作為抗癌治療的蛋白質(zhì)靶的氧化鯊烯環(huán)化酶的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明鑒定的膽固醇生物合成途徑(包括氧化鯊烯環(huán)化酶)作為抗腫瘤治療的新蛋白質(zhì)靶。本發(fā)明還提供一類含有與芳環(huán)結(jié)構(gòu)連接的叔胺的氧化鯊烯環(huán)化酶抑制劑作為新類別的抗癌藥。本文中公開的化合物已經(jīng)在19個細胞系中以及在裸鼠中的人乳腺及前列腺異種移植物腫瘤生長物內(nèi)測試過，所述細胞系包括乳腺癌細胞、前列腺癌細胞、肺癌細胞(包括耐藥性肺癌H69AR細胞)，結(jié)腸癌細胞、卵巢癌細胞(包括耐藥性O(shè)VCAR-3細胞)和胰腺癌細胞，并且已經(jīng)證實有活性。
【專利說明】作為抗癌治療的蛋白質(zhì)靶的氧化鯊烯環(huán)化酶
[0001]本申請要求2010年12月27日提交的美國臨時申請?zhí)?1/460，167和2011年08月28日提交的美國臨時申請?zhí)?1/628，324的優(yōu)先權(quán)益，所述文獻的公開內(nèi)容通過引用的方式如其中所書寫那樣完整并入。
基金聲明
[0002]本發(fā)明是在美國政府支持下在國家健康研究所資助的基金號R21GM088517、R56CA86916和T15LM07089做出的。美國政府享有本發(fā)明中的某些權(quán)利。
[0003]本文中公開了抗癌藥物和治療方法，更具體地涉及用于治療癌癥的新蛋白質(zhì)靶，連同其抑制劑。
[0004]OSC及其抑制劑:所述的酶一氧化鯊烯環(huán)化酶(‘0SC’)已知是膽固醇生物合成途徑的一部分，因而OSC將氧化鯊烯轉(zhuǎn)化成羊毛固醇，形成類固醇支架[1，2]。已經(jīng)報道OSC的眾多抑制劑，包括一系列含有叔胺、己氧基間隔團和無約束的溴苯基的抑制劑，如式I
【權(quán)利要求】
1.一種治療癌癥的方法，所述方法包括步驟:向有需求的患者給藥治療有效量的膽固醇生物合成途徑中蛋白質(zhì)靶的抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)靶不是羥甲戊二酰輔酶A還原酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)靶是氧化鯊烯環(huán)化酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述癌癥選自乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、胰癌、肝癌、甲狀腺癌、胃癌、子宮癌、淋巴瘤、腦癌、皮膚癌、腎癌、口腔癌、喉癌、舌癌和膀胱癌，以及白血病，及它們的耐藥性表型。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述癌細胞不具有P53突變。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述癌細胞是HER2/neu陽性的乳腺癌細胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述癌細胞是雌激素受體和孕酮受體陽性的乳腺癌細胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述癌細胞是雌激素受體、孕酮受體和HER2/neu為三陰性的乳腺癌細胞。
9.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中所述癌細胞發(fā)生凋亡。
10.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的方法，其中抑制劑是并非PRIMA-1的化合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10中所述的方法，其中所述化合物是與至少兩個芳環(huán)結(jié)構(gòu)連接的叔胺。
12.根據(jù)權(quán)利要求11中所述的方法，其中所述化合物具有式1:
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述化合物是4'-[6-(烯丙基甲基氨基)己氧基]-4-溴-2'-氟二苯甲酮延胡索酸酯。
14.一種降低癌細胞生存力的方法，所述方法包括步驟:抑制細胞的膽固醇生物合成途徑中的蛋白質(zhì)靶的活性。
15.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)靶不是羥甲戊二酰輔酶A還原酶。
16.根據(jù)權(quán)利要求15中所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)靶是氧化鯊烯環(huán)化酶。
17.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述細胞選自乳腺癌細胞、前列腺癌細胞、肺癌細胞、結(jié)腸癌細胞、卵巢癌細胞、胰癌細胞、肝癌細胞、甲狀腺癌細胞、胃癌細胞、子宮癌細胞、淋巴瘤、腦癌細胞、皮膚癌細胞、腎癌細胞、口腔癌細胞、喉癌細胞、舌癌細胞和膀胱癌細胞，以及白血病細胞，及它們的耐藥性表型。
18.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述細胞不具有p53突變。
19.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述癌細胞發(fā)生凋亡。
20.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述癌細胞是HER2/neu陽性的乳腺癌細胞。
21.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述癌細胞是雌激素受體和孕酮受體陽性的乳腺癌細胞。
22.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中所述癌細胞是雌激素受體、孕酮受體和HER2/neu為三陰性的乳腺癌細胞。
23.根據(jù)權(quán)利要求14中所述的方法，其中抑制步驟用并非PRIMA-1的化合物實現(xiàn)。
24.根據(jù)權(quán)利要求23中所述的方法，其中所述化合物是與至少兩個芳環(huán)結(jié)構(gòu)連接的叔胺?！?br> 25.根據(jù)權(quán)利要求24中所述的方法，其中所述化合物具有式1:
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述化合物是4'-[6-(烯丙基甲基氨基)己氧基]-4-溴-2'-氟二苯甲酮延胡索酸酯(Ro48-8071)。
27.一種化合物的用途，所述化合物抑制細胞的膽固醇生物合成途徑中蛋白質(zhì)靶的活性，用于治療癌癥。
28.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述蛋白質(zhì)靶不是羥甲戊二酰輔酶A還原酶。
29.根據(jù)權(quán)利要求28中所述的用途，其中所述蛋白質(zhì)靶是氧化鯊烯環(huán)化酶。
30.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述癌癥選自乳腺癌、前列腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、胰癌、肝癌、甲狀腺癌、胃癌、子宮癌、淋巴瘤、腦癌、皮膚癌、腎癌、口腔癌、喉癌、舌癌和膀胱癌，以及白血病，及它們的耐藥性表型。
31.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述細胞不具有p53突變。
32.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述癌細胞發(fā)生凋亡。
33.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述癌癥是乳腺癌，其細胞是HER2/neu陽性的。
34.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述癌癥是乳腺癌，其細胞是雌激素受體陽性和孕酮受體陽性的。
35.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中所述癌癥是乳腺癌，其細胞是雌激素受體、孕酮受體和HER2/neu三陰性的。
36.根據(jù)權(quán)利要求27中所述的用途，其中抑制步驟用并非PRIMA-1的化合物實現(xiàn)。
37.根據(jù)權(quán)利要求36中所述的用途，其中所述化合物是與至少兩個芳環(huán)結(jié)構(gòu)連接的叔胺。
38.根據(jù)權(quán)利要求37中所述的用途，其中所述化合物具有式1:
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述化合物是4'-[6-(烯丙基甲基氨基)己氧基]-4-溴-2'-氟二苯甲酮延胡索酸酯(Ro48-8071)。
40.一種用于測定化合物的促凋亡特性或抗增殖特性的方法，所述方法包括: a)使包含氧化鯊烯環(huán)化酶活性的哺乳動物癌細胞的樣品與所述化合物接觸；b)測量樣品中以下標記的任一者或多者的水平: i)凋亡標記和 ii)2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇中的一者或多者；以及 c)將與所述化合物接觸的樣品中(i)和(ii)的任一者或多者的水平與對照樣品中(i)和(ii)的任一者或多者的水平比較， 其中2，3-(S)_氧化鯊烯水平及凋亡標記水平與凋亡及抗增殖水平直接相關(guān)，并且羊毛固醇水平及膽固醇水平與凋亡及抗增殖水平反相關(guān)。
41.根據(jù)權(quán)利要求40中所述的方法，其中所述方法測量所述樣品中2，3-(S)-氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一者的水平。
42.根據(jù)權(quán)利要求41中所述的方法，其中所述方法測量所述樣品中凋亡標記的水平，所述凋亡標記是膜聯(lián)蛋白V。
43.一種用于鑒定抑制癌細胞增殖的藥物的方法，包括: a)提供包含氧化鯊烯環(huán)化酶活性的癌細胞的測試樣品； b)或者: i)通過以下方式測定所述測試樣品中的氧化鯊烯環(huán)化酶活性:使所述測試樣品與測試藥物接觸并且將所述測試樣品中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一種的水平與對照樣品中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一種的水平比較；或 ii)通過以下方式測定所述測試樣品中的氧化鯊烯環(huán)化酶活性:在第一時點測量所述樣品中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一種的水平；使所述樣品與測試藥物接觸，并且在第二時間點測量所述樣品中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一種的水平；和 c)基于以下情況，測定所述測試藥物是否為調(diào)節(jié)氧化鯊烯環(huán)化酶胞內(nèi)活性的藥物: i)與所述對照樣品相比，所測試述樣品中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一者的水平的變化；或 ii)從所述第一個時間點至所述第二時間點，所測試述樣品中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一者的水平的變化； 其中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一者的水平與所述胞內(nèi)氧化鯊烯環(huán)化酶活性水平相關(guān)。
44.一種用于鑒定治療癌癥的化合物的方法，包括: a)提供癌細胞的測試樣品； b)使所述測試樣品與測試化合物接觸； c)確定2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇中的一者或多者的降低程度； d)任選地，測定: i)凋亡標記水平的增加；和 ii)活癌細胞水平的下降； e)鑒定所述測試化合物作為以下化合物 i)抑制膽固醇生物合成途徑中酶的活性的化合物； ii)在癌細胞中促進凋亡的化合物；或 iii)殺死癌細胞的化合物；和其中2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇的任一者的水平與所述抗癌活性水平相關(guān)。
45.一種制備包含治療癌癥的化合物的組合物的方法，所述方法包括: a)提供癌細胞的測試樣品； b)使所述測試樣品與測試化合物接觸； c)測定2，3-(S)_氧化鯊烯、羊毛固醇和膽固醇中任一者的降低程度； d)任選地，測定: i)凋亡標記水平的增加；和 ii)活癌細胞水平的下降； e)鑒定所述測試化合物作為以下化合物 i)抑制膽固醇生物合成途徑中酶的活性的化合物； ii)在癌細胞中促進凋亡的化合物；或 iii)殺死癌細胞的化合物；和 f)將如此鑒定的測試化合物或所述測試化合物的功能性類似物或同系物與載體混合，因而制備所述組合物。
46.根據(jù)權(quán)利要求45中所述的方法，其中膽固醇生物合成途徑中的所述酶不是羥甲戊二酰輔酶A還原酶。
47.根據(jù)權(quán)利要求46中所述的方法，其中膽固醇生物合成途徑中的所述酶是氧化鯊烯環(huán)化酶。
48.根據(jù)權(quán)利要求45中所述的方法，其中所述凋亡標記是膜聯(lián)蛋白V。
49.一種篩選在哺乳動物中抑制腫瘤生長的藥物的方法，所述方法包括: a)使細胞與測試藥物接觸； b)檢測所述氧化鯊烯環(huán)化酶活性； c)與對照中的氧化鯊烯環(huán)化酶活性相比，評定氧化鯊烯環(huán)化酶活性的下降，作為所述測試藥物是哺乳動物中抑制腫瘤生長的藥物的指示。
【文檔編號】A61P35/00GK103596570SQ201180063224
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2011年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2010年12月27日
【發(fā)明者】鄒曉勤, 薩爾曼·M·海德, 梁雅韻, 山姆·Z·格林特, 黃勝友 申請人:密蘇里大學(xué)管委會