專利名稱：一種補骨脂提取物及其制備和應用方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種補骨脂提取物，具體地，是以中藥補骨脂為原料的提取物及其制備方法和制備治療慢性阻塞性肺疾病藥劑的用途；屬于藥物領域。
背景技術：
市場現(xiàn)有產(chǎn)品補肺活血膠囊(BFHX)經(jīng)多年臨床使用證明，對于慢阻肺有著顯著療效。其藥方組成為黃芪、赤芍和補骨脂三味傳統(tǒng)中藥。中藥及其復方制劑多成分、多靶點和整合協(xié)同作用的特點，使得補肺活血膠囊在慢阻肺這ー緩慢進程性疾病的治療方面凸顯出 優(yōu)勢。盡管補肺活血膠囊臨床使用有效，可是其生產(chǎn)エ藝粗糙，制劑穩(wěn)定性較差，物質基礎不明，質量標準較低，很難適應中藥現(xiàn)代化、產(chǎn)業(yè)化和國際化進程?；诖耍覀償M對其進行深度開發(fā)。前期的預試驗顯示，補骨脂黃芪、赤芍、三味藥材各自單煎的提取物，與三味藥材合煎得到的提取物化學成分相同，沒有出現(xiàn)單煎時藥材成分丟失或者増加的現(xiàn)象。因此我們簡化研究對象，先単獨研究補骨脂一味藥材，后期再合并黃芪、赤芍的研究結果，作為補肺活血膠囊深度開發(fā)的一個整體思路。補骨脂是豆科植物補骨脂的干燥成熟果實，作為我國傳統(tǒng)治療腰膝冷痛，腎虛作喘的中藥有著悠久的用藥歷史。以往研究證明其具有擴張冠狀動脈、抗菌、抗腫瘤、增強免疫等生理活性(郭秀芝等.中醫(yī)藥學報，2005，33 (5) :52-53)。但是補肺活血膠囊中補骨脂究竟哪些成分起作用，其體內過程如何至今尚不清楚，嚴重制約了該藥物臨床使用，加之補骨脂藥材質量控制和評價體系尚不完善，生產(chǎn)エ藝十分粗糙，導致了已開發(fā)產(chǎn)品的市場競爭カ較弱，如何提高補骨脂產(chǎn)品質量是亟待解決的問題。藥動學用于中藥研究可為中藥制劑生產(chǎn)エ藝的設計、內在質量的評價與監(jiān)控提供有效手段和方法。目前ロ服給藥是中藥治療的主要方式，影響ロ服生物利用度的因素很多，研究藥物的吸收對于指導藥物給藥系統(tǒng)研究有重要意義。評價藥物的吸收的模型有很多種，有離體法和在體法，目前較多采用大鼠在體單向腸灌流模型，這種模型以較低的流速某一腸道進行單向灌流，根據(jù)進出口處灌流液中的藥物濃度差考察藥物在該腸段的吸收，其實驗條件與ロ服給藥后藥物接觸的腸道環(huán)境較接近，吸收速率穩(wěn)定，與人體有良好相關性(譚曉斌等.中成藥，2007，29 (11):1665-1668)。從藥物動力學研究角度，采用相應分析手段對大鼠灌胃給藥后收集的血液、尿液等生物樣品進行分析，結合大鼠在體腸灌流實驗技術，找出中藥進入體內的成分，篩選出能反映補骨脂物質作用基礎的指標成分，可更好的控制該藥物的質量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質量可控、物質基礎明確的補骨脂藥物，以順應中藥現(xiàn)代化的要求。目前尚無針對本發(fā)明標準的補骨脂提取物及其制備和應用方法的報道。

發(fā)明內容
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種補骨脂提取物及其制備和應用方法?！N補骨脂提取物，是以補骨脂為原料提取得到的，所述的補骨脂提取物含有補骨脂素、異補骨脂素，質量百分比分別為補骨脂素I. 57%-3. 3%，異補骨脂素I. 1%-2. 5%。所述的補骨脂提取物提取物還含有補骨脂素苯并呋喃苷和異補骨脂素苯并呋喃苷。所述的補骨脂來源于豆科植物補骨脂(Psoralen. L)的干燥成熟果實。所述的補骨脂提取物的水分含量不超過6. 0%、熾灼殘渣量不超過I. 0%、重金屬含量不超過0. 01%0。所述的補骨脂提取物用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥劑。包括以補骨脂提取物為主要有效成分與多種醫(yī)用輔料(賦型劑，稀釋劑，香味劑、甜味劑、潤滑劑等)配合，制成多種劑型的藥物使用，如凍干粉針，注射液，大輸液，片劑，膠囊，顆粒劑以及ロ服液等。一種補骨脂提取物的制備方法，包括如下步驟取補骨脂飲片，先用其5-10倍體積量40%_80%こ醇浸泡提取2次，每次30min-l. 5h,濾過,合并提取液,減壓濃縮、回收こ醇至無醇味,放冷,加水調至濃度為0. 5g/mL，即每ImL藥液中含生藥補骨脂量為0. 5g，濾過，然后通過已預處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱，樹脂重量與加水調節(jié)濃度后的藥液重量之比為I : 1，再依次以3倍柱體積的水洗脫，再用7倍柱體積的70%こ醇洗脫，收集こ醇洗脫液，減壓回收こ醇，繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)干燥，得補骨脂提取物粉末。優(yōu)選包括如下步驟 取補骨脂飲片，先用其8倍體積量60%こ醇，再用其I倍體積量60%こ醇各提取I次，毎次I. 5h，過濾，合并提取液；減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調至濃度為
0.5g/mL，即每ImL藥液中含生藥補骨脂量為0. 5g，過濾后通過已預處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱；樹脂重量與加水調節(jié)濃度后的藥液重量之比為I :レ流速為^!!!!^!!!^1^依次用3倍柱體積純水，7倍柱體積70%こ醇洗脫；收集こ醇洗脫液，減壓回收こ醇，60°C繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)60°C干燥，得補骨脂提取物粉末。所述的補骨脂提取物含有補骨脂素、異補骨脂素，質量百分比分別為補骨脂素
1.57%-3. 3%，異補骨脂素 I. l%-2. 5%o所述的補骨脂提取物還含有補骨脂素苯并呋喃苷和異補骨脂素苯并呋喃苷。所述的補骨脂來源于豆科植物補骨脂(Psoralen. L)的干燥成熟果實。所述的補骨脂提取物的水分含量不超過6. 0%、熾灼殘渣量不超過I. 0%、重金屬含量不超過0. 01%0。本發(fā)明提供了一種補骨脂提取物，以中藥材補骨脂為原料提取而成。本發(fā)明采用大鼠在體腸單向灌流法，比較藥材灌胃液灌流前后經(jīng)小腸吸收減少的成分是否與灌胃給藥吸收入血成分一致；灌流結束后采血，檢測血漿樣品，進ー步確定補骨脂藥材吸收入血成分有補骨脂素苯并呋喃苷、異補骨脂素苯并呋喃苷、補骨脂素和異補骨脂素，并以這些成分及其含量作為標準。根據(jù)其優(yōu)化提取エ藝和富集純化工藝，最終獲得精制而成的本發(fā)明提取物，同時水分含量、熾灼殘渣量、重金屬含量也作為標準，在優(yōu)化提取エ藝和富集純化工藝時考慮。本發(fā)明可更好的控制該藥物的質量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質量可控、物質基礎明確的補骨脂藥物，以順應中藥現(xiàn)代化的要求。。
以下通過實 施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內容再作進ー步的詳細說明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。


圖I補骨脂灌胃液HPLC指紋圖譜；圖2大鼠灌胃補骨脂后血漿HPLC典型圖譜a.空白血漿，b.含藥血漿；圖3大鼠灌胃補骨脂后尿液HPLC典型圖譜；a.大鼠空白尿樣，b.大鼠灌胃給藥后0_24h尿樣，c.大鼠灌胃給藥后24_48h尿樣；圖4大鼠灌胃給藥前后糞樣及提取物灌胃液圖譜；a.空白糞樣；b.大鼠灌胃給藥后0_48h糞樣圖譜；c.補骨脂提取物灌胃液。
具體實施例方式實施例I :補骨脂藥材中特征成分為主的色譜指紋圖譜的建立以及大鼠在體腸灌流方法確定補骨脂吸收成分的方法I. I材料和儀器I. I. I藥品和試劑補骨脂飲片購自湖南九芝堂藥業(yè)，經(jīng)鑒定為豆科植物補骨脂鹽炙的干燥成熟果實。補骨脂素、異補骨脂素和萘普生對照品購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純(Tedia公司)，こ酸銨等其他試劑為分析純(國藥集團化學試劑有限公司)。1.1.2 儀器Agilent Technologies 1200 (Agilent Chemstation エ作站，DAD 檢測器)；Finnigan LCQAdvantage MAX ；KromasiI 100-5C18 (250X4. 6mm, 5 u m) ;JA2003H 型千分之一天平(上海精密科學儀器有限公司)；CP22 型十萬分之ー電子天平(Sartorious)；KL-R0-10型艾柯超純水機(臺灣艾柯)；WH-2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；MTN-2800D氮氣吹干儀(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；RE_5298A系列旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);3700M071型代謝籠(Tecniplast公司);DDB-320多功能電子蠕動泵(上海之信儀器有限公司)。I. I. 3實驗動物SD大鼠(清潔級)，雄性，體重180_220g，購于中南大學湘雅醫(yī)學院實驗動物學部。I. 2溶液配制(I) K-R 液(Krebs-Ringer’ s 液)的配制分別稱取氯化鈉7. 8g、葡萄糖I. 4g、碳酸氫鈉I. 37g、氯化鈣0. 37g、氯化鉀0. 35g、磷酸ニ氫鈉0. 32g、氯化鎂0. 02g，加適量蒸餾水溶解，加水稀釋至IOOOmL,超聲混勻即得K-R 液。(2)補骨脂提取物腸灌流供試品溶液的配制參照文獻(中國專利申請?zhí)?2135035. 3)，取補骨脂飲片適量，加入10倍量水，カロ熱回流lh，過濾，再加入8倍量純水，繼續(xù)加熱回流lh，濾液合并、濃縮至一定密度，再加入こ醇至含醇量約為60%，靜置24h，過濾，揮去こ醇，濃縮得補骨脂稠膏。按100 60(ff V)溶于一定量的純水中，渦旋混勻，制得補骨脂灌胃液，每毫升補骨脂灌胃液約相當于0. 6g補骨脂藥材。補骨脂灌胃液按體積比I : 9加入K-R液，混和搖勻即得灌流樣品。1. 3色譜條件、質譜條件色譜條件色譜柱Kromasil100-5C18 (250 X 4. 6mm, 5 u m);流動相0_5min,A: 30% ；5-30min, A:30%-60% ；30-55 min, A:60%-95% ；55-60min, A :95%_5%，其中 A 為甲醇，B為0. 1%甲酸、IOmmol じ1こ酸銨水溶液；流速1. OmL min—1 ;柱溫30°C ；DAD掃描范圍190-400nm ;檢測波長320nm，245nm ;進樣量20 y し質譜條件電噴霧離子化源(ESI)，源電壓3. 5KV，干燥氣流速IOL mirT1，干燥氣溫度350°C，噴霧氣壓カ30psi，目標離子分子量366，化合物穩(wěn)定性100%，MS2打碎電壓I. 0V，掃描的范圍為150-1000。采集正離子模式下的MS和MS2圖譜。數(shù)據(jù)分析采用軟件FinniganLCQ Advantage MAX Xcalibur。I. 4樣品收集、處理禁食12h的SD大鼠6只稱重后，按0. 3mL/100g腹腔注射10%的水合氯醛，麻醉后將大鼠分別固定在手術板上，沿腹中線剪開腹部，在十二指腸上部及回腸下部結扎，在結扎的兩端開ロ后腸管插管，用37°C的生理鹽水沖凈腸內容物，經(jīng)乳膠管接通蠕動泵，構成循環(huán)回路，并用經(jīng)37°C生理鹽水浸潰的紗布覆蓋創(chuàng)ロ。I只大鼠灌流空白K氏液，5只大鼠用K-R液配制成的補骨脂供試藥液灌流。先將藥液快速泵入腸段，使腸段內充滿藥液，后將流速降至(0. 2mL/min)，同時開始記時，進ロ處用已知質量的裝有供試液的小瓶進行灌流，于出口處收集流出的灌流液直至實驗結束，記錄流出液質量并將所灌流的腸段內殘液沖出。灌流結束后，大鼠心臟取血。所取灌流液樣品高速離心，經(jīng)0. 45um微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進行HPLC分析，血漿樣品經(jīng)處理后進樣分析，比較灌流液中藥物減少成分是否與血漿中入血成分一致。I. 5 結果I. 5. I補骨脂灌胃液指紋圖譜的建立補骨脂水提醇沉提取物320nm處補骨脂灌胃液圖譜色譜峰指紋信息最多，60min內可完成所有成分的分析，且補骨脂各成分峰分離良好，相互間沒有干擾，保留時間適中。其中主要成分峰A、B、C、D的保留時間分別為10. 7min, 13. Omin, 25. 5min, 27. Omin,按峰面積歸ー化法計算，峰面積總和達到90%以上(見圖I)。方法學考察結果顯示，以湖北補骨脂藥材的提取物為供試品，分別于0、2、4、6、8、
10、12h測定，各色譜峰的保留時間漂移在±0. 15min范圍內，各色譜峰面積的RSD值不超過3. 6%，說明供試品溶液在12h內穩(wěn)定。以湖北補骨脂藥材的提取物為供試品，連續(xù)進樣6次，結果表明，各色譜峰的保留時間漂移在±0. 15min范圍內，各色譜峰面積的RSD值不超過2.9%。該分析方法具有較好的精密度和重現(xiàn)性。I. 5. 2補骨脂提取物腸灌流結果補骨脂提取物灌流液各成分在在空白灌流液中至少4h內穩(wěn)定。補骨脂提取物給予大鼠單向腸灌流2-3h后，灌流液中多種成分均有所減少，其中保留時間分別為10. 7min、13. Omin,25. 8min和27. 5min的主要成分A、B、C、D均有不同程度的吸收。確定其為SD大鼠進行補骨脂提取物腸灌流時小腸吸收的主要成分，且極有可能是補骨脂吸收入血發(fā)揮補肺活血作用的有效成分。經(jīng)對照品峰位及光譜核對、液質聯(lián)用結合化學成分轉化性質的方法，判斷其分別是補骨脂素苯并呋喃苷、異補骨脂素苯并呋喃苷、補骨脂素和異補骨脂素。實施例2 :補骨脂提取物血清藥物化學研究2. I材料和儀器同實施例I。2. 2大鼠血樣、尿樣、糞樣采集2. 2. I補骨脂灌胃液的制備參照文獻(中國專利申請?zhí)?2135035. 3)，制得補骨脂稠膏。按100 60 (ff V) 溶于一定量的純水中，渦旋混勻，制得補骨脂灌胃液，每毫升補骨脂灌胃液約相當于0. 6g補骨脂藥材。2. 2. 2灌胃給藥，收集血漿、尿樣、糞樣取6只大鼠，實驗前禁食12h，自由飲水。補骨脂提取物按I. 6g生藥/IOOg的劑量給與大鼠灌胃。將灌胃后采集血漿與自身灌胃前采集的空白血漿進行對比。即分別于補骨脂提取物灌胃前(Omin)和灌胃后30min、60min、90min、120min> 180min>240min于大鼠眼眶采血約lmL，置于I. 5mL肝素化EP管中，12000rpm離心lOmin，分取血漿置于I. 5mLEP管中，-20°C保存。另取2只SD大鼠置于代謝籠中，收集其空白尿。以2g補骨脂生藥/IOOg體重的劑量灌胃給藥，收集灌胃給藥后0-24h、24-48h尿樣。同時收集大鼠空白糞樣和灌胃給藥后0-48h糞樣。2. 3大鼠血漿、尿樣、糞樣的處理取灌胃給藥后3h大鼠血漿樣品400 ii L，加入3倍量こ腈，渦旋2min混勻，12000rpm離心IOmin除去蛋白。離心得到的上清液轉移至玻璃離心管中，60°C微弱氮氣吹干。加入100 ii L流動相復溶,潤旋振蕩3min,轉移至I. 5mLEP管，12000rpm離心IOmin,取上清液進樣檢測。血藥濃度濃縮至原先的4倍。每個大鼠尿樣分別給予離心、こ酸こ酯萃取兩種不同方式處理。對比SD大鼠空白尿樣、給藥后尿樣色譜圖，分析吸收入血后經(jīng)代謝由尿樣排泄的補骨脂成分。糞樣自然風干，研成粉末，稱取一定量，加甲醇超聲30min，靜置6h后，經(jīng)0. 45 y m濾膜過濾，續(xù)濾液進HPLC檢測。2. 4 結果2. 4. I血漿分析補骨脂藥材主成分峰A、B、C、D在給藥后血漿的色譜圖中都有出現(xiàn)。這ー結果與大鼠小腸單向灌流試驗中灌流液主要減少成分相吻合。不同大鼠血漿色譜峰的個數(shù)和峰位一致，峰面積有所變化。提示我們，A、B、C、D成分以原型進入大鼠體內，且大鼠對于補骨脂藥材提取物吸收代謝等體內過程，存在個體間差異。腸灌流大鼠血漿樣品與灌胃給藥大鼠血漿樣品共有峰的峰位相吻合，進ー步驗證了 SD大鼠腸灌流試驗中減少的成分，是由大鼠吸收入血而引起。初步認定藥材中4種主要成分A、B、C、D是補骨脂發(fā)揮藥效的物質基礎，也是后續(xù)研究所要追蹤的目標成分。典型圖見圖2。2. 4. 2尿樣分析對比空白尿樣可知,給藥后0-24h、24-48h的尿樣中均出現(xiàn)了藥材A、B、C、D四種主成分峰。可初歩推斷這些成分為補骨脂灌胃液進入大鼠體內經(jīng)腎臟代謝后以原型排出的成分，典型圖見圖3。2. 4. 3糞樣分析之前腸灌流試驗、以及血樣尿樣圖譜推斷吸收入血的藥材A、B、C、D4個主要成分中，A這ー藥材中含量最高、血漿樣品中含量卻極少的成分在糞樣中沒有出現(xiàn)，排除了經(jīng)過腸道不吸收而直接排出體外的可能性，從另ー個角度佐證了 A成分經(jīng)胃腸道吸收進入體內。綜合之前灌流試驗以及灌胃大鼠血漿、尿樣分析結果，A、B、C、D這4種成分均吸收入血，且入血的比例都較高，極有可能是補骨脂吸收入血發(fā)揮補肺活血作用的有效成分。經(jīng)對照品峰位及光譜核對、液質聯(lián)用結合化學成分轉化性質的方法，判斷其分別是補骨脂素 苯并呋喃苷、異補骨脂素苯并呋喃苷、補骨脂素和異補骨脂素。實施例3 :本發(fā)明補骨脂提取物的制備根據(jù)實施例I和2的結果用補骨脂素苯并呋喃苷、異補骨脂素苯并呋喃苷、補骨脂素和異補骨脂素為指標成分，正交試驗法優(yōu)化補骨脂提取物提取エ藝。依據(jù)提取預試驗結果，采用L9 (34)正交試驗表進行設計，對提取時的こ醇濃度、提取溶媒用量和提取時間等因素進行考察，每個因素設置3個水平。因素水平見表I。將補骨脂藥材混勻，稱取18份(每個試驗平行操作2份)，每份20g，按表2安排實驗，D項為空白項，用來做方差分析。以提取液中補骨脂素苯并呋喃苷與異補骨脂素苯并呋喃苷的峰面積、補骨脂素與異補骨脂素的含量作為考察指標，進行數(shù)據(jù)分析。試驗數(shù)據(jù)用SPSS13. 0軟件統(tǒng)計，結果見表2-表6。表I正交實驗因素水平表
權利要求
1.一種補骨脂提取物，其特征在于是以補骨脂為原料提取得到的，所述的補骨脂提取物含有補骨脂素、異補骨脂素，質量百分比分別為補骨脂素I. 57%-3. 3%，異補骨脂素I. 1%-2. 5%。
2.根據(jù)權利要求I所述的補骨脂提取物，其特征在于所述的補骨脂提取物提取物還含有補骨脂素苯并呋喃苷和異補骨脂素苯并呋喃苷。
3.根據(jù)權利要求I所述的補骨脂提取物，其特征在于所述的補骨脂來源于豆科植物補骨脂(Psoralen. L)的干燥成熟果實。
4.根據(jù)權利要求I所述的補骨脂提取物，其特征在于所述的補骨脂提取物的水分含量不超過6. 0%、熾灼殘洛量不超過I. 0%、重金屬含量不超過0. 01%0。
5.權利要求1-4任意一項所述的補骨脂提取物的應用方法，其特征在于，用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥劑。
6.一種補骨脂提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 取補骨脂飲片，先用其5-10倍體積量40%-80%こ醇浸泡提取2次，每次30min-l. 5h，濾過，合并提取液，減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調至濃度為0. 5g/mL，即每ImL藥液中含生藥補骨脂量為0. 5g，濾過，然后通過已預處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱，樹脂重量與加水調節(jié)濃度后的藥液重量之比為I : 1，再依次以3倍柱體積的水洗脫，再用7倍柱體積的70%こ醇洗脫，收集こ醇洗脫液，減壓回收こ醇，繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)干燥，得補骨脂提取物粉末。
7.根據(jù)權利要求6所述的制備方法，其特征在于包括如下步驟 取補骨脂飲片，先用其8倍體積量60%こ醇，再用其7倍體積量60%こ醇各提取I次，每次I. 5h，過濾，合并提取液；減壓濃縮、回收こ醇至無醇味，放冷，加水調至濃度為0. 5g/mL,即每ImL藥液中含生藥補骨脂量為0. 5g，過濾后通過已預處理好的DlOl型大孔吸附樹脂柱；樹脂重量與加水調節(jié)濃度后的藥液重量之比為I : 1，流速為廣2!111^1^11_1;再依次用3倍柱體積純水，7倍柱體積70%こ醇洗脫；收集こ醇洗脫液，減壓回收こ醇，60°C繼續(xù)濃縮得干膏，經(jīng)60 V干燥，得補骨脂提取物粉末。
8.根據(jù)權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于所述的補骨脂提取物含有補骨脂素、異補骨脂素，質量百分比分別為補骨脂素I. 57%-3. 3%，異補骨脂素I. 1%-2. 5%。
9.根據(jù)權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于所述的補骨脂提取物還含有補骨脂素苯并呋喃苷和異補骨脂素苯并呋喃苷。
10.根據(jù)權利要求6或7所述的制備方法，其特征在于所述的補骨脂提取物的水分含量不超過6. 0%、熾灼殘洛量不超過I. 0%、重金屬含量不超過0. 01%0。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種補骨脂提取物及其制備和應用方法，該提取物以中藥補骨脂為原料提取而成，其中含有補骨脂素和異補骨脂素，質量百分比分別為1.57%-3.3%，異補骨脂素含量為1.1%-2.5%。本發(fā)明提取物的制備方法以該提取物中的補骨脂素和異補骨脂素含量、水分含量、熾灼殘渣量、重金屬含量為指標進行優(yōu)化得到。本發(fā)明可更好的控制補骨脂提取物的質量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質量可控、物質基礎明確的補骨脂藥物，以順應中藥現(xiàn)代化的要求。
文檔編號A61K131/00GK102641328SQ20121015449
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月17日 優(yōu)先權日2012年5月17日
發(fā)明者云筠筠, 張超, 王霆, 程澤能, 蔡凝芳, 袁玉 申請人:中南大學