專利名稱：一種生理活性三七多糖的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種具有生理活性的三七多糖的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
三七(/ : notoginseng (Burk.) F. H. Chen),又名田七、金不換等，為五加科 (Araliaceae)人參屬(Panax、植物。三七為名貴中藥，利用歷史悠久。三七的主要活性成分為皂苷，已進(jìn)行工業(yè)生產(chǎn)，并開發(fā)多種產(chǎn)品。近代藥理學(xué)研究表明，除皂苷外，三七多糖亦有顯著的生理活性。目前，三七多糖的提取多采取簡(jiǎn)單的提取、醇沉、濃縮、干燥等步驟。生產(chǎn)的三七多糖純度低，重金屬(特別是砷)和灰分含量過高，影響終端產(chǎn)品的質(zhì)量。中國(guó)專利公開了三七多糖提取分離方法(申請(qǐng)?zhí)?1108493. 6和CN1329094A)，即為三七粗多糖的制備方法，未進(jìn)行純化和精制。應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)，工業(yè)化生產(chǎn)具有生理活性三七多糖，對(duì)于三七資源的綜合利用，促進(jìn)三七產(chǎn)業(yè)的持續(xù)發(fā)展均有積極的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種生理活性三七多糖的制備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明的制備方法通過純化和精制等步驟，得到三七多糖。按本發(fā)明制得的三七多糖具有含量高，蛋白質(zhì)、重金屬和灰分低，質(zhì)量穩(wěn)定，有顯著生理活性等特點(diǎn)。本發(fā)明提供的制備方法生產(chǎn)周期短，所用溶劑為水及乙醇，安全無(wú)毒，成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供的三七多糖的制備方法，其具體步驟如下
三七的地下部位(根莖、主根、支根和須根)粉碎，過20目篩的顆粒，用乙醇提取三七總皂苷后，揮去殘留乙醇，加入6-10倍質(zhì)量的水，于80-100°C加熱提取三次，提取液合并， 置于離心機(jī)中，在5000-15000rm轉(zhuǎn)速下高速離心10-15分鐘。離心后的清液從經(jīng)過預(yù)處理的樹脂層析柱柱頂加入，上柱流速O. 3-1. O BV/h。提取液加入后，用相當(dāng)于層析柱體積的I. 0-2. O BV的純化水沖洗，流速為O. 5-1. O BV/h。合并洗脫液，洗脫液通過截留分子量 300-500的芳香聚酰胺平板式超濾膜，截留液相對(duì)密度I. 02-1. 03，超濾液加入3_5倍的乙醇靜置，沉淀，離心。沉淀物用水溶解至截留液相對(duì)密度I. 02，噴霧干燥，得到三七多糖。上述過程中上樹脂層析柱后可用活性炭脫色，活性炭用量為三七質(zhì)量百分比的 4-5%，在溫度45°C以上攪拌30分鐘，過濾，離心，合并清液。按上述步驟使用的樹脂須進(jìn)行預(yù)處理。預(yù)處理方法為將樹脂用水浸泡，過濾，裝入層析柱，用75-98%乙醇飽和，靜置15 36h后，順序用乙醇沖洗，至乙醇液用水稀釋后不混濁,用水沖洗,至無(wú)乙醇,用相當(dāng)于樹脂體積O. 5 5倍的質(zhì)量濃度為3-5%鹽酸洗滌，用水洗至中性，用相當(dāng)于樹脂體積O. 5 5倍的質(zhì)量濃度為I 8%氫氧化鈉洗滌,用水洗至中性,至HPLC檢測(cè)無(wú)有機(jī)物質(zhì)殘留。按本發(fā)明提供的制備方法得到的三七多糖為淡黃色粉末，溶于水，不溶于乙醇、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑，水溶液為中性，pH=7.0。三七多糖按常法水解，用HPLC測(cè)定單糖組成，為半乳糖醛酸，半乳糖，葡萄糖醛酸，阿拉伯糖，葡萄糖，鼠李糖。其單糖的組成比例為 63:21:7:5:2:2ο三七多糖的紅外光譜(IR)顯示3431.02 cnT1為O-H伸縮振動(dòng)的吸收，2928. 25 CnT1為C-H伸縮振動(dòng)的吸收，這兩組吸收峰是多糖的特征峰；1646. 62CHT1為C=O的伸縮振動(dòng)的吸收峰，1400-1200cm_1為C-H的變角振動(dòng)的吸收峰，1200-1000 cnT1是吡喃糖環(huán)的C-O (C-O-C和C-0-H)伸縮振動(dòng)的吸收峰(圖I)。三七多糖的13C核磁共振譜(13C-NMR)顯示D_吡喃半乳糖的化學(xué)位移[δ 92. 5 (c-l )，69.61 ( C-2 )，70.13 ( C—3 )，71.05 (C—4)，71.50 (C—5)，62.71 (C—6) ];D-葡萄吡喃糖的化學(xué)位移[δ 94. 74 (C-I)，74. 90 (C-2)，77. 05 (C-3)，70. 13 (C-4), 76.76 (C-5), 61. 71 (C_6) ] ;D_吡喃半乳糖醛酸甲酯和D-葡萄吡喃糖醛酸的甲酯碳的化學(xué)位移(S 215.55，215.69，215. 81) ;D_吡喃阿拉伯糖的化學(xué)位移[δ 104. 88 (C-I) , 71. 13 (C-2) , 73. 75 (C-3 ) , 70. 13 (C-4), 64. 43 (C-5)](圖 2)。三七多糖經(jīng)部分降解，制備寡糖，證明具有β -D-半乳吡喃糖基(1-3)-[α-L-阿拉伯呋喃糖基(1-6) ]_β -D-半乳吡喃糖的寡糖單元結(jié)構(gòu)。按本發(fā)明提供的制備方法得到的三七多糖經(jīng)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明，三七多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能、保護(hù)肝損傷、促進(jìn)骨缺損修復(fù)、抑制腫瘤、降低血糖、抗病毒等作用。以下為實(shí)驗(yàn)研究的情況
I、三七多糖增強(qiáng)創(chuàng)傷大鼠免疫功能的作用
創(chuàng)傷引起機(jī)體代謝和免疫功能紊亂，增加感染幾率，誘發(fā)多器官衰竭。免疫抑制與創(chuàng)傷的嚴(yán)重程度及炎癥反應(yīng)成正比。表現(xiàn)為外周血淋巴細(xì)胞減少，功能降低，CD4細(xì)胞減少，CD4 / CD8比值減少，自然殺傷細(xì)胞(NK)和淋巴因子激活殺傷細(xì)胞活力下降，由T細(xì)胞產(chǎn)生的白細(xì)胞介素-2 (IL-2)水平降低。及時(shí)提供早期腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)支持(EN)治療，能減輕腸黏膜萎縮，防止細(xì)菌移位，維護(hù)腸道屏障，糾正免疫功能異常，降低死亡率。創(chuàng)傷模型大鼠在實(shí)施EN治療的同時(shí)，加入三七多糖，觀察三七多糖對(duì)機(jī)體免疫功能的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，僅提供蛋白質(zhì)和熱量的標(biāo)準(zhǔn)腸道營(yíng)養(yǎng)支持(EN)對(duì)創(chuàng)傷機(jī)體免疫功能恢復(fù)雖有一定作用，但未能起到明顯的促進(jìn)作用。三七多糖可調(diào)節(jié)NK細(xì)胞，促進(jìn)巨噬細(xì)胞活性，提高脾臟空斑形成細(xì)胞的數(shù)量。在提供EN的同時(shí)，加入三七多糖，不僅CD4細(xì)胞數(shù)量和OT4 / OT8比值均明顯高于創(chuàng)傷組。而且血清的白細(xì)胞介素IL-2水平顯著高于EN 治療組。加入三七多糖有利于創(chuàng)傷機(jī)體免疫抑制的全面恢復(fù)(表3，4)。表3創(chuàng)傷大鼠T細(xì)胞表型含量變化
權(quán)利要求
1.一種具有生理活性的三七多糖的制備方法，其特征在于，三七多糖的制備按以下步驟進(jìn)行三七的地下部位粉碎，過20目篩的顆粒，用乙醇提取三七總皂苷后，揮去殘留乙醇，加入6-10倍質(zhì)量的水，于80-100°C加熱提取三次，提取液合并，置于離心機(jī)中，在 5000-15000rm轉(zhuǎn)速下高速離心10-15分鐘，離心后的清液從經(jīng)過預(yù)處理的樹脂層析柱柱頂加入，上柱流速0. 3-1. 0 BV/h，提取液加入后，用相當(dāng)于層析柱體積的I. 0-2. 0 BV的純化水沖洗，流速為0. 5-1. 0 BV/h，合并洗脫液，洗脫液通過截留分子量300-500的芳香聚酰胺平板式超濾膜，截留液相對(duì)密度I. 02-1. 03，超濾液加入3-5倍的乙醇靜置，沉淀，離心，沉淀物用水溶解至截留液相對(duì)密度I. 02，噴霧干燥，得到三七多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的制備方法，其特征在于所述的純化用吸附樹脂和離子交換樹脂包括LSA-8、、LSA-21、LSA-30、LSA-10, LSC-AS, LSC-100、 LX-20、LX-68、0U-29、LAR-714、D-101 型號(hào)的樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的制備方法，其特征在于所述的超濾，包括醋酸纖維素超濾膜、芳香聚酰胺平板式超濾膜和無(wú)機(jī)陶瓷超濾膜。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的制備方法，其特征在于上述過程中上樹脂層析柱后用活性炭脫色，活性炭用量為三七質(zhì)量百分比的5%以下，在溫度45°C 以上攪拌30分鐘，過濾，離心。
5.權(quán)利要求I所述的具有生理活性的三七多糖的應(yīng)用，其特征在于三七多糖具有調(diào)節(jié)免疫功能、保護(hù)肝損傷、促進(jìn)骨缺損修復(fù)、抑制腫瘤、降低血糖、抗病毒的作用，可單獨(dú)或組合用做醫(yī)藥品和健康產(chǎn)品的原料。
全文摘要
本發(fā)明是一種具有生理活性的三七多糖的制備方法及其應(yīng)用。該方法應(yīng)用樹脂柱層析、活性碳和膜分離技術(shù)純化等步驟，精制純化得到三七多糖。用本發(fā)明的制備方法得到的三七多糖具有蛋白質(zhì)、重金屬和灰分低，質(zhì)量穩(wěn)定的特點(diǎn)，并具有調(diào)節(jié)免疫、保護(hù)肝損傷、降低血糖、抗腫瘤等生理活性，可單獨(dú)或組合作為天然藥物和健康產(chǎn)品的原料。本發(fā)明提供的三七多糖制備方法操作簡(jiǎn)單，適于工業(yè)化生產(chǎn)，且成本低，達(dá)到節(jié)能降耗，實(shí)現(xiàn)中國(guó)名貴中藥三七的綜合開發(fā)、可持續(xù)利用的目的。
文檔編號(hào)A61P3/10GK102585029SQ20121005894
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月8日
發(fā)明者丁艷芬, 張穎君, 李江霞, 楊崇仁, 王東 申請(qǐng)人:玉溪市維和生物技術(shù)有限責(zé)任公司