專利名稱：一種用于治療HBV的siRNA的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療HBV的siRNA，屬基因工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
目前，全世界約有4. 2億HBV攜帶者，HBV感染是嚴(yán)重影響人類健康的疾病之一。 慢性HBV感染與肝纖維化、肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。但是，大部分的慢性HBV患者并沒(méi)有在常規(guī)的治療方式下獲得預(yù)期的結(jié)果。盡管干擾素能夠抑制HBV的復(fù)制，但是HBV能夠通過(guò)抑制干擾素的分泌和功能，從而對(duì)抗機(jī)體的抗病毒機(jī)制，而最終導(dǎo)致機(jī)體處于免疫耐受狀態(tài)。比如，在慢性感染的病人的外周血和肝浸潤(rùn)細(xì)胞中，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例有明顯增加。另外， HBsAg, HBeAg以及其他的病毒因子能夠直接抑制TLR介導(dǎo)的固有免疫應(yīng)答。HBV聚合酶能夠阻斷RIG-I和TLR3介導(dǎo)的IFN-β分泌。目前，RNAi技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于抗HBV研究。無(wú)論是細(xì)胞水平，還是HBV動(dòng)物模型，siRNA分子均取得明顯的抗HBV效果。RNAi干擾藥物必將成為今后研究的重點(diǎn)。能否設(shè)計(jì)一種分子，既能特異性的沉默HBV相關(guān)基因，同時(shí)能夠誘導(dǎo)IFN的產(chǎn)生， 從而能夠改善HBV導(dǎo)致的免疫耐受狀態(tài)。HBx特異的3p-siRNA的出現(xiàn)，使得這樣的假想成為可能，為HBV的治療提供了很好的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，針對(duì)HBV治療現(xiàn)狀的不足，本發(fā)明提供了一種用于治療HBV的 SiRNA0本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種用于治療HBV的siRNA，其序列如SEQ ID NO. 1所示SEQ ID NO. 1 :G⑶CUUACAUAAGAGGACU?；蛉鏢EQ ID NO. 2 所示SEQ ID NO. 2 :GGAC⑶CCUUUGUUUACGU?；蛉鏢EQ ID NO. 3 所示SEQ ID NO. 3 CCGACCUUGAGGCAUACUU。本發(fā)明的用于治療HBV的siRNA，是通過(guò)以下方法制備得到的LsiRNA 的設(shè)計(jì)(1)首先分析所研究的HBV亞型為ayw型，其序列如SEQ ID N0. 4所示。(2)針對(duì)HBV χ基因的序列，設(shè)計(jì)針對(duì)HBV χ基因的特異性沉默RNA，用siRNA設(shè)計(jì)軟件，設(shè)定相關(guān)參數(shù)包括siRNA的長(zhǎng)度為19個(gè)堿基序列；GC比例在35-50之間。將潛在的序列利用BLAST進(jìn)行基因數(shù)據(jù)庫(kù)的比較，排除和其他編碼序列同源的序列。(3)化學(xué)合成siRNA由廣州銳博公司直接合成，其靶點(diǎn)和3p_siRNA相同，序列見(jiàn)表 1，以及序列表 SEQ ID NO. I-SEQ ID NO. 3。表1化學(xué)合成siRNA序列
權(quán)利要求
1. 一種用于治療HBV的siRNA，其特征在于其序列如SEQ ID NO. 2所示=SEQ ID NO. 2 GGAC⑶CCUUUGUUUAC⑶。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于治療HBV的siRNA，其序列如SEQ ID NO.2所示?？扇斯ず铣?，也可通過(guò)體內(nèi)轉(zhuǎn)錄合成。將本發(fā)明的siRNA轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞24h和48h后，發(fā)現(xiàn)均能夠下調(diào)HBx基因的表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)以及上清中HBsAg和HBeAg的含量也明顯下降，并且3p-siRNA的作用效果比化學(xué)合成的更加顯著?？梢宰鳛榭笻BV的藥物應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P31/20GK102533767SQ20121002261
公開(kāi)日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月16日
發(fā)明者張建, 張彩, 田志剛, 韓秋菊 申請(qǐng)人:山東大學(xué)