他(marimastat)(BB-2516)、普馬司他(prinomastat)(AG3340)、美他司他(metastat)(NSC683551)BMS-279251、BAYl2-9566、TAA211、MMI270B 或 AAJ996。如本文所使用，術(shù)語“用于治療血液惡性腫瘤的化合物”包括(但不限于)FMS樣酪氨酸激酶抑制劑，例如靶向、降低或抑制FMS樣酪氨酸激酶受體(Flt-3R)的活性的化合物；干擾素、Ι-b-D-阿糖呋喃胞喃唳(ara-c)及白消安(bisulfan);及ALK抑制劑,例如,革巴向、降低或抑制退行性淋巴瘤激酶的化合物。靶向、降低或抑制FMS樣酪氨酸激酶受體(Flt-3R)的活性的化合物尤其是抑制Flt-3R受體激酶家族的成員的化合物、蛋白質(zhì)或抗體，例如，PKC412、TKI258、米哚妥林(midostaurin)、星孢菌素衍生物、SUl 1248 及 MLN518。如本文所使用，術(shù)語“HSP90抑制劑”包括(但不限于)靶向、降低或抑制HSP90的內(nèi)ATP酶活性；經(jīng)由泛素蛋白酶體途徑降解、靶向、降低或抑制HSP90客體蛋白質(zhì)的化合物。靶向、降低或抑制HSP90的內(nèi)ATP酶活性的化合物尤其是抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白質(zhì)或抗體，例如，17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格爾德霉素(17AAG)、格爾德霉素(geldanamycin)衍生物；其他格爾德霉素相關(guān)的化合物；根赤殼菌素(radicicol)及HDAC抑制劑。實例HSP90抑制劑是AUY922。如本文所使用，術(shù)語“細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)劑”包括(但不限于)靶向、降低或抑制Bcl2家族成員(如ABT-263)及IAP家族成員(如AEG40826)的活性的化合物；或藉由已知或未知作用機(jī)制誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的化合物(例如，TRAIL抗體、DR5抗體)。如本文所使用，術(shù)語“抗增殖抗體”包括(但不限于)曲妥珠單抗(trastuzumab，Hercept in )、曲妥珠單抗-DM1、爾必得舒(erbi tux)、貝伐單抗(bevacizumab, Avast in )、利妥昔單抗(rituximab, Rituxan )、PR064553 (抗 CD40)、2C4 抗體及 HCD122 抗體(抗⑶40)。抗體意指(例如)完整的單·株抗體、多株抗體、由至少2種完整抗體形成的多特異性抗體、及抗體片段(只要其顯示所需的生物活性即可)。為治療急性骨髓性白血病(AML)，可將本發(fā)明固體型與標(biāo)準(zhǔn)白血病療法，尤其是用于治療AML的療法組合使用。具體說，可將該固體型與(例如)法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑和/或用于治療AML的其他藥物(如，柔紅霉素、阿霉素(adriamycin)、Ara-C, VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、去甲氧柔紅霉素、卡鉬及PKC412)組合給予。術(shù)語“抗白血病化合物”包括(例如)Ara_C(嘧啶類似物，其是脫氧胞苷的2’ - α -羥基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物)。亦包括次黃嘌呤、6-巰嘌呤(6-ΜΡ)及磷酸氟達(dá)拉濱的嘌呤類似物。靶向、降低或抑制組蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制劑活性的化合物(如丁酸鈉及辛二?；桨樊惲u肟酸(SAHA))抑制該等酶(稱為組蛋白去乙酰酶)的活性。特定的HDAC 抑制劑包括 MS275、SAHA, FK228 (先前稱 FR901228)、曲谷抑菌素 A(TrichostatinA)、LDH589(揭示于W002/22577中)及US6，552,065中所揭示的化合物，具體說，N-羥基-3- [4- [ [ [2- (2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺、或其藥學(xué)上可接受的鹽及N-羥基-3-[4-[ (2-羥乙基){2-(1Η-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽(尤其是乳酸鹽)。如本文所使用，術(shù)語“生長抑素受體拮抗劑”是指靶向、降低或抑制生長抑素受體的化合物，如奧曲肽(octreotide)及S0M230(帕西瑞肽(pasireotide))。腫瘤細(xì)胞損傷途徑是指諸如電離輻射的途徑。上文及下文所提及的術(shù)語“電離輻射”意指以電磁射線(如X射線及伽馬射線)或粒子(如α及β粒子)形式發(fā)生的電離輻射。在輻射療法(但不限于此)中提供電離輻射，且其是相關(guān)技術(shù)已知。參見Hellman在Principles and Practice of Oncology, Devita 等人編輯，第 4 版,第 I 卷,第 248 至 275頁(1993)中的 Principles of Radiation Therapy, Cancer。
如本文所使用，術(shù)語“EDG黏合劑”是指一類調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞再循環(huán)的免疫抑制劑，如FTY720。術(shù)語“核糖核苷酸還原酶抑制劑”是指嘧啶或嘌呤核苷類似物，其包括(但不限于)氟達(dá)拉濱和/或胞喃唳阿拉伯糖苷(ara-C)、6_硫鳥嘌呤、5-氟尿喃唳、克拉屈濱(cladribine)、6_巰基嘌呤(尤其是與ara_C組合抗ALL)和/或噴托他丁(pentostatin)。核糖核苷酸還原酶抑制劑尤其是羥基脲或2-羥基-1H-異吲哚-1，3- 二酮衍生物，如Nandy等人,Acta Oncologica,第 33 卷,第 8 號,第 953 至 961 頁(1994)中所述及的 PL_1、PL_2、PL-3、PL-4、PL-5、PL-6、PL-7 或 PL-8。如本文所使用，術(shù)語“S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶抑制劑”包括(但不限于)US5, 461，076中所揭示的化合物。具體說，亦包括彼等揭示于下列中的化合物、蛋白質(zhì)或VEGF單株抗體:W098/35958(例如，1-(4-氯苯氨基)-4-(4-吡啶甲基)酞嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽(例如琥珀酸鹽))、或 W000/09495、W000/27820、W000/59509、W098/11223、W000/27819 及EP0769947 中者；彼等如 Prewett 等人，Cancer Res,第 59 卷，第 5209 至 5218 頁(1999)；Yuan 等人，Proc Natl Aca·d Sci USA,第 93 卷，第 14765 至 14770 頁(1996) ;Zhu 等人，Cancer Res,第 58 卷，第 3209 至 3214 頁(1998);及 Mordenti 等人，Toxicol Pathol,第 27卷，第 I 號，第 14 至 21 頁(1999)中所述者；W000/37502 及 W094/10202 中者;如 O，Reilly等人，Cel，第79卷，第315至328頁(1994)中所述的血管抑素(ANG10STATIN);如O，Reilly等人，Cel，第88卷，第277至285頁(1997)中所述的內(nèi)皮抑素(END0STATIN);鄰氨基苯甲酰胺；ZD4190 ；ZD6474 ；SU5416 ；SU6668 ；貝伐單抗；或抗VEGF抗體或抗VEGF受體抗體，例如，rhuMAb及RHUFab ;VEGF適體，例如，哌加他尼(Macugon) ;FLT_4抑制劑、FLT-3抑制劑、VEGFR_21gGl 抗體、Angiozyme (RPI4610)及貝伐單抗(Avastin )。如本文所使用，“光動力療法”是指使用某些被稱為光敏化化合物的化學(xué)品以治療或預(yù)防癌癥的療法。光動力療法的實例包括利用如(例如)VISUDYNE 及卩卜吩姆(porf imer)鈉的化合物的療法。如本文所使用，“血管生成抑制性類固醇”是指阻斷或抑制血管生成的化合物，如(例如)阿奈可他(anecortave)、去炎松(triamcinolone)、氫化可的松(hydrocortisone)、
11-α-表氫可的松、脫氧皮醇(cortexolonehna-羥孕酮、皮質(zhì)脂酮、脫氧(腎上腺)皮質(zhì)酮、睪酮，雌酮及地塞米松(dexamethasone)。含有皮質(zhì)類固醇的植入物是指諸如(例如)氟輕松(fluocinolone)、地塞米松的化合物?！捌渌熁衔铩卑?但不限于)植物生物堿類、激素化合物及拮抗劑；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，較佳是淋巴細(xì)胞活素或干擾素；反義寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shRNA或siRNA ;或混雜化合物或具有其他或未知作用機(jī)制的化合物。由代碼、一般或商標(biāo)名稱所識別的活性化合物的結(jié)構(gòu)可自標(biāo)準(zhǔn)綱要“默克索引(The Merck Index) ”的實際版或自數(shù)據(jù)庫(例如，專利國際(Patents International)(例如，IMS World Publications))獲得。本發(fā)明中參考文獻(xiàn)的引用皆不應(yīng)被理解為承認(rèn)所引用的參考文獻(xiàn)是將負(fù)面影響本發(fā)明的可專利性的現(xiàn)有技術(shù)。
可如相關(guān)技術(shù)中所述，制備并給予可與本文所述的(S)-1-(4-氯-苯基)-7_異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型組合使用的上述化合物。本發(fā)明亦提供一種藥物制劑，其包含如本文所述的(S)-l_(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型及至少一種藥學(xué)上可接受的載劑。可單獨或與一或多種其他治療化合物組合給予本文所述的該結(jié)晶型，可能的組合療法是呈固定組合形式、或本發(fā)明化合物及一或多種其他治療(包括預(yù)防)化合物的給予是交錯或彼此獨立地提供、或固定組合及一或多種其他治療化合物的組合給予。除此以外或另外，可將該固體形式與化療、輻射療法、免疫療法、光療法、外科介入術(shù)或此等的組合組合給予，以尤其用于腫瘤治療。如上所述，長期療法同樣可作為其他治療策略中的輔助療法。其他可能的療法是保持患者在腫瘤退化后的狀態(tài)的療法，或甚至是化學(xué)預(yù)防療法(例如在處于風(fēng)險中的患者中)。該活性成分的劑量取決于各項因素，其包括該患者的類型、種類、年齡、體重、性別及醫(yī)學(xué)失調(diào)；待治療的失調(diào)的嚴(yán)重度；投藥途徑；該患者的腎及肝功能；所使用的特定化合物。一般技術(shù)的醫(yī)師、臨床醫(yī)師或獸醫(yī)可容易確定及處方有效量的所需藥物，以預(yù)防、反擊或阻止該失調(diào)的發(fā)展。達(dá)到產(chǎn)生療效的范圍內(nèi)的藥物濃度的最佳精度需要基于藥物至靶位點的可用性的動力學(xué)的方案·。待給予給溫血動物(例如，約70kg體重的人類)的如本文所述的(S)-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2- (4- {甲基-[4- (4-甲基-3-氧代-哌嗪_1_基)_反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1, 4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型的劑量較佳是約3mg至約15g/人/天,更佳是約IOmg至約3g/人/天,仍更佳是約50mg至1.5g/人/天,其是不分開以I次劑量或以較佳分成2至4次(例如，2或3次)可具有(例如)相同大小的單劑量給予。通常，兒童接受成人劑量的一半。可藉由任何習(xí)知途徑，尤其是非經(jīng)腸(例如，呈可注射容易或懸浮液形式)、經(jīng)腸(例如，經(jīng)口，(例如)呈片劑或膠囊形式)、局部(例如，呈洗劑、凝膠、藥膏或乳霜的形式，或呈鼻內(nèi)或栓劑形式)，給予該固體型。局部給予是(例如)至皮膚。局部給予的另一形式是給予至眼睛?？梢粤?xí)知方法，藉由與藥學(xué)上可接受的載劑或稀釋劑混合，制造與至少一種藥學(xué)上可接受的載劑或稀釋劑組合且包含本發(fā)明化合物的藥物組合物。本發(fā)明亦涉及一種藥物組合物，其包含有效量(尤其是有效治療上述疾病中一者的量)的如本文所述的⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基_2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4-二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型，及適用于局部、經(jīng)腸(例如，經(jīng)口或直腸)或非經(jīng)腸給予且可是無機(jī)或有機(jī)、固體或液體的一或多種藥學(xué)上可接受的載劑。尤其可存在用于經(jīng)口投藥的片劑或明膠膠囊，其包括活性成分與稀釋劑(例如，乳糖、葡萄糖、甘露醇、和/或甘油)、和/或潤滑劑和/或聚乙二醇。片劑亦可包含黏合劑，例如，硅酸鎂鋁、淀粉(如玉米、小麥或大米淀粉)、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯啶酮，且如果需要，則包含崩解劑，例如，淀粉、瓊脂、海藻酸或其鹽(如海藻酸鈉)、和/或發(fā)泡劑混合物、或吸附齊 、染料、調(diào)味劑及甜味劑。亦可使用呈非經(jīng)腸可給予組合物形式或呈輸注溶液形式的本發(fā)明藥物上活性化合物。該等藥物組合物可經(jīng)滅菌和/或可包含賦形劑，例如，防腐劑、穩(wěn)定齊U、潤濕化合物和/或乳化劑、增溶劑、用于調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。本發(fā)明藥物組合物(如果需要，可包含其他藥理活性物質(zhì))是以本身已知的方式(例如，藉由習(xí)知的混合、造粒、摻和、溶解或凍干制程)制得，且包含約1%至99%(尤其是約1%至約20%)的活性成分。實施例106氯-苯某)_7_異丙氣某_6_甲氣某甲某-「4- (4-甲某-3-氣代-哌嗪-1-某)-反式-環(huán)P1某甲某1-氡某丨-苯某)-1, 4- 二氫-2H-異暗啉-3-酮
權(quán)利要求
1.一種⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)_反式-環(huán)己基甲基]-氨基}_苯基)_1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸鹽的結(jié)晶型。
2.如權(quán)利要求1的⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基_2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4-二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸鹽的結(jié)晶型，其中該硫酸鹽系硫酸氫鹽。
3.如權(quán)利要求1或2的(S)-l-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基_2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸氫鹽的結(jié)晶型，使用Cu Ka輻射時，其具有包括以下峰的粉末X射線衍射圖:18.8、21.3及22.7° 2 Θ角(誤差+/-0.2° )。
4.如權(quán)利要求1、2或3的⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基_2_(4_{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1，4-二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸氫鹽的結(jié)晶型，使用Cu Ka輻射時，其具有與本文圖1中所示的粉末X射線衍射圖實質(zhì)上相同的粉末X射線衍射圖。
5.如權(quán)利要求1、2或3的⑶-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基_2-(4_{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代 -哌嗪-1-基)_反式-環(huán)己基甲基]-氨基}_苯基)_1，4- 二氫-2H-異喹啉-3-酮硫酸氫鹽的結(jié)晶型，使用Cu Ka輻射時，其具有與本文圖2中所示的粉末X射線衍射圖實質(zhì)上相同的粉末X射線衍射圖。
6.如權(quán)利要求1、2、3、4或5的結(jié)晶型，其用作藥物。
7.如權(quán)利要求1、2、3、4或5的結(jié)晶型，其用于治療由MDM2和/或MDM4的活性介導(dǎo)的失調(diào)或疾病。
8.權(quán)利要求1、2、3、4或5中任一項所述的結(jié)晶型在制備在個體中治療由MDM2和/或MDM4的活性介導(dǎo)的失調(diào)或疾病的藥物的用途。
9.一種藥物組合物，其包含治療上有效量的權(quán)利要求1、2、3、4或5中任一項所述的結(jié)晶型及一或多種藥學(xué)上可接受的載劑。
10.一種調(diào)節(jié)個體的MDM2和/或MDM4活性的方法，其包括給予個體治療有效量的權(quán)利要求1、2、3、4或5中任一項所述的結(jié)晶型的步驟。
11.一種治療由MDM2和 /或MDM4的活性介導(dǎo)的失調(diào)或疾病的的方法，其包括給予個體治療有效量的權(quán)利要求1、2、3、4或5中任一項所述的結(jié)晶型的步驟。
12.如權(quán)利要求7、8或11中任一項所述的結(jié)晶型、用途或方法，其特征在于，所述失調(diào)或疾病是增殖性失調(diào)或疾病。
13.如權(quán)利要求1、2、3、4或5中任一項所述的結(jié)晶型，其與一或多種治療活性劑組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及(S)-1-(4-氯-苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-{甲基-[4-(4-甲基-3-氧代-哌嗪-1-基)-反式-環(huán)己基甲基]-氨基}-苯基)-1,4-二氫-2H-異喹啉-3-酮的結(jié)晶型，其適用于治療與p53或其變體與MDM2和/或MDM4或其變體之間的相互作用相關(guān)的疾病或失調(diào)。
文檔編號A61P35/00GK103221094SQ201180055811
公開日2013年7月24日 申請日期2011年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者J·博格豪森, 任海霞 申請人:諾華有限公司