專利名稱：山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
目前流行性感冒病毒日益嚴(yán)重，并且流行性感冒病毒與呼吸道疾病及引起的全身性疾病密切相關(guān)，我國是流感高發(fā)國家之一，不但人口眾多，而且生活習(xí)慣也有利于流感病毒的轉(zhuǎn)播，每年人平均發(fā)病次數(shù)達(dá)到O. 3 O. 7次不等，重點(diǎn)人群達(dá)到2 4次。流感對(duì)人類存在嚴(yán)重威脅，尤其是新發(fā)品種流感病毒，其不但引起繼發(fā)性其它微生物感染，而且會(huì)直接導(dǎo)致器官破壞和變態(tài)反應(yīng)致人死亡。但目前并沒有有效的治療流行性感冒病毒及其疾病 (流感)的方法和治療手段，如針對(duì)臨床癥狀進(jìn)行炎癥反應(yīng)治療，治標(biāo)不治本。目前最常見的預(yù)防和治療流行性感冒病毒的方法是使用流感病毒疫苗接種，非特異性抗病毒中藥或西藥磷酸奧司他韋(達(dá)菲)_神經(jīng)氨酸酶抑制劑。然而流感病毒疫苗預(yù)防接種弊端在于接種人群有選擇性，不是人人可以接種。此外，流感病毒疫苗保護(hù)率不高，保護(hù)時(shí)間也較短(3 6個(gè)月)。目前大多數(shù)非特異性抗病毒中藥雖然宣稱有抗病毒作用，但是并非針對(duì)流感病毒，且抗病毒作用機(jī)理不清楚。在我們以往研究的許多種治療外感風(fēng)寒，西醫(yī)所認(rèn)為的感冒的中藥組方并沒有直接抗流感病毒的作用。簡(jiǎn)單的說，不是所有的治療感冒的中藥組方都有明確的抑制流感病毒的作用。西藥“磷酸奧司他韋(達(dá)菲，(3R，4R，5S)-4-乙酰胺-5-氨基-3(1-丙氧乙酯)-1_環(huán)己烯-I羧酸乙酯磷酸鹽)”是神經(jīng)氨酸酶抑制劑，對(duì)流感病毒進(jìn)入細(xì)胞有特異性抑制作用，但是不僅價(jià)格昂貴，而且有一些患者服用后出現(xiàn)嘔吐、惡心、失眠、頭痛、腹痛、腹瀉、頭暈、疲勞、鼻塞、咽痛和咳嗽等副反應(yīng)。達(dá)菲是在體內(nèi)被位于肝臟和腸道的酯酶轉(zhuǎn)化為活性代謝產(chǎn)物而起著抑制神經(jīng)氨酸酶作用，如果患者肝臟和腸道器官功能不正常也將影響其藥效。此外，腎功能不全患者也要慎用。因此，針對(duì)性抑制流感病毒復(fù)制、抑制流感病毒神經(jīng)氨酸酶水解細(xì)胞表面唾液酸， 從而導(dǎo)致流感病毒不能與細(xì)胞表面受體結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，以及減少流感病毒在細(xì)胞內(nèi)的產(chǎn)生將是治療流感病毒性感冒的病因。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，抑制流感病毒神經(jīng)氨酸酶水解細(xì)胞表面唾液酸，導(dǎo)致流感病毒不能與細(xì)胞表面受體結(jié)合而進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而能有效的抑制流感病毒復(fù)制，更重要地是克服藥物的副反應(yīng)弊端。本發(fā)明的另一目的是提供了一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物的制備方法。本發(fā)明的另一目的是提供了山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物制備預(yù)防和治療流感及其并發(fā)癥疾病的藥物的用途；本發(fā)明的另一目的是提供了含有山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物的藥物組合物。本發(fā)明的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，通過將山香圓醇滲漉提取得到，醇滲漉提取方法是取山香圓葉粗粉，用30 90%乙醇作為提取劑，浸潰12 72小時(shí)后，以I 8ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 15倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用25 90%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用40 80%乙醇作為提取劑， 浸潰24 48小時(shí)后，以I 7ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 13倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用 30 85%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用45 75%乙醇作為提取劑， 浸潰24 36小時(shí)后，以I 6m/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 11倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用 35 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用50 70%乙醇作為提取劑， 浸潰36小時(shí)后，以I 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 10倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用40 80 %乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用55 70%乙醇作為提取劑，浸潰24小時(shí)后，以2 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材5 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用45 80% 乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用60 70%乙醇作為提取劑， 浸潰12小時(shí)后，以3 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 6倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50 75%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用65%乙醇作為提取劑，浸潰 36小時(shí)后，以4ml/分鐘速度進(jìn)行滲漉，收集藥材7 10倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50 70%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。更優(yōu)選的，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用70%乙醇作為提取劑，浸潰 72小時(shí)后，以4 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優(yōu)選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中總黃酮含量50%以上。優(yōu)選的，述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中還包含黃酮類化學(xué)成分及其醫(yī)學(xué)上可以接受的酚酸類成分。優(yōu)選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中黃酮類化學(xué)成分含女貞苷、 野漆樹苷、金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種。優(yōu)選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)4. 5%U. 2%、2· 5%以上。優(yōu)選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷總量達(dá)23%以上。本發(fā)明還提供了山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物用于制備預(yù)防和治療流感及其并發(fā)癥疾病的藥物的用途，用于抑制流感病毒、抑制流感病毒FM1、抑制神經(jīng)氨酸酶，其并發(fā)癥是指腎功能衰竭或是指脾損傷或/和肺損傷。本發(fā)明還提供了一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物制劑，該制劑以所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物為主要活性成分。本發(fā)明的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物能夠提取出有效的抑制神經(jīng)氨酸酶成分，山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物隨著使用劑量大小變化，其抑制神經(jīng)氨酸酶活性的能力，即神經(jīng)氨酸酶抑制率的高低也相應(yīng)發(fā)生變化，并且成正相關(guān)，山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物能夠通過抑制流感病毒表面神經(jīng)氨酸酶，進(jìn)而抑制流感病毒進(jìn)入細(xì)胞里面、抑制已經(jīng)進(jìn)入細(xì)胞里面的流感病毒復(fù)制、增殖，從而減少了流感病毒對(duì)細(xì)胞的感染、生長(zhǎng)，以及預(yù)防和治療流感及其并發(fā)癥。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其是通過將山香圓醇滲漉提取得到， 醇滲漉提取方法如下取山香圓葉粗粉，用30 90%乙醇作為提取劑，浸潰12 72小時(shí)后，以I 8ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 15倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用25 90%乙醇洗脫， 收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。優(yōu)選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中總黃酮含量50%以上。優(yōu)選的，所述的山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，其中還包含黃酮類化學(xué)成分及其醫(yī)學(xué)上可以接受的酚酸類成分，其中黃酮類化學(xué)成分含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種。其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)4. 5%U. 2%、2· 5%以上。更優(yōu)選的，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷總量達(dá)23%以上。實(shí)施例I制備方法取山香圓葉粗粉，用50%乙醇作為提取劑，浸潰24小時(shí)后，以7ml/kg/ 分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材11倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用15%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用6倍量柱體積的50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量53.6%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)15%、5%、3%。實(shí)施例2制備方法取山香圓葉粗粉，用60%乙醇作為提取劑，浸潰48小時(shí)后，以6ml/kg/ 分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材9倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用18%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用5倍量柱體積的55%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量57.3%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)13%、6%、5%。實(shí)施例3制備方法取山香圓葉粗粉，用65%乙醇作為提取劑，浸潰40小時(shí)后，以5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用5倍量柱體積的60%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量63.7%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)10%、8%、7%。實(shí)施例4制備方法取山香圓葉粗粉，用70%乙醇作為提取劑，浸潰72小時(shí)后，以4ml/kg/ 分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材7倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用5倍量柱體積的50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量82.5%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)7 %、3 %、7 %。實(shí)施例5制備方法取山香圓葉粗粉，用75%乙醇作為提取劑，浸潰36小時(shí)后，以2ml/kg/ 分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材6倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用6倍量柱體積的50%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量74.6%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)6 %、6 %、11 %。實(shí)施例6制備方法取山香圓葉粗粉，用80%乙醇作為提取劑，浸潰24小時(shí)后，以3ml/kg/ 分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材5倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用5倍量柱體積的40%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量65. 8.6%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)16%、7%、4%。實(shí)施例7制備方法取山香圓葉粗粉，用85%乙醇作為提取劑，浸潰72小時(shí)后，以lml/kg/ 分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材10倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用17%的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用4倍量柱體積的30%乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量58.7%，含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)18%、6%、8%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)I、提取工藝優(yōu)化研究山香圓葉主要含黃酮類、有機(jī)酸等化合物，黃酮類化合物以乙醇提取效果較佳，因此，我們以乙醇濃度(A)、收集乙醇量(B)、滲漉速度(C)、浸潰時(shí)間(D)四項(xiàng)作為考察因素， 每一因素設(shè)三個(gè)水平，按L9(34)正交表進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(表I、表2)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究，考察指標(biāo)為總黃酮提取率。表I因素水平表
權(quán)利要求
1.山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物用于制備預(yù)防和治療流感并發(fā)癥疾病的藥物的用途，其中所述并發(fā)癥是指腎功能衰竭，所述提取物通過將山香圓醇滲漉提取得到，醇滲漉提取方法是取山香圓葉粗粉，用30 90%乙醇作為提取劑，浸潰12 72小時(shí)后，以I 8ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 9倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用25 90%乙醇洗脫，收集洗脫液， 回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
2.如權(quán)利要求I所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用40 80%乙醇作為提取劑，浸潰24 48小時(shí)后，以I 7ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 9倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用30 85%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用45 75%乙醇作為提取劑，浸潰24 36小時(shí)后，以I 6m/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 8 倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì),再用35 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用50 70%乙醇作為提取劑，浸潰36小時(shí)后，以I 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì),再用40 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
5.如權(quán)利要求3所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用55 70%乙醇作為提取劑，浸潰24小時(shí)后，以2 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材5 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì),再用45 80%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮,干燥,得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
6.如權(quán)利要求I所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用60 70%乙醇作為提取劑，浸潰12小時(shí)后，以3 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4 6倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì),再用50 75%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
7.如權(quán)利要求4所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用65%乙醇作為提取劑，浸潰36小時(shí)后，以4ml/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材7 8倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50 70%乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
8.如權(quán)利要求I所述的用途，具體的提取方法如下取山香圓葉粗粉，用70%乙醇作為提取劑，浸潰72小時(shí)后，以4 5ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20%以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用50% 乙醇，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物。
9.如權(quán)利要求I 8任一項(xiàng)所述的用途,其中總黃酮含量50%以上。
10.如權(quán)利要求I 8任一項(xiàng)所述的用途，其中還包含黃酮類化學(xué)成分及其醫(yī)學(xué)上可以接受的酚酸類成分。
11.如權(quán)利要求10所述的用途，其中黃酮類化學(xué)成分含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷、 槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種。
12.如權(quán)利要求11所述的用途，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷分別達(dá)4.5 %、I.2%,2. 5% 以上。
13.如權(quán)利要求12所述的用途，其中含女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷總量達(dá)23%以上。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，通過將山香圓醇滲漉提取得到，醇滲漉提取方法是取山香圓葉粗粉，用30～90％乙醇作為提取劑，浸漬12～72小時(shí)后，以1～8ml/kg/分鐘的速度進(jìn)行滲漉，收集藥材4～15倍量的滲漉液，回收乙醇，水溶液用非極性大孔吸附樹脂吸附，用20％以下的乙醇洗脫除去雜質(zhì)，再用25～90％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮，干燥，得山香圓葉總黃酮乙醇滲漉提取物，總黃酮含量50％以上，黃酮類主要化學(xué)成分為女貞苷、野漆樹苷、金絲桃苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素及其苷或苷元中的一種或多種；該提取物可作神經(jīng)氨酸酶抑制劑用在預(yù)防和治療流感，制成藥學(xué)上可以接受的劑型。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102579521SQ20121006850
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2010年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月13日
發(fā)明者劉地發(fā), 呂武清, 唐春山, 張華敏, 李志勇, 楊小玲, 王燕平, 程帆, 謝寧 申請(qǐng)人:江西山香藥業(yè)有限公司