專利名稱：一種雞新城疫株病毒及其分離方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及動(dòng)物病毒學(xué)領(lǐng)域，具體提供了一種新的雞新城疫病毒，并且提供了該病毒的分離方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
雞新城疫(NewCastledisease), 由副粘病毒引起的高度接觸性傳染病。又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟。常呈急性敗血雞新城疫雞新城疫癥狀。主要特征是呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊舌L、粘膜和衆(zhòng)膜出血。死亡率尚，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)為害嚴(yán)重。有強(qiáng)毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型(即緩發(fā)型)、中等毒力型(即中發(fā)型)、強(qiáng)毒カ型(即速發(fā)型)3型，現(xiàn)在普遍采用疫苗接種的形式來(lái)預(yù)防該類傳染病，目前，我國(guó)最常用的疫苗有雞新城疫I、II、L(Lasota)系活疫苗和油乳滅活疫苗，可以防治一般性的新城疫病毒感染，但是由于病毒的多祥性，往往新變異病毒的出現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致疫情的大面積發(fā)生，給禽類養(yǎng)殖帶來(lái)沉重的打擊。山東某父母代肉種雞場(chǎng)發(fā)病周齡為31周，正處于產(chǎn)蛋高峰期，產(chǎn)蛋率為80%左右，臨床上突然出現(xiàn)輕微的呼吸道癥狀，首先在ー棟雞舍發(fā)生產(chǎn)蛋下降，8天后產(chǎn)蛋率從80%下降到24%，采食時(shí)間明顯延長(zhǎng)，10-14天后產(chǎn)蛋開(kāi)始緩慢回升。此后，相鄰的幾棟雞舍相繼發(fā)病。剖檢可見(jiàn)喉頭粘液增多，喉頭、氣管出血嚴(yán)重，心、肝、脾、肺正常；個(gè)別腎腫；卵巢以及卵泡病變不明顯；腸道有點(diǎn)狀出血。取發(fā)病前后的雞血清進(jìn)行抗體檢測(cè)，同時(shí)取發(fā)病雞的腦、輸卵管和氣管進(jìn)行病原分離。未發(fā)病前ND的平均抗體水平為28 5，高低相差5 ；發(fā)病初期H9的平均抗體水平為28.7，高低相差4 ;發(fā)病10天后發(fā)病欄ND抗體飆升至212以上，發(fā)病欄中的6個(gè)抽檢樣品中2個(gè)215，2個(gè)217，I個(gè)218，I個(gè)213。而在整個(gè)發(fā)病前后，該雞群的H9抗體水平無(wú)明顯變化，據(jù)此可斷定該雞場(chǎng)為NDV強(qiáng)毒感染；同時(shí)自2001年3月底至5月份，該公司不同種雞場(chǎng)(相隔20公里以上)飼養(yǎng)的三批種雞均連續(xù)在產(chǎn)蛋高峰期發(fā)病，癥狀一致類似的病例在天津、北京、河南、江蘇、河北、山東省不同地區(qū)如東營(yíng)、濟(jì)寧、臨沂、德州、濟(jì)南、棗莊等發(fā)生。可見(jiàn)該致病性毒株與傳統(tǒng)的疫苗毒株(La Sota株及Clone30株)在基因分型及抗原性上均產(chǎn)生了較大的差異，使得傳統(tǒng)疫苗株已不能產(chǎn)生有效的保護(hù)，為了能夠更好的認(rèn)知該毒株及其致病性，必須對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一歩的分離及研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人從上述的發(fā)病雞群中分尚到一株病毒，代號(hào)為SDMOl株并提供了其分離制備方法，發(fā)明人對(duì)該毒株進(jìn)行了生物保藏，保藏編號(hào)CCTCC NO V201109 ;通過(guò)SPF雞胚傳代，進(jìn)行了生物學(xué)特性試驗(yàn)如血凝性、血清中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)和外源病毒檢查，試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該病毒為新城疫病毒。通過(guò)雞胚平均死亡時(shí)間(MDT)U日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)測(cè)定、6周齡雞靜脈內(nèi)接種致病指數(shù)(IVPI)測(cè)定，證實(shí)該新城疫病毒為強(qiáng)毒力毒株。通過(guò)對(duì)分離毒株及標(biāo)準(zhǔn)毒株制備陽(yáng)性血清，進(jìn)行HI交叉中和試驗(yàn)、雞胚中和試驗(yàn)、細(xì)胞中和試驗(yàn)、F和HN基因序列測(cè)序比較及免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)新城疫SDMOl株與傳統(tǒng)的疫苗毒株(La Sota株及Clone30株)在基因分型及抗原性上均產(chǎn)生了較大的差異，SDMOl株對(duì)目前流行株具有較好的保護(hù)效果，是較佳的候選疫苗毒株。發(fā)明人對(duì)該病毒毒株進(jìn)行了生物保藏，于2011年3月保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC NO V201109o在本發(fā)明中，發(fā)明人對(duì)該病毒毒 株進(jìn)行了進(jìn)ー步的研究，發(fā)現(xiàn)其具有如下的特征(I)發(fā)病雞除呼吸道癥狀外，大部分雞均有腺胃出血、十二指腸出血、泄殖腔出血、氣管出血或粘液增多等病變，用10日齡SPF雞胚接種病毒，可見(jiàn)24-72小時(shí)死亡的雞胚均有充血或出血，肝臟有壞死和出血點(diǎn)；(2)病毒分離物對(duì)I %雞紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集；(3) SPF雞回歸試驗(yàn)可出現(xiàn)呼吸道癥狀、腺胃出血、腸道棗核樣出血、盲腸扁桃體出血及泄殖腔出血等新城疫典型病變；(4)外源病毒檢查發(fā)現(xiàn)，病毒分離物免疫SPF雞的血清只呈現(xiàn)ND抗體呈陽(yáng)性反應(yīng)，而其它雞十八種疾病均為抗體陰性反應(yīng)；(5) SDMOl株病毒的F和HN基因均擴(kuò)增出目的片段。經(jīng)雙向測(cè)序、拼接和校正后，F(xiàn)基因開(kāi)放閱讀框架(ORF)全長(zhǎng)1，662bp，編碼553個(gè)氨基酸，基因序列如Seq ID No 1所示，其所編碼的氨基酸序列如Seq ID No 3所示；HN基因ORF全長(zhǎng)1，716bp，編碼571個(gè)氨基酸，基因序列如Seq ID No :2所不,其所編碼的氣基酸序列如Seq ID No:4所不。發(fā)明人還提供了該病毒的分離鑒定方法如下病毒的分尚培養(yǎng)無(wú)菌采集發(fā)病雞的氣管、腦、輸卵管和肝臟，稱重后分別按I : 3加入滅菌生理鹽水，勻漿后經(jīng)超聲波處理，以3000r/min離心15min，取上清加青(鏈)霉素雙抗至2000IU/ml，置4°C冰箱過(guò)夜，無(wú)菌檢驗(yàn)合格后，分別接種5個(gè)10日齡SPF雞胚，每胚0. 2ml。棄去24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，此后每6-8小時(shí)照蛋I次，及時(shí)將死亡雞胚取出，置2-8V冷藏，至96小時(shí)取出所有雞胚，無(wú)菌收取雞胚尿囊液，留樣檢測(cè)后將含有病毒的雞胚尿囊液置_70°C保存?zhèn)溆?。為了?duì)該病毒進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定，發(fā)明人進(jìn)行了如下的鑒定試驗(yàn)方式I.紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)(HA)病毒分離物對(duì)I %雞紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，HA為29，即病毒的凝集效價(jià)為29。2.紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)(HI)病毒分離物與特異性新城疫、禽流感H9和AIV H5亞型、減蛋綜合癥(EDS)等病毒單因子陽(yáng)性血清進(jìn)行HI交叉抑制試驗(yàn)，進(jìn)行初歩鑒別診斷。結(jié)果病毒分離物只與新城疫特異性陽(yáng)性血清出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，證實(shí)該病毒分離物應(yīng)為新城疫病毒。3.動(dòng)物回歸試驗(yàn)取40日齡SPF雞10只，用點(diǎn)眼、滴鼻途徑，每只雞接種SDMOl株雞胚尿囊液0. 2ml,觀察14天。被接種的10只SPF雞，在48小時(shí)左右開(kāi)始出現(xiàn)呼吸道癥狀，96小時(shí)內(nèi)全部死亡，剖檢出現(xiàn)典型的新城疫癥狀氣管出血、十二指腸、泄殖腔粘膜、盲腸扁桃體等出血。4.外源病毒檢查4周齡SPF雞10只，用SDMOl株制備滅活疫苗免疫，免疫I周和2周后加強(qiáng)免疫I次，同時(shí)設(shè)相同日齡SPF雞對(duì)照5只，最后I次免疫3周采血。進(jìn)行有關(guān)疫病的血清抗體檢驗(yàn)，檢驗(yàn)項(xiàng)目有傳染性法氏囊病(IBD)、禽腺病毒I型(Adeno)、減蛋綜合征(EDS)、禽腦脊髄炎(AE)、禽流感(AI)H9亞型、禽流感(AI)H5亞型、禽呼腸孤(REO)、雞痘(FP)、傳染性喉氣管炎(ILT)、雞傳染性支氣管炎(IB)、禽白血病(AL)、雞馬立克氏病(MD)、雞新城疫(ND)、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥(RE)。結(jié)果免疫雞只新城疫抗體陽(yáng)性，其它均為陰性，證實(shí)病毒分離物中只含有新城疫病毒。5.生物學(xué)毒カ檢測(cè)按照OIE方法，利用蝕斑純化后的 病毒分別進(jìn)行雞胚最小致死量(MDT)、I日齡雛雞腦內(nèi)致死指數(shù)(ICPI)和6周齡靜脈接種指數(shù)(IVPI)檢測(cè)，結(jié)果MDT為50. 5小吋，ICPI和IVPI分別為I. 76和2. 41，表明為分離到的SDMOl株為強(qiáng)毒。6. F和HN基因測(cè)序SDMOl株的F和HN基因均擴(kuò)增出目的片段。經(jīng)雙向測(cè)序、拼接和校正后F基因開(kāi)放閱讀框架(ORF)全長(zhǎng)1，662bp，編碼553個(gè)氨基酸，基因序列如Seq ID No : I所示；HN基因ORF全長(zhǎng)l，716bp，編碼571個(gè)氨基酸，基因序列如Seq ID No :2所示。按照傳統(tǒng)方法進(jìn)行F基因分型，SDMOl為基因VII型，而LaSota為基因II型。綜合上述鑒定結(jié)果，發(fā)明人可以確定該新毒株為ー株新城疫病毒的強(qiáng)毒株。發(fā)明人進(jìn)ー步的將該毒株與其它新城疫分離株抗原性比較、雞胚中和交叉抗原同源性比較以及細(xì)胞交叉中和的抗原同源性比較，發(fā)現(xiàn)由其他新城疫分離株獲得的傳統(tǒng)疫苗對(duì)目前流行株的交叉保護(hù)能力較弱，相比之下，SDMOl對(duì)多數(shù)分離株具有較高的交叉保護(hù)能力。發(fā)明人還進(jìn)行了現(xiàn)在常用的LaSota免疫對(duì)本發(fā)明所述的流行株SDMOl進(jìn)行了攻毒保護(hù)效果研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的疫苗毒對(duì)SDMOl存在著抗原性方面的差異，不能提供有效的保護(hù)。因此必須提供新的疫苗株。綜上所述，本發(fā)明提供的雞新城疫病毒(NDV) SDMOl毒株通過(guò)SPF雞胚傳代，進(jìn)行了生物學(xué)特性試驗(yàn)如血凝性、血清中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)和外源病毒檢查，試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該病毒為新城疫病毒。通過(guò)雞胚平均死亡時(shí)間(MDT)U日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)測(cè)定、6周齡雞靜脈內(nèi)接種致病指數(shù)(IVPI)測(cè)定，證實(shí)該新城疫病毒為強(qiáng)毒力毒株。通過(guò)對(duì)分離毒株及標(biāo)準(zhǔn)毒株制備陽(yáng)性血清，進(jìn)行HI交叉中和試驗(yàn)、雞胚中和試驗(yàn)、細(xì)胞中和試驗(yàn)、F和HN基因序列測(cè)序比較及免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)新城疫SDMOl株與傳統(tǒng)的疫苗毒株(La Sota株及Clone30株)在基因分型及抗原性上均產(chǎn)生了較大的差異。發(fā)明人對(duì)本發(fā)明所公開(kāi)的雞新城疫病毒(NDV)毒株SDMOl進(jìn)行了生物保藏，具體保藏信息如下保藏信息保藏時(shí)間2011年3月31日保藏單位名稱中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心CCTCC保藏編號(hào)CCTCCNO V201109保藏單位地址武漢大學(xué)分類命名副粘病毒科SDMOl病毒
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I病毒的分離培養(yǎng)無(wú)菌采集發(fā)病雞的氣管、腦、輸卵管和肝臟，稱重后分別按I : 3的重量比加入滅菌生理鹽水，勻衆(zhòng)后經(jīng)超聲波處理，以3000r/min離心15min,取上清加青(鏈)霉素雙抗至2000IU/ml，置4°C冰箱過(guò)夜，無(wú)菌檢驗(yàn)合格后，分別接種5個(gè)10日齡SPF雞胚，每胚0. 2ml。棄去24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，此后每6-8小時(shí)照蛋I次，及時(shí)將死亡雞胚取出，置2-8V冷藏，至96小時(shí)取出所有雞胚，無(wú)菌收取雞胚尿囊液，留樣檢測(cè)后病毒分離物即可置-70°C保存?zhèn)溆谩?實(shí)施例2病毒的鑒定I.紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)(HA)病毒分離物對(duì)I %雞紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)，HA為29，即病毒的凝集效價(jià)為29。2.紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)(HI)病毒的凝集紅細(xì)胞的能力可被相應(yīng)的特異性抗體所抑制，即紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)(HI)，具有特異性。病毒分離物與特異性新城疫、禽流感H9和AIV H5亞型、減蛋綜合癥(EDS)等病毒單因子陽(yáng)性血清進(jìn)行HI交叉抑制試驗(yàn)，進(jìn)行初歩鑒別診斷。具體方法根據(jù)HA試驗(yàn)結(jié)果，確定病毒的血凝價(jià)，配制出4個(gè)血凝単位的病毒液；在96孔微量反應(yīng)板上進(jìn)行，用固定病毒稀釋血清的方法，自第I孔至第11孔各加25微升生理鹽水；第I孔加相應(yīng)血清25微升，吹吸混合均勻，吸25微升至第2孔，依此倍比稀釋至第10孔，吸棄25微升；第12孔加新城疫陽(yáng)性血清25微升，作為血清對(duì)照；自第I孔至12孔各加25微升4個(gè)血凝單位的新城疫病毒液，其中第11孔為4單位新城疫病毒液對(duì)照，振蕩混合均勻，置室溫中作用IOmin ;自第I孔至12孔各加1%雞紅細(xì)胞懸液25微升，振蕩混合均勻，室溫下靜置后觀察結(jié)果。待病毒對(duì)照孔(第11孔)出現(xiàn)紅細(xì)胞100%凝集(++++)，而血清對(duì)照孔(第12孔)為完全不凝集(_)吋，即可進(jìn)行結(jié)果觀察。以100%抑制凝集(完全不凝集)的被檢血清最大稀釋度為該血清的血凝抑制效價(jià)，即HI效價(jià)。凡被已知新城疫陽(yáng)性血清抑制血凝者，該病毒為新城疫病毒。結(jié)果病毒分離物只與新城疫特異性陽(yáng)性血清出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，證實(shí)該病毒分離物應(yīng)為新城疫病毒。3. 3 動(dòng)物回歸試驗(yàn)取40日齡SPF雞10只，用點(diǎn)眼、滴鼻途徑，每只雞接種SDMOl株雞胚尿囊液0. 2ml,觀察14天。被接種的10只SPF雞，在48小時(shí)左右開(kāi)始出現(xiàn)呼吸道癥狀，96小時(shí)內(nèi)全部死亡，剖檢出現(xiàn)典型的新城疫癥狀氣管出血、十二指腸、泄殖腔粘膜、盲腸扁桃體等出血。4.外源病毒檢查4周齡SPF雞10只，用SDMOl株制備滅活疫苗免疫，免疫I周和2周后加強(qiáng)免疫I次，同時(shí)設(shè)相同日齡SPF雞對(duì)照5只，最后I次免疫3周采血。進(jìn)行有關(guān)疫病的血清抗體檢驗(yàn)，檢驗(yàn)項(xiàng)目有傳染性法氏囊病(IBD)、禽腺病毒I型(Adeno)、減蛋綜合征(EDS)、禽腦脊髄炎(AE)、禽流感(AI)H9亞型、禽流感(AI)H5亞型、禽呼腸孤(REO)、雞痘(FP)、傳染性喉氣管炎(ILT)、雞傳染性支氣管炎(IB)、禽白血病(AL)、雞馬立克氏病(MD)、雞新城疫(ND)、網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥(RE)。結(jié)果免疫雞只新城疫抗體陽(yáng)性，其它均為陰性，證實(shí)病毒分離物中只含有新城疫病毒。
5.生物學(xué)毒カ檢測(cè)按照OIE方法，利用細(xì)胞蝕斑純化后的病毒分別進(jìn)行雞胚最小致死量(MDT)、1日齡雛雞腦內(nèi)致死指數(shù)(ICPI)和6周齡靜脈接種指數(shù)(IVPI)檢測(cè)，這是評(píng)價(jià)NDV毒力致病性的3個(gè)指標(biāo)MDT —般小于60小時(shí)的為速發(fā)型，在60 90小時(shí)為中發(fā)型，大于90小時(shí)的為緩發(fā)型；ICPI —般大于I. 6為速發(fā)型，I. 2 I. 6為中發(fā)型，小于I. 2為緩發(fā)型；IVPI —般2. 0以上為速發(fā)型，2. 0以下為速發(fā)型或緩發(fā)型。本病毒檢測(cè)結(jié)果=MDT為50. 5小時(shí)， ICPI和IVPI分別為I. 76和2. 41，表明為分離到的SDMOl株為強(qiáng)毒。6. F和HN基因測(cè)序及鑒定SDMOl株的F和HN基因均擴(kuò)增出目的片段。經(jīng)雙向測(cè)序、拼接和校正后F基因開(kāi)放閱讀框架(ORF)全長(zhǎng)1，662bp，編碼553個(gè)氨基酸，基因序列如Seq ID No : I所示；HN基因ORF全長(zhǎng)l，716bp，編碼571個(gè)氨基酸，基因序列如Seq ID No :2所示。按照傳統(tǒng)方法進(jìn)行F基因分型，SDMOl為基因VII型，而LaSota為基因II型。實(shí)施例3 SDMOl株與其它新城疫分離株抗原性比較I. HI同源性比較單因子陽(yáng)性血清制備，按照國(guó)家SPF雞微生物監(jiān)測(cè)方法，將制備的20株NDV抗原和陽(yáng)性血清分別進(jìn)行交叉HI實(shí)驗(yàn)，取5次檢測(cè)值的平均。同時(shí)設(shè)SPF雞陰性血清、新城疫陽(yáng)性血清對(duì)照和病毒對(duì)照。HI抗原同源性的計(jì)算按免疫學(xué)方法進(jìn)行R=V^" xiG()%，rl=異源血清效價(jià)I/同源血清效價(jià)1，r2 =異源血清效價(jià)2/同源血清效價(jià)2，結(jié)果如表I。La Sota與Clone30和F48E9的抗原同源性最高，分別為0. 97和0. 98，與17個(gè)分離株的抗原同源性為0. 70 0. 97，大多數(shù)介于0. 85 0. 90。其中，23. 5%的NDV野毒與F48E9和La Sota間的同源性在0. 9以上，但52. 9%的NDV野毒與La Sota和F48E9的同源性已降至0. 70 0. 85，而且，即使同屬于基因VII型的不同毒株間抗原的同源性也變化在 0. 79-1. 0 間。表I. NDV不同毒株間HI同源性La Clone F^8K9 UTizO.S Tj03 .TSOI JS02 SDDOI SDMOI YG SCTfl^ SQD04 SQ7.04 QF.01 SSXO^ SKYO.^ SR7.03 T.T05 SPYO.^ SWS La I .00
Clone 0.97 1.00 F48E9 0.98 0.96 1.00
Whz03 0.83 0.80 0.731.00 Tj03 0.97 0.94 0.96 0.91 1.00 JSOi 0.88 0.85 0.86 0.90 0.95 LGO JS02 0.86 0.84 0.80 0.91 0.88 0.89 1.00 SDDOi 0.85 0.80 0.78 0.88 0.93 0.87 0.91 LOG SDMOi 0.89 0.86 0.88 0.93 0.93 0.96 0.88 0.94 1.00 YG 0.86 0.85 0.90 0.89 0.92 1.02 0.98 0.95 0.91 LOG
SCL03 0.95 0.89 0.850.87 0.92 0.89 0.88 0.84 0.87 0.90 1.00
SQD04 0.93 0.93 0.850.84 0.92 0.87 0.88 0.93 0.88 0.90 0.89 LOO
SQZ04 0.83 0.79 0.820.96 1.02 0.89 0.96 1.00 0.94 0.89 0.84 0.94 LOG
QEOi 0.85 0.89 0.820.87 0.92 0.96 0.93 0.97 0.92 1.03 0.96 0.91 0.96 1.00
ssxo3 0.9フ 0.95 0.910.88 0.95 0.95 0.87 0.89 1.07 0.99 0.91 0.97 1.01 0.94 1.00
SKY03 0.86 0.86 0.780.96 0.85 0.94 0.93 0.91 0.84 0.98 0.89 0.97 0.98 0.85 0.92 1.00
SRZ03 0.81 0.78 0.700.88 0.88 0.99 1.01 1.00 0.92 0.85 0.85 0.96 0.98 0.85 0.82 0.80 1.00
TJ05 0.87 0.85 0.810.93 0.88 0.93 0.90 0.91 0.86 0.98 0.85 0.98 1.00 0.86 0.90 0.97 0.85 1.00
SPY03 0.92 0.91 0.860.79 0.96 0.92 0.91 0.86 0.92 0.95 0.95 0.89 0.87 0.92 0.96 0.84 0.88 0.82 1.00
swsos 0.82 0.81 0.770.88 0.94 0.91 0.95 0.96 0.95 0.89 0.86 0.88 1.00 0.95 0.86 0.8フ 0.98 0.86 0.92 1.00

2.雞胚中和交叉抗原同源性比較分別測(cè)定NDV毒株雞胚半數(shù)感染量(EID5tl)，采用固定病毒稀釋血清法，能使半數(shù)
雞胚保護(hù)的最高血清稀釋度即為該血清的中和效價(jià)，HI抗原同源性的計(jì)算按免疫學(xué)方法進(jìn)
行R=V^" Xi00 %，巧=異源血清效價(jià)ノ同源血清效價(jià)17 r2 =異源血清效價(jià)J同源血
清效價(jià)2，傳統(tǒng)的La Sota、Clone30和傳統(tǒng)的F48E9強(qiáng)毒之間相關(guān)程度較高(大于0. 6)，顯示
出較高的交叉保護(hù)能力，而與分離株相關(guān)程度不一，普偏低于0.5。其中，La
的中和同源性在0. 77，15%的NDV強(qiáng)毒與F48E9和La Sota間的同源性在0. 5以上，85%的
NDV強(qiáng)毒與La Sota和F48E9的同源性已降至0. 15 0. 5。表2NDV不同毒株間雞胚中和 交叉抗原同源性

權(quán)利要求
1.一種雞新城疫病毒株SDMOl，其保藏編號(hào)為CCTCC N0:V201109。
2.如權(quán)利要求I所述的雞新城疫病毒株SDM01，其特征在于其分離制備方法如下 無(wú)菌采集發(fā)病雞的氣管、腦、輸卵管和肝臟，稱重后分別按I : 3的重量比加入滅菌生理鹽水，勻漿后經(jīng)超聲波處理，以3000r/min離心15min，取上清加青(鏈)霉素雙抗至2000IU/ml，置4°C冰箱過(guò)夜，無(wú)菌檢驗(yàn)合格后，分別接種5個(gè)10日齡SPF雞胚，每胚0. 2ml。棄去24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，此后每6-8小時(shí)照蛋I次，及時(shí)將死亡雞胚取出，置2-8V冷藏，至96小時(shí)取出所有雞胚，無(wú)菌收取雞胚尿囊液，留樣檢測(cè)后病毒分離物即可置-70°C保存?zhèn)溆谩?br> 3.如權(quán)利要求I所述的雞新城疫病毒株SDMOl，其在作為疫苗株的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及動(dòng)物病毒學(xué)領(lǐng)域，本發(fā)明提供了一種雞新城疫株病毒及其分離方法，代號(hào)為SDM01株并提供了其分離制備方法，發(fā)明人對(duì)該毒株進(jìn)行了生物保藏，保藏編號(hào)CCTCC NOV201109；通過(guò)SPF雞胚傳代，進(jìn)行了生物學(xué)特性試驗(yàn)如血凝性、血清中和試驗(yàn)、動(dòng)物回歸試驗(yàn)和外源病毒檢查，試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)該病毒為新城疫病毒。通過(guò)雞胚平均死亡時(shí)間(MDT)、1日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)(ICPI)測(cè)定、6周齡雞靜脈內(nèi)接種致病指數(shù)(IVPI)測(cè)定，證實(shí)該新城疫病毒為強(qiáng)毒力毒株。通過(guò)對(duì)分離毒株及標(biāo)準(zhǔn)毒株制備陽(yáng)性血清，進(jìn)行HI交叉中和試驗(yàn)、雞胚中和試驗(yàn)、細(xì)胞中和試驗(yàn)、F和HN基因序列測(cè)序比較及免疫攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)新城疫SDM01株與傳統(tǒng)的疫苗毒株(La Sota株及Clone30株)在基因分型及抗原性上均產(chǎn)生了較大的差異。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102766603SQ20121012601
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月26日
發(fā)明者徐懷英, 王友令, 秦卓明 申請(qǐng)人:徐懷英, 秦卓明