專利名稱：一種復(fù)方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性。
背景技術(shù)：
丹參為雙子葉植物唇形科Labiatae鼠尾草屬植物丹參Silvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖?？?，微寒。歸心、肝經(jīng)?；钛{(diào)經(jīng)，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養(yǎng)血安神。主治月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠；肝脾腫大，心絞痛。根主含脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸成分，還含黃酮類，三萜類，甾醇等。現(xiàn)代藥理證明丹參具有降血脂、強(qiáng)心、擴(kuò)張冠脈，增加心肌血流量抗血栓形成、改善微循環(huán)、促進(jìn)組織的修復(fù)與再生。淫羊藿為小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭葉淫羊藿 (Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim·)、或卓月鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥葉。辛、甘，溫。歸肝、腎經(jīng)。補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕。用于陽痿遺精，筋骨痿軟，風(fēng)濕痹痛，麻木拘攣；更年期高血壓。淫羊藿含淫羊藿苷(icariin)、淫羊藿次苷(icarisoside)等，朝鮮淫羊藿含淫羊藿苷、淫羊藿新苷 (印加6(10&如^、8、(、03等.箭葉淫羊藿含淫羊藿苷、脫水淫羊藿苷元-3-0-α -鼠李糖苷，淫羊藿苷元-3-0-α -鼠李糖苷，槲皮素等?，F(xiàn)代藥理試驗(yàn)證明淫羊藿具有雄性激素樣作用、有增加冠脈流量、耐缺氧、保護(hù)心肌缺血、降壓等作用、可增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬能力、促進(jìn)骨質(zhì)生長，尚有抗衰老、抗疲勞、抗病毒等作用。紫球藻(Porphyridium cruentum)是屬于紅藻門的一種單細(xì)胞紅藻，在生長過程中能大量合成胞外硫酸酯多糖、藻膽蛋白和多不飽和脂肪酸等生物活性物質(zhì)。紫球藻藻紅蛋白占藻膽蛋白84%，其中以B-藻紅蛋白含量最多。藻紅蛋白用途廣泛，它既可作為天然色素應(yīng)用于食品、化妝品、染料等工業(yè)，又可制成熒光試劑用于臨床醫(yī)學(xué)診斷和免疫化學(xué)及生物工程等領(lǐng)域，藻紅蛋白還是一種具有開發(fā)潛力的光敏劑，用于腫瘤的光動(dòng)力治療。紫球藻的胞外硫酸化多糖抗病毒特性突出，具有抗腫瘤、抗過敏、抗氧化、降血脂、調(diào)血脂等功能。因此，綜合開發(fā)紫球藻藻紅蛋白、多糖和藻粉系列產(chǎn)品，社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益明顯。人體在生命活動(dòng)的氧化代謝過程中會(huì)不斷產(chǎn)生各種自由基，體內(nèi)過多自由基對(duì)生物大分子造成損傷，導(dǎo)致細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能減退，并對(duì)機(jī)體的衰老過程產(chǎn)生影響，最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。而人工合成的抗氧化劑具有一定的毒性和致癌作用。所以評(píng)價(jià)和篩選具有強(qiáng)抗氧化活性的天然植物已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和食品科學(xué)研究的新趨勢。采用典型的體外抗氧化體系，以抗壞血酸為對(duì)照，評(píng)價(jià)復(fù)方丹參制劑的抗氧化活性，為更好的開發(fā)利用復(fù)方丹參資源為抗氧化活性產(chǎn)品，提供理論依據(jù)。DPPH 法DPPH 為 1，1_ 二苯基 _2_ 三硝基苯胼(1，l-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2, 2-Diphenyl-l-(2,4,6-trinitrophenyl) hydrazyl) DPPH 法于 1958 年被提出，廣泛用于測定食品的抗氧化能力。此法是根據(jù)DPPH自由基有單電子，在517nm處有一強(qiáng)吸收，
3其醇溶液呈紫色的特性。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，由于與其單電子配對(duì)而使其吸收逐漸消失，其褪色程度與其接受的電子數(shù)量成定量關(guān)系，因而可用分光光度計(jì)進(jìn)行快速定量分析。

發(fā)明內(nèi)容
1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參9g_12g、淫羊藿6g_9g、紫球藻10g_20g ；(2)將丹參和淫羊藿加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲 30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將(4)中的干燥物與C3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復(fù)方丹參制劑。2.將復(fù)方丹參制劑進(jìn)行試驗(yàn)，該制劑具有抗氧化作用根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明所述的涉及一種復(fù)方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性包括以下實(shí)施例，下面的實(shí)施例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1 1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參9g、淫羊藿6g、紫球藻IOg ；(2)將丹參和淫羊藿加入8倍量70%乙醇室溫下浸提8，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7. 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將(4)中的干燥物與C3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復(fù)方丹參制劑。2.將復(fù)方丹參制劑進(jìn)行試驗(yàn)，該制劑具有抗氧化作用實(shí)施例2 1. 一種具有抗氧化作用的復(fù)方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參12g、淫羊藿9g、紫球藻20g ；(2)將丹參和淫羊藿加入10倍量70%乙醇室溫下浸提10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；
(3)將⑵中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于ρΗ7· 4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎5s，間隔5s，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心 15min，得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將(4)中的干燥物與(3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復(fù)方丹參制劑。2.將復(fù)方丹參制劑進(jìn)行試驗(yàn)，該制劑具有抗氧化作用一種復(fù)方丹參制劑的的抗氧化試驗(yàn)1復(fù)方丹參制劑對(duì)DPPH清除率的測定1.1 DPPH溶液的制備精密稱定DPPH樣品0. Olg,加入無水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到DPPH溶液， 濃度為 0. (Mmg/ml。1. 2樣品溶液的制備精密稱取復(fù)方丹參制劑0. 4g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，再加入蒸餾水定容至50ml，得到樣品母溶液，濃度為8mg/ml，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為0. 003125，0. 00625,0. 0125,0. 025,0. 05， 0. 1，0. 2，0.細(xì)1的樣品母液，用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025，0. 005， 0. 01，0. 02，0. 04，0. 08，0. 16，0. 32mg/ml 的樣品溶液。1. 3樣品對(duì)DPPH的清除作用準(zhǔn)確移取不同濃度的樣品溶液分別與DPPH溶液和無水乙醇溶液等體積混合于不同試管中，搖勻，在黑暗中放置30min，在515nm下測定其吸光度值分別為AjPAj。另取蒸餾水與DPPH溶液等體積混合于試管中，測得吸光度值為A。其中以蒸餾水和無水乙醇混合為空白對(duì)照試驗(yàn)。并按下面公式計(jì)算清除率。清除率=(A-Ai+AJ)/AX100%2復(fù)方丹參制劑對(duì)羥自由基清除率的測定2. 1樣品溶液的制備精密稱取復(fù)方丹參制劑0. 25g置于50ml具塞容量瓶中，加入適量的蒸餾水，密封超聲30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到樣品母溶液，備用。在樣品母溶液中，用移液槍精密移取體積為 5 μ 1，10 μ 1，20 μ 1，40 μ 1，80 μ 1，160 μ 1，320 μ 1，640 μ 1 的樣品母液， 用蒸餾水定容于IOml容量瓶中得到濃度為0. 0025,0. 005,0. 01,0. 02,0. 04,0. 08,0. 16， 0. 32mg/ml的樣品溶液。2. 2試劑的制備稱取0. 2032g甲基紫用去離子水定容于IOOml容量瓶中，備用。用鹽酸調(diào)Tris緩沖溶液PH為5，備用。取30%的H2A溶液1. OmL，用去離子水定容于IOOmL容量瓶中，備用。 稱取0. 0695gFeS04 · 7H20用水定容于50mL容量瓶中，備用(現(xiàn)用現(xiàn)配)。2.3羥自由基· OH的產(chǎn)生及測定取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，按順序放入IOmL的刻度管中。并
用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A578。取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，F(xiàn)e2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘，記為A00
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取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris緩沖液lmL，不同濃度梯度的待測液2mL，F(xiàn)e2+溶液lmL，H2O2溶液ImL按順序放入IOmL的刻度管中。并用去離子水定容至刻度，搖勻靜置三十分鐘。平行三次，記為As。以去離子水做空白實(shí)驗(yàn)，用721紫外分光光度計(jì)在578的波長下測定其吸光度。2. 4羥自由基· OH清除率的計(jì)算利用公式清除率<% = (As-A0)/(A578-A0) X100%,得出樣品提取液對(duì)羥自由基的清除率。3復(fù)方丹參制劑的抗氧化結(jié)果3. 1復(fù)方丹參制劑對(duì)DPPH和羥自由基的清除率見表1。表1復(fù)方丹參制劑對(duì)DPPH和羥自由基的清除率結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種具有抗氧化作用的復(fù)方丹參制劑的制備方法，其特征在于包括以下過程(1)原料藥的重量配比為丹參9g-12g、淫羊藿6g-9g、紫球藻10g-20g；(2)將丹參和淫羊藿加入8-10倍量70%乙醇室溫下浸提8-10h，再密封超聲30min，溫度為30°C，功率為80W，然后用紗布過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70%的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；(3)將O)中的濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；(4)將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心lOmin，然后懸浮于pH7.4,50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，破碎k，間隔k，20次，用lOOOOr/min高速冷凍離心機(jī)離心15min， 得上清液，冷凍干燥，得干燥物；(5)將中的干燥物與(3)中的丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復(fù)方丹參制劑。
2.如權(quán)利要求1中所述的一種復(fù)方丹參制劑的用途，其特征在于制備抗氧化作用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產(chǎn)品研究開發(fā)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明涉及一種復(fù)方丹參制劑的制備方法及其抗氧化活性。將丹參、淫羊藿加入70％乙醇室溫下浸提，再超聲30min，溫度為30℃，功率為80W，過濾，濾渣再分別用6倍量與4倍量70％的乙醇重復(fù)提取各一次，過濾，得濾液；將濾液合并，回收乙醇，得到丹參、淫羊藿提取物；將紫球藻用5000r/min離心機(jī)離心10min，然后懸浮于pH7.4，50mmol/L的磷酸緩沖液中，進(jìn)行超聲破碎，用高速冷凍離心機(jī)離心，得上清液，冷凍干燥，得干燥物，將此干燥物與丹參、淫羊藿提取物混合均勻，得復(fù)方丹參制劑。本發(fā)明產(chǎn)品具有抗氧化作用。
文檔編號(hào)A61P39/06GK102512498SQ20121000995
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2012年1月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月1日
發(fā)明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 鄭友蘭 申請(qǐng)人:山東大學(xué)威海分校