專利名稱：地菍提取物及其在制備治療艾滋病藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及藥物技術領域，具體地說，涉及中草藥地薟的醫(yī)藥新用途，更具體地說，涉及地薟提取物在制備治療艾滋病藥物中的用途。
背景技術：
現(xiàn)有技術公開了艾滋病是由于感染艾滋病病毒(HIV)而引起的一種傳染病，可以通過血液、性、吸毒、母嬰等四種途徑傳播。由于相關疫苗研究至今仍未成功，該疾患的抗病毒治療成為目前唯一的手段。但是本領域公知抗艾滋病病毒藥物其毒副作用大，將嚴重降低患者的生活質量。而且，由于臨床抗藥病毒株的不斷出現(xiàn)，導致現(xiàn)有的抗病毒藥物的療效顯著降低甚至喪失。另據(jù)報道，在非洲等一些經(jīng)濟落后地區(qū)，雖然艾滋病流行形勢十分嚴峻，但是由于經(jīng)濟落后，當?shù)責o法擔負抗病毒藥物價格，多數(shù)患者得不到適當?shù)闹委?，成為影響當?shù)亟?jīng)濟社會發(fā)展的嚴重制約。因此，研究開發(fā)低毒、有效、廉價的抗艾滋病藥物適合當前社會發(fā)展需求。我國有豐富的中草藥資源，中草藥化學成分的多樣性是中草藥發(fā)揮各種不同藥效的物質基礎。國內、外研究表明，天然產(chǎn)物包括中草藥的部分品種顯示出對艾滋病病毒的顯著拮抗作用，有可能在艾滋病的治療領域發(fā)揮積極作用。根據(jù)已有的文獻典籍，結合現(xiàn)代藥理研究方法，研究者發(fā)現(xiàn)部分中草藥顯示出對艾滋病病毒的抑制作用。地茶(Melastoma dodecandnun Lour)為野牡丹科植物地茶的全草,又名山地茶、地葡萄、金頭石榴、鋪地薟、落地薟等。分布我國東南、西南各地，是廣東省和浙江省正式收錄的地方藥材。其味甘、澀，性涼，具有活血止血，消腫祛瘀，清熱解毒之功效。臨床用于治療高熱、腫痛、咽喉腫痛、牙痛、黃疽、水腫、痛經(jīng)、崩漏、帶下、產(chǎn)后腹痛、癰腫、療瘡、痔瘡、毒蛇咬傷等病癥。另有報道地薟有抗腫瘤、抗衰老、降血糖、降血脂等作用。迄今，尚未見有關地薟及其提取物對由于HIV感染引起的艾滋病的治療用途。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供地薟提取物的醫(yī)藥新用途，具體地說，涉及地薟提取物在制備治療HIV感染引起的艾滋病的藥物中的用途。本發(fā)明經(jīng)篩選研究發(fā)現(xiàn)，地薟的提取物對HIV-1NL 4-3呈現(xiàn)顯著抑制作用，IC50低于0.49ug/ml，結果顯示，地薟該藥用植物具有防治艾滋病的嶄新用途。本發(fā)明的地薟提取物由地薟的地上部分、地薟的根或其全草經(jīng)由本領域已知的方法制備獲得。本發(fā)明以地薟地上部分、地薟的根或其全草為原料，采用溶劑提取法以及溶劑萃取法制成濃縮提取物；所采用的溶劑提取法中，選用水、甲醇、乙醇、丙酮等有機溶劑或以上溶劑的多種混和溶劑，在室溫下浸潰提取或加熱條件下回流提取，提取次數(shù)為2 3次獲得地薟提取物。本發(fā)明的實施例中優(yōu)選95% 乙醇為提取溶劑；
上述得到的地薟提取物采用溶劑萃取法進行萃取，將所述的地薟提取物懸浮于水中，石油醚、乙酸乙酯等適宜的溶劑依次進行萃取，萃取次數(shù)為2 3次，萃取液合并，減壓濃縮揮去有機溶劑，獲得不同極性有機溶劑萃取部位。本發(fā)明將獲得的地薟不同極性有機溶劑萃取部位進行抗病毒實驗，3次實驗結果的平均值顯示，所述地薟的乙酸乙酯萃取部位(DN-EA)對HIV-1NL4-3呈現(xiàn)顯著劑量依賴的抑制活性(如表I所示)。本發(fā)明中，實驗結果還顯示，樣品DN-EA起始濃度為800ug/ml,當其稀釋1620倍達到0.49ug/ml的濃度時，仍然對HIV病毒的抑制率達到70%，活性顯著。表I是地薟不同極性有機溶劑萃取部位抗 病毒實驗結果。表1.
sampledilution foldinhibition %
20NS
60NS
180 100 54099
DN-EA
162070
486036
1458010
4374012NS:受試濃度無抑制活性作用。本發(fā)明進一步的細胞毒測試結果證明DN-EA在180-1620倍稀釋時細胞毒作用很小(如表2所示)，實驗結果表明，地薟提取物的抗病毒作用是在安全劑量范圍內。表2是地薟提取物的細胞毒測試結果。表2
sample dilution foldcells %
204
6047
18088
54091
DN-EA
162092
486093
1458099
4374095本發(fā)明提供了地薟提取物的醫(yī)用新用途，所述的地薟提取物可單獨應用或者合用，或與適宜的賦形劑結合，按照常規(guī)方法制成口服或者非口服劑型應用于艾滋病的預防及治療。本發(fā)明具有以下明顯優(yōu)點:地薟資源豐富，在我國東南、西南各地都有分布；地薟作為地方藥物在廣東、浙江正式收錄，有一定臨床應用的歷史，至今未發(fā)現(xiàn)嚴重的毒副作用，臨床應用較為安全可靠；另外，地薟的活性部位可以單獨從其地上部分獲取，有利于資源的再生和可持續(xù)利用。下面結合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實施例絕非對本發(fā)明有任何限制。本領域技術人員在本說明書的啟示下對本發(fā)明實施中所作的任何變動都將落在本發(fā)明權利要求書的范圍內。
具體實施例方式實施例1地薟地上部分100g，粉碎，用8倍量的95%乙醇回流提取2小時，抽濾，藥渣同法提取I次。合并兩次提取液，在60°C下減壓濃縮，得到15g浸膏。浸膏用2倍量的水混懸，用與混懸液等倍量的石油醚萃取兩次，然后用等倍量的乙酸乙酯萃取兩次。乙酸乙酯萃取部分減壓濃縮后得浸膏4g，為抗病毒活性部位。實施例2地薟全草100g，粉碎，用85%含水丙酮進行回流提取，每次兩小時，合并兩次提取液，60°C下減壓濃縮得到18g浸膏。浸膏用2倍量的水混懸，用與混懸液等倍量的乙酸乙酯萃取兩次，然后用等倍量的正丁醇萃取兩次。乙酸乙酯萃取部分減壓濃縮后得浸膏6g，為抗病毒活性部位。實施例3地薟的根50g粉碎，用80%乙醇室溫下浸泡48小時，收集冷浸液；重復2次，合并三次冷浸液，60°C下減壓濃縮得浸膏4g。浸膏用2倍量的水混懸，用與混懸液等倍量的石油醚萃取兩次，然后用等倍量的乙酸乙酯萃取兩次。乙酸乙酯萃取部分減壓濃縮后得浸膏
1.2g，為抗病毒活性部位。實施例4地薟活性部位對轉染HIV-1NL4-3的TZM_bl細胞的保護作用在一 96孔培養(yǎng)板中，將實施例1 3所得的制備物作系列稀釋，稀釋倍數(shù)為20倍 43740倍。每孔分別加入25ul待測樣品溶液，25ul新鮮配制的TZM_bl培養(yǎng)液，25ul細胞濃度為 4X105cells/ml 的 TZM-bl 細胞液和 25ul HIV-1 NL4-3 (100TCID50)。在 37。。，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時。吸棄培養(yǎng)液，加入IOOul溶解于PBS中的底物工作液(PromegaBright-Glow luciferase assay system),室溫在暗處孵育5分鐘，以突光儀讀取數(shù)值,通過熒光值強弱計算病毒受到樣品的抑制程度。結果顯示，所述地薟的乙酸乙酯萃取部位(DN-EA)對HIV-1 NL4-3呈現(xiàn)顯著劑量依賴的抑制活性(如表I所示)。
權利要求
1.地薟提取物在制備治療艾滋病藥物中的用途； 所述的地薟提取物通過下述方法制備:以地薟地上部分、地薟的根或其全草為原料，采用溶劑提取法以及溶劑萃取法制成濃縮地薟提取物； 所述的溶劑提取法中，有機溶劑選自水、甲醇、乙醇或丙酮或所述溶劑的多種混和溶齊 ，在室溫下浸潰提取或加熱條件下回流提取2 3次獲得地薟提取物； 將制得的地薟提取物懸浮于水中，石油醚以及乙酸乙酯溶劑依次進行萃取2 3次，萃取液合并，減壓濃縮揮去有機溶劑，獲得地薟不同極性有機溶劑萃取部位。
2.按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的溶劑提取法中采用95%乙醇為提取溶劑。
3.按權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的地薟提取物為地薟的乙酸乙酯萃取部位(DN-EA)。
4.按權利要求3所述的用途，其特征在于，所述的地薟乙酸乙酯萃取部位(DN-EA)抑制HIV-1 NL4-3 活性。
5.按權利要求1或3所述的用途，其特征在于，所述地薟提取物單獨或者與其它藥物合用。
6.按權利要求1或3所述的用途，其特征在于，所述地薟提取物與賦形劑制成片劑、丸齊U、膠囊劑或顆 粒。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物技術領域，具體地說，涉及中草藥地菍的醫(yī)藥新用途，更具體地說，涉及地菍提取物在制備治療艾滋病藥物中的用途。本發(fā)明經(jīng)抗病毒實驗結果顯示，地菍提取物在體外對艾滋病病毒株HIV-1 NL4-3呈現(xiàn)明顯抑制作用，地菍提取物可單獨應用或者與其它藥物合用，或者與適宜的賦形劑結合，制備抗病毒藥物用于艾滋病的預防和治療。
文檔編號A61K36/54GK103211864SQ20121001919
公開日2013年7月24日 申請日期2012年1月20日 優(yōu)先權日2012年1月20日
發(fā)明者楊國勛, 胡金鋒, 周金濤, 熊娟, 張銳澤, 胡昌奇 申請人:復旦大學