專利名稱：胃蛋白酶增強(qiáng)劑、組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種胃蛋白酶組合物，及其在胃藥和飼料中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
酸性蛋白酶是ー種適合在酸性條件下水解蛋白質(zhì)為小的肽片段和氨基酸的酶類，一般包括胃蛋白酶、凝乳酶和某些微生物蛋白酶。這ー類蛋白酶中研究最徹底的是胃蛋白酶。胃蛋白酶(Pepsin)是ー種消化性蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主細(xì)胞(gastric chiefcell)所分泌，功能是將食物中的蛋白質(zhì)分解為小的肽片段。
胃蛋白酶臨床上用于因食用蛋白性食物過多而引起的消化不良，病后恢復(fù)期消化功能減退，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎、胃癌及惡性貧血而導(dǎo)致的胃蛋白酶缺乏。酸性蛋白酶分解蛋白質(zhì)的條件與動物體內(nèi)消化系統(tǒng)的環(huán)境相似，酸性蛋白酶作為飼料添加劑可提高動物對蛋白質(zhì)的消化吸收效率，或與稀鹽酸同時用于幼畜消化不良性腹瀉和慢性萎縮性胃炎。在我國胃病患者的比例相當(dāng)高，約有85%的人不同程度的患有胃腸道疾病，特別是老年人，常常會有腸胃不好，消化不良，我國毎年因胃腸道疾病病變死亡的人數(shù)高達(dá)數(shù)百萬，且藥物的副作用給患者帶來極大的精神痛苦，經(jīng)濟(jì)上的損失也是巨大的。隨著生活節(jié)奏的加快，不良的飲食習(xí)慣，工作與生活的壓カ常會引起功能性消化不良，有調(diào)查曾指出，每個人一生約有20%的機(jī)會患上功能性消化不良。在胃病的治療中，胃蛋白酶作為重要的輔助性治療藥物發(fā)揮著重要作用，因此研究出一種高效的胃蛋白酶制劑成為亟待解決的問題。在酶催化反應(yīng)介質(zhì)系統(tǒng)中引入某種物質(zhì)，以改變酶分子所處的微環(huán)境條件，可提高酶的催化性能，包括活性、選擇性和穩(wěn)定性。已有報道證實表面活性劑的添加可提高脂肪酶催化活性。本發(fā)明涉及到的低聚木糖(xylooligosaccharide, X0S),又稱為木寡糖,是由2-7個木糖分子以β -I, 4糖苷鍵結(jié)合而成的功能性聚合糖，其甜度為蔗糖的50%，性質(zhì)穩(wěn)定，不能被唾液、胃液、胰液和小腸液消化，不影響血糖濃度，不增加胰島素水平，同時具有良好的酸、熱穩(wěn)定性，難發(fā)酵。低聚木糖作為ー種新資源食品，廣泛應(yīng)用于食品和保健品中。低聚木糖作為增強(qiáng)劑增加胃蛋白酶催化活性還未見報道，低聚木糖作為增強(qiáng)劑同時具有安全、環(huán)保等優(yōu)點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高效的胃蛋白酶制劑，有效緩解各種原因引起的消化不良癥狀，對各種胃部疾病進(jìn)行輔助性治療，且無毒副作用。為此，本發(fā)明提供了ー種胃蛋白酶增強(qiáng)劑，該增強(qiáng)劑可以提高胃蛋白酶的催化活性，所述胃蛋白酶增強(qiáng)劑的成分為低聚木糖。所述增強(qiáng)劑與胃蛋白酶組成的胃蛋白酶組合物比単獨的胃蛋白酶具有更大的蛋白水解活性。優(yōu)選地，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性⑶比例為O.003:1200-10:1200。優(yōu)選地，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性⑶比例為O.005:1200-10:1200。優(yōu)選地，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性⑶比例為O.02:1200-10:1200ο優(yōu)選地，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性⑶比例為O.3:1200-10:1200。 優(yōu)選地，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性⑶比例為O.4:1200-10:1200。更優(yōu)選地，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性⑶比例為O.003:1200,O.005:1200, O. 02:1200, O. 3:1200, O. 4:1200 或 10:1200。本發(fā)明一方面提供ー種胃病輔助性治療藥物，所述藥物包括所述胃蛋白酶組合物。本發(fā)明另在一方面提供ー種動物飼料，所述動物飼料包括所述胃蛋白酶組合物。相較于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果在于其一，胃蛋白酶增強(qiáng)劑大大提高了胃蛋白酶的催化活性，胃蛋白酶組合物水解蛋白質(zhì)的活性高于單獨使用胃蛋白酶水解蛋白質(zhì)的活性。其ニ，利用其高效胃蛋白酶活性，所述胃蛋白酶組合物可應(yīng)用于胃病輔助性治療藥物和動物飼料中。其三，所述胃蛋白酶增強(qiáng)劑成分低聚木糖的制備原料來源廣泛，可降低生產(chǎn)成本，同時，具有安全、環(huán)保等多種優(yōu)點。此外，所述胃蛋白酶組合物除了利用胃蛋白酶水解活性之外，還可充分利用低聚木糖的多重功能，如降血脂、降膽固醇、降血壓、雙歧桿菌増殖效果等，使得相應(yīng)產(chǎn)品的功能進(jìn)ー步擴(kuò)展，并拓寬應(yīng)用領(lǐng)域。


圖I是本發(fā)明不同比例低聚木糖與胃蛋白酶組合物酶活性圖。圖2是本發(fā)明不同比例低聚木糖對胃蛋白酶的活性增強(qiáng)作用圖。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一歩詳細(xì)說明。本發(fā)明中蛋白酶活性的測定采用《QB/T 1803-1993エ業(yè)酶制劑通用試驗方法》中蛋白酶活性測定的方法。胃蛋白酶活性增強(qiáng)率按照下式計算低聚木糖對胃蛋白酶活性的增強(qiáng)作用=(低聚木糖與胃蛋白酶組合物的活性-単獨胃蛋白酶活性)/単獨胃蛋白酶活性 X I00%O實施例實驗材料與試劑 I福林試劑
于2000mL磨ロ回流裝置中加入鎢酸鈉(Na2W04-2H20) IOOg,鑰酸鈉(Na2Mo04_2H20) 25g、水700 mL、85%磷酸50mL、濃鹽酸lOOmL，小火沸騰回流10h，取下回流冷卻器，在通風(fēng)櫥中加入硫酸鋰(Li2SO4) 50 g、水50 mL和數(shù)滴濃溴水(99%)，再微沸15min，以除去多余的溴，冷卻，加水定容至IOOOmL,混勻，過濾。貯存于棕色瓶內(nèi)。使用溶液一份福林試劑與ニ份水混合，搖勻。
2 碳酸鈉溶液c (Na2CO3) =0. 4mol/L3三氯こ酸c=0. 4mol/L
4氫氧化鈉溶液c (NaOH)=O. 5mol/L 5 鹽酸溶液c (HCI) =lmol/L 及 0. lmol/L 6緩沖溶液
乳酸緩沖液(PH= 3.0)，適用于酸性蛋白酶 甲液稱取乳酸(80%-90%) 10. 6g，加水溶解并定容至1000mL。乙液:稱取乳酸鈉(70%) 16g，加水溶解并定容至1000mL。使用溶液取甲液8mL，加こ液lmL，棍勻，稀釋一倍，即成0. 05mol/L乳酸緩沖溶液。用PH計校正。7胃蛋白酶購自上海源葉生物科技有限公司(約1200U/g)，使用時稀釋500倍。8酪素購自上海源葉生物科技有限公司，使用時配成10g/L。實驗方法 對照實驗
(1).在試劑瓶中加入ImL的胃蛋白酶及ImL的各種濃度的低聚木糖溶液(包括濃度為零，即不含低聚木糖)于40°C ±0. 2°C環(huán)境中靜置2min ；
(2).再在上述試劑瓶中加入2.OOmL的三氯こ酸，搖勻，于40°C ±0. 2°C環(huán)境中靜置IOmin ；
(3).再在上述試劑瓶中加入I.OOmL酪素，混合均勻；
(4).將上述試劑瓶取出靜置IOmin后過濾；
(5).用量杯取I.OOmL濾液，再在量杯中加入5. OOmL碳酸鈉溶液；
(6).在上述量杯中加入I.OOmL福林試劑使用溶液，混合均勻；
(7).將步驟(6)中最終的溶液置于40°C±0. 2°C，顯色20 min，并于680nm波長，用IOmm比色皿，選取低聚木糖濃度為零的樣品管設(shè)背景管，并調(diào)零。樣品測試
(1).在試劑瓶中加入ImL的胃蛋白酶及ImL的各種濃度的低聚木糖溶液(包括濃度為零，即不含低聚木糖)于40°C ±0. 2°C環(huán)境中靜置2min ；
(2).再在上述試劑瓶中加入1.00mL酪素，混合均勻，于40°C ±0.2°C環(huán)境中靜置IOmin ；
(3).再在上述試劑瓶中加入2.00 mL的三氯こ酸，搖勻；(4).將上述試劑瓶取出靜置10min后過濾；
(5).用量杯取I.OOmL濾液，再在量杯中加入5. OOmL碳酸鈉溶液；
(6).再在上述量杯中加入I.OOmL福林試劑使用溶液，混合均勻；
(7).將步驟(6)中最終的溶液置于40°C±0. 2°C，顯色20 min，并于680nm波長，用IOmm比色皿測試其吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線
配置不同濃度的L-酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入福林試劑顯色后于波長680nm下分別測試其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得出K=98. 2895±0. 0013。實驗所述濃度的低聚木糖在680nm波長處無明顯吸光度。X = 5/10 XAXKXn
X——樣品的酶活力，u/g(u/mL)
A-----樣品吸光度；
K------吸光常數(shù)；
5------反應(yīng)試劑的總體積，mL
10----反應(yīng)時間IOmin,以I min計;
η——稀釋倍數(shù)。
加入不加低聚木糖時，按照上述試驗所述的實驗方法，即胃蛋白酶活性不受低聚木糖影響時，胃蛋白酶的活性為1042U/g。
權(quán)利要求
1.一種胃蛋白酶活性增強(qiáng)劑，其特征在于，所述胃蛋白酶活性增強(qiáng)劑的成分為低聚木糖。
2.—種胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述胃蛋白酶組合物包括權(quán)利要求I所述的低聚木糖和胃蛋白酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性(U)比例為0.003:1200-10:1200。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性(U)比例為0.005:1200-10:1200。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性(U)比例為0.02:1200-10:1200。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性(U)比例等于0.3:1200-10:1200。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性(U)比例等于0.4:1200-10:1200。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胃蛋白酶組合物，其特征在于，所述組合物中低聚木糖質(zhì)量(g)與胃蛋白酶活性(U)比例為 0.003:1200，0.005:1200，0.02:1200，0.3:1200,0.4:1200或 10:1200。
9.一種具有助消化作用的胃藥，其特征在于，所述胃藥包括權(quán)利要求2至8任一項所述的胃蛋白酶組合物。
10.一種具有助消化作用的飼料，其特征在于，所述飼料包括權(quán)利要求2至8任一項所述的胃蛋白酶組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種胃蛋白酶活性增強(qiáng)劑，用于提高胃蛋白酶催化活性，所述胃蛋白酶增強(qiáng)劑的成分為低聚木糖。本發(fā)明還提供了一種胃蛋白酶組合物，所所述胃蛋白酶組合物包括低聚木糖和胃蛋白酶，所述胃蛋白酶組合物酶催化活性顯著提高，所述胃蛋白酶組合物中低聚木糖(g)和胃蛋白酶(U)的比例優(yōu)選為0.003:1200-10:1200。本發(fā)明還提供具有助消化作用的胃藥和飼料，所述胃藥和飼料中均包括所述胃蛋白酶組合物。
文檔編號A61P1/04GK102660529SQ201210151660
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月16日
發(fā)明者周虹, 李旭, 陳功 申請人:蘇州先闊生物科技有限公司