專利名稱：一種牙科種植體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及牙科種植體材料,特別涉及一種載有miRNA或siRNA的牙科種植體及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著種植技術(shù)發(fā)展，牙科種植體已廣泛應(yīng)用于臨床的牙列缺損及缺失病人的修復(fù)。但是，種植體植入后，骨結(jié)合時間久。一般來說，種植體植入3-6個月之后才可負(fù)載修復(fù)，尤其是一些特殊病人，如糖尿病、骨質(zhì)疏松病人等，實行種植更加困難，勉強(qiáng)種植常導(dǎo)致失敗病例的出現(xiàn)。這極大地困擾著病人及牙科醫(yī)生。如今，為了提高骨結(jié)合速率，縮短骨結(jié)合時間，已有多種種植體表面形貌出現(xiàn)并應(yīng)用于臨床，主要是采用微弧氧化(MicroarcOxidation,ΜΑ0)、鈦衆(zhòng)噴涂或噴砂酸蝕等技術(shù)以改善種植體表面形貌。微弧氧化作為一種比較成熟的種植體表面處理技術(shù)已在臨床廣泛應(yīng)用，其種植體表面具有多孔結(jié)構(gòu)，可以提高骨結(jié)合速率。此外，為了提高骨結(jié)合速率，現(xiàn)在已有多種促成骨分化因子成功加載到種植體表面的科研報道，主要有骨形成蛋白(BMP)、轉(zhuǎn)化生長因子-β (TGF-β)、胰島素樣生長因子 (IGF-I)。其一種加載方法是將TOLLA(poly (D，L-lactide)、聚內(nèi)消旋乳酸)與TGF-β、 IGF-I蛋白混合形成微球，并包裹在純鈦絲表面，常溫干燥后，冰箱內(nèi)_20°C保存。另一種方法，就是將種植體基體浸沒于生物因子BMP與磷酸鈣的混合溶液48h，待干燥后于_80°C保存。上述方法中的微球直徑約為30-100 μ m，完全覆蓋牙科種植體原有形貌，并且加載完成后需要在-20°C或-80°C保存才能保證其活性；另外上述步驟繁瑣，首先需要采用多步驟制備TOLA、PDLLA等，然后才能與BMP等蛋白混合后加載，加載時間至少48小時。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種牙科種植體，該牙科種植體為具有微納米形貌的微弧氧化涂層，又加載有高效促成骨分化因子，可以更加快速地提高骨結(jié)合速率，縮短骨結(jié)合時間。本發(fā)明的另一個目的在于提供上述牙科種植體的制備方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)。一種牙科種植體，其特征在于，所述牙科種植體的外表面為具有微納米形貌的微弧氧化涂層，所述微弧氧化涂層加載有促成骨分化因子，所述促成骨分化因子為miRNA或 SiRNA0上述牙科種植體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟步驟1，選用純鈦或者鈦合金加工成種植體基體，再將種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗，然后吹干；步驟2，采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層，再依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗，然后吹干；
步驟3,將脂質(zhì)體與miRNA或siRNA混合成載體混合物；步驟4，將種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍；步驟5，采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，常溫放置，獲得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。上述技術(shù)方案中，優(yōu)選地，步驟I采用純鈦種植基體。優(yōu)選地，步驟2所述的微弧氧化工藝中，微弧氧化電解液溶質(zhì)由O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣配制，溶劑為去離子水，電源頻率100Hz，電壓為300至450V，占空比 20%，處理時間4-6min。優(yōu)選地，步驟3中，所述載體混合物中miRNA或siRNA濃度為O. 3-0. 5 μ M ； 步驟3中，所述脂質(zhì)體為脂質(zhì)類轉(zhuǎn)染試劑之一，包括商品化的Lipofectamine2000、 Oligofectamine 或 TransIT-TKO0優(yōu)選地，步驟4中所述干冰冷凍時間為3_8min ；更優(yōu)選地，步驟4中干冰冷凍時間為 5min。優(yōu)選地，步驟5所述真空凍干工藝中，真空室中壓力值等于或低于IPa，溫度為-20°C至_30°C，凍干時間大于等于24h。隨著RNA的發(fā)現(xiàn)及其功能的研究。RNA干涉(RNAi)作為一種強(qiáng)大的實驗工具，發(fā)展迅速；其利用具有同源性的RNA作用于目標(biāo)基因的信使RNA(mRNA)誘導(dǎo)序列特異的目標(biāo)基因沉默，迅速阻斷目標(biāo)基因活性，并成為基因分析和潛在臨床治療的有效工具。其中，小干擾 RNA(small interfering RNA ；siRNA)和微 RNA(microRNA ;miRNA)是兩種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子。相對于背景技術(shù)中多種促成骨分化因子，例如，骨形成蛋白(BMP)、轉(zhuǎn)化生長因子-β (TGF-β)、胰島素樣生長因子-I (IGF-I)，RNAi具有以下特性(I)RNAi具有高度的特異性。miRNA及siRNA能夠非常特異地誘導(dǎo)與之序列同源的mRNA降解或翻譯抑制，而與序列無關(guān)的mRNA不受影響。(2)RNAi具有高效性。相對很少量的miRNA及siRNA分子 (數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于內(nèi)源mRNA的數(shù)量)就能產(chǎn)生強(qiáng)烈的RNAi效應(yīng)，產(chǎn)生類似基因“剔除”的效果。(3) RNAi存在放大效應(yīng)。少量的miRNA及siRNA能夠使大量的靶基因沉默，即便細(xì)胞增殖50-100倍仍可保持RNAi效應(yīng)，這表明RNAi存在擴(kuò)增機(jī)制。(4)RNAi作用廣泛并可遺傳。miRNA及siRNA介導(dǎo)RNAi不僅在導(dǎo)入部位產(chǎn)生抑制效應(yīng)，而且可以跨越細(xì)胞界限在不同細(xì)胞間長距離傳遞和維持。研究表明，RNAi效應(yīng)可以在生物體內(nèi)傳播，并可傳給子代；并且miRNA及siRNA來源容易，完全體外合成，免疫原性小，可以大量供應(yīng)于臨床。研究已發(fā)現(xiàn)很多的促成骨分化、抗炎、促胰島素分泌的miRNA、siRNA。研究表明， miRNA及siRNA可以特異性地干擾轉(zhuǎn)錄后基因的表達(dá)，例如，促成骨分化、抗炎的miRNA和 siRNA可以有效的促進(jìn)骨結(jié)合和提高種植體在炎癥狀況下的種植成功率。本發(fā)明的牙科種植體，采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層，微納米形貌為多孔結(jié)構(gòu)，孔徑為微米級；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，載體混合物中脂質(zhì)體包裹的miRNA或siRNA直徑只有200nm左右， 可以較好的均勻分散到微弧氧化涂層的孔內(nèi)及孔外，不會因外力作用而輕易脫落，并且不會過份地改變微弧氧化涂層的微納米形貌。然而，背景技術(shù)中的多種促成骨分化因子，其微球直徑為30-100 μ m，對于常規(guī)的牙科種植體或外表面具有微弧氧化涂層的牙科種植體，將完全覆蓋種植體原有形貌。因此，本發(fā)明的牙科種植體具有微納米形貌的微弧氧化涂層，又加載有高效促成骨分化因子，可以更加快速地提高骨結(jié)合速率，縮短骨結(jié)合時間，提高種植成功率。此外，脂質(zhì)體包裹的miRNA在常溫下不易保存，但是凍干之后可以穩(wěn)定保存2周， 并仍保存70%的轉(zhuǎn)染活性。本發(fā)明中所采用的真空凍干工藝，不受種植體形狀的限制，可以在其復(fù)雜的不規(guī)則表面上實現(xiàn)miRNA或siRNA的均勻分布，并將含有水分的物質(zhì)預(yù)先進(jìn)行降溫凍結(jié)成固體，然后在真空的條件下使水蒸氣直接從固體中升華出來，而物質(zhì)本身剩留在凍結(jié)的冰態(tài)固架中，保持牙科種植體干燥后體積不變，疏松多孔。


下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖I為微弧氧化工藝的實施原理圖，其中，101、電源；102、電解液；103、待微弧氧化樣品；104、不銹鋼槽；105、正極電源線；106、負(fù)極電源線；107、冷卻裝置。圖2為真空凍干機(jī)原理圖，其中，201、真空泵；202、真空計；203、待凍干樣品；204、 樣品架；205、壓縮機(jī)；206、真空室。圖3為牙科種植體微弧氧化多孔形貌的掃描電鏡(SEM)照片圖，其中(a)為未載 miRNA的微弧氧化多孔形貌圖；(b)為載miRNA的鈦微弧氧化多孔形貌圖。圖4為牙科種植體微弧氧化多孔形貌載miRNA的激光共聚焦圖，其中紅色為cy_3 熒光標(biāo)記的miRNA。圖5為牙科種植體微弧氧化多孔形貌載miRNA后接種細(xì)胞后的24h激光共聚焦圖，綠色為細(xì)胞膜綠色熒光探針(DiO)對細(xì)胞膜染色，紅色為cy-3熒光標(biāo)記的miRNA。
具體實施例方式參照圖1，為本發(fā)明采用的微弧氧化工藝的實施原理圖，其中電源101的頻率 IOOHz,電壓為400V，占空比20% ;不銹鋼槽104內(nèi)盛裝電解液102，待微弧氧化樣品103為純鈦或者鈦合金加工成種植體基體，置入電解液102中。待微弧氧化樣品103電連接正極電源線105，不銹鋼槽104電連接負(fù)極電源線106。不銹鋼槽104的外側(cè)設(shè)置有冷卻裝置107。參照圖2，為真空凍干機(jī)原理圖，用于實現(xiàn)本發(fā)明中的真空凍干工藝，其中真空室 206內(nèi)設(shè)置有樣品架204，樣品架204上放置待凍干樣品203，壓縮機(jī)205為真空室206制冷，真空泵201保持真空室206的真空度，真空計202用于真空度檢測。下面通過實施例說明本發(fā)明的載有miRNA或siRNA的牙科種植體的制備方法。實施例II)選用純鈦加工成牙科種植體基體，牙科種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗30分鐘，吹干待用；2)配置微弧氧化工藝用電解液去離子水為溶劑，溶質(zhì)為O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣；3)采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層 不銹鋼槽為陰極，牙科種植體基體作為陽極，放入前一步驟配置的電解液內(nèi)，具體工藝參數(shù)為電源頻率100Hz，電壓為400V，占空比20%，處理時間5min，反應(yīng)溫度為室溫；
4)種植體基體表面二氧化鈦微弧氧化涂層制備完成后，用丙酮、無水乙醇和去離子水依次清洗；5)配置載體混合物將20nmol miRNA加入到100 μ L無RNA酶去離子水，形成 20 μ M miRNA溶液，試管取15 μ L 20 μ M miRNA和500 μ L無血清培養(yǎng)基(Opti-MEM)混合； 試管取15 μ L轉(zhuǎn)染試劑(Oligofectamine)和500 μ L無血清培養(yǎng)基(Opti-MEM)混合；兩管均室溫放置5min后混合,miRNA濃度為O. 3 μ M ;最后室溫下再放置20min,即得載體混合物；6)將微弧氧化過的牙科種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍3min后；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，其中，真空室中壓力值等于或低于IPa， 溫度為-30°C，凍干時間為24h ;最后常溫放置，即得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。實施例2I)選用純鈦加工成牙科種植體基體，牙科種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗30分鐘，吹干待用；2)配置微弧氧化工藝用電解液去離子水為溶劑，溶質(zhì)為O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣；3)采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層 不銹鋼槽為陰極，牙科種植體基體作為陽極，放入前一步驟配置的電解液內(nèi)，具體工藝參數(shù)為電源頻率100Hz，電壓為400V，占空比20%，處理時間4min，反應(yīng)溫度為室溫；4)種植體基體表面二氧化鈦微弧氧化涂層制備完成后，用丙酮、無水乙醇和去離子水依次清洗；5)配置載體混合物將20nmol miRNA加入到100 μ L無RNA酶去離子水，形成 20 μ M miRNA溶液，試管取20 μ L 20 μ M miRNA和500 μ L無血清培養(yǎng)基(Opti-MEM)混合； 試管取20 μ L轉(zhuǎn)染試劑(Lipofectamine2000)和500 μ L無血清培養(yǎng)基(Opti-MEM)混合； 兩管均室溫放置5min后混合,miRNA濃度為O. 4 μ M ;最后室溫下再放置20min,即得載體混合物；6)將微弧氧化過的牙科種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍5min后；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，其中，真空室中壓力值等于或低于IPa， 溫度為_30°C，凍干時間為26h ;最后常溫放置，即得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。實施例3I)選用純鈦加工成牙科種植體基體，牙科種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗30分鐘，吹干待用；2)配置微弧氧化工藝用電解液去離子水為溶劑，溶質(zhì)為O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣；3)采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層 不銹鋼槽為陰極，牙科種植體基體作為陽極，放入前一步驟配置的電解液內(nèi)，具體工藝參數(shù)為電源頻率100Hz，電壓為400V，占空比20%，處理時間6min，反應(yīng)溫度為室溫；4)種植體基體表面二氧化鈦微弧氧化涂層制備完成后，用丙酮、無水乙醇和去離子水依次清洗；5)配置載體混合物將20nmol miRNA加入到100 μ L無RNA酶去離子水，形成20 μ M miRNA溶液，試管取25 μ L 20 μ M miRNA和500 μ L無血清培養(yǎng)基(Opti-MEM)混合； 試管取25 μ L轉(zhuǎn)染試劑(Lipofectamine2000)和500 μ L無血清培養(yǎng)基(Opti-MEM)混合； 兩管均室溫放置5min后混合,miRNA濃度為O. 5 μ M ;最后室溫下再放置20min,即得載體混合物；6)將微弧氧化過的牙科種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍5min后；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，其中，真空室中壓力值等于或低于IPa， 溫度為_30°C，凍干時間為28h ;最后常溫放置，即得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。實施例4I)選用鈦合金加工成牙科種植體基體，牙科種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、 無水乙醇和去離子水超聲清洗30分鐘，吹干待用；2)配置微弧氧化工藝用電解液去離子水為溶劑，溶質(zhì)為O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣；3)采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層 不銹鋼槽為陰極，牙科種植體基體作為陽極，放入前一步驟配置的電解液內(nèi)，具體工藝參數(shù)為電源頻率100Hz，電壓為400V，占空比20%，處理時間5min，反應(yīng)溫度為室溫；4)種植體基體表面二氧化鈦微弧氧化涂層制備完成后，用丙酮、無水乙醇和去離子水依次清洗；5)配置載體混合物將20nmol siRNA加入到100 μ L無RNA酶去離子水，形成20 μ M SiRNA溶液，試管取15 μ L轉(zhuǎn)染試劑(TransIT-TKO)和500 μ L無血清培養(yǎng)基 (Opti-MEM)混合，室溫放置5min，將2. 25 μ L 20 μ M siRNA加入上述的溶液中，siRNA濃度為O. 3 μ M ;最后室溫下再放置15min，即得載體混合物；6)將微弧氧化過的牙科種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍5min后；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，其中，真空室中壓力值等于或低于IPa， 溫度為-20°C，凍干時間為24h ;最后常溫放置，即得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。實施例5I)選用鈦合金加工成牙科種植體基體，牙科種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、 無水乙醇和去離子水超聲清洗30分鐘，吹干待用；2)配置微弧氧化工藝用電解液去離子水為溶劑，溶質(zhì)為O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣；3)采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層 不銹鋼槽為陰極，牙科種植體基體作為陽極，放入前一步驟配置的電解液內(nèi)，具體工藝參數(shù)為電源頻率100Hz，電壓為400V，占空比20%，處理時間4min，反應(yīng)溫度為室溫；4)種植體基體表面二氧化鈦微弧氧化涂層制備完成后，用丙酮、無水乙醇和去離子水依次清洗；5)配置載體混合物將20nmol siRNA加入到100 μ L無RNA酶去離子水，形成20 μ M SiRNA溶液，試管取20 μ L轉(zhuǎn)染試劑(TransIT-TKO)和500 μ L無血清培養(yǎng)基 (Opti-MEM)混合，室溫放置5min,將3. 00 μ L 20 μ M siRNA加入上述的溶液中，siRNA濃度為O. 4 μ M ;最后室溫下再放置15min，即得載體混合物；6)將微弧氧化過的牙科種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍5min后；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，其中，真空室中壓力值等于或低于IPa， 溫度為_20°C，凍干時間為26h ;最后常溫放置，即得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。實施例6I)選用鈦合金加工成牙科種植體基體，牙科種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、 無水乙醇和去離子水超聲清洗30分鐘，吹干待用；2)配置微弧氧化工藝用電解液去離子水為溶劑，溶質(zhì)為O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣；3)采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層 不銹鋼槽為陰極，牙科種植體基體作為陽極，放入前一步驟配置的電解液內(nèi)，具體工藝參數(shù)為電源頻率100Hz，電壓為400V，占空比20%，處理時間6min，反應(yīng)溫度為室溫；4)種植體基體表面二氧化鈦微弧氧化涂層制備完成后，用丙酮、無水乙醇和去離子水依次清洗；5)配置載體混合物將20nmol siRNA加入到100 μ L無RNA酶去離子水，形成20 μ M miRNA溶液，試管取25 μ L轉(zhuǎn)染試劑(TransIT-TKO)和500 μ L無血清培養(yǎng)基 (Opti-MEM)混合，室溫放置5min，將3. 75 μ L 20 μ M siRNA加入上述的溶液中，siRNA濃度為O. 5 μ M ;最后室溫下再放置15min，即得載體混合物；6)將微弧氧化過的牙科種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍5min后；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，其中，真空室中壓力值等于或低于IPa， 溫度為_20°C，凍干時間為28h ;最后常溫放置，即得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。以實施例I制備的載有miRNA牙科種植體，并結(jié)合相關(guān)附圖對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明。參照圖3，為種植體基體微弧氧化表面加載miRNA前后形貌的掃面電鏡(SEM)照片， 對比圖，3 (a)中未載miRNA前形貌的微觀形貌，可見經(jīng)miRNA的凍干加載之后，微弧氧化的多孔表面及內(nèi)部均有一層脂質(zhì)體顆粒覆蓋。圖4為種植體基體微弧氧化表面加載miRNA前后形貌的激光共聚焦照片，其中紅色為cy-3熒光標(biāo)記的miRNA，從圖中可以看出經(jīng)miRNA的凍干加載之后，微弧氧化的種植體表面的確為miRNA的沉積。圖5為牙科種植體微弧氧化多孔形貌載miRNA后接種細(xì)胞24h后的激光共聚焦圖，綠色為細(xì)胞膜綠色熒光探針(DiO) 對細(xì)胞膜染色，紅色為cy-3熒光標(biāo)記的miRNA，從圖中可以看出，經(jīng)凍干法加載之后，miRNA 仍能有效的轉(zhuǎn)染進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部。其他實施例制備牙科種植體，具有類似結(jié)果。即凍干加載之后，微弧氧化的多孔表面及內(nèi)部均有一層脂質(zhì)體顆粒覆蓋，并確有miRNA或siRNA的沉積；接種細(xì)胞24h后，miRNA 或siRNA仍能有效的轉(zhuǎn)染進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部。盡管以上結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施方案進(jìn)行了描述，但本發(fā)明并不局限于上述的具體實施方案和應(yīng)用領(lǐng)域，上述的具體實施方案僅僅是示意性的、指導(dǎo)性的，而不是限制性的。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員在本說明書的啟示下，在不脫離本發(fā)明權(quán)利要求所保護(hù)的范圍的情況下，還可以做出很多種的形式，這些均屬于本發(fā)明保護(hù)之列。
權(quán)利要求
1.一種牙科種植體，其特征在于，所述牙科種植體的外表面為具有微納米形貌的微弧氧化涂層，所述微弧氧化涂層加載有促成骨分化因子，所述促成骨分化因子為HIiRNA或 SiRNA0
2.一種牙科種植體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟步驟1，選用純鈦或者鈦合金加工成種植體基體，再將種植體基體表面拋光后，依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗，然后吹干；步驟2，采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層， 再依次用丙酮、無水乙醇和去離子水超聲清洗，然后吹干；步驟3，將脂質(zhì)體與miRNA或siRNA混合成載體混合物；步驟4，將種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍；步驟5，采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，常溫放置，獲得載有 miRNA或siRNA的牙科種植體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牙科種植體的制備方法，其特征在于，步驟2所述的微弧氧化工藝中，微弧氧化電解液溶質(zhì)由O. 04M β -甘油磷酸鈉和O. 2Μ醋酸鈣配制，溶劑為去離子水，電源頻率IOOHz,電壓為300至450V，占空比20%，處理時間4_6min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牙科種植體的制備方法，其特征在于，步驟3中，所述載體混合物中miRNA或siRNA濃度為O. 3-0. 5 μ M。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牙科種植體的制備方法，其特征在于，步驟3中，所述脂質(zhì)體為脂質(zhì)類轉(zhuǎn)染試劑之一，包括商品化的Lipofectamine2000、Oligofectamine或 TransIT-TKO0
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牙科種植體的制備方法，其特征在于，步驟4中所述干冰冷凍時間為3-8min。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牙科種植體的制備方法，其特征在于，步驟4中干冰冷凍時間為 5min。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牙科種植體的制備方法，其特征在于，步驟5所述真空凍干工藝中，真空室中壓力值等于或低于IPa，溫度為-20°C至_30°C，凍干時間大于等于24h。
全文摘要
本發(fā)明涉及牙科種植材料領(lǐng)域，公開了一種載有miRNA或siRNA的牙科種植體及其制備方法。該牙科種植體的外表面為具有微納米形貌的微弧氧化涂層，所述微弧氧化涂層加載有促成骨分化因子，所述促成骨分化因子為miRNA或siRNA。其制備方法，依次包括以下步驟選用純鈦或者鈦合金加工成種植體基體，拋光、清洗，吹干；采用微弧氧化工藝在種植體基體外表面制備具有微納米形貌的微弧氧化涂層，再清洗、吹干；將脂質(zhì)體與miRNA或siRNA混合成載體混合物；將種植體基體浸沒于載體混合物中，干冰冷凍；采用真空凍干工藝將載體混合物加載到微弧氧化涂層，常溫放置，獲得載有miRNA或siRNA的牙科種植體。
文檔編號A61K6/04GK102579145SQ201210041330
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月23日
發(fā)明者吳凱敏, 宋文, 張玉梅, 閆鈞 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)