包含抗生素和分散劑或者抗粘結(jié)劑的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及包含抗生素劑和第二試劑的產(chǎn)品，所述第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑，具體地是黏液溶解分散劑或者黏液溶解抗粘結(jié)劑，所述的產(chǎn)品在關(guān)于細(xì)菌感染的預(yù)防和治療中有用。
【專利說明】包含抗生素和分散劑或者抗粘結(jié)劑的組合物
發(fā)明領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染的產(chǎn)品、組合物、方法和用途。
[0002]發(fā)明背景
[0003]在人/獸藥物和農(nóng)業(yè)中廣泛地使用抗生素，并且這導(dǎo)致對目前可用的抗生素的耐藥性這一日益嚴(yán)重的問題。這與使用單一的抗生素治療感染性癥狀或者疾病(也稱作單一療法)特別相關(guān)。因此，不僅對于有效和安全的新治療有著顯著的需要，而且對于具有的作用模式使得在靶向病原體群體中最終產(chǎn)生耐藥性的風(fēng)險被最小化或者消除的治療，和對于可以與其他的治療組合使用來使得耐藥性的機(jī)會最小化并延長目前可用的抗微生物劑的效用的治療有著顯著的需要。
[0004]在如囊胞性纖維癥(CF)的疾病中，富含黏液的環(huán)境如肺的細(xì)菌感染是常見的。然而，傳統(tǒng)的抗生素在這樣的環(huán)境下傾向于效果不良，并且在這樣的環(huán)境下使用時，其抗菌效力被大大減弱。
[0005]微生物的生物膜是嵌入在聚合物物質(zhì)的細(xì)胞外基質(zhì)中，并粘附到生物或者非生物表面的微生物細(xì)胞群落。在這些生物膜中可以找到一系列的微生物(細(xì)菌、真菌和/或原生動物，以及相關(guān)的噬菌體和其他病毒)。生物膜在自然界中普遍存在，并且通常存在與多種環(huán)境中?？茖W(xué)和醫(yī)學(xué)群體越來越多地認(rèn)識到生物膜涉及多種感染，特別是對感染治療的抗性的貢獻(xiàn)。
[0006]生物膜在哺乳動物的多種疾病狀`態(tài)中是病原劑，并且涉及80%的人類感染。實(shí)例包括了皮膚和傷口感染、中耳感染、腸胃道感染、腹膜感染、泌尿生殖道感染、口腔軟組織感染、牙菌斑的形成、眼部感染(包括隱形眼鏡污染)、心內(nèi)膜炎、囊胞性纖維癥中的感染和留置醫(yī)療設(shè)備如關(guān)節(jié)假體、牙科植入物、導(dǎo)管、和心臟植入物的感染。
[0007]就像Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)和 EuropeanCommittee on Antimicrobial Susceptibility Testing(EUCAST)所描述的那樣，一般地將浮游微生物(即，在液體介質(zhì)中懸浮或者生長的微生物)用作抗微生物劑敏感性研究的模型。生物膜中的微生物與浮游的類似物相比，針對抗微生物劑的處理明顯具有更高的耐受性。然而，在生物膜微生物的抗生素敏感性的研究中，沒有標(biāo)準(zhǔn)化的方法。
[0008]生物膜的形成不僅限于微生物附著到表面的能力。在生物膜中生長的微生物彼此之間的相互作用比與真實(shí)物理基質(zhì)的相互作用更多，所述生物膜最初在所述真實(shí)物理基質(zhì)上形成的。例如，這一現(xiàn)象有利于接合基因轉(zhuǎn)移，所述的接合基因轉(zhuǎn)移在生物膜中的細(xì)胞之間發(fā)生的速率比在浮游細(xì)胞之間的更高。這代表了細(xì)菌之間水平基因轉(zhuǎn)移的機(jī)會增加，并且由于這能夠促進(jìn)抗生素耐受性或者毒力決定基因從耐受性微生物轉(zhuǎn)移到敏感微生物而是重要的。細(xì)菌可以通過稱作群體感應(yīng)的系統(tǒng)彼此聯(lián)系，通過該系統(tǒng)將信號分子釋放到環(huán)境中，并且所述信號分子的濃度可以被周圍的微生物檢測到。群體感應(yīng)使得細(xì)菌能夠使協(xié)調(diào)其行為，從而增強(qiáng)其生存能力。群體感應(yīng)的響應(yīng)包括適應(yīng)營養(yǎng)素的來源，防御可能競爭同樣的營養(yǎng)素的其他微生物，以及避免對細(xì)菌有潛在危險的毒性化合物。致病性細(xì)菌在感染宿主(例如人、其他動物或者植物)的過程中，為了建立成功的感染，協(xié)調(diào)其毒力來逃避宿主的免疫反應(yīng)是非常重要的。
[0009]生物膜在多種感染性疾病中是關(guān)鍵的角色，所述的感染性疾病例如囊胞性纖維癥和牙周炎，血流和尿道感染，以及由于留置醫(yī)療設(shè)備的存在而發(fā)生的感染。生物膜相關(guān)的微生物在宿主中引起疾病的建議機(jī)制包括以下:(i)抗微生物劑滲透通過生物膜基質(zhì)的延遲，(?)留置醫(yī)療設(shè)備生物膜上細(xì)胞或細(xì)胞聚集物的脫離，(iii)內(nèi)毒素的產(chǎn)生，(iv)對宿主免疫系統(tǒng)的耐受性，(v)通過抗微生物劑耐受性和/或毒力決定基因的水平基因轉(zhuǎn)移提供用于生成耐受性有機(jī)體的生態(tài)位(niche)，和(vi)改變的生長速率(即，代謝休眠)(Donlan 和 Costerton, Clin Microbiol Revl5:167-193，2002;Parsek和 Singh, Annu RevMicrobio157:677-701, 2003;Costerton JW, Resistance of biofilms to stress.1n’ Thebiofilm primer’.(Springer Berlin Heidelberg).pp.56-64.2007)。
[0010]最近的試驗(yàn)證據(jù)顯示，在生物膜內(nèi)存在小亞群的特化的非代謝存留(persister)細(xì)胞(休眠細(xì)胞)。認(rèn)為這些細(xì)胞是生物膜對抗微生物劑高耐受性/抗性的原因。在浮游群體和生物膜群體中都存在多藥物抗性的存留細(xì)胞，并且其酵母和細(xì)菌似乎形成類似的策略來賦予該亞群生存的功能。聚合物基質(zhì)所提供的保護(hù)使得存留細(xì)胞避免被清除，并且作為群體恢復(fù)的來源。有證據(jù)表明，存留細(xì)胞是微生物生物膜具有多藥物耐受性的主要原因(LaFleur 等人，Antimicrob Agents Chemother.50:3839-46, 2006; Lewis, Nature ReviewsMicrobiology5, 48-562007)。
[0011]為了治療和預(yù)防細(xì)菌感染，尤其是與黏液溶解環(huán)境相關(guān)的細(xì)菌感染例如CF肺，仍然需要更好的療法。除此之外，在治療或預(yù)防細(xì)菌感染中，尤其在生物膜環(huán)境下，仍然需要限制抗生素的量或者劑量，同時引入能夠改善目前可用的療法的有效性的新型療法、補(bǔ)充療法或者調(diào)試療法。
[0012]發(fā)明概沭
[0013]根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包含抗生素劑和第二試劑，所述的第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑，特別是黏液溶解的分散劑或者黏液溶解的抗粘結(jié)劑。
[0014]根據(jù)一個實(shí)施方案，所述的第二試劑可以具有抗微生物活性。供選擇地，所述的第二試劑可以不具有固有的直接抗微生物的活性。
[0015]本發(fā)明包括醫(yī)藥產(chǎn)品，所述的醫(yī)藥產(chǎn)品包含至少一種抗生素劑和至少一種分散劑或者至少一種抗粘結(jié)劑，特別是黏液溶解的分散劑或者黏液溶解的抗粘結(jié)劑。
[0016]還提供了如上所示的用于治療用途的產(chǎn)品。
[0017]根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用于治療或者預(yù)防細(xì)菌感染的產(chǎn)品。
[0018]所述的細(xì)菌感染可以是散播性的浮游細(xì)菌感染，或者具體地為生物膜。
[0019]還提供了預(yù)防或者治療細(xì)菌感染的方法，所述的方法包括將治療有效量的本發(fā)明的產(chǎn)品給予需要其的患者的步驟。所述的抗生素劑和分散或抗粘結(jié)劑可以按照聯(lián)合的或者序貫的方式來給予。
[0020]詳沭
[0021]產(chǎn)品
[0022]根據(jù)本發(fā)明的第一個方面，提供了產(chǎn)品，所述的產(chǎn)品包括抗生素劑和第二試劑，所述的第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑。
[0023]根據(jù)一個實(shí)施方案，所述的抗生素是非肽抗生素。優(yōu)選地，本發(fā)明的產(chǎn)品不包含任何肽。
[0024]本發(fā)明的產(chǎn)品在治療和預(yù)防細(xì)菌感染中是有效的，所述的細(xì)菌感染包括黏液環(huán)境的細(xì)菌感染。由于傳統(tǒng)的抗生素在該環(huán)境下效果較差，因此該癥狀通常非常難以治療。除此之外，本發(fā)明的產(chǎn)品的試劑一般地協(xié)同地組合，提供出人意料地高的抗菌活性。因此抗生素的需要量被最小化了。供選擇地，本發(fā)明的產(chǎn)品的試劑可以附加地進(jìn)行組合。
[0025]所述的產(chǎn)品的優(yōu)點(diǎn)在于其顯示對建立的細(xì)菌聚落，包括細(xì)菌聚落中存在的存留細(xì)胞，例如生物膜具有抗菌活性，這是清除生物膜的關(guān)鍵步驟。
[0026]協(xié)同效應(yīng)
[0027]出人意料的是，發(fā)現(xiàn)當(dāng)將抗生素劑和分散劑或抗粘結(jié)劑組合時，其抗菌作用一般地協(xié)同提聞。 [0028]部分抑菌濃度(FIC)相當(dāng)于相互作用系數(shù)，該系數(shù)表明抗微生物劑的組合是否是協(xié)同的、加和的、拮抗的或者中和的。FIC通過將組合試劑的活性(試劑A+試劑B的MIC)和單獨(dú)試劑的活性(試劑A或者試劑B的MIC)如下地進(jìn)行比較來確定(Singh等人，2000):
[0029]FIC=MICa[組合]/MICa[單獨(dú)]+MI Cb [組合]/MICb [單獨(dú)]
[0030]FIC指數(shù)為I表明兩種抗微生物劑的加和組合，而FIC指數(shù)〈I表明是協(xié)同組合。中和組合會使得FIC在I到4之間，而高于4的FIC指數(shù)則表明兩種抗微生物劑之間有拮抗效果。
[0031]一般來說，本發(fā)明的產(chǎn)品組分的組合的FIC指數(shù)小于1，一般地小于0.9，適當(dāng)?shù)匦∮?.8，有利地小于0.75或者為約0.75，例如小于0.5或者為約0.5。
[0032]供選擇地，本發(fā)明的產(chǎn)品組分的組合的FIC指數(shù)可以大于I，通常地在I和2之間，一般地在I到1.5之間，適當(dāng)?shù)卦贗到1.2之間。
[0033]在黏液溶解環(huán)境下，傳統(tǒng)抗生素如妥布霉素、粘菌素、慶大霉素或者環(huán)丙沙星顯示與當(dāng)其在非黏液溶解環(huán)境中時不同水平的抗菌活性。出人意料的是，當(dāng)給予分散劑或抗粘結(jié)劑如半胱胺時，該傳統(tǒng)抗生素的抗菌活性會提高?？股睾涂拐辰Y(jié)劑或分散劑協(xié)同地起作用，并且當(dāng)一起給予或者序貫給予時，活性劑的抗菌活性遠(yuǎn)高于單獨(dú)給予。
[0034]一般地說，本發(fā)明的產(chǎn)品的抗菌活性與單獨(dú)的抗生素劑的抗菌活性相比高至少兩倍，一般地，本發(fā)明的產(chǎn)品的抗菌活性與單獨(dú)的抗生素劑的抗菌活性相比高至少四倍，適當(dāng)?shù)?，高至少八倍，通常地至少?0倍左右。
[0035]一般地，對于同樣的細(xì)菌病原體，本發(fā)明的產(chǎn)品的最小抑制濃度(MIC)比單獨(dú)的抗生素劑的MIC低至少兩倍，適當(dāng)?shù)氐椭辽偎谋叮话愕氐椭辽侔吮?，有利地低至?0倍或者低約10倍。
[0036]為了得到協(xié)同效果，本發(fā)明的產(chǎn)品的試劑可以一起或者序貫給予，優(yōu)選地所述的給予間隔不多于10分鐘。
[0037]抗生素劑
[0038]術(shù)語“抗生素”用于表示可以來源于細(xì)菌來源的抗菌劑。抗生素劑可以是殺菌的或者是抑制細(xì)菌的。
[0039]一般地說，抗生素劑屬于氨基糖苷類、安沙霉素、頭孢烯類、碳青霉烯類、頭孢菌素類(包括第一、第二、第三、第四和第五代頭孢菌素類)、林可酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、單環(huán)內(nèi)酰胺類、硝基呋喃類、喹諾酮類、青霉素、磺胺類、多肽和四環(huán)素類。供選擇地或者另外地，所述的抗生素劑可以是對分枝桿菌有效的。
[0040]根據(jù)一個實(shí)施方案，所述的抗生素劑可以是氨基糖苷例如阿米卡星、慶大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星、妥布霉素或者巴龍霉素。
[0041]根據(jù)一個實(shí)施方案，所述的抗生素劑可以是例如格爾德霉素和除莠霉素。
[0042]供選擇地，所述的抗生素劑可以是頭孢烯類例如氯碳頭孢。
[0043]根據(jù)另一個實(shí)施方案，所述的抗生素劑是碳青霉烯類例如厄他培南、多尼培南、亞胺培南/西司他丁或者美羅培南。
[0044]供選擇地，所述的抗生素劑可以是頭孢菌素類(第一代)，如頭孢羥氨芐、頭孢唑啉、頭孢氨節(jié)、頭孢噻吩(Cefalotin)或頭孢噻吩(Cefalothin),或者供選擇地為頭孢菌素類(第二代)，如頭孢克洛、頭孢孟多、頭孢西丁、頭孢丙烯、頭孢呋辛。供選擇地，所述的抗生素劑可以是頭孢菌素類(第三代)，如頭孢克肟、頭孢地尼、頭孢妥侖、頭孢哌酮、頭孢噻肟、頭孢泊肟、頭孢布烯、頭孢唑肟和頭孢曲松，或頭孢菌素(第四代)，如頭孢吡肟和頭孢吡普。
[0045]所述的抗生素劑可以是林可酰胺類如克林霉素和阿奇霉素，或者大環(huán)內(nèi)酯類如阿奇霉素、克拉霉素、地紅霉素、紅霉素、羅紅霉素、醋竹桃霉素、泰利霉素和壯觀霉素。
[0046]供選擇地， 所述的抗生素劑可以是單環(huán)內(nèi)酰胺類如氨曲南，或者是硝基呋喃如呋喃唑酮或者呋喃妥英。
[0047]所述的抗生素劑可以是青霉素，例如阿莫西林、氨芐西林、阿洛西林、羧芐青霉素、鄰氯青霉素、雙氯青霉素、氟氯西林、美洛西林、萘夫西林、苯唑西林、青霉素G或V、哌拉西林、替莫西林和替卡西林。
[0048]所述的抗生素劑可以是磺胺類，例如磺胺米隆、磺胺米柯定(S u 1 f ο n am i d ο c h r y s ο i d i n e )、磺乙酰胺、磺胺嘧唳、磺胺嘧唳銀、磺胺甲二唑、磺胺甲噁唑、磺胺二甲異惡唑(Sulfani 1 imide)、柳氮磺胺吡唳、磺胺異卩,惡唑、甲氧節(jié)唳、和甲氧節(jié)唳_磺胺甲噁唑(復(fù)方新諾明)(TMP-SMX)。
[0049]所述的抗生素劑可以是喹諾酮類藥物如環(huán)丙沙星、依諾沙星、加替沙星、左氧氟沙星、洛美沙星、莫西沙星、萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星、曲伐沙星、格帕沙星、司帕沙星和替馬沙星。
[0050]根據(jù)一個實(shí)施方案，所述的抗生素劑可以是多肽例如桿菌肽、粘菌素和多粘菌素B0
[0051]供選擇地，所述的抗生素劑可以是四環(huán)素類，如去甲金霉素、強(qiáng)力霉素、米諾環(huán)素和土霉素。
[0052]供選擇地或者另外地，所述的抗生素劑可以對分枝桿菌有效。具體地，所述的抗生素劑可以是氯法齊明、氯苯吩嗪、氯苯砜、卷曲霉素、環(huán)絲氨酸、乙胺丁醇、乙硫異煙胺、異煙肼、吡嗪酰胺、利福平、利福布汀、利福噴丁或鏈霉素。
[0053]一般地說，所述的抗生素劑在由革蘭氏陰性和革蘭氏陽性細(xì)菌，如大腸桿菌和克雷伯氏桿菌屬，特別是銅綠假單胞菌所引起的感染的治療或者預(yù)防中是有活性的。
[0054]第二試劑
[0055]第二試劑可以選自分散劑和抗粘結(jié)劑。具體地，所述的第二試劑選自黏液溶解分散劑和黏液溶解抗粘結(jié)劑。所述的第二試劑可以是抑制細(xì)菌聚落形成的任意試劑，具體地是抑制生物膜形成的任意試劑。作為實(shí)例，第二試劑可以抑制細(xì)菌的粘附、疏水性和粘質(zhì)的產(chǎn)生。
[0056]根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方案，第二試劑不是肽。
[0057]術(shù)語“分散劑”旨在包括能夠?qū)⒓?xì)菌顆粒分散，從而抑制細(xì)菌聚落形成的任意試劑。具體地，所述的分散劑可以將細(xì)菌生物膜的顆粒分散。所述的分散劑可以促進(jìn)細(xì)菌微生物所產(chǎn)生的粘質(zhì)(siime)，形成生物膜的部分的黏液(mucous)的分散，所述黏液例如生物膜微生物所粘附的細(xì)胞所產(chǎn)生的黏液，以及生物膜細(xì)菌所產(chǎn)生的黏液。
[0058]所述的分散劑可以是黏液溶解劑。所述的黏液溶解劑可以是酶，例如DNA酶(DNase)、褐藻酸酶、蛋白酶或者碳水化合物酶。供選擇地，所述的黏液溶解劑可以是小分子，例如胺，如氨基硫醇；或者是酸，如乙二胺四乙酸(EDTA)。所述的胺可以選自乙酰半胱氨酸和半胱胺，優(yōu)選地為半胱胺。
[0059]術(shù)語“抗粘結(jié)劑”旨在包括能夠抑制細(xì)胞、蛋白質(zhì)和有機(jī)體例如微生物之間的粘附，從而預(yù)防細(xì)菌聚落形成，尤其能夠防止細(xì)菌生物膜形成或者促進(jìn)生物膜自我破壞的任意試劑。特別地，所述的抗粘結(jié)劑可以防止微生物生物膜中所遇到的所有細(xì)胞類型粘結(jié)到表面或者基質(zhì)，所述的細(xì)胞類型尤其為游離的活微生物即浮游細(xì)胞。抗粘結(jié)劑可以包括但不限于透明質(zhì)酸、肝素或者卡波普934。
[0060]所述的第二抗生物膜劑可以是抗菌劑。所述的抗菌劑可以是黏液溶解劑，例如同時具有黏液溶解和抗菌活性的黏液溶解劑。優(yōu)選地，所述的抗菌劑是半胱胺。
[0061]醫(yī)藥產(chǎn)品
[0062]前文所述的活性劑可以作為自由或者固定的組合來給予。自由的組合可以作為包含自由組合中所有活性劑的組合包裝來提供。固定組合通常是片劑或者膠囊劑。
[0063]本發(fā)明的試劑可以作為藥學(xué)上可接受的鹽的形式來給予。本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可以通過傳統(tǒng)的化學(xué)方法由包含堿或者酸部分的母體化合物合成。一般地，這樣的鹽可以通過將這些化合物的游離酸或者堿形式與化學(xué)計量的合適的堿或者酸在水中或者在有機(jī)溶劑中，或者在這兩者的混合物中反應(yīng)來制備；一般地，優(yōu)選為非水介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或者乙腈。適用的鹽的列表記載于Remington’s PharmaceuticalSciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa.，US, 1985，p.1418 中，將其公開內(nèi)容引入本文作為參考；還參見Stahl等人，Eds, “Handbook of Pharmaceutical SaltsProperties Selection and Use”, Verlag Helvetica Chimica Acta and Wiley-VCH, 2002。在本文中，使用短語“藥學(xué)上可接受的”來表示這樣的化合物、材料、組合物和/或劑型，其在可靠的醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)適用于接觸人類的組織，或者視情況而定適用于接觸動物的組織，而沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或者其他問題或并發(fā)癥，并且按照合理的收益/風(fēng)險比提供希望的效果。
[0064]本發(fā)明因此包括了所公開的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，其中母體化合物通過制備其酸或堿的鹽來進(jìn)行修飾，例如傳統(tǒng)的無毒性的鹽或者季銨鹽，例如由無機(jī)或者有機(jī)的酸或者堿形成的。這樣的酸加成的鹽的實(shí)例包括了:乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基磺酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。堿鹽包括了銨鹽，堿金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣鹽和鎂鹽，與有機(jī)堿形成的鹽如二環(huán)己基胺鹽，N-甲基-D-葡糖胺，和與氨基酸如精氨酸鹽、賴氨酸等形成的鹽。此外，堿性含氮基團(tuán)可被以下試劑季銨化:例如低級烷基鹵化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和鵬化物；二烷基硫酸酷如二甲基、二乙基、二丁基和二戍基硫酸酷，長鏈鹵化物如癸基、月桂基、肉豆蘧基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基溴化物和其它。
[0065]本發(fā)明的產(chǎn)品
[0066]根據(jù)一個實(shí)施方案，本發(fā)明的產(chǎn)品的抗生素劑不包括肽。適合地，本發(fā)明的產(chǎn)品不包括肽。
[0067]優(yōu)選的產(chǎn)品包括非肽的抗生素和分散劑，所述的分散劑尤其地為黏液溶解分散劑如半胱胺。
[0068]在本發(fā)明的產(chǎn)品中，抗生素劑和第二試劑的比例可以是1:10到10:1，一般地至少為2:1，例如至少為3:1或者4:1。供選擇地，在本發(fā)明的產(chǎn)品中，抗生素劑和第二試劑的比例可以是1:100到1:2000，例如為1:500到1:1000。根據(jù)一個實(shí)施方案，抗生素劑和第二試劑的比例是約1:1。優(yōu)選地，所述的第一抗生素劑是非肽的抗生素，以及第二試劑是半胱胺，并且所述的產(chǎn)品包含了比例為2:1到高達(dá)4:1的這些組分。根據(jù)另外的實(shí)施方案，所述的比例可以是約1:1。 [0069]可以同時地、序貫地或者分別地給予所述的活性劑。所述的活性劑可以作為組合包裝來提供。所述的組合包裝可以包括本發(fā)明的產(chǎn)品，以及用于同時、分別或者序貫給予各個活性劑的說明書。對于序貫給予，活性劑可以按照任意的順序來進(jìn)行給予。
[0070]本發(fā)明的產(chǎn)品的活性劑可以作為藥物組合物來提供，所述的藥物組合物還包括一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑和/或載體。這對于固定和自由組合都適用。
[0071]本發(fā)明的活性劑可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任意途徑來給予，優(yōu)選地，優(yōu)選地以適合該途徑的藥物組合物的形式以及按照對意圖的治療有效的劑量來給予?；钚曰衔锖徒M合物可以，例如，經(jīng)腸道外地、經(jīng)口服地、經(jīng)鼻內(nèi)地、經(jīng)支氣管內(nèi)地、經(jīng)腸內(nèi)地、透皮地、經(jīng)舌下地、經(jīng)直腸地、經(jīng)陰道地、經(jīng)眼睛地或者局部給予。局部和全身性給予都是考慮到的。
[0072]為了進(jìn)行經(jīng)腸道外給予(在本文中使用的“腸道外”是指這樣的給予方式，包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腸內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射和輸注,并且其中靜脈內(nèi)(包括連續(xù)靜脈內(nèi)給予)是最優(yōu)選的)，可以采用丙二醇水溶液，以及對應(yīng)的水溶性鹽的無菌水溶液。這樣的水溶液如果有必要的話可以是適當(dāng)?shù)亟?jīng)緩沖的，并且首先使用足量的鹽水或者葡萄糖來使液體稀釋液成為等滲的。這些水溶液尤其地適用于靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下和腹膜內(nèi)注射的目的。在這方面，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，所采用的無菌水性介質(zhì)都是能夠容易地得到的。
[0073]本發(fā)明的產(chǎn)品還可以經(jīng)鼻內(nèi)或者通過吸入來給予，并且便利地以干燥粉末吸入器或者氣霧噴霧器的形式來進(jìn)行遞送，所述的干燥粉末吸入器或者氣霧劑噴霧表現(xiàn)為加壓的容器、泵、噴霧器(spray)、霧化器(atomiser)、噴灑器(nebuliser),使用或者不使用適用的推進(jìn)劑。[0074]供選擇地，本發(fā)明的產(chǎn)品可以按照栓劑或者陰道栓的形式來給予，或者其可以局部地以凝膠、水凝膠、乳液、溶液、乳膏、軟膏或者粉末的形式來施用。本發(fā)明的產(chǎn)品可以是經(jīng)皮膚或者透皮給予的，例如通過使用皮膚貼劑、長效貼劑或者皮下注射來給予。其還可以通過肺或者直腸途徑來給予。
[0075]對于口服給予，藥物組合物可以是如下的形式:例如為片劑、膠囊劑、混懸劑或者液體。所述的藥物組合物優(yōu)選地制備成劑量單位的形式，所述的劑量單位包含特定量的活性成分。該劑量單位的實(shí)例是膠囊劑、片劑、粉末劑、顆粒劑或者混懸劑；其具有傳統(tǒng)的添加劑如乳糖、甘露醇、玉米淀粉或者馬鈴薯淀粉；其具有粘合劑如結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或者明膠；其具有崩解劑例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或者羧甲基纖維素鈉；以及其具有潤滑劑如滑石粉或者硬脂酸鎂?；钚猿煞诌€可以作為組合物通過注射來給予，其中例如，可以使用鹽水、右旋糖或者水來作為適用的載體。
[0076]本發(fā)明的產(chǎn)品還可以用作口腔制劑或者在口腔制劑中使用，其中所述的產(chǎn)品配制在載體中，所述的載體例如選自膜、帶、凝膠、微球、錠劑、口香糖、牙膏和漱口水。
[0077]給予的治療活性化合物的量以及使用本發(fā)明的化合物和/或組合物來治療疾病病癥的給藥方案取決于多種因素，所述的因素包括受試者的年齡、體重、性別和醫(yī)學(xué)狀態(tài)，疾病的嚴(yán)重性，給予的途徑和頻率以及所采用的具體化合物，以及所治療的個體的藥代動力學(xué)特征，因此其可能在大范圍內(nèi)變化。如果化合物局部給予而不是全身給予，以及用于預(yù)防而不是用于治療的話，劑量一般地會更低。這樣的治療在必要時可以經(jīng)常給予，并且在治療醫(yī)師判 斷必要的時期中給予。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠認(rèn)識到的是，所給予的抑制劑的給藥方案或者治療有效量可以需要針對每個個體進(jìn)行優(yōu)化。藥物組合物可以包含約0.1到2000mg的活性組分，優(yōu)選地約0.5到500mg，以及最優(yōu)選地約I到200mg。合適的每日劑量是約0.01到100mg/kg體重，優(yōu)選地約0.1到約50mg/kg體重，以及最優(yōu)選地約I到20mg/kg體重?？梢詫⒚咳盏膭┝堪凑彰刻煲淮蔚剿拇谓o藥來給予。
[0078]本發(fā)明的產(chǎn)品優(yōu)選地給予到呼吸道。因此，本發(fā)明還提供了包括本發(fā)明的產(chǎn)品的氣霧劑的藥物制劑。還提供了包括本發(fā)明的產(chǎn)品的霧化器或者吸入器。
[0079]除此之外，本發(fā)明的產(chǎn)品適用于配制成緩釋劑型等。所述的制劑的構(gòu)成可以使其釋放活性成分，例如在腸或者呼吸道的特定部分釋放，可能地在一段時間內(nèi)釋放?？梢岳缬删酆衔镏苽渫繉?、包封和保護(hù)性的基質(zhì)，所述的聚合物為例如聚乳酸-羥基乙酸酯、脂質(zhì)體、微乳液、微粒、納米顆粒或者蠟。所述的涂層、包封和保護(hù)性基質(zhì)用于涂布留置設(shè)備，例如支架，導(dǎo)管，腹膜透析管，排液裝置等等。
[0080]本發(fā)明的產(chǎn)品可以包含協(xié)同有效量的在本文中定義的各個活性劑。因此，本發(fā)明包括了包含協(xié)同有效量的以下試劑的產(chǎn)品:(i )抗生素劑(其可以是非肽的抗生素劑)，(ii )第二試劑，其一般地是半胱胺。所述的產(chǎn)品可以在生產(chǎn)藥物中使用，從而在治療微生物感染，例如細(xì)菌感染時將所述的試劑同時地、分別地或者序貫地給予。如本文所使用的，“協(xié)同地”可以用于描述本發(fā)明的產(chǎn)品的兩種或更多種試劑共同起作用以產(chǎn)生比所述的試劑分別地使用時預(yù)期的組合效果更好的效果。
[0081]在本發(fā)明的又一個方面中，提供了本發(fā)明的產(chǎn)品施加或者附著到的基質(zhì)。優(yōu)選地，所述的基質(zhì)適用于應(yīng)用在傷口或者遞送到傷口的位置。優(yōu)選地，所述的基質(zhì)使得能夠?qū)⒈景l(fā)明產(chǎn)品的活性劑從基質(zhì)轉(zhuǎn)移到傷口床，以實(shí)現(xiàn)其抗細(xì)菌的效果。所述的基質(zhì)可以是敷料，例如傷口敷料。所述的敷料可以包括織物材料或者其可以是膠原蛋白樣材料。所述的基質(zhì)可以是任意適合用于傷口的形式，一般地所述的基質(zhì)可以是水凝膠、膠體、軟膏、乳膏、凝膠、泡沫或者噴霧的形式。
[0082]本發(fā)明的產(chǎn)品還可以作為消毒劑或者殺微生物劑使用，或者用在消毒劑或者殺微生物劑中。在這種情況下，可以將本發(fā)明的藥物組合物單獨(dú)地或者與其他的消毒劑組合施加到所處理的表面上。如本文中所使用的，“所處理的表面”可以是在本文中定義的基質(zhì)，并且可以包括醫(yī)療設(shè)備和留置設(shè)備，例如支架，導(dǎo)管，腹膜透析管，排液設(shè)備，關(guān)節(jié)假體，牙科植入物等等。
[0083]方法及用途
[0084]本發(fā)明提供了治療或者預(yù)防細(xì)菌感染的方法。所述的的細(xì)菌感染可以一般地為播散性感染或者特別地位于富含黏液的環(huán)境中，例如在肺中，例如患有CF或者細(xì)菌相關(guān)的慢性阻塞性肺病(C0PD)的患者的肺。本發(fā)明的方法包括了將根據(jù)本發(fā)明的產(chǎn)品給予到環(huán)境中的步驟。所述的方法可以是體內(nèi)的或者離體的。
[0085]在富含黏 液的環(huán)境中，傳統(tǒng)的抗生素如妥布霉素、粘菌素、慶大霉素或者環(huán)丙沙星顯示與當(dāng)其在低黏液環(huán)境中時不同水平的抗菌活性。出人意料的是，當(dāng)給予分散劑或者抗粘結(jié)劑如半胱胺時，抗生素的抗菌活性提高。有利地，所述的方法包括給予以下試劑的步驟:
[0086]抗生素劑；和
[0087]第二試劑，所述的第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑，優(yōu)選地為半胱胺。
[0088]其中本發(fā)明的方法用于治療與CF相關(guān)的細(xì)菌感染，所述的抗生素劑優(yōu)選地為妥布霉素、粘囷素、慶大霉素或者環(huán)丙沙星。
[0089]環(huán)境可以包括任意的細(xì)菌感染，包括由一種以上微生物所導(dǎo)致的感染，所述的微生物為例如細(xì)菌和選自真菌、酵母、病毒和原生動物的任意一種。
[0090]所述的細(xì)菌可以是革蘭氏陽性或者革蘭氏陰性細(xì)菌。細(xì)菌病原體可以來自選自以下的細(xì)菌種類:葡萄球菌屬(Staphylococcus spp.),例如金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；腸球菌屬(Enterococcus spp.),例如幾腸球菌(Enterococcus faecal is)；釀胺鏈球菌(Streptococcus pyogenes);李斯特菌屬(Listeria spp.);假單胞菌屬(Pseudomonasspp.);分枝桿菌屬(Mycobacterium spp.),例如結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis);腸桿菌屬(Enterobacter spp.);彎曲桿菌屬(Campylobacter spp.);沙門氏菌屬(Salmonella spp.);鏈球菌屬(Streptococcus spp.)，如A群或B群鏈球菌，肺炎鏈球菌(Streptoccocus pneumoniae);螺旋桿菌屬(Helicobacter spp.),如幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori);奈瑟氏菌屬(Neisseria spp.)，例如淋病奈瑟氏菌(Neisseriagonorrhea),腦膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis);伯氏疏螺旋體(Borreliaburgdorferi);志賀菌屬(Shigella spp.),如弗氏志賀菌(Shigellaflexneri);大腸桿菌(Escherichia coli );嗜血桿菌屬(Haemophilus spp.),如流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae);衣原體屬(Chlamydia spp.),例如沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis),肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae),嬰|踏熱衣原體(Chlamydia psittaci) ; 土拉熱弗朗西斯氏菌(Francisella fularensis);芽孢桿菌屬(Bacillus spp.),如炭疽芽孢桿菌(Bacillus anthracis);梭狀芽胞桿菌屬(Clostridia spp.),例如肉毒梭狀芽孢桿菌(Clostridium botulinum);耶爾森氏菌屬(Yersinia spp.),例如鼠疫耶爾森氏菌(Yersinia pestis);密螺旋體菌屬(Treponema spp.);伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderiaspp.)，例如鼻疽伯克霍爾德氏菌(Burkholderia mallei)和類鼻疽伯克霍爾德氏菌(Bpseudomallei)。
[0091]特別地，所述的細(xì)菌可以包括假單胞菌屬，例如銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa);葡萄球菌屬例如金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌；嗜血桿菌屬，例如流感嗜血菌；伯克霍爾德氏菌屬，例如洋蔥伯克霍爾德氏菌(Burkholderia cepacia);鏈球菌屬，丙酸菌屬(Propionibacterium spp.),例如瘡皰丙酸桿菌(Propionibacterium acnes)。優(yōu)選地，所述的細(xì)菌選自假單胞菌屬和葡萄球菌屬，所述的假單胞菌屬例如銅綠假單胞菌，所述的葡萄球菌屬例如金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。
[0092]本發(fā)明的方法可以用于在多種環(huán)境中使細(xì)菌聚落，特別是細(xì)菌生物膜的形成最小化，以及優(yōu)選地預(yù)防其的形成，所述的環(huán)境包括但不限于家庭、工作場所、實(shí)驗(yàn)室、工業(yè)環(huán)境、水環(huán)境(例如管道系統(tǒng))、醫(yī)療設(shè)備(包括留置設(shè)備，例如本文中所限定的)、牙科設(shè)備或者牙科植入物、動物體例如人體。
[0093]因此，本發(fā)明的方法可以用于口腔中，來防止人牙齒或者牙科植入物例如義齒上菌斑或者齲齒的形成。
[0094]本發(fā)明的方法可以用于防止或者限制細(xì)菌聚落的形成。本發(fā)明的方法可以用于預(yù)防或者治療細(xì)菌感染，所述的細(xì)菌感染包括了局部感染、口腔感染和全身性感染。局部感染可以包括傷口、潰瘍和損傷，例如皮 膚的傷口例如切傷或者燒傷，以及與其相關(guān)的癥狀。
[0095]口腔感染可以包括牙齦炎、牙周炎和口腔粘膜炎。
[0096]全身性的感染可以包括囊胞性纖維癥、C0PD和其他與粘膜感染相關(guān)的病癥，例如胃腸道、泌尿生殖器或者其他呼吸道感染。
[0097]本發(fā)明的另一個方面在于在哺乳動物中，尤其是人中通過將有效量的本發(fā)明的產(chǎn)品給予哺乳動物，來治療、預(yù)防細(xì)菌感染或者延緩細(xì)菌感染的進(jìn)展的方法。
[0098]“有效”量或者“治療上有效量”意思是在可靠的醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)，足以在沒有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)或者其他問題或并發(fā)癥的情況下，按照合理的收益/風(fēng)險比提供希望的效果的一種或多種活性物質(zhì)的量。
[0099]因此，本發(fā)明的產(chǎn)品可以用于選自以下的疾病或病癥的預(yù)防、延緩進(jìn)展或者治療:皮膚和傷口感染、中耳感染、胃腸道感染、腹膜感染、泌尿生殖道感染、口腔軟組織感染、牙菌斑的形成、眼部感染(包括隱形眼鏡污染)、心內(nèi)膜炎、囊胞性纖維癥中的感染和留置醫(yī)療設(shè)備的感染，所述留置醫(yī)療設(shè)備例如在本文中所描述的。
[0100]本發(fā)明還包括了治療的方法，其中將本發(fā)明的產(chǎn)品與一種或多種其他的抗菌劑例如抗生素給予哺乳動物。一般來說，本發(fā)明的產(chǎn)品和本發(fā)明的任意組合物不包括任何肽。
[0101]在本文本中所提到的活性劑能以不同的形式存在，例如游離酸、游離堿、醚和其他前藥、鹽和互變異構(gòu)體，例如，本發(fā)明包括試劑的全部變化形式。
[0102]在本文本的說明書和權(quán)利要求中，除非上下文另外要求，單數(shù)涵蓋了復(fù)數(shù)。具體地，當(dāng)使用不定冠詞時，除非內(nèi)容另外要求，文本應(yīng)當(dāng)理解為考慮了復(fù)數(shù)以及單數(shù)。
[0103]結(jié)合本發(fā)明的具體方面、實(shí)施方案或者實(shí)施例進(jìn)行描述的特征、整數(shù)、特性、化合物、化學(xué)部分或者基團(tuán)應(yīng)當(dāng)理解為可應(yīng)用于任意其他的在本文中描述的方面、實(shí)施方案或者實(shí)施例中，除非與其不相容。
[0104]在本文本的整個說明書和權(quán)利要求中，詞語“包括(comprise)”和“包含(contain)”和所述詞語的變化,例如“包括(comprising)”和“包括(comprises)”意思是“包括(including)但是不限于”，并且不意圖(也不)排除其他的部分、添加物、組分、整數(shù)或
者步驟。
[0105]一般地，術(shù)語“大約”旨在包括其所使用的任意數(shù)值的10%或者更少的范圍。
[0106]本發(fā)明的其他方面和實(shí)施方案在下文的說明書和權(quán)利要求書中給出。
[0107]在此參照下圖，以實(shí)施例的方式對本發(fā)明進(jìn)行描述，其中:
[0108]圖1a和Ib:提供了妥布霉素和半胱胺(NM001)當(dāng)分開地給予，以及以組合的形式給予時對假單胞菌浮游細(xì)胞的抗菌活性的比較。NM001使得妥布霉素對浮游細(xì)胞的MIC降低至少4倍(圖lb)。[0109]圖2:針對在復(fù)制CF肺中發(fā)現(xiàn)的環(huán)境的粘液環(huán)境下培養(yǎng)的銅綠假單胞菌細(xì)胞，提供了妥布霉素和環(huán)丙沙星單獨(dú)以及與半胱胺組合時抗細(xì)菌活性的對比。
[0110]圖3:針對在無粘液環(huán)境下培養(yǎng)的銅綠假單胞菌細(xì)胞，和在復(fù)制CF肺中發(fā)現(xiàn)的環(huán)境的粘液環(huán)境下培養(yǎng)的銅綠假單胞菌細(xì)胞(在NaCl和/或粘蛋白的存在下)，提供了單獨(dú)的妥布霉素和當(dāng)其和半胱胺(NM001)組合時活性的對比。NM001在粘液環(huán)境下恢復(fù)了傳統(tǒng)抗生素的抗生素活性。
[0111]圖4:顯示了針對建立的銅綠假單胞菌PAOl生物膜，單獨(dú)的半胱胺和半胱胺與妥布霉素組合的抗生物膜活性比較的柱狀圖:劑量響應(yīng)研究允許確定半胱胺對建立的銅綠假單胞菌PAOl生物膜的最低生物膜消除濃度(MBEC)以及允許定量與妥布霉素的加和活性化。單獨(dú)的半胱胺的MBEC是1000 μ g/ml,以及妥布霉素顯示出4 μ g/ml的MBEC。然而，當(dāng)組合時，使用500 μ g/ml半胱胺和I μ g/ml妥布霉素得到了完全的生物膜清除。因此，這樣的組合的部分抑菌濃度(FIC)為0.75，顯示兩種抗微生物劑之間的加和性。因此，黏液溶解/抗微生物劑半胱胺具有增強(qiáng)傳統(tǒng)抗生素的抗生物膜活性的潛力，這可以影響到降低抗微生物耐受性的傳播和治療的成本。
[0112]圖5:顯示了半胱胺(NM001)與妥布霉素(TOB)組合針對銅綠假單胞菌PAOl生物膜的抗微生物后效應(yīng)的圖表。
[0113]圖6:顯示了證明針對多藥耐藥的洋蔥伯克霍爾德菌NCTC10743時，半胱胺(NM001)提聞妥布霉素的抗微生物活性的圖表。還確定了半胱;胺和妥布霉素對多藥耐藥株洋蔥伯克霍爾德菌NCTC10743的加和抗微生物活性。妥布霉素的MICicici高于16 μ g/ml，而半胱胺顯示出500 μ g/ml的MICicici值。當(dāng)組合時，半胱胺能夠提高妥布霉素的活性，并且當(dāng)與250 μ g/ml半胱胺組合時的MICicici值是0.25 μ g/ml。這導(dǎo)致FIC指數(shù)小于0.51，這表明這兩種化合物至少有加和的抗微生物活性，以及可能是協(xié)同的。
[0114]圖7:顯示了證明妥布霉素和半胱胺針對單獨(dú)的銅綠假單胞菌PAOl浮游細(xì)胞，和所述的浮游細(xì)胞與囊胞性纖維癥(CF)患者中發(fā)現(xiàn)的生理相關(guān)的濃縮物(concentration)組合的抗微生物活性的柱狀圖。將半胱胺的抗微生物活性(MIC.)在正常條件下(如CLSIM7-A7方法所述一參見附錄I)、和在150mM氯化鈉(NaCl)、l.7mM氯化鈣(CaC12)、lmg/mlDNA或者l%(w/v)豬胃粘蛋白的存在下在96孔板中進(jìn)行三次重復(fù)比較。隨后使細(xì)菌生長24小時，并且使用BioTek微滴定讀板儀在625nm下讀取吸收度。完全細(xì)菌生長抑制在NaCl、CaCl2或者DNA的存在下保持，在粘蛋白的存在下是正常MIC.的兩倍。在二價陽離子Ca2+的存在下，以及在陰離子聚合物DNA的存在下，妥布霉素的活性被抑制。當(dāng)與半胱胺組合時，妥布霉素的活性在所有的測試條件下都得到保持，所述的測試在高達(dá)其正常MIC的四倍的濃度下進(jìn)行。
[0115]圖8:是顯示了半胱胺與其他的二硫鍵的破壞劑和黏液溶解劑相比的黏液溶解活性的柱狀圖。通過測量處理后粘蛋白溶液的粘度，將半胱胺的黏液溶解活性和其他的黏液溶解劑，例如N-乙?；腚装彼?Mucomyst* )、DNA酶I ( DomaseAlfa*),海藻酸裂解酶和半胱胺鹽酸鹽進(jìn)行比較。豬胃的粘蛋白(Sigma-Aldrich, Gillingham, UK)在無菌的純水中按照20% (w/v)進(jìn)行制備。將黏液溶解劑在20% (w/v)的粘蛋白溶液中按照10mg/ml進(jìn)行制備。在暴露于黏液溶解劑約5分鐘后，測量粘蛋白的流速。數(shù)據(jù)顯示了獨(dú)立的重復(fù)試驗(yàn)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差值。
[0116]圖9:是顯示了半胱胺(NM001)與妥布霉素組合對銅綠假單胞菌PA01的生物膜的抗微生物后效應(yīng)的圖表。這顯示了半胱胺與妥布霉素的組合在兩個不同的濃度下的抗生物膜活性，同時在處理生物膜之后，通過跟蹤細(xì)菌生長來測定這些化合物的抗微生物后效應(yīng)(PAE)。
[0117]圖10:顯示了證明在使用半胱胺(NM001)與妥布霉素組合處理銅綠假單胞菌PA01的生物膜之后，微生物代謝活性受抑制的圖表。這顯示了生物膜在經(jīng)處理之后的代謝活性。數(shù)據(jù)證實(shí)，半胱胺當(dāng)單獨(dú)或者與妥布霉素組合時抗生物膜的活性具有顯著的PAE，這一點(diǎn)被細(xì)菌生長的延遲和生物膜代謝活性降低所證實(shí)。
實(shí)施例
[0118] 抗微生物劑對細(xì)菌聚落的活性
[0119]材料和方法
[0120]1.1 菌株
[0121]在本研究中使用銅綠假單胞菌ATCC27853和洋蔥伯克霍爾德菌NCTC10743。如表1和2中顯示的，使用了銅綠假單胞菌的其他菌株。
[0122]1.2抗微生物化合物的制備
[0123]在本研究中試驗(yàn)的抗微生物劑是半胱胺(NM001)、妥布霉素、環(huán)丙沙星、粘菌素和慶大霉素。所述的試劑得自Sigma-Aldrich (Gillingham, UK),儲備液按照20mg/ml在14-18ΜΩ.cm的純水(Purite HP40水純化系統(tǒng)，Oxon, UK)中進(jìn)行制備。一旦溶解之后，將制備物使用0.22 μ m的濾器(Millipore, Watford, England)進(jìn)行過濾除菌并且在-20° C下進(jìn)行儲存。
[0124]1.3細(xì)菌接種液的制備
[0125]通過將在Mueller-Hinton (ΜΗ)肉湯中活性生長的培養(yǎng)物的稀釋方法來建立細(xì)菌接種液，并且按照CLSI方法Μ26-Α所述的使用0.5McFarland濁度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。
[0126]1.4最小抑制濃度(MIC)的測定
[0127]將細(xì)菌接種液和抗微生物劑兩者，包括在結(jié)構(gòu)上與半胱胺相關(guān)的化合物同時加到板中。將所述的板在37° C下孵育24小時，并且在微滴定讀板儀(BioTek PowerwaveXS, Winooski, USA)上于625nm下讀取其光密度。將對細(xì)菌生長顯示出完全抑制的抗微生物劑的最低濃度作為MIC。
[0128]半胱胺衍生物對銅綠假單胞菌的抗微生物效果
[0129]研究了在化學(xué)結(jié)構(gòu)上與半胱胺相關(guān)的大量化合物的抗微生物活性:胱胺(二鹽酸鹽)、牛磺酸和2，3-二巰基丁二酸。其他在化學(xué)上與半胱胺相關(guān)的化合物是已知的，但是有毒性，因此在這種性質(zhì)的藥物中沒有實(shí)用性。
[0130]半胱胺:
[0131]
【權(quán)利要求】
1.一種產(chǎn)品，其包含抗生素劑和第二試劑，所述的第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品，其中，不存在肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的產(chǎn)品，其中，所述抗生素劑是非肽抗生素。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的產(chǎn)品，其中，所述抗生素是妥布霉素、粘菌素、慶大霉素或者環(huán)丙沙星。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的產(chǎn)品，其中，所述第二試劑是半胱胺。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的產(chǎn)品，其含有協(xié)同有效量的(i)抗生素劑，和(ii)第二試劑，所述第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的產(chǎn)品，其用作藥物。
8.一種基質(zhì)，所述的基質(zhì)上施加或者附著有根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的產(chǎn)品。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的基質(zhì)，其中，所述基質(zhì)選自敷料、醫(yī)療設(shè)備和留置設(shè)備。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的基質(zhì)，其中，所述留置設(shè)備選自支架、導(dǎo)管、腹膜透析管、排液設(shè)備、關(guān)節(jié)假體和牙科植入物。
11.一種藥物組合物,所述藥物組合物包含權(quán)利要求1-7中任一項所述的產(chǎn)品和一種或多種藥學(xué)上可接受的稀釋劑、賦形劑和/或載體。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的產(chǎn)品在治療或者預(yù)防微生物感染或者與其相關(guān)的疾病或者病癥中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中感染或與其相關(guān)的疾病或病癥選自:皮膚和傷口感染、中耳感染、胃腸道感染、腹膜感染、泌尿生殖道感染、口腔軟組織感染、牙菌斑的形成、眼部感染、心內(nèi)膜炎、囊胞性纖維癥中的感染和留置醫(yī)療設(shè)備的感染。
14.根據(jù)權(quán)利要求12和13中任一項所述的用途，其中，所述的感染是黏液溶解環(huán)境的感染。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的用途，其中，所述的感染是與囊胞性纖維癥相關(guān)的細(xì)菌感染。
16.根據(jù)權(quán)利要求12-15中任一項所述的用途，其中，所述的感染是由選自以下的細(xì)菌引起的:假單胞菌屬、葡萄球菌屬、嗜血桿菌屬、伯克霍爾德氏菌屬、鏈球菌屬和丙酸桿菌屬。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中，所述的細(xì)菌是假單胞菌屬。
18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中，所述的細(xì)菌是伯克霍爾德氏菌屬。
19.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其中，所述的細(xì)菌是葡萄球菌屬。
20.一種通過預(yù)防或治療來治療微生物感染的方法，所述的方法包括序貫或聯(lián)合給予治療有效量的: 抗生素劑；和 第二試劑，所述的第二試劑是分散劑或者抗粘結(jié)劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的方法，所述的方法包括給予權(quán)利要求1-7中任一項所述的產(chǎn)品或者權(quán)利要求11所述的組合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求20或21所述的方法，其中，所述微生物感染是局部感染或者全身性感染。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中，所述的全身性感染是粘膜感染。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述的粘膜感染是胃腸道、泌尿生殖道或呼吸道感染。
25.根據(jù)權(quán)利要求23或24所述的方法，其中，所述的粘膜感染是囊胞性纖維癥或者是與慢性阻塞性肺病(COPD)相關(guān)的。
【文檔編號】A61K31/00GK103732232SQ201180064011
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2011年12月14日 優(yōu)先權(quán)日:2010年12月14日
【發(fā)明者】D·奧尼爾, C·查瑞爾 申請人:諾瓦生命科學(xué)有限公司