一種皮炎診斷貼劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種皮炎診斷貼劑及其制備方法。所述皮炎診斷貼劑包括：一含有硫酸鎳的凝膠層；一載體；和一粘性材料。
【專利說明】一種皮炎診斷貼劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于生化【技術領域】，具體涉及一種皮炎診斷貼劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]接觸性皮炎是指皮膚由于接觸外界物質，如金屬、化妝品和藥物等而發(fā)生的炎性反應，其臨床癥狀與接觸物的抗原性強弱及個體體質的敏感程度有關。輕者僅表現(xiàn)血管擴張，充血性紅斑和水腫，重者在紅斑基礎上發(fā)生丘疹、水皰、大皰，甚至出現(xiàn)燙傷樣表皮壞死，皮損通常邊界不清。可引起接觸性皮炎的物質有很多，有些物質在低濃度時表現(xiàn)為致敏作用，在高濃度時則有刺激性和毒性，按其性質可分為三類:第一類、動物性來源:動物毒素、昆蟲分泌物、毒毛等；第二類、植物性來源:花粉、植物葉、莖、花及果實等；第三類、化學物質:也是引發(fā)接觸性皮炎的主要致敏原，主要包括金屬及其制品、塑料、橡膠和香料等。
[0003]通常所講的接觸性皮炎是指過敏性接觸性皮炎，是機體對透過皮膚進入體內的化學物質的一種適應性免疫反應，屬于IV型變態(tài)反應。它分為兩個階段:初始致敏階段和隨后的激發(fā)階段。在初始致敏階段，進入體內的小分子半抗原物質(分子量一般小于500Da)，如油漆、燃料、農(nóng)藥、化妝品和某些藥物(磺胺和青霉素)等與表皮細胞的膜蛋白結合形成完全抗原，經(jīng)抗原遞呈細胞(如朗格漢斯細胞)“攝取”并被提呈給T細胞，使其活化并分化為過敏原特異性的效應T細胞。激發(fā)階段:已被致敏的機體若再次接觸過敏原則表現(xiàn)出皮膚變態(tài)反應癥狀，即過敏性接觸性皮炎癥狀。臨床癥狀:局部皮膚出現(xiàn)紅腫、皮疹、水皰，嚴重者可出現(xiàn)剝脫性皮炎。反應機理:這是一種抗原誘導的T細胞免疫應答反應，機體被致敏后再次接觸相應致敏原，抗原特異性T細胞被激活并招募至致敏部位，皮膚細胞和效應T細胞釋放細胞因子、趨化因子和細胞毒素，引起局部血管刺激，巨噬細胞和嗜酸性細胞的聚集及隨后的級聯(lián)放大反應。過敏性接觸性皮炎患者即使接觸很低劑量或日常使用劑量的化學物質即會發(fā)生明顯的皮炎癥狀，這些低劑量的化學物質本身不會對人體構成威脅，反而是機體的過度反應損傷了人體自身組織，影響患者正常的工作和生活。
[0004]數(shù)據(jù)表明對特定致敏原的接觸性過敏的發(fā)生率在不同國家間是不同的，而且隨著周圍環(huán)境和社會的發(fā)展變化，對特定致敏原的接觸性過敏的發(fā)生率亦會隨之而變化。周圍環(huán)境中致敏原的種類主要取決于氣候(例如，尼日利亞的鉻過敏主要是由于氣候溫暖人們經(jīng)常穿皮涼鞋所致)、職業(yè)(例如，印度的農(nóng)場工人中接觸性皮炎是由于對銀膠菊過敏)、文化習慣(例如，佩帶首飾易致鎳過敏)和立法(例如，丹麥對鎳的調控)等。因此，對接觸性過敏的流行病學統(tǒng)計數(shù)據(jù)會受時間和地區(qū)的局限，而且會隨著時間和地區(qū)這些決定性因素的變化而變化。
[0005]臨床上使用斑貼試驗診斷過敏性接觸性皮炎已經(jīng)有一百多年的歷史，其診斷機理就是人為地誘發(fā)過敏患者的IV型變態(tài)反應，造成皮膚表面明顯的皮損，從而判斷患者對哪種物質過敏。傳統(tǒng)斑貼試驗是臨床醫(yī)生使用凡士林或者蒸餾水等做稀釋基質自制斑貼產(chǎn)品進行檢測。隨著越來越多的化工產(chǎn)品被應用到各個領域，日常生活和工作環(huán)境中人們接觸各種致敏物的幾率在增大，因此變態(tài)反應性皮膚病的發(fā)病率在逐步上升。通過斑貼試驗尋找致敏原，確定其與臨床的相關性，指導患者避免接觸該類物質，從而避免變態(tài)反應性皮膚病的復發(fā)和惡化，是預防過敏性接觸性皮炎的重要措施。
[0006]各國根據(jù)本國的情況，通過對周圍環(huán)境及日常生活中常見致敏原的調查分析，組合成一套斑貼試驗標準變應原系列，其中以歐洲標準變應原系列和北美標準變應原系列應用最為廣泛。歐洲標準變應原系列含有26種檢測過敏原，北美標準變應原系列含有24種檢測過敏原。這兩個標準變應原系列中某些抗原是相同的，而某些抗原則因地區(qū)差異而不同，目前我國尚無標準變應原系列。因此，本領域迫切需要制定適合我國國情的接觸性皮炎變應原檢測系列，并制備相應變應原品種的皮炎診斷貼劑。
[0007]硫酸鎳在我國是接觸性皮炎常見過敏原之一，臨床上常見因硫酸鎳過敏引起的接觸性皮炎患者，因此，制備含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑，開展早期診斷促使患者嚴格避免過敏原的再接觸就顯得尤為迫切。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明旨在提供一種皮炎診斷貼劑。
[0009]在本發(fā)明的第一方面，提供了一種皮炎診斷貼劑，所述貼劑包括:
[0010]一含有硫酸鎳的凝膠層；
[0011]—載體；和
[0012]一粘性材料。
[0013]在另一優(yōu)選例中，所述皮炎是接觸性皮炎。具體地說，所述皮炎是指由IV型變態(tài)反應引起的過敏性接觸性皮炎。
[0014]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層包含硫酸鎳、成膜基質和溶劑；更優(yōu)選所述含有硫酸鎳的凝膠層由硫酸鎳、成膜基質和溶劑組成。
[0015]在另一優(yōu)選例中，所述成膜基質為聚維酮，更優(yōu)選聚維酮K90。
[0016]在另一優(yōu)選例中，所述溶劑為純化水與無水乙醇的組合。
[0017]在另一優(yōu)選例中，在制備所述含有硫酸鎳的凝膠層時，在配制成膜液中，所述聚維酮與所述溶劑的質量比較佳的為1:4-1:20，更佳的為1:5-1:15，最佳的為1:9 ;所述溶劑優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合，所述純化水與所述無水乙醇的質量比較佳的為1:1-5:1，更佳的為2:1-4:1，最佳的為3:1。
[0018]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層的厚度為1-50 Pm，更優(yōu)選為2-30 u m,最優(yōu)選為 3-10 u m。
[0019]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層的面積為0.5-14cm2，更優(yōu)選為0.7_3cm2,最優(yōu)選為 0.8_lcm2。
[0020]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層的形狀為帶棱角的形狀；更優(yōu)選為正方形或者矩形。
[0021]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層為0.9cmX0.9cm的正方形。
[0022]在另一優(yōu)選例中，皮炎診斷貼劑至少一個載體固定于粘性材料上，至少一個載體上覆有含有硫酸鎳的凝膠層。
[0023]在另一優(yōu)選例中，所述載體材料為聚氯乙烯。
[0024]在另一優(yōu)選例中，所述粘性材料為醫(yī)用膠帶；更佳地，所述醫(yī)用膠帶主要由無紡布和醫(yī)用壓敏膠材料組成。
[0025]在另一優(yōu)選例中，所述載體的面積為0.5_14cm2，更優(yōu)選為0.7_3cm2，最優(yōu)選為
0.8_lcm2。
[0026]在另一優(yōu)選例中，所述載體的形狀為帶棱角的形狀；更優(yōu)選為正方形或者矩形。
[0027]在另一優(yōu)選例中，所述載體為0.9cm X0.9cm的正方形。
[0028]在另一優(yōu)選例中，所述載體的面積大于或等于所述含有硫酸鎳的凝膠層的面積。
[0029]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層與所述載體的形狀相同、面積相等，并且兩者完全重合緊貼在一起。
[0030]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層上覆蓋有可剝離紙，所述可剝離紙的部分與所述粘性材料相接觸并固定；優(yōu)選所述可剝離紙為離型紙。
[0031]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層中硫酸鎳的濃度以鎳計算為20-100 u g/cm2。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層中硫酸鎳的濃度以鎳計算為40-50 V- g/cm2 ;更優(yōu)選為 45 u g/cm2。
[0033]在另一優(yōu)選例中，所述硫酸鎳選自無水硫酸鎳、六水合硫酸鎳、七水合硫酸鎳。
[0034]在本發(fā)明的第二方面，提供了一種如上所述的本發(fā)明提供的皮炎診斷貼劑的制備方法，所述方法包括步驟:
[0035](I)將溶劑、硫酸鎳和成膜基質混合、溶解，除氣泡后獲得成膜液；
[0036](2)將成膜液在載體上涂膜、干燥，使載體上覆有含有硫酸鎳的凝膠層；和
[0037](3)切片，組裝在粘性材料上，得到如上所述的本發(fā)明提供的皮炎診斷貼劑。
[0038]在另一優(yōu)選例中，步驟(1)中，所述成膜基質與溶劑的質量比為1:4-1:20 ;更優(yōu)選為1:5-1:15 ;最優(yōu)選為1:9 ;所述硫酸鎳的質量一般為所述溶劑與成膜基質質量之和的1%-10%，更優(yōu)選為2%-5%，最優(yōu)選為3%-4%。
[0039]在另一優(yōu)選例中，所述硫酸鎳選自無水硫酸鎳、六水合硫酸鎳、七水合硫酸鎳。
[0040]在另一優(yōu)選例中，所述成膜基質為聚維酮，更優(yōu)選聚維酮K90。
[0041]在另一優(yōu)選例中，所述溶劑為純化水與無水乙醇的組合。更優(yōu)選，所述純化水與所述無水乙醇的質量比較佳的為1:1-5:1，更佳的為2:1-4:1，最佳的為3:1。
[0042]在另一優(yōu)選例中，所述載體材料為聚氯乙烯。
[0043]在另一優(yōu)選例中，所述粘性材料為醫(yī)用膠帶。
[0044]在另一優(yōu)選例中，所述醫(yī)用膠帶主要由無紡布和醫(yī)用壓敏膠材料組成。
[0045]在另一優(yōu)選例中，步驟(3 )中，所述切片是將覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體分割成面積為0.5-14cm2,更優(yōu)選為0.7-3cm2,最優(yōu)選為0.8-1 cm2的帶棱角的形狀；更優(yōu)選是正方形或者矩形。
[0046]在另一優(yōu)選例中，步驟(3 )中，所述切片是將覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體分割成
0.9cm X0.9cm的正方形。
[0047]在另一優(yōu)選例中，步驟(2)中，所述涂膜厚度為50-500 ii m ;更優(yōu)選為70-200 ii m，最優(yōu)選為100 Ii m。
[0048]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層的厚度為1-50 Pm，更優(yōu)選為2-30 u m,最優(yōu)選為 3-10 u m。[0049]在另一優(yōu)選例中，所述含有硫酸鎳的凝膠層中硫酸鎳的濃度以鎳計算為20-100 V- g/cm2,更優(yōu)選為 40-50 ii g/cm2 ;最優(yōu)選為 45 y g/cm2。
[0050]據(jù)此，本發(fā)明提供了一種含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑，以利開展早期診斷促使患者嚴格避免過敏原的再接觸。
【具體實施方式】
[0051]發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，發(fā)現(xiàn)了一種含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑，所述貼劑是由至少一個載體固定于粘性材料上，其中，至少一個所述載體上覆有含有硫酸鎳的凝月父層。
[0052]本發(fā)明所述的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑應用于斑貼試驗，但采用了“含有硫酸鎳的凝膠層”，硫酸鎳分布更加均勻，并且去除了傳統(tǒng)斑試器給患者帶來的異樣感，同時載體也能達到同斑試器一樣的局部封閉效果。
[0053]此處，“至少一個”指本發(fā)明的皮炎診斷貼劑可以有多個載體，其上可以分別覆有含變應原的凝膠層。所述變應原包括但不限于，硫酸鎳、羊毛醇、硫酸新霉素、重鉻酸鉀、苯佐卡因、香料化合物(包括香葉醇、羥基香茅醛、桂皮醛、丁香酚、戊基桂皮醛、異丁香酚、桂皮醇或其組合)、松香、雙酚A型環(huán)氧樹脂、喹啉化合物(包括氯碘喹啉、氯喹那多或其組合)、秘魯香脂、乙二胺、氯化鈷、布地奈德、桿菌肽、硫酸鎳、對叔丁基酚甲醛樹脂、對羥基苯甲酸酯化合物(包括對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸丁酯或其組合)、卡巴化合物(包括1，3_ 二苯基胍(DPG)、二乙基二硫氨甲酸鋅(ZDC)、二丁基二硫氨甲酸鋅(ZBC)或其組合)、黑橡膠化合物(包括N-異丙基-N’ -苯基-對苯二胺(IPro )、N，N’ - 二苯基-對苯二胺(DPPD)、N-環(huán)己基-N’ -苯基-對苯二胺(CPPD)或其組合)、夸特15、巰基苯并噻唑、對苯二胺、甲醛、巰基化合物(包括環(huán)己基苯并噻唑亞磺酰胺(CBS )、二苯并噻唑二硫化物(MBTS )、嗎啉塞巰基苯并噻唑(MOR )或其組合)、硫柳汞、秋蘭姆化合物(包括一硫化四甲基秋 蘭姆(TMTM)、二硫化四甲基秋蘭姆(TMTD)、二硫化四乙基秋蘭姆(TETD)、二硫化雙亞戊基秋蘭姆(PTD)或其組合)、咪唑烷基脲、重氮咪唑烷基脲、丁酸氫化可的松、溴硝丙二醇等。
[0054]在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，所述含有硫酸鎳的凝膠層包含硫酸鎳、成膜基質以及溶劑。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述含有硫酸鎳的凝膠層是由硫酸鎳、成膜基質以及溶劑組成的。
[0055]如本發(fā)明所用，“硫酸鎳”(英文名:Nickelous sulfate),有無水物、六水物和七水物三種。優(yōu)選六水物。有a-型和P -型兩種變體，前者為藍色四方結晶，后者為綠色單斜結晶。加熱至103° C時失去六個結晶水。溶于水，水溶液呈酸性；易溶于醇和氨水。
[0056]在一定面積范圍內，面積不同，化學致命物質的總劑量即使相差數(shù)倍至十多倍，但只要單位面積內化學致敏物質的劑量(即本發(fā)明的所述硫酸鎳濃度)一致，則對人體皮膚的致敏效果沒有差異。因此，本發(fā)明在優(yōu)選實施方案中，限定了凝膠層的面積范圍、以及硫酸鎳的濃度范圍，即可以保證檢測效果。
[0057]如本發(fā)明所用，“接觸性皮炎”是機體對透過皮膚進入體內的化學物質的一種適應性免疫反應，屬于IV型變態(tài)反應。其臨床特點為在接觸部位發(fā)生邊緣鮮明的損害，輕者為水腫性紅斑，較重者有丘疹、水疙甚至大疤，更嚴重者則可有表皮松解，甚至壞死。[0058]當本發(fā)明皮炎診斷貼劑上的載體有多個時，為了避免鄰近的不同變應原對檢測結果判讀的干擾，相鄰載體的間距宜大于等于0.2cm，較佳的大于等于0.5cm，更佳的大于等于 1cm。
[0059]在本發(fā)明中，將溶解后的硫酸鎳均勻混合在聚維酮(例如聚維酮K90)中干燥成膜(凝膠層)，使凝膠層中的過敏原呈晶體化、微?；癄顟B(tài)，達到最高的均勻度及釋放度。所述聚維酮是由乙烯基吡咯烷酮聚合而得，英文簡稱PVP，分子量5000-700000。聚維酮是一種非離子型高分子化合物，是一種合成水溶性高分子化合物，具有水溶性高分子化合物的一般性質，膠體保護作用、成膜性、粘結性、吸濕性、增溶或凝聚作用，優(yōu)異的溶解性能及生理相容性。聚維酮為白色或乳白色、無臭或幾乎無臭、易流動的無定形粉末，有吸濕性。具有優(yōu)良的溶解性，可溶于水、含氯類溶劑、乙醇、胺及低分子脂肪酸，與多數(shù)無機鹽和多種樹脂相容，不溶于乙醚和丙酮。聚維酮具有優(yōu)良的生理惰性和生物相容性，對皮膚、眼睛、黏膜無刺激或過敏，無毒(LD5tl > 13000mg/kg)。其不參與人體新陳代謝，又具有優(yōu)良的生物相容性，對皮膚、粘膜、眼等不形成任何刺激，對皮膚無過敏反應，被廣泛地用作藥物制劑的輔料。
[0060]聚維酮按其平均分子量有K15、K25、K30、K60、K90等規(guī)格，K值越大，分子量越大，不同的K值分別代表相應的聚維酮平均分子量范圍。K值實際上是與聚維酮水溶液的相對粘度有關的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關的物理量，因此可以用K值來表征聚維酮的平均分子量。通常K值越大，其粘度越大，粘接性越強。在本發(fā)明的一個實施方案中，選用了聚維酮K90作為成膜基質。從本發(fā)明的實施例4可以看出，采用了聚維酮K90作為成膜基質，成膜(凝膠層)效果好，膜(凝膠層)表面均一，并且不易脫膜(凝膠層)。
[0061]在本發(fā)明所述含有硫酸鎳的凝膠層中，所述硫酸鎳的濃度以鎳計算，較佳的為20-100 ii g/cm2，更佳的為40-50ii g/cm2，最佳的為45 ii g/cm2。在一個優(yōu)選的實施方案中，在制備本發(fā)明所述含有硫酸鎳的凝膠層時，在配制成膜液中，所述聚維酮(優(yōu)選聚維酮K90)與所述溶劑(優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合)的質量比較佳的為1:4-1:20，更佳的為1:5-1:15，最佳的為1:9 ;所述溶劑優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合，所述純化水與所述無水乙醇的質量比較佳的為1:1-5:1，更佳的為2:1-4:1，最佳的為3:1。所述硫酸鎳(優(yōu)選六水合硫酸鎳)添加的質量一般為所述 溶劑(優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合)與成膜基質(優(yōu)選聚維酮K90)質量之和的1%_10%，更優(yōu)選為2%-5%，最優(yōu)選為3%-4%。
[0062]在本發(fā)明中，所述含有硫酸鎳的凝膠層的厚度一般為1-50 ym，較佳的為2-30 u m,更佳的為3-10 u m。所述含有硫酸鎳的凝膠層的面積一般為0.5-14cm2,較佳的為
0.7_3cm2,更佳的為 0.8-1 cm2 o
[0063]本發(fā)明所述載體不應該包含任何可能對皮膚產(chǎn)生刺激的物質，并且載體能達到與傳統(tǒng)斑試器相同的局部封閉效果。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，所述載體的材料為聚氯乙烯。此外，對于載體的形狀沒有太多的限制，一般與含有硫酸鎳的凝膠層的形狀一致(兩者緊貼在一起)。然而，刺激性皮膚反應病灶呈現(xiàn)的形狀多與接觸到的載體形狀相同，而真正由過敏原引起的接觸性過敏反應皮疹部位一般都呈現(xiàn)圓形，如果選用圓形載體，則容易混淆，影響結果判讀。因此，載體與其之上的含有硫酸鎳的凝膠層的形狀優(yōu)選正方形或者矩形等帶棱角的形狀。在本發(fā)明的一個實施方案中，選擇了 0.9cmX0.9cm的正方形。
[0064]在一個較佳的實施方案中，所述含有硫酸鎳的凝膠層上還覆蓋有可剝離紙，所述可剝離紙的部分與所述粘性材料相接觸并固定。對于可剝離紙的選擇主要考慮其密封性、不與硫酸鎳反應、在撕離時不吸附硫酸鎳而影響其含量。在一個更佳的實施方案中，所述可剝離紙為離型紙。所述可剝離紙(優(yōu)選離型紙)是在貼劑施用于患者皮膚前去除。
[0065]為了便于保存與運輸，本發(fā)明皮炎診斷貼劑可以密封保存，優(yōu)選地可以密封保存于醫(yī)用復合鋁箔袋中。為了防止空氣、水分與光對所述皮炎診斷貼劑的影響，可以適當抽真空，加入惰性氣體，或者加入干燥劑(片)等，這些也是本領域技術人員所熟知的。
[0066]本發(fā)明還提供了一種制備所述皮炎診斷貼劑的方法，包括如下步驟:
[0067](I)將溶劑、硫酸鎳和成膜基質混合、溶解，除氣泡后獲得成膜液；
[0068](2)將成膜液在載體上涂膜、干燥，使載體上覆有含有硫酸鎳的凝膠層；
[0069](3)切片，組裝在粘性材料上，得到所述皮炎診斷貼劑。
[0070]在一個較佳的實施方案中，所述制備方法，包括如下步驟:
[0071]I)制備成膜液
[0072]將溶劑、硫酸鎳和成膜基質混合、溶解，除氣泡后獲得成膜液。其中，所述硫酸鎳選自無水硫酸鎳、六水合硫酸鎳、七水合硫酸鎳。所述溶劑優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合，所述純化水與所述無水乙醇的質量比較佳的為1:1-5:1，更佳的為2:1-4:1，最佳的為3:1。所述聚維酮(優(yōu)選聚維酮K90)與所述溶劑(優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合)的質量比較佳的為1:4-1:20，更佳的為1:5-1:15，最佳的為1:9。所述硫酸鎳(優(yōu)選六水合硫酸鎳)添加的質量一般為所述溶劑(優(yōu)選純化水與無水乙醇的組合)與所述聚維酮(優(yōu)選聚維酮K90)質量之和的1%-10% (較佳的為2%-5%，更佳的為3%-4%)。此外，攪拌時間優(yōu)選至少I小時以上，更優(yōu)選2小時以上，最優(yōu)選3小時以上。對于除氣泡的方法，可以采用靜置(一般為5-10分鐘)除氣泡，離心(一般為5，000-10, OOOrpm, 5-10分鐘)除氣泡，或者抽真空除氣泡方法等。
[0073]2)涂膜與干燥
[0074]將成膜液在載 體上涂膜、干燥，使載體上覆有含有硫酸鎳的凝膠層。對于本領域技術人員而言，可以使用自動涂膜機運行涂膜器涂膜，也可以使用手動涂膜器涂膜。其中，所述涂膜厚度優(yōu)選為50-500 u m,更優(yōu)選為70-200 u m,最優(yōu)選為100 u m。干燥的溫度優(yōu)選(TC -600C，更優(yōu)選 20°C -40°C，還要優(yōu)選 25°C -37°C ;濕度優(yōu)選 40%_70%，更優(yōu)選 45%_65% ；時間優(yōu)選10-60分鐘，更優(yōu)選20-60分鐘，還要優(yōu)選30-60分鐘，最優(yōu)選45分鐘。干燥成膜(即含有硫酸鎳的凝膠層)后，所述含有硫酸鎳的凝膠層的厚度一般為1-50 ym，較佳的為
2-30 u m,更佳的為 3-10 u m。
[0075]3)切片與組裝
[0076]切片，組裝在粘性材料上，得到所述皮炎診斷貼劑。所述切片是將覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體分割成面積為0.5-14cm2,更優(yōu)選為0.7-3cm2,最優(yōu)選為0.8-1 cm2的帶棱角的形狀；更優(yōu)選是正方形或者矩形。在本發(fā)明的一個實施方案中，選擇了 0.9cmX0.9cm的正方形。最后，將覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體固定于粘性材料(例如醫(yī)用膠帶)上。優(yōu)選地，所述含有硫酸鎳的凝膠層上還覆蓋有可剝離紙(例如離型紙)，所述可剝離紙(例如離型紙)的部分與所述粘性材料相接觸并固定。更優(yōu)選地，可以密封保存于醫(yī)用復合鋁箔袋中。
[0077]需要說明的是，當本發(fā)明皮炎診斷貼劑上的載體(其上可以分別覆有含不同變應原的凝膠層)有多個時，在制備本發(fā)明皮炎診斷貼劑時，包括如下步驟:①分別制備含有不同變應原的成膜液；②將成膜液分別在載體上涂膜、干燥，使載體上覆有含有變應原的凝膠層；③切片，將多個覆有含有變應原凝膠層的載體組裝在粘性材料上。為了避免鄰近的不同變應原對檢測結果判讀的干擾，相鄰載體的間距宜大于等于0.2cm，較佳的大于等于
0.5cm,更佳的大于等于1cm。
[0078]本發(fā)明提到的上述特征，或實施例提到的特征可以任意組合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。
[0079]本發(fā)明的主要優(yōu)點在于:
[0080]1、首次提供了含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑。
[0081]2、首次提供了靈敏度高、特異性強的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑。
[0082]3、首次提供了膜(凝膠層)表面均一，并且不易脫膜(凝膠層)的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑。
[0083]下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數(shù)、比率、比例、或份數(shù)按
重量計。
[0084]本發(fā)明中的重量體積百分比中的單位是本領域技術人員所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶質的重量。
[0085]除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相 似或均等的方法及材料皆可應用于本發(fā)明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。
[0086]實施例1含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑的制備
[0087](I)制備成膜液
[0088]
規(guī)格36 |ug/片(以鎳計)
NiS04‘6H203.5 g
聚維酮K90IOg
純化水67.5 g
無水乙醇_22.5 g
[0089]①根據(jù)上述比例，稱取純化水，加入六水合硫酸鎳，攪拌至完全溶解；
[0090]②再加入無水乙醇，邊攪拌邊緩慢加入聚維酮K90，封口后攪拌約3小時；
[0091]③完全溶解后，靜置除氣泡，即成硫酸鎳成膜溶液。
[0092](2)涂膜與干燥
[0093]將聚氯乙烯硬片貼于水平玻璃板上，確認平整無氣泡。將玻璃板固定于涂膜機上，將100 u m涂膜器放置在聚氯乙烯硬片上，倒入成膜液，運行涂膜機。
[0094]將上述涂好的膜置于室溫、濕度45%_65%的環(huán)境中干燥至膜表面不粘離型膜即可(約45分鐘)。
[0095](3)切片與組裝
[0096]制備好的膜(含有硫酸鎳的凝膠層)緊貼于聚氯乙烯硬片上，將其一起裁剪成0.9cmX0.9cm的正方形膜片(覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體)。
[0097]將上述0.9cmX0.9cm正方形膜片固定于醫(yī)用膠帶(主要由無紡布和醫(yī)用壓敏膠材料組成)的粘性面上，用防水不透氣的離型紙覆蓋其上，并用醫(yī)用復合鋁箔袋密閉封裝。
[0098]實施例2鎳離子(Ni2+)濃度(含量)的檢測
[0099]原理:在堿性溶液中，氧化劑(過硫酸銨)存在的條件下，鎳與顯色劑(丁二酮肟)形成酒紅色的可溶性絡合物，在波長465nm處有特征吸收峰，利用這一性質用分光光度檢測鎳離子(Ni2+)的濃度(含量)。
[0100](I)試劑配制
[0101]a) 20%酒石酸鉀鈉溶液:稱取20g酒石酸鉀鈉,加少量純化水溶解后定容至100ml,混勻。
[0102]b) 3%過硫酸銨溶液:稱取1.5g過硫酸銨，加入少量純化水溶解后定容至50ml，混
勻。避光保存，需當天配制。
[0103]c)5%Na0H溶液:稱取5g NaOH，加入少量純化水溶解后定容至100ml，混勻。
[0104]d) 1% 丁二酮肟溶液:稱取0.5g 丁二酮肟，加入少量5%Na0H溶液溶解后定容至50ml,混勻。需當天配制。
[0105](2)標準品系列濃度的配制
[0106]移取鎳離子標準品`溶液(lmg/ml)lml于25ml容量瓶中，用純化水稀釋至刻度。混勻后分別取4ml、3ml、2ml、lml、0.5ml至IOml離心管中，用純化水補至4ml。則標準品(Ni2+)系列濃度依次為 40 u g/ml>30 u g/ml、20 u g/ml> 10 u g/ml>5 u g/ml。
[0107](3)供試品溶液的制備
[0108]隨機抽取10片取自實施例1制備的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑上的硫酸鎳膜片(覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體)，分別置于5ml離心管中，每片各加2ml純化水，浸泡I小時，間歇振蕩2次，每次10-15秒，使之完全溶解，即供試液。
[0109](4)測定方法
[0110]a)取標準品系列濃度溶液和供試液各1.0ml于15ml具塞刻度試管中。以純化水為空白對照，作同樣處理。
[0111]b)分別加入20%酒石酸鉀鈉溶液1.0ml，5%NaOH溶液0.4ml, 3%過硫酸銨溶液
0.5ml,混勻。
[0112]c)再加入1% 丁二酮肟溶液0.3ml，然后加入純化水6.8ml，混勻，室溫反應15-20分鐘。
[0113]d)用石英比色皿于465nm波長處測定其吸光度。以空白對照校零。
[0114](5)試驗結果
[0115]a)繪制標準曲線
[0116]以標準品系列濃度溶液檢測的吸光度為橫坐標(X)，對應的標準品濃度為縱坐標(y )，繪制標準曲線y=ax+b。
[0117]b)計算鎳離子(Ni2+)的濃度(含量)
[0118]根據(jù)供試液的吸光度與標準曲線y=ax+b，計算供試液中鎳離子(Ni2+)的濃度，并換算成單個硫酸鎳膜片中的鎳離子(Ni2+)含量。
[0119]c )檢測結果[0120]計算結果單個硫酸鎳膜片中鎳離子(Ni2+)的含量為36.75iig (10次檢測的平均值)，即實施例1制備的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑中，含有硫酸鎳的凝膠層中鎳離子(Ni2+)的濃度為45.37 ii g/cm2。(單個膜片的面積為0.9cmX0.9cm=0.81cm2，因此，含有硫酸鎳的凝膠層中鎳離子(Ni2+)的濃度為36.75 ug^0.81cm2=45.37 u g/cm20)
[0121]實施例3斑貼試驗
[0122]共44例受試者，平均年齡(40.5±9.6)歲，男性25例，女性19例，其中在臨床上確診為硫酸鎳過敏的接觸性皮炎患者22例(陽性組)，非硫酸鎳過敏的接觸性皮炎患者22例(陰性組)。使用實施例1制備的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑對上述患者進行斑貼試驗，患`者必須持續(xù)粘貼至少48小時，注意保持試驗區(qū)干爽。結果判讀應在72-96小時期間進行，如果在揭下貼劑時即進行評估，則應在30分鐘后進行判讀，并在72-96小時期間進行補充
判讀。判讀標準如下表所示:
[0123]
_BM_逃_判定標準_
可疑反應？僅出現(xiàn)微弱的斑疹性紅斑
弱(非水泡性)陽性反 +紅斑、浸潤，可能有丘疹
強(水泡性)陽性反應 ++紅斑、浸潤、丘疹、水皰
極強陽性反應+++大皰反應
陰性反應-無反應
不同類型的刺激性反M/
IR 膿皰不伴有浸潤的斑片狀濾泡或均勻紅斑
(非討敏反M/i)
_未檢測_NT_
[0124]結果顯示:在22例陽性組中，有2例出現(xiàn)“極強陽性反應”(+++)，9例出現(xiàn)“強陽性反應”(++)，9例出現(xiàn)“弱陽性反應”(+ )，1例出現(xiàn)“可疑反應”(？)，1例出現(xiàn)“陰性反應”(_)。在22例陰性組中，有2例出現(xiàn)“弱陽性反應”(+ )，3例出現(xiàn)“可疑反應”(？)，19例出現(xiàn)“陰性反應”(_)。如以臨床診斷為硫酸鎳過敏的接觸性皮炎的診斷標準及排除標準，計算靈敏度與特異度的結果如下:
[0125]靈敏度(％)=斑貼試驗結果為陽性的人數(shù)/陽性組總人數(shù)=(2+9+9) + 22=90.91%
[0126]特異度(％) =斑貼試驗結果為陰性的人數(shù)/陰性組總人數(shù)=19 + 22=86.36%
[0127]因此，使用本發(fā)明的含有硫酸鎳的皮炎診斷貼劑進行斑貼試驗靈敏度高、特異性強。根據(jù)臨床確診為硫酸鎳過敏的接觸性皮炎組和非硫酸鎳過敏的接觸性皮炎組的檢測結果，本試驗靈敏度90.91%和特異度86.36%，與臨床診斷有很好的符合率，且不良反應少，可良好耐受。
[0128]實施例4不同成膜基質涂膜(凝膠層)比較
[0129]按照實施例1(1)、(2)的方法分別制備4種膜片(覆有含有硫酸鎳凝膠層的載體)，不切片，4種成膜液的配方如下:
[0130]膜片一:NiS04-6H,03.6 g
[0131]
聚維酮K905 g
純化水75 g
[0132]
無水乙醇_20 R
[0133]膜片二:
NiS04-6H203.3 g
聚維酮K9015 g
[0134]
純化水 60 g
無水乙醇_25 g
[0135]膜片三:
[0136]NiSO4 ? 6H203.1g
[0137]羥丙纖維素(HPC-HF )5g
[0138]純化水95g
[0139]_
[0140]膜片四:
[0141]NiSO4 ? 6H203.8g
[0142]甲基纖維素IOg
[0143]純化水90g
[0144]_
[0145]注:將甲基纖維素加入到預加熱至高溫(80°C左右)的純化水中高速攪拌分散均勻后,再迅速加入用純化水溶解好的NiSO4 ? 6H20并攪拌均勻。
[0146]觀察成膜效果，結果如下:
[0147]膜片一:成膜效果好，膜(凝膠層)表面均一，不易脫膜(凝膠層);
[0148]膜片二:成膜效果好，膜(凝膠層)表面均一，不易脫膜(凝膠層);
[0149]膜片三:成膜效果較差，膜(凝膠層)表面有花紋，易脫膜(凝膠層)；
[0150]膜片四:成膜效果較差，膜(凝膠層)表面有花紋，易脫膜(凝膠層)。
[0151]從上述成膜(凝膠層)效果看，采用聚維酮K90的成膜液成膜(凝膠層)效果好，膜(凝膠層)表面均一，并且不易脫膜(凝膠層)。
[0152]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用以限定本發(fā)明的實質技術內容范圍，本發(fā)明的實質技術內容是廣義地定義于申請的權利要求范圍中，任何他人完成的技術實體或方法，若是與申請的權利要求范圍所定義的完全相同，也或是一種等效的變更，均將被視為涵蓋于該權利要求范圍之中。
【權利要求】
1.一種皮炎診斷貼劑，其特征在于，所述貼劑包括: 一含有硫酸鎳的凝膠層； 一載體；和 一粘性材料。
2.如權利要求1所述的皮炎診斷貼劑，其特征在于，所述含有硫酸鎳的凝膠層包含硫酸鎳、成膜基質和溶劑；優(yōu)選所述含有硫酸鎳的凝膠層由硫酸鎳、成膜基質和溶劑組成。
3.如權利要求1所述的皮炎診斷貼劑，其特征在于，至少一個載體固定于粘性材料上，至少一個載體上覆有含有硫酸鎳的凝膠層。
4.根據(jù)權利要求3所述的貼劑，其特征在于，所述含有硫酸鎳的凝膠層上覆蓋有可剝離紙，所述可剝離紙的部分與所述粘性材料相接觸并固定；優(yōu)選所述可剝離紙為離型紙。
5.如權利要求1-4任一所述的皮炎診斷貼劑，其特征在于，所述含有硫酸鎳的凝膠層中硫酸鎳的濃度以鎳計算為20-100ii g/cm2。
6.如權利要求5所述的皮炎診斷貼劑，其特征在于，所述含有硫酸鎳的凝膠層中硫酸鎳的濃度以鎳計算為40-50 u g/cm2 ;優(yōu)選為45 u g/cm2。
7.如權利要求5所述的皮炎診斷貼劑，其特征在于，所述硫酸鎳選自無水硫酸鎳、六水合硫酸鎳、七水合硫酸鎳。
8.—種如權利要求1-7任一所述的皮炎診斷貼劑的制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟: (1)將溶劑、硫酸鎳和成膜基質混合、溶解，除氣泡后獲得成膜液； (2)將成膜液在載體上涂膜、干燥，使載體上覆有含有硫酸鎳的凝膠層； (3)切片，組裝在粘性材料上，得到如權利要求1-7任一所述的皮炎診斷貼劑。
9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述成膜基質與溶劑的質量比為1:4-1:20 ;優(yōu)選為1:5-1:15 ;更優(yōu)選為1:9 ;所述硫酸鎳的質量一般為所述溶劑與成膜基質質量之和的1%_10%，更優(yōu)選為2%-5%，最優(yōu)選為3%-4%。
10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述涂膜厚度為50-500u m ；優(yōu)選為70-200 u m,更優(yōu)選為100 u m。
【文檔編號】A61K49/00GK103480005SQ201210190082
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2012年6月11日 優(yōu)先權日:2012年6月11日
【發(fā)明者】馬榮水, 許偉欽 申請人:浙江我武生物科技股份有限公司