專利名稱：一種治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中草藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
副豬嗜血桿菌病又稱多發(fā)性纖維性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，也稱格拉澤氏病，是由副豬嗜血桿菌引起的，主要危害3-8周齡仔豬和保育豬，也可感染2-4周齡生長育肥豬，發(fā)病率達(dá)10-50%，嚴(yán)重時病死率甚至可高達(dá)50%，是近幾年養(yǎng)豬生產(chǎn)中的常見病和多發(fā)病，給養(yǎng)豬業(yè)造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。副豬嗜血桿菌病已經(jīng)在全球范圍影響著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，經(jīng)常發(fā)生副豬嗜血桿菌病的豬場應(yīng)提前使用有效藥物進(jìn)行預(yù)防，隨著集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，副豬嗜血桿菌病的發(fā)病率呈上升的趨勢。在治療時推薦使用頭孢噻呋鈉、氟苯尼考注射，但該菌對這些抗菌藥物已產(chǎn)生耐藥性。用化學(xué)藥物防治疾病，不但會使動物抗病力減弱，還會在動物體中殘留蓄積，產(chǎn)生毒副作用，危及動物和人體的健康，耐藥性問題已經(jīng)成為全球關(guān)注的熱點(diǎn)。積極開展抗菌中草藥的篩選和配方的研制對于副豬嗜血桿菌及其他呼吸系統(tǒng)細(xì)菌性動物疫病的防治具有
重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有對副豬嗜血桿菌病的治療容易產(chǎn)生耐藥性的缺陷，提供一種治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑及其制備方法，對福豬嗜血桿菌病的防治取得了較好的效果。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
按照質(zhì)量份計算，本發(fā)明治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑是由金銀花5-15份、 連翹5-15份、蒲公英5-15份、枇杷葉2-15份、木通2-10份、黃芪5_25份和甘草5_35份制備而成。優(yōu)選的，上述中草藥制劑是由金銀花6-12份、連翹6-12份、蒲公英6-12份、枇杷葉3-10份、木通3-6份、黃芪10-20份和甘草10-30份制備而成。本發(fā)明還提供了前述治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑的制備方法取金銀花、 連翹、蒲公英、枇杷葉、木通、黃芪和甘草，混勻，按常規(guī)方法制成中藥制劑。優(yōu)選的，還可以取混勻后的中草藥，加水浸泡，煎煮，過濾，濾液濃縮，按常規(guī)方法制成中藥制劑。本發(fā)明口服液的制備方法取混勻后的中草藥，加水浸泡，煎煮30min，過濾，濾渣加水至蓋過濾洛，繼續(xù)煎煮30min,過濾,合并兩次濾液，濃縮至lg/ml, 110-120 °C滅菌，即得口服液。方中金銀花忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬植物干燥花蕾或帶初開的花，連翹木犀科(Oleaceae)連翅屬(Forsythia)植物連翅(Forsythia suspensa (Thunb. ) Vahl)的干燥果實，蒲公英為菊科植物蒲公英/1OraracwffiHand. Mazz.、堿地蒲公英
Toraxacum borealisinense Kitam.或同屬數(shù)種植物的干燥全草,金銀花、連翅和蒲公英具有清熱解毒、散結(jié)消腫的功效；枇杷葉為薔薇科植物枇杷Eriobotryajaponica (Thunb.) Lindl.的葉，具有化痰止咳和胃降逆的功效，木通為雙子葉植物藥木通科植物白木通或三葉木通、木通(五葉木通)的木質(zhì)莖，具有清熱利水的功效，黃芪為豆科草本植物蒙古黃芪、 膜莢黃芪的根，具有補(bǔ)氣升陽、固表止汗、托里生肌、利水消腫的功效，甘草為雙子葉植物豆科 Leguminosae 甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch ，脹果甘草inf lata Bat.，或光果甘草G glabra L.的根及根莖，具有補(bǔ)中益氣、清熱解毒、潤肺止咳、緩和藥性的功效， 以上諸藥協(xié)同增效，對副豬嗜血桿菌病進(jìn)行預(yù)防和治療，具有較好的效果。I、材料和方法
1.I儀器設(shè)備與試劑普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基；藥敏試紙(購買或自制)；細(xì)菌待做藥敏試驗的細(xì)菌；接種環(huán)、酒精燈、打孔器、牛津杯；移液器、滴頭；酸度計(德國)；超純水器 (IOL);控溫、控濕全自動生化培養(yǎng)箱；臥式高壓消毒柜；超生波裂解儀；歐林巴氏顯微鏡系列；超靜工作臺。L2試驗動物
昆明小鼠90只，雌雄各半，體重(20±2)g，購于貴陽醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，適應(yīng)環(huán)境I周后進(jìn)入正式實驗。自由飲水，定時通風(fēng)，濕度保持60%，光照和黑暗時間各12h。 小鼠飼料配方面粉20%，玉米面30%，麩皮22%，豆餅粉18%，魚粉3%，酵母粉1%，骨粉3%，雞蛋1%，食鹽1%，魚肝油1%。家兔60日齡20只，體重I. 7206±0. 0315公斤，分成兩組進(jìn)行中草藥安全試驗和生理特性觀測試驗，試驗期30天。家兔飼料配方玉米面51%，麩皮17%，黃豆粉8%，魚粉 6%，油枯7%，草粉10%,磷酸鈣0. 5%，食鹽0. 5%。1.3試驗藥物金銀花6-12份、連翹6-12份、蒲公英6-12份、枇杷葉3-10份、木通3-6份、黃芪10-20份、甘草10-30份。基本處方配制由當(dāng)?shù)厮幉呐l(fā)市場購入以上中草藥，加工(60目)粉粹包裝待用。每公斤體重0. 8-1克/次，早晚各兩次，連用3-5天?？诜褐苽鋵⒁陨现胁菟幇戳糠Q重混合，加水浸泡，煎煮30分鐘，過濾，藥渣再加水至蓋過濾渣，煎煮30分鐘過濾，合并濾液并濃縮至lg/ml，瓶裝，116°C、高壓滅菌30分鐘，放入4 °C冰箱備用。2、實驗項目
2.I安全試驗
中草藥在推廣應(yīng)用前檢驗其安全性與毒性。試驗動物為小鼠或大鼠；測定半數(shù)致死量 LD50 ;試驗結(jié)果按簡化寇氏法進(jìn)行計算。預(yù)備實驗取小鼠20只，按序貫法進(jìn)行預(yù)備試驗，測得小鼠腹腔注射100%致死量為2870mg/kg，連續(xù)觀察7d。正式實驗按寇氏Idirber法，取體重(20±2 )g健康小白鼠70只，隨機(jī)分組， 每組10只，雌雄各半，實驗前禁食不禁水12h，實驗時以適當(dāng)劑量一次性腹腔注射染毒， 注射量為0. 2mL/20g體重，組數(shù)為7，劑距為0. 80,染毒2h后給食，觀察7天。記錄各組小鼠的中毒癥狀，死亡時間和死亡數(shù)，計算LD5tlt5
2.2中草藥藥敏試驗
藥敏片的制備取新華I號定性濾紙，用打孔機(jī)打成6毫米直徑的圓形小紙片。取圓紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅15-20分鐘高壓消毒后，放在37°C溫箱或烘箱中數(shù)天，使完全干燥?？咕幖埰谱髟谏鲜龊?0片紙片的青霉素瓶內(nèi)加入藥液0. 25毫升，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37°C溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密蓋，置陰暗干燥處存放，有效期3-6個月。藥液的制備按單味藥的使用治療量的比例配制復(fù)方制劑藥液，即配置lg/lml的水煎劑。此稀釋液即為用于做藥敏試驗的藥液。在“超凈工作臺”中，用酒精燈火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量副豬嗜血桿菌培養(yǎng)液于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液(濃度為105cfu/ml-106cfu)，用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。用鑷子輕按幾下藥敏片，使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，在平皿中央貼一片，外周等距離貼若干片，標(biāo)記每種藥敏片的名稱。將平皿培養(yǎng)基置于37°C溫箱中培養(yǎng)24小時后，觀察效果。藥敏實驗的結(jié)果觀察按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標(biāo)準(zhǔn)，抑菌圈直徑(毫米)敏感度20以上極敏，15-20高敏，10-14中敏，10以下低敏，0不敏。2.3中草藥對家兔安全性及生理特性的影響
在貴州省畜牧獸醫(yī)研究所選擇60日齡家兔20只。試驗期為30天。20只小白兔分成兩組進(jìn)行中草藥安全試驗和生長性能測定試驗。試驗開始前一周喂飼料，自由采食，一日二次，飲水器自由飲水。第二周后，實驗組中草藥方劑劑量按0.8-1克/公斤體重拌料投放飼喂。對照組按常規(guī)投料。分早晚二次喂料，每天早晚觀察家兔行為體征，并記錄。30天后進(jìn)行屠宰試驗。2. 4推廣試驗
試驗動物及規(guī)模(1)選擇貴州省內(nèi)中小型豬場和養(yǎng)豬基地20日齡以上哺乳仔豬和35 日齡以上斷奶仔豬共100頭副豬嗜血桿菌疑似病例進(jìn)行病原分離、模板DNA提取、引物設(shè)計合成，PCR擴(kuò)增，對陽性病例采取中草藥制劑防治。(2)選擇貴州省中小型豬場和養(yǎng)豬基地 1087頭副豬嗜血桿菌疑似病例進(jìn)行診斷與防治。3、結(jié)果
3. I急性中毒癥狀
主要表現(xiàn)為精神萎靡，全身出汗，呼吸急促，被毛松亂，蜷曲，不食，扎堆，給藥后 0. 15 6h死亡，尸檢可見心臟腫脹充血、肝臟、肺臟充血。3.2半數(shù)致死量半數(shù)致死量按以下公式計算
LD50 = log ^ 1 [Xm - d (Sp - 0. 5)]
其中Xm為最大劑量組劑量的對數(shù)；d為相鄰兩組高劑量與低劑量之比的對數(shù)；P為各組動物的死亡率，用小數(shù)表示；Sp為各組動物死亡率的總和。半數(shù)致死量結(jié)果見表I。
表I小鼠腹腔LD5tl測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑，其特征在于按照質(zhì)量份計算，它是由金銀花5-15份、連翹5-15份、蒲公英5-15份、枇杷葉2_15份、木通2_10份、黃芪5_25份和甘草5-35份制備而成。
2.按照權(quán)利要求I所述治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑，其特征在于它是由金銀花6-12份、連翹6-12份、蒲公英6-12份、枇杷葉3_10份、木通3_6份、黃芪10-20份和甘草10-30份制備而成。
3.權(quán)利要求I或2所述治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑的制備方法，其特征在于 取金銀花、連翹、蒲公英、枇杷葉、木通、黃芪和甘草，混勻，按常規(guī)方法制成中藥制劑。
4.按照權(quán)利要求3所述治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑的制備方法，其特征在于 取混勻后的中草藥，加水浸泡，煎煮，過濾，濾液濃縮，按常規(guī)方法制成中藥制劑。
5.按照權(quán)利要求4所述治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑的制備方法，其特征在于 取混勻后的中草藥，加水浸泡，煎煮30min,過濾,濾洛加水至蓋過濾洛,繼續(xù)煎煮30min,過濾，合并兩次濾液，濃縮至lg/ml，110-120°C滅菌，即得口服液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療副豬嗜血桿菌病的中草藥制劑及其制備方法，它是由金銀花、連翹、蒲公英、枇杷葉、木通、黃芪和甘草制備而成，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用中草藥制劑來防治副豬嗜血桿菌病，用藥安全，對副豬嗜血桿菌高度敏感，有很好的抑制作用，對副豬嗜血桿菌病的治愈率可達(dá)89.7-91.4%，并且價格低廉，用藥方便，不會產(chǎn)生耐藥性，無毒副作用。
文檔編號A61K36/73GK102579622SQ20121005336
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月3日
發(fā)明者余波, 劉輝, 史開志, 吳位珩, 孫淑琴, 徐景峨, 楊茂生, 楊莉, 譚尚琴 申請人:貴州省畜牧獸醫(yī)研究所