專利名稱：齊墩果酸和維甲酸藥物組合在治療胰島素抵抗和糖尿病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及齊墩果酸和維甲酸藥物組合的用途，具體指齊墩果酸和維甲酸藥物組合在治療胰島素抵抗和糖尿病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來，隨著人們生活方式的轉(zhuǎn)變，糖尿病的發(fā)病率逐年增加。美國糖尿病協(xié)會推測，至2030年，全球?qū)⒂?5億人患有糖尿病及其并發(fā)癥。最近，我國的一項調(diào)查顯示，目前我國糖尿病患病人數(shù)已達9200萬，僅次于印度。糖尿病對全球尤其是發(fā)展中國家的經(jīng)濟發(fā)展產(chǎn)生了巨大的壓力，據(jù)統(tǒng)計，發(fā)展中國家用于糖尿病方面的費用支出超出了衛(wèi)生費用預算的10%。糖尿病患者中90%以上是2型糖尿病患者，胰島素抵抗是2型糖尿病的基本特 征。胰島素抵抗是指肝、肌肉、脂肪等胰島素作用的靶組織，不能響應(yīng)胰島素導致胰島素的降血糖作用減弱甚至缺失的病理狀態(tài)。除2型糖尿病之外，胰島素抵抗還與高血壓、動脈粥樣硬化、代謝綜合征、卵巢囊腫、阿爾茨海默癥、腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，對胰島素抵抗的發(fā)病機制及防治研究顯得尤為重要。目前，用于治療胰島素抵抗和糖尿病的有效藥物主要包括噻唑烷二酮類藥物和二甲雙胍等，這些藥物的肝腎毒性比較大。在正常的胰島素信號傳導中，胰島素與其受體結(jié)合啟動胰島素信號，激活受體內(nèi)源性蛋白酪氨酸激酶活性，導致受體細胞質(zhì)一側(cè)的酪氨酸磷酸化。激活的受體，反過來又募集并磷酸化一系列底物分子。進而激活磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphoinositide-3-kinase, PI3K) / 蛋白激酶 B (Protein kinase B, Akt)。蛋白激酶B是胰島素信號傳導過程中的一種重要的激酶，胰島素刺激條件下其磷酸化水平的高低常被用來作為胰島素信號傳導是否正常的指標。胰島素抵抗發(fā)生時，胰島素刺激的蛋白激酶B磷酸化水平明顯降低。齊墩果酸(Oleanolic acid，0A)是一種天然三萜系化合物，并且是許多皂苷的苷配基，其結(jié)構(gòu)式見圖I。齊墩果酸大量存在于各種食物(菜子油)中，并且是許多植物葉子和根莖的成分，包括 Olea europaea、Viscum album L. >Aralia chinensis L 和其它超過 120種天然植物。齊墩果酸作為中藥的有效成分已經(jīng)有20多年的使用歷史，主要用于治療病毒性肝炎。有研究發(fā)現(xiàn)齊墩果酸可以保護小鼠免受各種肝毒物和親電子物，包括四氯化碳、對乙酰氨基酚、溴化苯和硫代乙酰胺等的損傷。給予齊墩果酸后，齊墩果酸主要分布于肝臟并在肝臟代謝。小鼠預先給予齊墩果酸，可以降低肝毒物引起的轉(zhuǎn)氨酶的升高并抑制肝小葉中心壞死。此外，有大量的研究報道富含齊墩果酸的天然藥物和齊墩果酸的合成衍生物表現(xiàn)出一系列的藥理學功能，包括抗炎、抗腫瘤、促進凋亡等作用。維甲酸(retinoic acid，RA)，又稱視黃酸、維生素甲酸、維A酸等，是動物體內(nèi)維生素A的代謝中間產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)式見圖2。有著廣泛的生理學和藥理學活性。β_胡蘿卜素在腸道被腸粘膜β-胡蘿卜素加氧酶氧化生成2個分子的視黃醇，即維生素Α。后者被吸收入體內(nèi)被氧化成視黃醛.再進一步被氧化成視黃酸(即維甲酸)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是將齊墩果酸和維甲酸藥物組合應(yīng)用于治療胰島素抵抗和糖尿病的藥物中。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下一種用于治療胰島素抵抗和糖尿病的組合物，該組合物包括齊墩果酸和維甲酸藥物。一種齊墩果酸和維甲酸藥物組合的用途，用于治療胰島素抵抗和糖尿病的藥物中。本發(fā)明的測定結(jié)果表明在糖尿病大鼠中，齊墩果酸和維甲酸都可以使血糖降低，齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合應(yīng)用使血糖降低更為明顯。齊墩果酸和維甲酸培養(yǎng)細胞中，胰島素刺激的蛋白激酶B磷酸化水平顯著增強，明顯抑制氧化應(yīng)激誘導的蛋白激酶B磷酸化水平 的降低，從而驗證了齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合應(yīng)用在治療胰島素抵抗和糖尿病中的有效性。本發(fā)明的特點為應(yīng)用具有保肝效用的齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合應(yīng)用，治療胰島素抵抗和糖尿病，與現(xiàn)有糖尿病治療藥物相比，既保證了改善胰島素抵抗和降血糖的有效性，又可發(fā)揮齊墩果酸的保肝效用。


圖I是齊墩果酸結(jié)構(gòu)式。圖2是維甲酸結(jié)構(gòu)式。圖3是齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合應(yīng)用降血糖效果圖。圖4是齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合應(yīng)用增強蛋白激酶B磷酸化圖。
具體實施例方式下面通過實例對本發(fā)明做進一步說明，其目的在于更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，而非限制本發(fā)明的保護范圍。實施例I.實驗儀器血糖測定儀(美國強生公司)、精密電子天平、Iml注射器等。2.實驗動物與材料2. I實驗動物SD大鼠，清潔級，雄性，體重180±220g，有第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供。BRL-3A大鼠正常肝細胞系，購于武漢細胞典藏中心。2. 2實驗材料生理鹽水、苦味酸、血糖試紙、胰島素。3.實驗方法選用40只SD大鼠，清潔級、雄性、體重180 土 220g，隨機分為正常對照組(8只)和模型組(32)，分別標記。模型組動物腹腔注射鏈脲佐菌素構(gòu)建糖尿病動物模型。待模型組動物血糖升高，達到糖尿病診斷標準后，將模型組動物隨機分為陽性對照組(8只)、齊墩果酸治療組(8只)、維甲酸治療組(8只)和齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合治療組(8只)，齊墩果酸治療組動物每天腹腔注射20mg/kg齊墩果酸，維甲酸治療組動物每天腹腔注射20mg/kg維甲酸治療組，齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合治療組每天腹腔注射10mg/kg齊墩果酸和10mg/kg維甲酸(兩者的質(zhì)量比為I : 1)，持續(xù)2周。陽性對照組動物注射同樣體積的給藥溶劑。2周后，測定空腹血糖水平。用DMEM培養(yǎng)基(加10%胎牛血清)在6孔板里培養(yǎng)大鼠正常肝細胞系(BRL-3A)，當細胞生長至80-90%密度時，換成無血清DMEM培養(yǎng)基，用無血清DMEM培養(yǎng)基溶解不同濃度的齊墩果酸和維甲酸培養(yǎng)細胞24小時，培養(yǎng)結(jié)束后，用IOOnM胰島素刺激15分鐘，加入細胞裂解緩沖液，收集裂解細胞，進行蛋白檢測(Western blot)，測定蛋白激酶B的磷酸化水平。4.實驗結(jié)果4. I如圖3所示，陽性組動物平均空腹血糖值為24. 62 土 2. 26mmol/L,齊墩 果酸治療組動物平均空腹血糖值為20. 06±1.48mmol/L，維甲酸治療組動物平均空腹血糖值為20. 36±1.04mmol/L，齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合治療組動物平均空腹血糖值為12. 30±3. 23mmol/L04. 2如圖4所示，與正常對照相比，齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合處理組胰島素刺激的蛋白激酶B磷酸化水平明顯增高。另外，將齊墩果酸和維甲酸分別取在組合物中的質(zhì)量百分比為40%和60% ;齊墩果酸和維甲酸分別取在組合物中的質(zhì)量百分比為60%和40%;對上述兩種不同組分的組合物進行試驗，與單一使用齊墩果酸或維甲酸相比同樣取得了較好的效果?？梢姡景l(fā)明利用齊墩果酸和維甲酸聯(lián)合用于治療胰島素抵抗和糖尿病的藥物中是可行的。
權(quán)利要求
1.一種用于治療胰島素抵抗和糖尿病的組合物，其特征在于該組合物由齊墩果酸和維甲酸組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于齊墩果酸在組合物中的質(zhì)量百分比為40% -60% ;維甲酸在組合物中的質(zhì)量百分比為40% -60%。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的組合物，其特征在于齊墩果酸、維甲酸在組合物中的質(zhì)量百分比均為50%。
4.一種齊墩果酸和維甲酸組合物在治療胰島素抵抗和糖尿病的藥物中的用途。
全文摘要
發(fā)明公開了一種齊墩果酸和維甲酸藥物組合的用途，用于治療胰島素抵抗和糖尿病的藥物中。糖尿病動物腹腔注射齊墩果酸和維甲酸藥物組合，可以使血糖水平顯著降低，在培養(yǎng)肝細胞的培養(yǎng)液中加入齊墩果酸和維甲酸藥物組合可以顯著地促進胰島素信號的傳導。因此，齊墩果酸和維甲酸藥物組合可用于治療糖尿病、胰島素抵抗以及和胰島素抵抗密切相關(guān)的代謝綜合征的藥物中。
文檔編號A61K31/56GK102764262SQ20121018661
公開日2012年11月7日 申請日期2012年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月7日
發(fā)明者海春旭, 王欣 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學