專利名稱：茯苓皮提取物及其在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及茯苓皮提取物及其在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
茯苓皮為多孔菌科真菌茯苓D0Oria cocos (Schw. ) Wolf.]的菌核的外皮，主要分布在亞洲(中國(guó)、日本、韓國(guó)等)、北美洲等地。始載于《神農(nóng)草本經(jīng)》，在以后的《中華本草》、《中國(guó)醫(yī)學(xué)大辭典》、《醫(yī)學(xué)啟源》都有記載，為歷屆《中國(guó)藥典》所收載?！侗静菥V目》記載茯苓皮“主水腫膚脹，開(kāi)水道，開(kāi)腠理”?！端拇ㄖ兴幹尽酚涊d茯苓皮“性平，味甘淡，無(wú)毒”，入腎，膀胱二經(jīng)。主要用于水腫，小便不利等。茯苓菌核內(nèi)部(茯苓)在中國(guó)主要用于治療水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安，驚悸失眠等，茯苓的表皮(茯苓皮)主要用于治療水腫，小便不利等；在日本，僅僅茯苓應(yīng)用于臨床，茯苓皮作為廢料處理。茯苓皮 含有化學(xué)成分包括四環(huán)三萜酸(茯苓酸、去氫土莫酸、去氫齒孔酮酸等)、多糖(3 -茯苓聚糖)、戊聚糖等。茯苓酸A具有抗腫瘤作用和一定的細(xì)胞毒作用，3-表去氫土莫酸能夠被人體小腸的上皮細(xì)胞吸收且具有清除自由基的活性，兩者均為茯苓皮藥材所含的活性成分。長(zhǎng)期以來(lái)，國(guó)內(nèi)外的研究者對(duì)茯苓皮研究主要集中在多糖類成分及其抗腫瘤活性研究，這與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為茯苓皮的利水滲濕功效偏離較大。國(guó)內(nèi)外部分學(xué)者在茯苓皮(或復(fù)方制劑)等利水滲濕作用的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用方面有不少報(bào)道，但主要集中于水煎煮提取物為主，少有新的發(fā)現(xiàn)和突破。到目前為止，茯苓皮具有利尿的活性部位一直不明確。為了明確茯苓皮的活性部位，充分的利用茯苓皮，發(fā)明人對(duì)茯苓皮的非極性和極性部位進(jìn)行了利尿研究，發(fā)現(xiàn)茯苓皮的非極性部位具有明顯的利尿作用，這與中醫(yī)茯苓皮利水滲濕作用相一致。另外，目前的利尿藥吲達(dá)帕胺、速尿藥物的缺點(diǎn)是大量應(yīng)用容易引起低血鉀、心律不齊；噻嗪類利尿劑(如氯噻嗪、氯噻酮和雙氫克尿塞)一個(gè)很大的缺點(diǎn)是常常會(huì)降低體內(nèi)的鉀含量，另外，噻嗪類利尿劑可增加患者膽汁中膽固醇的飽和度，可能增加膽囊炎的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。因此，有待于進(jìn)一步從天然資源中尋找新的利尿藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種茯苓皮提取物，特別是一種乙酸乙酯提取物；
本發(fā)明的另一目的是提供上述茯苓皮提取物的提取方法；
本發(fā)明還有一個(gè)目的是克服現(xiàn)有利尿藥物的缺點(diǎn)，提供茯苓皮提取物在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)過(guò)程如下
一種茯苓皮提取物，其通過(guò)以下步驟得到
(1)茯苓皮經(jīng)干燥、粉碎后，乙醇浸泡、滲漉，回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物；
(2)棕色膏狀物用水溶解，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得膏狀物；
(3)步驟(2)所得膏狀物溶于乙醇，用硅膠拌樣，上100-200目的硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯洗脫液洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，最后得茯苓皮提取物。上述步驟(I)中，用3-7倍體積的95%乙醇浸泡12-36小時(shí)后開(kāi)始滲漉。上述步驟(2)中，用乙酸乙酯萃取3-5次。上述步驟(3)中，使用石油醚-乙酸乙酯體積比為7:3飛:5洗脫液洗脫。2010版《中國(guó)藥典》收載茯苓皮的功能主治利水消腫，用于水腫，小便不利等。發(fā)明人以生理鹽水負(fù)荷的水潴溜大鼠模型，尿量、尿液中PH值、鈉、鉀、氯，鈉鉀比值為指標(biāo)，以活性追蹤的方式，茯苓皮乙酸乙酯和水提取物進(jìn)行利尿?qū)嶒?yàn)，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯提取物有利尿作用，增加尿量的同時(shí)亦能增加大鼠體內(nèi)鈉、鉀、氯排出。用茯苓皮提取物制備利尿藥物以常規(guī)藥用制劑的形式來(lái)使用；所述的常規(guī)藥物用制劑含作為活性組分在制劑中與藥學(xué)上可接受的載體，如適宜于腸胃內(nèi)和腸胃外給藥的有 機(jī)或無(wú)機(jī)的固體或液體賦形劑混合，該藥用制劑可以是固體形式如片劑、膠囊劑、散劑、丸齊U、顆粒劑等。上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑和其它常用的添加劑，如乳糖、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、橄欖油、可可脂、乙二醇、抗壞血酸、甘露醇等。上述的制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。


圖I為不同時(shí)間段茯苓皮乙酸乙酯提取物P. 0.給藥大鼠尿量的影響。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I茯苓皮提取物的制備
茯苓皮經(jīng)干燥、粉碎后，用3-7倍體積的95%乙醇浸泡12-36小時(shí)后開(kāi)始滲漉6天，回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物；棕色膏狀物用水溶解，乙酸乙酯萃取4次，回收乙酸乙酯，濃縮得膏狀物；將膏狀物溶于乙醇，用硅膠拌樣，上100-200目的硅膠柱，使用石油醚-乙酸乙酯體積比為7:3飛:5洗脫液洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，最后得茯苓皮提取物。滲漉時(shí)間的確定茯苓皮經(jīng)干燥、粉碎后，乙醇浸泡、滲漉，用95%乙醇滲漉，考察I天、2天、3天、4天、5天、6天、7天滲漉提取時(shí)間對(duì)提取效率的影響。結(jié)果顯示I天、2天、3天、4天、5天、6天、7天的提取率(浸膏/生藥量)分別為I. 2%、2. 2%、3. 5%、4. 7%、5. 5%、6. 1%、6. 2%，最終確定滲漉時(shí)間為6天。乙酸乙酯萃取次數(shù)的考察當(dāng)用乙酸乙酯萃取提取物時(shí)，萃取I次、2次、3次、4次、5次的結(jié)果分別為71%、89%、95%、98%、99% (萃取量/總乙酸乙酯萃取物)，所以最總確定乙酸乙酯的萃取次數(shù)為4次。實(shí)施例2
為了驗(yàn)證茯苓皮提取物利尿的效果，發(fā)明人采用生理鹽水負(fù)荷的水潴溜大鼠模型進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)，各種試驗(yàn)情況如下
I.實(shí)驗(yàn)藥物
茯苓皮提取物(實(shí)施例I制備)懸濁液，含2%的阿拉伯樹(shù)膠粉的自來(lái)水配制。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重200-220g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)儀器
ZH-B6型大鼠代謝籠(安徽淮北正華生物儀器有限公司);TD型電子天平(余姚市金諾天平儀器有限公司)；美特列-托利多十萬(wàn)分子一分析天平。實(shí)驗(yàn)方法
(I)藥物利尿?qū)嶒?yàn) SD大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、茯苓皮乙酸乙酯提取物小劑量組(2. 5g生藥/kg)、中劑量組(5g生藥/kg)、大劑量組劑量組(IOg生藥/kg)、速尿組(20mg/kg),每組8只大鼠，與禁食(不禁水)24h后各組均按5ml/100g體重灌胃給予生理鹽水負(fù)荷，并用手輕壓腹部使其排盡余尿，給藥各組均按lml/100g體重灌胃，生理鹽水對(duì)照組給自來(lái)水lml/100g。給藥后立即將大鼠分別放入方形不銹鋼的代謝籠中，每籠I只。給藥后在代謝籠下面放置帶刻度的試管，每小時(shí)記錄尿液I次，連續(xù)收集6小時(shí)尿量(ml )，記錄每小時(shí)每只動(dòng)物的尿量，計(jì)算每組動(dòng)物每小時(shí)的尿量的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，計(jì)算6h每組動(dòng)物總尿量的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，測(cè)定尿液的PH值，并測(cè)定尿樣中Na+、K+及Cl—的量(mmol/L)，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果見(jiàn)圖I和表1，2。(2)藥效計(jì)算
結(jié)果均以平均值土SD表示，采用(檢驗(yàn)，計(jì)算t，P值，將治療組與空白組進(jìn)行組間差異性比較，(檢驗(yàn)，P < 0.05為有顯著性差異；P〈0.01為有非常顯著性差異，判斷茯苓皮提取物的利尿效果。(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
A.茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)大鼠尿量的影響。圖I和表I顯示,小、中、大3個(gè)劑量的乙酸乙酯提取物組尿量有增加的趨勢(shì),與生理鹽水組比較，小劑量和大劑量組存在顯著性差異。若以對(duì)照組尿量為100%，則3組尿量增加百分率分別為16. 1%、10. 7%,27. 7%。增加率均超過(guò)10%，特別是大劑量效果非常明顯，與陽(yáng)性藥速尿的尿量接近，提示茯苓皮乙酸乙酯提取物有較好的利尿效果。但茯苓皮乙酸乙酯提取物3個(gè)不同的劑量組大鼠6h尿量低于速尿組，說(shuō)明利尿程度弱于速尿，與速尿組比較，茯苓皮乙酸乙酯提取物的利尿作用呈現(xiàn)溫和、持久的特點(diǎn)。B.茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)大鼠尿液中Na+、K+及Cl—排出量的影響。表2顯示，從Na+、K+及Cl_排出量結(jié)果可知，茯苓皮乙酸乙酯提取物在增加尿量的同時(shí)，也可明顯增加電解質(zhì)Na+及Cl—的排出特別是Na+排出而減少K+排出。與生理鹽水對(duì)照組比較，小、中、大3個(gè)劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)Na+的排出量分別增加了 12. 3%、16. 1%、27. 0%，均存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性差異；小、中、大3個(gè)劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)Cr的排出量均有增加的趨勢(shì)，Cr的排出量分別增加了 5. 0%、6. 3%、13. 9%，但僅大劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)Cl—的排出量存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性差異。與生理鹽水對(duì)照組比較，小、中、大3個(gè)劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)K+的排出量分別減少了7. 5%、11. 0%、17. 0%，小、中、大3個(gè)劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)K+的排出量均有降低的趨勢(shì)，但僅大劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)K+的排出量存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性差異。與生理鹽水對(duì)照組比較，小、中、大3個(gè)劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物Na+/K+比值均有增加的趨勢(shì)，且均存在著統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性差異，大劑量組Na+/K+比值接近于呋塞米組。小和大劑量茯苓皮乙酸乙酯提取物對(duì)尿液pH有顯著的影響。上述結(jié)果證明茯苓皮乙酸乙酯提取物在促進(jìn)鈉排泄的同時(shí)具有保鉀的作用。茯苓皮乙酸乙酯提取物的利尿作用可能主要是由于抑制了腎小管對(duì)電解質(zhì)和水的重吸收而產(chǎn)生的，茯苓皮主要含有三萜類化學(xué)成分，三萜成分與醛固酮及醛固酮的拮抗劑(如螺內(nèi)酯等)結(jié)構(gòu)相似，所以茯苓皮乙酸乙酯提取物的利尿作用也可能是拮抗醛固酮使Na+/ K+平衡發(fā)生改變。
權(quán)利要求
1.茯苓皮提取物，其特征在于茯苓皮提取物通過(guò)以下步驟得到 (1)茯苓皮經(jīng)干燥、粉碎后，乙醇浸泡、滲漉，回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物； (2)棕色膏狀物用水溶解，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得膏狀物； (3)步驟(2)所得膏狀物溶于乙醇，用硅膠拌樣，上100-200目的硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯洗脫液洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，最后得茯苓皮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的茯苓皮提取物，其特征在于步驟(I)中，用3-7倍體積的95%乙醇浸泡12-36小時(shí)后開(kāi)始滲漉。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的茯苓皮提取物，其特征在于步驟(2)中，用乙酸乙酯萃取3- 5 次。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的茯苓皮提取物，其特征在于步驟(3)中，使用石油醚-乙酸乙酯體積比為7:3飛:5洗脫液洗脫。
5.權(quán)利要求I所述茯苓皮提取物的提取方法，其特征在于包括以下步驟 (1)茯苓皮經(jīng)干燥、粉碎后，乙醇浸泡、滲漉，回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物； (2)棕色膏狀物用水溶解，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得膏狀物； (3)膏狀物溶于乙醇，用硅膠拌樣，上100-200目的硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯洗脫液洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，最后得茯苓皮提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的茯苓皮提取物的提取方法，其特征在于步驟(I)中，用3-7倍體積的95%乙醇浸泡12-36小時(shí)后開(kāi)始滲漉。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的茯苓皮提取物的提取方法，其特征在于步驟(2)中，用乙酸乙酯萃取3-5次。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的茯苓皮提取物的提取方法，其特征在于步驟(3)中，使用石油醚-乙酸乙酯體積比為7:3飛:5洗脫液洗脫。
9.權(quán)利要求I所述茯苓皮提取物在制備利尿作用藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種茯苓皮提取物，其通過(guò)以下步驟得到(1)茯苓皮經(jīng)干燥、粉碎后，乙醇浸泡、滲漉，回收乙醇，濃縮得棕色膏狀物；(2)棕色膏狀物用水溶解，乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，濃縮得膏狀物；(3)步驟(2)所得膏狀物溶于乙醇，用硅膠拌樣，上100-200目的硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯洗脫液洗脫，收集洗脫液，合并，濃縮，最后得茯苓皮提取物。本發(fā)明提取物有保鉀排鈉的作用，其利尿作用比速尿作用時(shí)間長(zhǎng)，具有長(zhǎng)效、毒副作用低等特點(diǎn)，可為臨床提供一種新的利尿藥物候選藥物。
文檔編號(hào)A61P7/10GK102697820SQ20121016861
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月28日
發(fā)明者孫文基, 林瑞超, 程顯隆, 趙英永, 魏鋒 申請(qǐng)人:西北大學(xué)