專利名稱：紅豆杉活性提取物的制備方法及其抗真菌的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從紅豆杉科(Taxaceae)紅豆杉屬(Tasus)植物中提取紅豆杉活性提取物(精制品)的方法，以及該紅豆杉活性提取物在制備抗真菌藥品、保健食品或日化用品的用途，屬于藥用天然產(chǎn)物領(lǐng)域或保健食品、日化用品制造業(yè)。
背景技術(shù)：
紅豆杉是一種珍貴的藥用植物，為世界珍稀瀕危樹種，國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物，被譽(yù)為“植物黃金”。南方紅豆杉枝葉的次生代謝代謝產(chǎn)物中，其藥用價(jià)值中除含有極少量的紫杉醇成分已在臨床上廣泛用于治療各種惡性腫瘤，被認(rèn)為是最好的抗癌藥之一。紅豆杉枝葉中的非紫杉烷類成分具有抗菌、消炎、止癢、驅(qū)蟲等功效，可用于開發(fā)治療粉刺、皮膚瘙癢等 發(fā)病率高的頑固性皮膚疾病。隨著人工種植面積的不斷擴(kuò)大，其生物量也在大幅增加，為了進(jìn)一步發(fā)掘人工種植紅豆杉枝葉的內(nèi)在功效，合理、可持續(xù)利用資源，提升綜合利用附加值以達(dá)到創(chuàng)品牌、增效益的目的，本發(fā)明通過多種活性篩選實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)紅豆杉活性提取物具有很好的抗菌作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種紅豆杉活性提取物的制備方法及其抗真菌的應(yīng)用，從紅豆杉中提取具有生物活性的提取物，制備的紅豆杉活性提取物成分含量明確。本發(fā)明提供了一種紅豆杉活性提取物抗真菌的應(yīng)用，該紅豆杉活性提取物作為抗菌的藥物、保健品和日化用品的添加劑，并給出了有效劑量，用于抑制真菌時(shí)更為安全、穩(wěn)定。按照本發(fā)明提供的技術(shù)方案，所述紅豆杉活性提取物的制備方法，特征是，包括以下工藝步驟(I)將紅豆杉枝葉切碎置于提取釜中，加入3 10倍紅豆杉枝葉體積的低級(jí)醇進(jìn)行提取，提取溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，過濾得到濾液；反復(fù)提取I 4次，每次提取的溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，每次提取后過濾，合并每次過濾的濾液得到粗提取液；所述低級(jí)醇為Cl C5的醇類，質(zhì)量百分濃度為50 95% ；(2)將粗提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮得到粗浸膏，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為3 5小時(shí)；將粗浸膏溶于30 70°C的熱水中，粗浸膏與熱水的體積比為I : 2 3;再加入石油醚萃取，除去親脂性雜質(zhì)得到浸膏，粗浸膏與石油醚的體積比為I : I 3;(3)向浸膏中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，浸膏與乙酸乙酯的體積比為I : I 3，萃取3 5次，合并乙酸乙酯萃取液；將乙酸乙酯萃取液減壓濃縮得到乙酸乙酯浸膏，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為40 50°C，時(shí)間為I 2小時(shí)；(4)向乙酸乙酯浸膏中加入水中進(jìn)行溶解，乙酸乙酯浸膏與水的比例為15 25mg ImL ;溶解后進(jìn)行抽濾，濾去不溶于水的固體；抽濾后再進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓カ為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為2 3小時(shí)，即得到紅豆杉活性提取物，該紅豆杉活性物的得率為O. 8% 3%，總黃酮類的含量為30 50%。本發(fā)明還保護(hù)ー種紅豆杉活性提取物的制備方法，特征是，包括以下エ藝步驟(I)將紅豆杉枝葉切碎置于提取釜中，加入3 10倍紅豆杉枝葉體積的低級(jí)醇進(jìn)行提取，提取溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，過濾得到濾液；反復(fù)提取I 4次，每次提取的溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小吋，每次提取后過濾，合并每次過濾的濾液得到粗提取液；所述低級(jí)醇為Cl C5的醇類，質(zhì)量百分濃度為50 95% ；(2)將粗提液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓カ為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為3 5小時(shí)；將減壓濃縮后得到的粗提液在大孔吸附樹脂上進(jìn)行吸附，先用水洗去粗提液中的水溶性雜質(zhì)，再用濃度為30% 90%的こ醇依次從低濃度到高濃度進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液；洗脫吋，大孔吸附樹脂的用量是粗提液體積的2 3倍，水的用量是粗提液體積的I 2倍，こ醇的用量是粗提液體積的3 5倍；(3)將洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓カ為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為7 8小時(shí)，得到紅豆杉活性提取物；該紅豆杉活性提取物的得率為O. 2 2%，總黃酮類的含量為70 90%。所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂D101、大孔吸附樹脂SA-3或大孔吸附樹脂AB-8。本發(fā)明還保護(hù)ー種紅豆杉活性提取物的制備方法，特征是，包括以下エ藝步驟(I)將紅豆杉枝葉切碎置于提取釜中，加入3 10倍紅豆杉枝葉體積的低級(jí)醇進(jìn)行提取，提取溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，過濾得到濾液；反復(fù)提取I 4次，每次提取的溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小吋，每次提取后過濾，合并每次過濾的濾液得到粗提取液；所述低級(jí)醇為Cl C5的醇類，質(zhì)量百分濃度為50 95% ；(2)將粗提液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓カ為7 IOkPa,溫度為80 60°C，時(shí)間為3 5小時(shí)；向減壓濃縮后得到的粗提液中加入30°C 70°C的熱水，粗提液與熱水的體積比為I : 2 3，在2000 3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心20 30min，得到沉淀物和上清液；(3)向步驟⑵得到的沉淀物中加入濃度為50 95%的こ醇進(jìn)行回流提取，回流提取的溫度為75 80°C，回流時(shí)間為2 3小時(shí)；將回流提取后得到的液體進(jìn)行過濾；將過濾得到的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓カ為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為I 2小時(shí)；將減壓濃縮后得到的濃縮液進(jìn)行干燥，干燥溫度為70 80°C，干燥時(shí)間為2 3小吋，即得到所述的紅豆杉活性提取物，該紅豆杉活性提取物的得率為
0.3% 4%，總黃酮類的含量為65 75%。本發(fā)明還保護(hù)ー種紅豆杉活性提取物抗真菌的應(yīng)用，特征是所述紅豆杉活性提取物作為抗菌物質(zhì)或消炎物質(zhì)添加到洗化用品中，紅豆杉活性提取物的添加量為0.01 15%。本發(fā)明采用制備藥品、保健品及日化用品的常規(guī)方法，將紅豆杉活性成分制備成各種制劑，例如片劑、噴霧劑、洗手液、沐浴露、浴足劑、洗發(fā)乳及按摩膏等。本發(fā)明制備得到 的紅豆杉活性成分在抑菌方面有顯著的效果。本發(fā)明所述的紅豆杉活性成分的制備方法，方法簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品中有效成分含量較高，質(zhì)量穩(wěn)定、易于控制。


圖I為實(shí)施例6得到的樣品在360nm下的HPLC檢測(cè)圖。圖2為實(shí)施例9得到的樣品在360nm下的HPLC檢測(cè)圖。圖3為實(shí)施例6得到的樣品在272nm下的HPLC檢測(cè)圖。圖4為實(shí)施例9得到的樣品在272nm下的HPLC檢測(cè)圖。
圖5為紅豆杉活性提取物抑制細(xì)菌實(shí)驗(yàn)照片。其中圖5中左側(cè)為紅豆杉活性提取物樣品抑制金黃色葡萄球菌實(shí)驗(yàn)照片；圖5中間為紅豆杉活性提取物樣品抑制沙門氏菌實(shí)驗(yàn)照片；圖5中右側(cè)為紅豆杉活性提取物樣品抑制大腸桿菌實(shí)驗(yàn)照片。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。本發(fā)明得到的紅豆杉活性提取物中總黃酮類的含量為30 90%，總黃酮類中的主要成分為槲皮素(quercetin)、紫杉雙黃酮(sciadopitysin)和銀杏黃酮(Ginkgetin),其中槲皮素(quercetin)含量不低于1%，紫杉雙黃酮(sciadopitysin)含量不低于3%,銀杏黃酮(Ginkgetin)含量不低于5%。槲皮素(quercetin)的結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，紫杉雙黃酮(sciadopitysin)的結(jié)構(gòu)式如式(II)所示，銀杏黃酮(Ginkgetin)的結(jié)構(gòu)式如式(III)所示
權(quán)利要求
1.一種紅豆杉活性提取物的制備方法，其特征是，包括以下工藝步驟 (1)將紅豆杉枝葉切碎置于提取釜中，加入3 10倍紅豆杉枝葉體積的低級(jí)醇進(jìn)行提取，提取溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，過濾得到濾液；反復(fù)提取I 4次，每次提取的溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，每次提取后過濾，合并每次過濾的濾液得到粗提取液；所述低級(jí)醇為Cl C5的醇類，質(zhì)量百分濃度為50 95% ; (2)將粗提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮得到粗浸膏，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為3 5小時(shí)；將粗浸膏溶于30 70°C的熱水中 ，粗浸膏與熱水的體積比為I : 2 3;再加入石油醚萃取，除去親脂性雜質(zhì)得到浸膏，粗浸膏與石油醚的體積比為I : I 3; (3)向浸膏中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，浸膏與乙酸乙酯的體積比為I: I 3，萃取3 5次，合并乙酸乙酯萃取液；將乙酸乙酯萃取液減壓濃縮得到乙酸乙酯浸膏，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為40 50°C，時(shí)間為I 2小時(shí)； (4)向乙酸乙酯浸膏中加入水中進(jìn)行溶解，乙酸乙酯浸膏與水的比例為15 25mg ImL;溶解后進(jìn)行抽濾，濾去不溶于水的固體；抽濾后再進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為2 3小時(shí)，即得到紅豆杉活性物，該紅豆杉活性提取物的得率為0. 8% 3%，總黃酮類的含量為30 50%。
2.—種紅豆杉活性提取物的制備方法，其特征是，包括以下工藝步驟 (1)將紅豆杉枝葉切碎置于提取釜中，加入3 10倍紅豆杉枝葉體積的低級(jí)醇進(jìn)行提取，提取溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，過濾得到濾液；反復(fù)提取I 4次，每次提取的溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，每次提取后過濾，合并每次過濾的濾液得到粗提取液；所述低級(jí)醇為Cl C5的醇類，質(zhì)量百分濃度為50 95% ； (2)將粗提液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為3 5小時(shí)；將減壓濃縮后得到的粗提液在大孔吸附樹脂上進(jìn)行吸附，先用水洗去粗提液中的水溶性雜質(zhì)，再用濃度為30% 90%的乙醇依次從低濃度到高濃度進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液；洗脫時(shí)，大孔吸附樹脂的用量是粗提液體積的2 3倍，水的用量是粗提液體積的I 2倍，乙醇的用量是粗提液體積的3 5倍； (3)將洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為7 8小時(shí)，得到紅豆杉活性提取物；該紅豆杉活性提取物的得率為0.2 2%，總黃酮類的含量為70 90%。
3.如權(quán)利要求2所述的紅豆杉活性提取物的制備方法，其特征是所述大孔吸附樹脂為大孔吸附樹脂D101、大孔吸附樹脂SA-3或大孔吸附樹脂AB-8。
4.一種紅豆杉活性提取物的制備方法，其特征是，包括以下工藝步驟 (1)將紅豆杉枝葉切碎置于提取釜中，加入3 10倍紅豆杉枝葉體積的低級(jí)醇進(jìn)行提取，提取溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，過濾得到濾液；反復(fù)提取I 4次，每次提取的溫度為30 70°C，提取時(shí)間為6 12小時(shí)，每次提取后過濾，合并每次過濾的濾液得到粗提取液；所述低級(jí)醇為Cl C5的醇類，質(zhì)量百分濃度為50 95% ； (2)將粗提液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為80 60°C，時(shí)間為3 5小時(shí)；向減壓濃縮后得到的粗提液中加入30°C 70°C的熱水，粗提液與熱水的體積比為I : 2 3，在2000 3000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心20 30min，得到沉淀物和上清液； (3)向步驟(2)得到的沉淀物中加入濃度為50 95%的乙醇進(jìn)行回流提取，回流提取的溫度為75 80°C，回流時(shí)間為2 3小時(shí)；將回流提取后得到的液體進(jìn)行過濾；將過濾得到的濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，減壓濃縮的壓力為7 IOkPa,溫度為50 60°C，時(shí)間為I 2小時(shí)；將減壓濃縮后得到的濃縮液進(jìn)行干燥，干燥溫度為70 80°C，干燥時(shí)間為2 3小時(shí)，即得到所述的紅豆杉活性提取物，該紅豆杉活性提取物的得率為0. 3% 4%，總黃酮類的含量為65 75%。
5.一種紅豆杉活性提取物抗真菌的應(yīng)用，其特征是所述紅豆杉活性提取物作為抗菌物質(zhì)或消炎物質(zhì)添加到洗化用品中，紅豆杉活性提取物的添加量為0. 01 15%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紅豆杉活性提取物的制備方法及其抗真菌的應(yīng)用，屬于藥用天然產(chǎn)物領(lǐng)域或保健食品、日化用品制造業(yè)。提取物為紅豆杉脂溶性活性成分，制備方法包括50～95％乙醇提取，低極性溶劑萃取，離心，大孔樹脂，得到總黃酮類含量為30～90％的紅豆杉活性提取物。本發(fā)明采用制備藥品、保健品及日化用品的常規(guī)方法，將紅豆杉活性成分制備成各種制劑，例如片劑、噴霧劑、洗手液、沐浴露、浴足劑、洗發(fā)乳及按摩膏等。本發(fā)明制備得到的紅豆杉活性成分在抑菌方面有顯著的效果。本發(fā)明所述的紅豆杉活性成分的制備方法，方法簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)品中有效成分含量較高，質(zhì)量穩(wěn)定、易于控制。
文檔編號(hào)A61K36/13GK102631379SQ20121012506
公開日2012年8月15日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者喻瓊林, 張丹, 王瓊 申請(qǐng)人:江蘇紅豆杉保健品有限公司