專利名稱：一種赤芍提取物及其制備和應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種赤芍提取物，具體地，是以中藥赤芍為原料的提取物及其制備方法和制備治療慢性阻塞性肺疾病藥劑的用途；屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructive pulmonary disease, COPD)是具有氣 流受限不完全可逆特征并呈進(jìn)行性發(fā)展的肺部慢性炎癥性疾病。COPD由于患病人數(shù)多，死亡率高，社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)重，已成為ー個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。在美國，CCffD居當(dāng)前慢性疾病死亡原因的第 4 位(Saetta M, Turato G, Maestrelli P, et al. Am J Respir Crit CareMed, 2001, 163(6) :1304.)。近年來COPD在我國也日益引起重視，已成為嚴(yán)重危害我國人民健康的重要慢性呼吸系統(tǒng)疾病。COPD涉及小氣道和肺實(shí)質(zhì)的慢性炎癥，但是現(xiàn)在還沒有特效藥物能遏制COPD病情的進(jìn)行性進(jìn)展，目前臨床上常把治療哮喘的藥物用于治療C0PD，療效不盡理想。隨著對COPD發(fā)病機(jī)制的研究，中醫(yī)藥治療慢性阻塞性肺疾病臨床研究也不斷深入，很多傳統(tǒng)中藥發(fā)揮著多靶點(diǎn)多途徑的藥理作用，已經(jīng)表現(xiàn)出良好的治療效果。文獻(xiàn)表明，由黃芪、赤芍、補(bǔ)骨脂三味藥組成的補(bǔ)肺活血膠囊具有改善COPD和哮喘癥狀的療效(郭歡，張海文.中國全科醫(yī)學(xué)，2007，10(8) 667.李彬，蘇輪.實(shí)用心腦肺血管病雜志，2006, 14(9) :728)。其中，赤芍是毛茛科植物芍藥或川赤芍的干燥根，屬于常用中藥，具有清熱涼血，散瘀止痛之功效，以往研究證明赤芍還具有抑制血小板和紅細(xì)胞聚集、抗血栓、抗動脈粥樣硬化、保護(hù)心臟和肝臟、抗腫瘤等多種藥理作用(阮金蘭等.中國藥理學(xué)通報(bào)，2003，19 (9):965 970.)。對于赤芍活血化瘀有效成分的研究，主要針對水溶性成分進(jìn)行研究，其中以單萜及單萜甙類化合物成分為主要的研究對象。因此，針對赤芍進(jìn)行試驗(yàn)，可進(jìn)ー步發(fā)掘赤芍有效成分用于治療慢性阻塞性肺疾病。目前，藥動學(xué)用于中藥研究可為中藥制劑生產(chǎn)エ藝的設(shè)計(jì)、內(nèi)在質(zhì)量的評價(jià)與監(jiān)控提供有效手段和方法。ロ服給藥是中藥治療的主要方式，影響ロ服生物利用度的因素很多，研究藥物的吸收對于指導(dǎo)藥物給藥系統(tǒng)研究有重要意義。評價(jià)藥物吸收的模型有很多種，有離體法和在體法，目前較多采用大鼠在體單向腸灌流模型，這種模型以較低的流速某一腸道進(jìn)行單向灌流，根據(jù)進(jìn)出口處灌流液中的藥物濃度差考察藥物在該腸段的吸收，其實(shí)驗(yàn)條件與ロ服給藥后藥物接觸的腸道環(huán)境較接近，吸收速率穩(wěn)定，與人體有良好相關(guān)性(譚曉斌等.中成藥，2007，29 (11):1665-1668)。而從藥物動力學(xué)研究角度，采用相應(yīng)分析手段對大鼠灌胃給藥后收集的血液、尿液等生物樣品進(jìn)行分析，結(jié)合大鼠在體腸灌流實(shí)驗(yàn)技術(shù)，找出中藥進(jìn)入體內(nèi)的成分，篩選出能反映赤芍物質(zhì)作用基礎(chǔ)的指標(biāo)成分；可更好的控制該藥物的質(zhì)量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質(zhì)量可控、物質(zhì)基礎(chǔ)明確的赤芍藥物，以順應(yīng)中藥現(xiàn)代化的要求。目前尚無針對本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)的赤芍提取物及其制備和應(yīng)用方法的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種赤芍提取物及其制備和應(yīng)用方法。
ー種赤芍提取物，是以赤芍為原料提取得到的，所述的赤芍提取物含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為299Γ42. 05%,O. 80% 15%。所述的赤茍來源于毛茛科植物茍藥(Paeonia lactiflora Pall)或川赤茍(Paeonia veitchii Lynch)的干燥根。所述的赤芍提取物的水分不超過3%、熾灼殘?jiān)坎怀^O. 6%、重金屬含量不超過IOppm0所述的赤芍提取物用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥劑。包括以赤芍提取物為主要有效成分與多種醫(yī)用輔料(賦型劑，稀釋劑，香味劑、甜味劑、潤滑劑等)配合，制成多種劑型的藥物使用，如凍干粉針，注射液，大輸液，片劑，膠囊，顆粒劑以及ロ服液等。ー種赤芍提取物的制備方法，包括如下步驟取赤芍飲片，先用其8 12倍體積量60%こ醇，再用其6 10倍體積量60%こ醇各浸泡提取I次，毎次lhl. 5h，濾過，合并提取液，減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調(diào)節(jié)其濃度不超過O. 3g/mL,即每ImL藥液中含生藥赤芍量不超過O. 3g，濾過，然后通過已預(yù)處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱，樹脂柱徑高比I : 4-1 12，流速l-3ml/min，上樣量不超過O. 6g生藥· πιΓ1樹脂，以f 2倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用4 8倍柱體積的50%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)干燥，得赤芍提取物。優(yōu)選包括如下步驟取赤芍飲片，先用其10倍體積量60%こ醇，再用其8倍體積量60%こ醇各提取I次，毎次I. 5h，濾過，合并提取液，減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調(diào)節(jié)其濃度為O. 3g/mL,即每ImL藥液中含生藥赤芍量為O. 3g，濾過，通過已預(yù)處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱；樹脂柱徑高比I : 8，吸附流速4倍柱體積/h，上樣量2倍柱體積，以2倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用6倍柱體積的50%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，60°C繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)60°C干燥，得赤芍提取物。所述的赤芍提取物含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為299Γ42. 05%、
O.80%"15%ο所述的赤茍來源于毛茛科植物茍藥(Paeonia lactiflora Pall)或川赤茍(Paeonia veitchii Lynch)的干燥根。所述的赤芍提取物的水分不超過3%、熾灼殘?jiān)坎怀^0. 6%、重金屬含量不超過IOppm0本發(fā)明提供了ー種赤芍提取物，以中藥材赤芍為原料提取而成。本發(fā)明采用大鼠在體腸單向灌流法，比較藥材灌胃液灌流前后經(jīng)小腸吸收減少的成分是否與灌胃給藥吸收入血成分一致；灌流結(jié)束后采血，檢測血漿樣品，進(jìn)ー步確定赤芍藥材吸收入血成分有芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷，并以這些成分及其含量作為標(biāo)準(zhǔn)；根據(jù)其優(yōu)化提取エ藝和富集純化工藝，最終獲得精制而成的本發(fā)明提取物，同時(shí)水分含量、熾灼殘?jiān)?、重金屬含量也作為?biāo)準(zhǔn)， 在優(yōu)化提取エ藝和富集純化工藝時(shí)考慮。本發(fā)明可更好的控制該藥物的質(zhì)量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質(zhì)量可控、物質(zhì)基礎(chǔ)明確的赤芍藥物，以順應(yīng)中藥現(xiàn)代化的要求。


圖I是赤芍灌胃液HPLC指紋圖譜；
圖2是大鼠灌胃赤芍后血漿HPLC典型圖譜(A空白血漿，B含藥血漿)；圖3是大鼠灌胃赤芍后尿液HPLC典型圖譜(A空白尿樣，B含藥尿樣)；圖4是大鼠灌胃赤芍后糞樣HPLC典型圖譜(A空白糞樣，B含藥糞樣)。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)ー步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :赤芍藥材中特征成分為主的色譜指紋圖譜的建立以及赤芍入血成分的確定方法I. I材料和儀器I. I. I藥品和試劑赤芍飲片購自湖南省九旺醫(yī)藥有限公司，經(jīng)鑒定為川赤芍的干燥根部。芍藥內(nèi)酯苷對照品購自上海尚宜科技有限公司，芍藥苷和萘普生對照品購自中國藥品生物制品檢定所，沒食子酸、苯甲酸、磷酸和鹽酸為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。こ腈為色譜純(Burdick& Jackson),水為純凈水。1.1.2 儀器Agilent 1200高效液相色譜儀-DAD，LD 3D系統(tǒng)化學(xué)エ作站(安捷倫科技)；RE — 5298A系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；TGL16M型臺式高速冷凍離心機(jī)(長沙英泰儀器有限公司)；XW — 80A微型漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠有限公司)；shangping-JA2003N型千分之ー電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；Sartoriuos-BS224s萬分之ー電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；3700M071型代謝籠(Tecniplast) ；MTN-2800D氮?dú)獯蹈裳b置；艾柯超純水機(jī)(成都艾柯)。I. I. 3實(shí)驗(yàn)動物SD大鼠(清潔級)，雄性，體重180_220g，購于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部。
I. 2給藥方法和樣品收集I. 2. I赤芍灌胃液的制備參照文獻(xiàn)(中國專利申請?zhí)?2135035. 3)，取赤芍飲片適量，加入10倍量水，加熱回流lh，過濾，再加入8倍量純水，繼續(xù)加熱回流lh，濾液合并、濃縮至一定密度，再加入こ醇至含醇量約為60%，靜置24h，過濾，揮去こ醇，濃縮得赤芍稠膏。稠膏用水溶解得赤芍灌胃液，每毫升赤芍灌胃液約相當(dāng)于I. 2克赤芍藥材。I. 2. 2單次給藥取9只大鼠，實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食12h，先于眼眶靜脈叢處采空白血，每只統(tǒng)ー灌胃
2.6ml赤芍灌胃液，灌胃后lh、2h、3h分別處死3只，采血后，分別置于肝素化管中離心分離出血漿。另取3只大鼠置三個(gè)代謝籠內(nèi)，灌胃前分別收集空白尿樣和糞樣，并禁食12h，可自由飲水，每只統(tǒng)ー灌胃2. 6ml赤芍灌胃液，并收集灌胃后各代謝籠中大鼠0-3h、3-6h、6-9h、9-24h、24-36h、36-48h、48-72h 的尿樣，及 0-24h、24-48h、48_72h 的糞樣。I. 2. 3連續(xù)給藥取9只大鼠，實(shí)驗(yàn)前禁食12h，可自由飲水。每只統(tǒng)ー灌胃2.6ml赤芍灌胃液，連續(xù)給藥3天，每天兩次。其中，6只大鼠給藥前采集空白血，連續(xù)給藥結(jié)束后分別于O. 5h、lh、I.5h、2h、3h、4h、6h、8h各時(shí)間點(diǎn)于眼眶靜脈叢處取血約O. 5ml。另取3只大鼠置代謝籠內(nèi)，給藥前分別收集空白尿樣和糞樣，給藥后每隔24h收集一次尿樣和糞樣，連續(xù)收集5天。收集到的血樣、尿樣和糞樣的處理方法同單次給藥。I. 3樣品處理和色譜分析I. 3. I色譜條件色譜柱AgilentEclipse XDB-C18 (5 μ m, 4· 6 X 250mm);流動相こ臆-O. 1% 憐酸(含10mmol/Lこ酸銨)，梯度洗脫條件為:0 5minこ腈8% — 12% ;5 35minこ腈12% — 22% ；35 45minこ臆22% — 80% ;45 50minこ臆維持80% ;后運(yùn)行IOmin0流速0. 8ml/min ;色譜峰光譜采集范圍190nm-400nm ;檢測波長230nm ;柱溫30°C ;進(jìn)樣量20μしI. 3. 2血漿的處理取血漿450 μ 1，分別加入等體積111101/1鹽酸，5(^1 85 μ g/ml萘普生甲醇液(參照物)，96°C水浴30min,按I :4 (v/v)加こ酸こ酯萃取2次,每次禍旋2min后3000r/min離心5min，合并萃取液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00 μ I流動相(水相こ腈=92 8)復(fù)溶后進(jìn)樣。I. 3. 3尿樣的處理取尿液450 μ 1，分別加入等體積lmol/L鹽酸，50 μ I 85 μ g/ml萘普生甲醇液(參照物)，96°C水浴30min,按I :4 (v/v)加こ酸こ酯萃取2次,每次禍旋2min后3000r/min離心5min，合并萃取液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?50 μ I流動相(水相こ腈=92 8)復(fù)溶后進(jìn)樣。I. 3. 4糞樣的處理糞樣晾干后研細(xì)，稱取I. Og,加入IOml水,50μ I磷酸，超聲30min,靜置12h,13000r/min離心lOmin，取上清液I. 0ml，加入50 μ I 85 μ g/ml萘普生甲醇液(參照物)，按I 4 (v/v)加こ酸こ酯萃取2次，合并萃取液，氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00 μ I流動相(水相こ腈=92 8)復(fù)溶后進(jìn)樣。I. 4 結(jié)果1.4. I赤芍灌胃液指紋圖譜的建立取I. 2. I方法下制得赤芍灌胃液1ml，純水稀釋五倍后，230nm處赤芍灌胃液圖譜色譜峰指紋信息最多，信號最強(qiáng)，色譜峰形狀和各峰的分離度較好，并且雜質(zhì)峰較少。故選230nm處所得色譜圖進(jìn)行比較。I. 3. I色譜條件下進(jìn)樣，得到赤芍指紋圖譜，共有16個(gè)特征峰(見圖I)。根據(jù)對照品，可確定峰I、峰5、峰6和峰13分別為沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷和苯甲酸。取藥材樣品，按赤芍灌胃液制備方法進(jìn)行制備，連續(xù)進(jìn)樣5次，檢測指紋圖譜。結(jié)果表明，測得各共有峰相對峰面積的RSD小于5%，表明儀器精密度良好。取同一赤芍飲片5份，按赤芍灌胃液制備方法進(jìn)行制備，檢測指紋圖譜，結(jié)果表明，測得各共有峰相對峰面積的RSD小于5%，表明其重復(fù)性良好，符合指紋圖譜要求。每隔24小時(shí)將稀釋后的同一赤芍灌胃液進(jìn)樣一次，共進(jìn)樣三次，結(jié)果表明赤芍灌胃液三天內(nèi)穩(wěn)定性良好。I. 4. 2血漿分析血漿的預(yù)處理在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)曾使用甲醇蛋白沉淀法，高氯酸蛋白沉淀法，こ腈蛋白沉淀法離心后進(jìn)樣，與赤芍指紋圖譜及空白血漿HPLC色譜圖對比，發(fā)現(xiàn)血漿中含與赤芍灌胃液HPLC指紋圖譜相同保留時(shí)間的峰很少且強(qiáng)度不高，考慮到赤芍提取物含有大部分鹽，苷類成份，嘗試用酸加熱水解后こ酸こ酯萃取的方法處理血漿，結(jié)果發(fā)現(xiàn)效果較蛋白沉淀法好，故確定此方法為血樣和尿樣的處理方法。用I. 3. 2方法處理給藥后不同時(shí)間段血漿與空白血漿和赤芍灌胃液HPLC指紋圖譜對比，發(fā)現(xiàn)4個(gè)峰的保留時(shí)間與赤芍指紋圖譜峰I、峰5、峰6、峰13的保留時(shí)間一致，可初歩判斷這些特征峰所代表的成分為赤芍灌胃液經(jīng)胃腸道吸收后，以原型進(jìn)入大鼠體內(nèi)的成分，典型圖見圖2。I. 4. 3尿樣分析用“I. 3. 3”項(xiàng)下方法處理給藥后不同時(shí) 間段尿樣，其色譜圖與赤芍灌胃液指紋圖譜比較，發(fā)現(xiàn)4個(gè)峰的保留時(shí)間與赤芍指紋圖譜峰I、峰5、峰6、峰13的保留時(shí)間一致，可初步推斷這些成分為赤芍灌胃液進(jìn)入大鼠體內(nèi)經(jīng)腎臟代謝后以原型排出的成分，典型圖見圖3。I. 4. 4糞樣分析糞樣的預(yù)處理比較了 I :10 (W/V)甲醇浸泡法和I :10 (W/V) O. 5%磷酸溶液超聲30min兩種方法，均靜置12h后續(xù)處理步驟相同，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用磷酸水溶液處理的糞樣的色譜圖峰形較好，確定此法為糞樣處理方法。用I. 3. 4方法處理給藥后不同時(shí)間段糞樣，得到的HPLC圖譜與赤芍灌胃液指紋圖譜比較，發(fā)現(xiàn)4個(gè)峰的保留時(shí)間與赤芍指紋圖譜峰I、峰5、峰6、峰13的保留時(shí)間一致，推測判斷這些成分為赤芍灌胃液進(jìn)入大鼠體內(nèi)后通過膽汁排泄以原型排出體外，典型圖見圖4。灌胃赤芍后不同時(shí)間的血漿、收集的尿樣、糞樣的HPLC圖譜分別與赤芍灌胃液230nm下HPLC指紋圖譜中的化學(xué)成分色譜峰比較，明確了沒食子酸，芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷，苯甲酸可以原型進(jìn)入大鼠體內(nèi)，給藥后I小時(shí)血漿、3-6小時(shí)時(shí)間段的尿樣、24小時(shí)內(nèi)糞樣中出現(xiàn)的色譜峰的數(shù)目多、信號強(qiáng)，是較好的取樣時(shí)間。實(shí)施例2 :大鼠在體腸灌流方法研究赤芍吸收本研究采用大鼠在體腸灌流的方法建立了赤芍提取物腸吸收模型，采用赤芍指紋圖譜條件測定赤芍提取物，并對其吸收特性進(jìn)行研究，為赤芍提取物的吸收研究提供生物藥劑學(xué)依據(jù)。2. I溶液的配制(I)K氏液(Krebs — Ringer’ s液)的配制分別稱取氯化鈉7. 8g、葡萄糖I. 4g、碳酸氫鈉I. 37g、氯化鈣O. 37g、氯化鉀O. 35g、磷酸ニ氫鈉O. 32g、氯化鎂O. 02g，加適量蒸餾水溶解，加水稀釋至IOOOmL,超聲混勻即得K氏液。(2)赤芍提取物K氏液的配制赤芍灌胃液(I. 2g/ml生藥)按體積比I : 4加入K氏液，混和搖勻即可。 2. 2大鼠在體腸吸收實(shí)驗(yàn)禁食12h的SD大鼠3只稱重后，按O. 3mL/100g腹腔注射10%的水合氯醛，麻醉后將大鼠分別固定在手術(shù)板上，沿腹中線剪開腹部，在十二指腸上部及回腸下部結(jié)扎，在結(jié)扎的兩端開ロ后腸管插管，用37°C的生理鹽水沖凈腸內(nèi)容物，經(jīng)乳膠管接通蠕動泵，構(gòu)成循環(huán)回路，并用經(jīng)37°C生理鹽水浸潰的紗布覆蓋創(chuàng)ロ。I只大鼠灌流空白K氏液，2只大鼠用K-R液配制成的赤芍供試藥液灌流。先將藥液快速泵入腸段，使腸段內(nèi)充滿藥液，后將流速降至(0.2mL/min)，同時(shí)開始記時(shí)，進(jìn)ロ處用已知質(zhì)量的裝有供試液的小瓶進(jìn)行灌流，于出口處收集流出的灌流液直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，記錄流出液質(zhì)量并將所灌流的腸段內(nèi)殘液沖出。并從心臟采血，制備血漿。所取灌流液樣品經(jīng)O.45微米的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)行HPLC分析，血漿樣品經(jīng)處理后進(jìn)樣分析，比較灌流液中藥物減少成分是否與血漿中入血成分一致。2. 3 結(jié)果明顯可見四個(gè)成分入血，保留時(shí)間分別為5. 7min、17. 38min、19. 7min、34. Omin,
根據(jù)對照品比對，可初歩判斷分別是沒食子酸、芍藥內(nèi)酯苷，芍藥苷和苯甲酸。實(shí)施例3 :本發(fā)明赤芍提取物的制備根據(jù)實(shí)施例I和2的結(jié)果用芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷為指標(biāo)成分作為赤芍提取物正交 試驗(yàn)法優(yōu)化提取エ藝和考察大孔吸附樹脂富集純化最佳エ藝的雙指標(biāo)。3. I提取エ藝的優(yōu)化赤芍中的活性部位通過大鼠體內(nèi)研究以證明為赤芍總苷，其中以芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷的含量最高，選擇芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷為含量測定的指標(biāo)成分。(I) HPLC 色譜條件色譜柱Agi lent C18 (2) (4. 6 X 250mm, 5 μ m),流動相こ腈一O. I %磷酸溶液(含10mmol/Lこ酸銨)梯度洗脫,流速1. Oml/min,檢測波長230nm,柱溫30°C，進(jìn)樣量:10μ I。(2)對照品溶液的制備分別取芍藥苷IOmg和芍藥內(nèi)酯苷5mg，精密稱定，分別置IOml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即分別得芍藥苷對照品貯備液(I. 018mg/ml)和芍藥內(nèi)酯苷對照品貯備液(O. 490mg/ml)。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷對照品貯備液，配制成濃度分別為含芍藥苷
7.953 μ g/ml>15. 906 μ g/ml、31. 81 μ g/ml>63. 625 μ g/ml、127. 25 μ g/ml 和 509 μ g/ml,以及含芍藥內(nèi)酯苷 3. 82 μ g/ml,7. 64 μ g/ml,15. 28 μ g/ml、30. 56 μ g/ml,61. 125 μ g/ml、122. 25 μ g/ml和244. 5 μ g/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)系列甲醇溶液。取上述不同濃度系列溶液分別經(jīng)HPLC分析，按前述色譜條件分別測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(C)對相應(yīng)峰面積(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得芍藥苷線性方程Yl=O. 0823C1-0. 8345，相關(guān)系數(shù)R=O. 9999 ;芍藥內(nèi)酯苷線性方程Y2=0. 0926C2-2. 5474，相關(guān)系數(shù)R=O. 9999。以上結(jié)果表明芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷濃度分別在7. 953 509 μ g/ml和3. 82 244. 5 μ g/ml范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。(4)供試品溶液的制備及測定取提取液，稀釋至一定體積，濾過，即得供試品溶液。由外標(biāo)法一點(diǎn)法計(jì)算即得芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量。3. 2赤芍提取物提取エ藝的正交試驗(yàn)考察赤芍提取物提取エ藝正交因素水平表見表3-1，赤芍提取物提取エ藝正交試驗(yàn)表見表3-2,通過做正交試驗(yàn)及正交驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),確定最佳提取條件。表3-1赤芍提取物提取エ藝正交因素水平表
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表3-2赤芍提取物提取エ藝正交試驗(yàn)表
權(quán)利要求
1.ー種赤芍提取物，其特征在于是以赤芍為原料提取得到的，所述的赤芍提取物含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為299Γ42. 05%,O. 80% 15%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的赤芍提取物，其特征在于所述的赤芍來源于毛茛科植物芍藥(Paeonia lactiflora Pali)或川赤茍(Paeonia veitchii Lynch)的干燥根。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的赤芍提取物，其特征在于所述的赤芍提取物的水分不超過3%、熾灼殘洛量不超過O. 6%、重金屬含量不超過lOppm。
4.權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的赤芍提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥劑。
5.ー種赤芍提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 取赤芍飲片，先用其8 12倍體積量60%こ醇，再用其6 10倍體積量60%こ醇各浸泡提取I次，毎次lhl. 5h，濾過，合并提取液，減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調(diào)節(jié)其濃度不超過O. 3g/mL,即每ImL藥液中含生藥赤芍量不超過O. 3g，濾過，然后通過已預(yù)處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱，樹脂柱徑高比I 4-1 12，流速l-3ml/min，上樣量不超過O. 6g生藥· πιΓ1樹脂，以f 2倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用4 8倍柱體積的50%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)干燥，得赤芍提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 取赤芍飲片，先用其10倍體積量60%こ醇，再用其8倍體積量60%こ醇各提取I次，每次I. 5h，濾過，合并提取液，減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調(diào)節(jié)其濃度為O. 3g/mL,即每ImL藥液中含生藥赤芍量為O. 3g，濾過，通過已預(yù)處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱；樹脂柱徑高比I : 8，吸附流速4倍柱體積/h，上樣量2倍柱體積，以2倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用6倍柱體積的50%こ醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收こ醇，60°C繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)60°C干燥，得赤芍提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，所述的赤芍提取物含有芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為299Γ42. 05%,O. 80% 15%。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，所述的赤芍來源于毛茛科植物芍藥(Paeonia lactiflora Pall)或川赤茍(Paeonia veitchii Lynch)的干燥根。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于，所述的赤芍提取物的水分不超過3%、熾灼殘洛量不超過O. 6%、重金屬含量不超過lOppm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種赤芍提取物及其制備和應(yīng)用方法；該提取物以中藥赤芍為原料提取而成，其中含有芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷分別為29%~42.05%、0.80%~15%。本發(fā)明提取物的制備方法以該提取物中的芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷含量、水分含量、熾灼殘?jiān)?、重金屬含量為指?biāo)進(jìn)行優(yōu)化得到。本發(fā)明可更好的控制赤芍提取物的質(zhì)量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質(zhì)量可控、物質(zhì)基礎(chǔ)明確的赤芍藥物，以順應(yīng)中藥現(xiàn)代化的要求。
文檔編號A61K36/71GK102641347SQ20121015448
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月17日
發(fā)明者云筠筠, 王霆, 程澤能, 蔡凝芳, 袁玉, 賈莉 申請人:中南大學(xué)