專利名稱：一種glp-1衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種具有人胰高血糖素樣肽一 1 (Glucagon-like Peptide 1，GLP 一 1)活性的人胰高血糖素樣肽一 1衍生物(GLP - 1衍生物)及其制備和應用，屬于生物工程技術領域。
背景技術：
人胰高血糖素樣肽一 1 (glucagon-like peptide-1, GLP-1)是主要由遠端回腸、 結腸和直腸的L細胞分泌的一種31個氨基酸的多肽激素，通過葡萄糖依賴性促胰島素釋放、刺激生長抑素釋放和抑制胰高血糖素，是一種治療糖尿病尤其是II型糖尿病的多肽藥物，具有廣泛的社會效益和巨大的經(jīng)濟效益。但是，GLP-I在體內很容易被二肽?；拿窱V(Dip印tidyl Peptidase 4，DPP IV) 降解為脫去N端HiS7-Ala8-殘基的無活性的GLP-l(9-37)或GLP-1 (9_36) -NH2。靜脈注射GLP-I在體內的半衰期僅為3飛分鐘，限制了 GLP-I的臨床應用。目前GLP-I治療糖尿病的研究方向之一是通過對GLP-I的結構進行改變，得到 GLP-I衍生物，用該衍生物治療糖尿病，達到延長藥物在體內的藥效時間的目的。已有的 GLP-I衍生物都顯示出穩(wěn)定性增加，且體內生物活性仍能維持的性質。例如在第8位上進行氨基酸改變如將丙氨酸Ala改為甘氨酸Gly的GLP-I衍生物。又如制備GLP-I的脂肪酸衍生物，代表性藥物有諾華諾德公司研制的NN2211(商品名Liraglutide)，在GLP-I的Lyd6 上進行酰化。再者，對GLP-I分子進行聚乙二醇(PEG)修飾，如用PEG20000修飾GLP-I分子。還有直接將GLP-I分子與白蛋白大分子融合的CJC-1131，通過分子量增大來增強GLP-I 的體內穩(wěn)定性。雖然通過改變GLP-I第8位上的氨基酸制備得到的GLP-I衍生物半衰期有延長， 但第20位LysJS位Lys以及30位Arg在體內是某些蛋白酶的降解位點，在體內仍然有被降解的可能。通過脂肪酸或聚乙二醇修飾GLP-I等方法制備的GLP-I衍生物雖然體內半衰期延長，但是脂肪酸或聚乙二醇修飾GLP-I的位點和修飾程度常難以控制，導致后續(xù)純化和質量控制都比較困難，制備步驟繁瑣、得率低、成本高。因此，現(xiàn)有GLP-I衍生物仍然存在制備和純化困難、或半衰期尚不夠長或難以口服給藥等缺陷，迫切需要研制生物半衰期長的新型GLP-I產(chǎn)品。
背景技術：
已經(jīng)提出一種GLP-I衍生物及其制備方法，見本申請人申請的申請?zhí)柡桶l(fā)明名稱分別為“200610024355. X”和“一種人胰高血糖素樣肽一 1衍生物及其制備和應用”，以及申請?zhí)柡桶l(fā)明名稱分別為“200610(^9646. 8”和“一種人胰高血糖素樣肽一 1衍生物及其固相化學合成”的發(fā)明專利。
背景技術：
制備所得的GLP-I衍生物，產(chǎn)量高，純化工藝簡化，生產(chǎn)成本較低，且該衍生物半衰期長于GLP-I的半衰期。但背景技術制備的衍生物也有以下缺點例如，第2位氨基酸在體內仍然容易被二肽酰基肽酶IV降解失去活性。第20 位LysJS位Lys以及30位Arg在體內是某些蛋白酶的降解位點，在體內仍然有被降解的可能。因此，仍然需要開發(fā)具有更長作用時間的GLP-I衍生物，更好地用于糖尿病治療。

發(fā)明內容
GLP-I在體內有兩種形式，一種為GLP-I (7 — 36) — NH2，由30個氨基酸殘基組成，另一種為GLP-1(7 - 37)，由31個氨基酸殘基組成，二者有相同的生物學活性。本發(fā)明涉及的 GLP-I 指 GLP-I (7 一 37)，其序列(Seq ID No. 1)羅列如下His-Ala-Glu_Gly- Th r-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-IIe-Ala -Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-Glyο由于GLP-I的結構與功能目前已十分清楚N端是保持活性所必需，而C端負責與受體的結合。GLP-I (7 - 34),GLP-I (7 - 35),GLP-I (7 - 36),GLP-I (7 — 37)已證明都具有降血糖活性，由此可見GLP-I的C端對生物學活性具有可塑性。根據(jù)GLP-I多肽C端功能“可塑性”的結構和功能的關系，以增加GLP-I的體內生物穩(wěn)定性和延長半衰期為設計思想，我們開展了大量的研究工作，采用全新的思路對GLP-I 的氨基酸序列進行設計和改造，制備出長效的新型GLP-I衍生物。本發(fā)明的第一個目的是提供一種新型GLP-I衍生物aGLP-Ι，其特征在于，該衍生物的分子結構式為以下的三種結構式aGLP_l (7 - 36)，即kq ID No. 2，aGLP-1 (7 一 37)，即 Seq ID No. 3 和 aGLP-1 (7 — 38)，即 Seq ID No. 4 之一。其中，aGLP-1(7 — 36)，即 Seq ID No. 2 序列如下:His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Xaa20-Glu-Phe-IIe-Ala-Trp -Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30。aGLP-1 (7 一 37)，即 kq ID No. 3 序列如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-
Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30- Xaa31。aGLP-1 (7 一 38)，即 kq ID No. 4 序列如下 His-Xaa2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-
Ala-Xaa20-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Xaa28-Gly-Xaa30- Xaa31_Xaa32。其中Xaa2是kr，His和D-Ala中的任何一個氨基酸，Xaa20是kr，His, Gln和 Ala中的任何一個氨基酸，Xaa^是義！·，His, Asp和Ala中的任何一個氨基酸，Xaa30是 Gly和Cys中的任何一個氨基酸，且當是C末端氨基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺-NH2，Xaa31是Gly和Cys中的任何一個氨基酸，且當Xaa31是C末端氨基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺_NH2，Xaa32是Gly和Cys中的任何一個氨基酸，且當Xaa32是C末端氨基酸時，Gly和Cys的C末端可以是羧基一 OH或酰胺-NH2。該衍生物不僅保持了天然GLP-I在體內的活性，還明顯延長了體內藥效時間，體內藥效時間至少可持續(xù)7小時，如給予較高濃度的該衍生物，體內藥效時間將更長，具有良好的臨床使用價值。此外，該衍生物可通過重組DNA技術的方法或固相化學合成方法制備，技術成熟，成本低，適宜普及使用。本發(fā)明的第二個目的是提供固相化學合成上述衍生物的方法。固相化學合成法在制備少于40個氨基酸的小肽工藝十分成熟，具有快速、純化簡便、成本低等優(yōu)點。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案選用固相化學合成法來制備GLP-I 衍生物aGLP-1。現(xiàn)詳細說明本發(fā)明的技術方案。一種GLP-I衍生物的固相化學合成方法，其特征在于，具體操作步驟
(1)合成多肽樹脂
先將樹脂置入常規(guī)多肽合成儀，再將帶保護基的氨基酸單體按所述GLP-I衍生物的氨基酸序列，從C 一端向N —端排列在所述常規(guī)合成儀中，在25°C下，進行脫Fmoc保護、活化、 連接，然后反復循環(huán)，合成得到帶側鏈保護基的多肽樹脂；
(2)脫保護基及切斷樹脂
將上述帶側鏈保護基的多肽樹脂進行裂解反應后，經(jīng)過濾，沉淀洗滌，干燥，得到GLP-I 衍生物粗品；
(3)HPLC分離純化、冷凍干燥
將上述粗品用制備型HPLC進行分離純化，再經(jīng)冷凍干燥，得到GLP-I衍生物； 其中，所述帶保護基的氨基酸單體包括Fmoc-L-Ala-0H、Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His (Trt)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu) _0H、Fmoc-L-Tyr (tBu) -OH、 Fmoc-L-Gly-0H、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、 Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH> Fmoc-L-Ile_0H、Fmoc-L-Asp(OtBu)-0H> Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH ；
其中，當多肽C末端為羧基時，選擇王氏樹脂作為所述固相載體樹脂；當多肽C末端為酰胺時，選擇常規(guī)氨基樹脂作為所述固相載體樹脂。當所述的GLP-I衍生物為僅包含由遺傳密碼編碼的氨基酸殘基的多肽時，還可通過DNA重組技術制備衍生物。例如，按GLP-I衍生物的氨基酸序列合成基因片段；以適合于表達單獨的蛋白質或融合蛋白的方式將編碼序列放入表達載體；用含有GLP-I衍生物或融合的GLP-I衍生物基因序列的表達載體轉化適當?shù)脑松锏乃拗骷毎?，獲得基因工程菌株；將基因工程菌株經(jīng)液體發(fā)酵，經(jīng)離心獲得含有GLP-I衍生物融合蛋白或單獨含有 GLP-I衍生物蛋白的濕菌體；將濕菌體破壁，經(jīng)分離獲得含GLP-I衍生物融合蛋白或單獨含有GLP-I衍生物蛋白的粗品；經(jīng)純化，冷凍干燥制得產(chǎn)品GLP-I衍生物。本發(fā)明的第三個目的是提出GLP-I衍生物的應用，該衍生物在制備治療糖尿病的藥物中作該藥物的活性成分。本發(fā)明的優(yōu)點在于本發(fā)明提出的GLP — 1衍生物具有長于GLP-I的半衰期；生產(chǎn)方法簡便，成本較低；適于作治療糖尿病藥物的活性成分。
具體實施例方式下面結合實施例，進一步詳述本發(fā)明的技術方案。說明書及以下實施例中所用帶保護基的氨基酸單體以及其他化學試劑等，均可以從相關公司購買獲得，未注明具體條件的實驗方法，可按常規(guī)條件進行，或按商品供貨商所建議的條件進行。所有的實施例均按照發(fā)明內容中的合成方法規(guī)定的步驟進行操作，所有的實施例僅羅列與各自產(chǎn)品有關的關鍵步驟。 實施例1
固相化學合成法合成本發(fā)明的GLP-I衍生物，該衍生物的分子結構式為aGLP-l (7 一 36)，即 kq ID No. 2，其中 Xaa2 = D_Ala，Xaa20 = Ser,Xaa28 = Ala，Xaa30 = Cys，且 Cys 的C末端是酰胺-NH2，操作步驟
1、用的帶保護基的氨基酸單體共有16個，它們是FmOC-L-Ala-0H、Fmoc-D-Ala-OH, Fmoc-L-His (Trt)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu) -OH、Fmoc-L-Tyr (tBu) -OH、 Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt) -OH、 Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-0H> Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH> Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Cys (Trt) _0H，其中縮寫表示
Fmoc 9 一芴基甲氧羰基 Trt 三苯甲基，即trityl OtBu 叔丁基酯 tBU 叔丁基，艮口 tert-butyl ；
2、需用的儀器設備及試劑
儀器SYMPHONY型12通道多肽合成儀，型號SYMPHONY，美國產(chǎn)品； 試劑N —甲基吡咯烷酮，二氯甲烷，六氫吡啶，甲醇，二甲氨基吡啶，即 Dimethylaminopyridine/DMF N, N —二異丙基乙胺，艮口 N, N-diisopropylethylamine/ NMP, HBTU IOOmmo 1/0. 5M HOBT in DMF N，N — 二環(huán)己基碳二亞胺，8口 N, N-Dieyelohexylcarbodiimide/NMP, 其中DMF為N，N —二甲基甲酰胺 NMP為N—甲基吡咯烷酮 HOBT為1 一羥基苯并三唑
HBTU為2 - (1氫苯并三唑基)一 1，1，3，3—四甲基脲六氟磷酸鹽，即2 —( IH — ben zotriazole-yl) _1，1,3,3-tetramethyI-Uronium hexafIuorophosphate ；
3、操作
第一步多肽樹脂的合成
當多肽C末端為羧基時，選擇王氏樹脂，當多肽C末端為酰胺時，選擇常規(guī)氨基樹脂，本實施例中選擇常規(guī)氨基樹脂。
以0. 25mmol規(guī)模為例，稱取常規(guī)氨基樹脂0. 25g，置入SYMPHONY型12通道多肽合成儀上的反應器中，將帶保護基的氨基酸單體稱取Immol裝瓶，按GLP-I衍生物的氨基酸序列， 即％(1 ID No.2，從C 一端向N—端排列在所述的合成儀中，25°C下，由計算機程序控制自動進行脫Fmoc保護、活化、連接，然后再進行下一輪循環(huán)，如此完成合成，得到帶側鏈保護基的多肽樹脂，在所述的合成儀上吹干、稱重；
其中，氨基酸單體從C 一端向N —端的排列順序如下
Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile_0H、Fmoc-L-Phe_OH、 Fmoc-L-Glu (OtBu)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH> Fmoc-L-Ala-OH> Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln (Trt)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-0H> Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L-Tyr (tBu)-OH、Fmoc-L-Ser (tBu)-OH、Fmoc-L-Ser (tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu) -OH、Fmoc-L-Thr (tBu)-0H> Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr (tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-D-Ala-OH 禾口 Fmoc-L-His(Trt)-OH
第二步脫保護基及切斷樹脂
將第一步得到的帶側鏈保護基的多肽樹脂置于具塞三角燒瓶，加入下列裂解試劑
>-ii"vrilm B-
試刑Jfl里-’
水‘0.25mL.:ρ
EDTV10.25mL -'^
S^lmL*;;ρ
=氬 7"逾 λ9.45 mL+-
^ fl't t—J-Pv*·. 'VSAAA"
，然后在30°C下，電磁攪拌反應2小時，過濾，收集濾液，樹脂用三氟乙酸洗滌，合并收集液與洗滌液，加入乙醚產(chǎn)生沉淀，過濾，沉淀用乙醚洗滌，干燥，得粗品； 第三步HPLC分離純化、冷凍干燥
將第二步得到的粗品用制備型HPLC進行分離純化，再經(jīng)冷凍干燥，得產(chǎn)品GLP-I衍生物。制得的產(chǎn)品GLP-I衍生物具有上述提出的GLP-I衍生物的氨基酸序列。實施例2 固相化學合成法合成本發(fā)明的GLP-I衍生物，該衍生物的分子結構式為 aGLP-l(7 — 37)，即 Seq ID No. 3，其中 Xaa2 = D_Ala，Xaa20 = Ser,Xaa28 = Ala，Xaa30 =Gly，Xaa31 = Cys，且Cys的C末端是羧基_0H，本實施例中選擇王氏樹脂。操作步驟的第一步中，將帶保護基的氨基酸單體稱取Immol裝瓶，按GLP-I衍生物的氨基酸序列，即ID No. 3，從C 一端向N —端排列在SYMPHONY型12通道多肽合成儀中
Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ile_0H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH> Fmoc-L-Ser(tBu)-0H> Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-0H> Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-0H> Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr (tBu)-0H> Fmoc-L-Ser (tBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu)-0H> Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu) -OH、Fmoc-L-Thr (tBu)-0H> Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr (tBu)-0H> Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-0H> Fmoc-D-Ala-OH和 Fmoc-L-His(Trt)-OH
其他操作步驟及實驗條件與實施例1相同。實施例3固相化學合成法制備本發(fā)明的GLP-I衍生物，該衍生物的分子結構式為 aGLP-1 (7 - 38)，即 kq ID No. 4，其中 Xaa2 = Ser,Xaa20 = Gln，Xaa28 = Asp，Xaa30 = Gly, Xaa31 = Gly, Xaa32 = Cys，且Cys的C末端是羧基_0H，本實施例中選擇王氏樹脂。
操作步驟的第一步中，將帶保護基的氨基酸單體稱取lmmol裝瓶，按GLP-I衍生物的氨基酸序列，即ID No. 4，從C 一端向N —端排列在SYMPHONY型12通道多肽合成儀中
Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、 Fmoc-L-Gly-OH, Fmoc-L-Gly-OH, Fmoc-L-Gly-OH, Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH> Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ile-OH、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH> Fmoc-L-Gln(Trt)-0H> Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc_L_A1a_0H、 Fmoc-L-Gln(Trt)-0H> Fmoc_L_G1y_0H、 Fmoc-L-Glu(OtBu) -OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Tyr (tBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu)-OH、 Fmoc-L-Ser (tBu) -OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu) -OH、 Fmoc-L-Thr (tBu)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr (tBu)-OH> Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu (OtBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu) -OH 和 Rnoc-L-His (Trt) -OH 其他操作步驟及實驗條件與實施例1相同。實施例4 GLP-I衍生物的降血糖作用。實驗材料與方法
雄性健康昆明小鼠(清潔級，上海復旦大學醫(yī)學院動物中心提供)； 50%葡萄糖溶液； 0. 9%NaCl 溶液； GLP-I ；
aGLP-Ι，具有實施例1 一 3所述GLP-I衍生物的結構； 血糖測試儀(上海新立醫(yī)療器械有限公司出品)。雄性健康昆明小鼠禁食過夜，分為5組(n=8)。1，葡萄糖對照組；2，GLP-I給藥對照組；3 5，aGLP-Ι給藥組，具體的序列結構是實施例1 一 3中所述的結構。GLP-I給藥對照組2腹腔注射100 μ L 18mmol/kg的葡萄糖溶液和6nmol/kg的GLP-I，aGLP-Ι給藥組 3 5，每組分別腹腔注射100 μ L 18mmol/kg的葡萄糖溶液和6nmol/kg的aGLP_l，記此時為零時刻。在測血糖前30!^11補充20(^1^ 50%葡萄糖溶液，每次注射30min后小鼠尾靜脈取血測定血糖，以檢驗aGLP-Ι降血糖作用。葡萄糖對照組只注射50%葡萄糖溶液，不給予 GLP-I和aGLP-Ι，按相同時間間隔測定血糖。結果如表1所示，所示數(shù)值均為n=8的均值。與葡萄糖組小鼠相比，在給藥后GLP-I 和aGLP-Ι組都能降低小鼠血糖，但GLP-I的持續(xù)降血糖時間只能維持100分鐘左右。而 aGLP-Ι組在給藥后持續(xù)降血糖時間可長達440分鐘，顯示體內半衰期比GLP-I顯著延長。 如給予更高濃度的aGLP-Ι，體內藥效時間將更長，顯示aGLP-Ι具有良好的臨床使用價值。表1 aGLP-Ι的降血糖作用
權利要求
1.一種GLP-I衍生物，其特征在于，該衍生物的分子結構式如下aGLP-1 (7 - 38)，即 kq ID No. 4，其中，所述 aGLP-1 (7 — 38)即^^ ID No. 4 中，Xaa2 是 kr，Xaa20 是 Gln，Xaa^ 是 Asp, Xaa30 是 Gly，Xaa31 是 Gly，Xaa32 是 Cys，且 Cys 的 C 末端是羧基 _0H。
2.權利要求1所述的GLP-I衍生物的固相化學合成制備方法，先將樹脂置入多肽合成儀，再將帶保護基的氨基酸單體按照權利要求1所述GLP-I衍生物的氨基酸序列，從C 一端向N —端排列在所述多肽合成儀中，經(jīng)合成得到多肽樹脂，再經(jīng)脫保護基、切斷樹脂、HPLC 純化、冷凍干燥，得到所述GLP-I衍生物；其中，所述帶保護基的氨基酸單體依次為Fmoc-L-Cys (Trt) -OH、Fmoc-L-Gly-OH, Fmoc-L-Gly-OH> Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-I Ie-OH> Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Glu (OtBu) -OH、 Fmoc-L-Gln (Trt)-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln (Trt)-0H> Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-0H> Fmoc-L-Leu-OH> Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、 Fmoc-L-Ser (tBu)-OH、Fmoc-L-Ser (tBu) -OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Asp (OtBu) -OH、 Fmoc-L-Ser (tBu)-OH、Fmoc-L-Thr (tBu) -0H> Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Thr (tBu)-0H> Fmoc-L-Gly-OH, Fmoc-L-Glu (OtBu) -OH、Fmoc-L-Ser (tBu) -OH 和 Rnoc-L-His (Trt) -OH 時， 所得GLP-I衍生物氨基酸序列為kq ID No. 4，在該序列中，Xaa2 = kr，)(aa20 = Gln，Xaa^ =Asp, Xaa30 = Gly, Xaa31 = Gly, Xaa32 = Cys，且 Cys 的 C 末端是羧基-OH ；其中，當GLP-I衍生物C末端為羧基時，選擇王氏樹脂作為所述固相載體樹脂。
3.權利要求1所述的GLP-I衍生物在制備降血糖藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種GLP-1衍生物，其特征在于，該衍生物的分子結構式為以下任何一種結構式aGLP-1(7-36)即SeqIDNo.2；aGLP-1(7-37)即SeqIDNo.3；或aGLP-1(7-38)即SeqIDNo.4。本發(fā)明還公開了GLP-1衍生物的固相化學合成制備方法，以及在制備治療糖尿病的藥物中的用途。
文檔編號A61P3/10GK102558339SQ20121001288
公開日2012年7月11日 申請日期2009年1月12日 優(yōu)先權日2009年1月12日
發(fā)明者劉雯, 吳自榮, 金麗, 金明飛, 黃靜 申請人:華東師范大學