專利名稱：藥物組合物及相關(guān)方法
藥物組合物及相關(guān)方法相關(guān)串請(qǐng)本申請(qǐng)是2010年I月29日提交的申請(qǐng)?zhí)枮?00880101239. O、發(fā)明名稱為“藥物組合物及相關(guān)方法”的中國(guó)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。優(yōu)先權(quán)本申請(qǐng)要求2007年7月30日提交的標(biāo)題為“藥物組合物”的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/962，706號(hào)的優(yōu)先權(quán)，在此將其全文引入本文作為參考。 發(fā)明領(lǐng)域本公開涉及用于加速創(chuàng)傷愈合、增加皮膚創(chuàng)傷閉合以及減少皮膚創(chuàng)傷部位感染的組合物和方法。
背景技術(shù)：
皮膚是復(fù)雜的組織，其構(gòu)成為不同的層，即表皮、真皮和皮下組織，每一個(gè)都擁有不同的細(xì)胞特征和生理重要性(Fuchs和Byrnel994 ；Goldsmith 1991)。表皮是分層的鱗狀上皮組織，其中嚴(yán)格區(qū)分了進(jìn)行生長(zhǎng)和分化的細(xì)胞(Fuchs和Byrne 1994)。在正常的生理階段，增殖被限制到與基底膜相粘附的基底細(xì)胞。分化是一個(gè)空間過(guò)程，其中基底細(xì)胞喪失了其與基底膜的粘附，停止DNA合成并進(jìn)行一系列形態(tài)和生物化學(xué)改變。最終的成熟步驟是角質(zhì)層的產(chǎn)生，其形成了皮膚的保護(hù)屏障(Tennenbaum等，1991 ；ffysocki 1999)。真皮主要由基質(zhì)纖維構(gòu)成并含有各種細(xì)胞類型。此外,所有的皮膚附屬部分，即微脈管系統(tǒng)、汗腺和皮脂腺、感覺(jué)神經(jīng)和毛囊均位于真皮中。真皮起到了支持皮膚營(yíng)養(yǎng)、維持真皮和下述途徑的作用，其中通過(guò)該途徑信號(hào)從身體的其它部分到達(dá)外部層(Green 1977；Wysocki 1999)。皮下組織是皮膚的最深層，其主要由脂肪細(xì)胞組成，也被稱為皮下脂肪層。直到最近，還認(rèn)為這一層具有隔離外部溫度變化的作用并且給皮膚的上層提供機(jī)械支持(Nash 等 2004 ；Querleux 等 2002)。在皮膚中，分層表皮的持續(xù)更新是由導(dǎo)致產(chǎn)生沒(méi)有活力的、角質(zhì)化的鱗的順序的且高度特化的過(guò)程維持的，所述鱗與衍生自分泌的片層體的脂質(zhì)一起構(gòu)成了身體的保護(hù)性水屏障。正在增殖的基底細(xì)胞與表皮特異性的基底膜粘附。角質(zhì)化細(xì)胞的分化過(guò)程與和基底膜接觸的細(xì)胞的喪失緊密相關(guān)；當(dāng)基底細(xì)胞遷移至更外表的棘層時(shí)，它們喪失了增殖能力。進(jìn)一步成熟為顆粒細(xì)胞區(qū)域，隨后形成硬的角質(zhì)化的包層，這與細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器的自溶以及程序性細(xì)胞死亡相關(guān)聯(lián)，產(chǎn)生成熟的鱗(Adams和Watt 1990 ；Eckert 1989 ;Yuspa等1980)。開放的皮膚創(chuàng)傷通常通過(guò)包括6個(gè)主要要素的過(guò)程愈合(i)發(fā)炎；(ii)成纖維細(xì)胞增殖；(iii)血管增生；(iv)結(jié)締組織合成；(V)上皮形成；以及(Vi)創(chuàng)傷收縮。當(dāng)這些要素個(gè)別地或作為整體不恰當(dāng)?shù)匕l(fā)揮作用時(shí)，創(chuàng)傷愈合即會(huì)受損。許多因素可影響創(chuàng)傷愈合，包括營(yíng)養(yǎng)不良、感染、藥劑(例如，放線菌素和類固醇)、高齡和糖尿病(Keast和Orstedl998 ；Kirsner 和 Eaglstein 1993 ；ffilliams和 Armstrong 1998)。糖尿病(Diabetes mellitus)是糖尿病(Diabetes)的常見(jiàn)形式,其特征在于受損的胰島素信號(hào)傳導(dǎo)、升高的血漿葡萄糖和在若干個(gè)特定組織上發(fā)生慢性并發(fā)癥的易感性。在所有糖尿病的慢性并發(fā)癥中，導(dǎo)致足部潰爛的受損的創(chuàng)傷愈合是研究最少的(Goodson和Hunt 1979 ；Grunfeld 1992)。然而糖尿病患者的皮膚潰瘍花費(fèi)了大量人力和財(cái)力。而且，足部潰爛以及爾后的下肢截?cái)嗍亲畛Ｒ?jiàn)的糖尿病患者住院的原因。在糖尿病中，創(chuàng)傷愈合過(guò)程受到損壞，以及愈合的創(chuàng)傷的特征在于創(chuàng)傷強(qiáng)度減小(Shaw和Boulton 1997)。組織修復(fù)中的缺陷與幾種因素有關(guān)，這些因素包括神經(jīng)病、血管病和感染(Mousley 2003；Silhil998)。但是，尚不明了其它機(jī)制，通過(guò)該機(jī)制，與反常的胰島素信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的糖尿病狀態(tài)損壞創(chuàng)傷的愈合并改變皮膚生理。還有一個(gè)普遍存在的問(wèn)題是在身體各個(gè)部分中的外科手術(shù)之后的創(chuàng)傷愈合受到年齡和諸如糖尿病和肥胖病等的慢性病發(fā)展的影響。在外科手術(shù)設(shè)置中，三分之一的患者由于它們的生理狀態(tài)以及在創(chuàng)傷部位的相關(guān)感染的發(fā)展而延遲創(chuàng)傷愈合(Diegelmann 和 Evans 2004)。皮膚創(chuàng)傷通常在包括馬、狗、貓和家畜的動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn)。在動(dòng)物創(chuàng)傷中，有各種常 見(jiàn)的疾病提示需要?jiǎng)?chuàng)傷管理。因此，獸醫(yī)皮膚病學(xué)是獸醫(yī)醫(yī)學(xué)中增長(zhǎng)最快的學(xué)科之一。一般而言，許多這些創(chuàng)傷通過(guò)第二期愈合而治愈。這一過(guò)程花費(fèi)很長(zhǎng)的時(shí)間，尤其是涉及四肢時(shí)尤其如此。在動(dòng)物中，以及在人類中，創(chuàng)傷愈合過(guò)程可能因諸如污染、感染或骨間裂隙的因素而被復(fù)雜化，這些因素通常是延長(zhǎng)愈合時(shí)間或不恰當(dāng)?shù)膭?chuàng)傷閉合的原因(Grunfeldl992 ；Knol 和 Wisselink 1996 ；Yeruham 等，1992 ；Yim 等，2007)。典型地，創(chuàng)傷愈合需要誘導(dǎo)(活化)新表皮和肉芽組織的形成以及減少感染。這些過(guò)程在動(dòng)物中對(duì)于各種急性和慢性創(chuàng)傷，諸如手術(shù)后創(chuàng)傷、肢端舔的潰瘍和糖尿病潰瘍等的愈合也是必要的。馬遭受由肉芽組織過(guò)剩引起的慢性創(chuàng)傷(例如，“贅肉”)，其中成纖維細(xì)胞增殖和血管發(fā)生均病理學(xué)地升高。這一反常的肉芽組織過(guò)度生長(zhǎng)在上皮組織水平之上，并且物理地阻斷鄰近皮膚的接近，否則該鄰近皮膚可能生長(zhǎng)在這一區(qū)域之上。成纖維細(xì)胞的這一不受控制的生長(zhǎng)的機(jī)制還是未知的。僅有的可利用的治療涉及手術(shù)移除過(guò)度無(wú)約束的組織、壓力包扎和皮質(zhì)類固醇。該治療花費(fèi)延長(zhǎng)的時(shí)間(5-8個(gè)月)并且病損常常復(fù)發(fā)(De、我和 Theoret 2004 ；Stone 1986)。動(dòng)物中其它特定的病理包括狗中的肢端舔的皮膚炎和咬的潰瘍。肢端舔的皮膚炎是狗中常見(jiàn)的問(wèn)題，其是指與狗病損相關(guān)的增加的變紅、粗糙、有彈力的組織，其產(chǎn)生自相同區(qū)域的反復(fù)舔。盡管在肢端舔的皮膚炎的治療中有許多策略，但是治愈率和效果都還不足并且在許多情況下會(huì)發(fā)生潰瘍的復(fù)發(fā)(White 1990 ;Yeruham等1992)。蛋白激酶C (PKC)是磷脂依賴性酶家族，其催化磷酸從ATP共價(jià)轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)的絲氨酸和蘇氨酸殘基上，并且其在調(diào)節(jié)皮膚生理中起著重要的作用。底物蛋白質(zhì)的磷酸化誘導(dǎo)構(gòu)象改變，其導(dǎo)致它們功能性質(zhì)的修飾。到目前為止，發(fā)現(xiàn)了 11種同種型參與各種細(xì)胞功能和調(diào)節(jié)增殖、分化、細(xì)胞存活和死亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑(Nishizuka 1995)。特異性輔因子的需求、組織定位和細(xì)胞區(qū)室化提示對(duì)于每一同種型的不同功能和特定信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的精確調(diào)諧。因此，通過(guò)由它們?cè)谔囟ㄉ镌O(shè)定中的表達(dá)、定位和磷酸化狀態(tài)調(diào)節(jié)的同種型特異性的PKC信號(hào)，特異性的刺激可以導(dǎo)致不同的反應(yīng)。PKC同種型被各種細(xì)胞外信號(hào)活化，并且依次修飾細(xì)胞蛋白質(zhì)的活性，所述蛋白質(zhì)包括受體、酶、細(xì)胞骨架蛋白和轉(zhuǎn)錄因子。因此，PKC家族在細(xì)胞信號(hào)處理中起著中心作用。絲氨酸/蘇氨酸激酶的蛋白激酶C(PKC)家族的原型首先被Nishizuka及其同事(Kikkawa等，1989)描述，它們首先發(fā)現(xiàn)了被作為磷脂酰肌醇的降解產(chǎn)物的二?；视?DAG)活化的PKC (Castagna等，1982)。其它研究揭示了 PKC是促進(jìn)腫瘤的佛波酯的細(xì)胞內(nèi)受體。所有的PKC家族成員共有一個(gè)結(jié)構(gòu)骨架，其可被劃分為兩個(gè)主要的結(jié)構(gòu)域處于N端的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域和處于C端的催化結(jié)構(gòu)域。將這些區(qū)域分類為保守區(qū)(C1-C4)和在同種型之間變化的區(qū)(V1-V5) (Nishizuka 1988)，同上。此外，PKC在調(diào)節(jié)區(qū)還展示出與底物識(shí)別基序密切相似的假底物結(jié)構(gòu)域，其封閉識(shí)別位點(diǎn)并阻止活化(Blumbergl991 ；House和Kemp1987)?；谒鼈兊慕Y(jié)構(gòu)特征和輔因子需求，可將PKC同種型家族劃分為3個(gè)大組。它們包括典型的cPKC(a、β I、β II和￥)、新的1^1(((6、ε、η、Θ )和非典型的aPKCU和ι /λ )同種型(Azzi 等 1992 ；Kikkawa 等 1989 ；Svetek 等 1995)。
對(duì)于它們的活化，所有同種型均需要磷脂雙層的成分。典型的cPKC是鈣(Ca2+)依賴性的，并且對(duì)于活化還需要DAG或DAG類似物諸如佛波酯。新的nPKC不依賴于Ca2+，但對(duì)于最大化活化仍需要DAG或佛波酯(Kazanietz等1993)。非典型的aPKC不依賴于Ca2+，也不需要DAG或佛波酯，但對(duì)于活化需要磷脂酰絲氨酸(Chauhan等1990)。此外，底物識(shí)別的主要部件是在調(diào)控結(jié)構(gòu)域內(nèi)的假底物區(qū)，其控制與細(xì)胞信號(hào)中PKC同種型的特異性活性有牽連的調(diào)控機(jī)制，并且與不同祀底物的磷酸化相關(guān)聯(lián)(Eichholtz等1993 ；Hofmann 1997)。已經(jīng)在體內(nèi)在皮膚表皮中和在培養(yǎng)的角質(zhì)化細(xì)胞中鑒定了五種PKC同種型(α、S、ε、η和ζ )。然而，在皮膚的真皮層中檢測(cè)到了諸如β和Y的其它PKC同種型。此外，PKC同種型的類型和PKC分布模式在不同的組織中不同，并且可能還作為表現(xiàn)型的函數(shù)而變化。重要的是，在體內(nèi)和體外中，PKC同種型均分布在基底和分化的皮膚角質(zhì)化細(xì)胞中，并且可能在創(chuàng)傷愈合中起著重要的作用。因此，需要調(diào)控PKC活性以幫助治療皮膚創(chuàng)傷和其它慢性創(chuàng)傷的改進(jìn)的組合物和方法。公開概述本公開大體上涉及含有不含鈣及鎂離子的生物活性的皮膚創(chuàng)傷愈合劑和或抗炎劑的藥物組合物，并且還涉及使用該藥物組合物治療皮膚創(chuàng)傷和/或炎癥的方法。該藥物組合物優(yōu)選地適用于局部或本地給藥，尤其是皮下給藥。本公開的一個(gè)方面是包含δ -PKC活化劑、a -PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本公開的另一方面是包含胰島素、由SEQ ID NO 1中所示氨基酸序列組成的并且在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢碾囊约安缓珻a2+和Mg2+陽(yáng)離子的水性的藥學(xué)上可接受的載體的組合物，其中所述的藥學(xué)上可接受的載體包含O. 2g/L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2PO4、8g/L NaCl 和 I. 15g/L 無(wú)水 Na2HPO4。所述藥學(xué)上可接受的載體優(yōu)選地包括適于緩沖該組合物的磷酸鹽或含有磷酸鹽的化合物。特別優(yōu)選的實(shí)施方案包括O. 2L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HP04。此類藥學(xué)上可接受的載體也是本發(fā)明的一個(gè)方面，并且可以通過(guò)混合所需要的組分以提供不含有鈣或鎂離子的藥學(xué)上可接受的載體而制備該載體。
本公開的另一方面是包含δ -PKC活化劑、a -PKC抑制劑、不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體以及藥物流出支架的藥物組合物。本公開的另一方面是由包括以下步驟的方法制得的藥物組合物提供δ -PKC活化劑、a -PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體；以及混合所述δ -PKC活化劑、a -PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體；由此制得藥物組合物。本公開的另一方面是用于增加動(dòng)物皮膚創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟提供包含δ-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動(dòng)物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉
口 ο本公開的另一方面是減少動(dòng)物皮膚創(chuàng)傷部位上的炎癥的方法，其包括以下步驟提供包含S-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體 的藥物組合物；以及向動(dòng)物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。本公開的另一方面是包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明的另一方面是包含約O. 0001單位/L至O. I單位/L的胰島素和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明的另一方面是用于增加動(dòng)物創(chuàng)傷閉合的方法，其包括以下步驟提供包含δ -PKC活化劑、a -PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動(dòng)物上的創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物，其中所述的創(chuàng)傷是選自由糖尿病潰瘍、肢端舔的創(chuàng)傷、贅肉創(chuàng)傷、外科手術(shù)創(chuàng)傷、慢性日光性膿腫創(chuàng)傷和骨髓炎創(chuàng)傷組成的組中的至少一種；由此增加皮膚創(chuàng)傷的閉合。本發(fā)明的另一方面是包含δ -PKC活化劑、a -PKC抑制劑和含有K+陽(yáng)離子而不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是包含δ -PKC活化劑和含有K+陽(yáng)離子而不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是包含a -PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明的另一方面是減少動(dòng)物上的皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥的方法，其包括以下步驟提供包含a -PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物；以及向動(dòng)物上的皮膚創(chuàng)傷給藥有效量的該藥物組合物；由此減少皮膚創(chuàng)傷部位的炎癥。本發(fā)明的其它方面包括應(yīng)用本發(fā)明的諸如本文描述的組合物促進(jìn)肉芽組織的形成、表皮增殖和皮膚生長(zhǎng)。最后，本文公開的組合物可以完全不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子，或含有不含這些陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。附圖簡(jiǎn)述圖IA提供了細(xì)胞培養(yǎng)皿的照片，其顯示了應(yīng)用所指示的在不同的制劑中配制的藥物組合物的體外創(chuàng)傷愈合效力。(在Axiovert 25Zeiss顯微鏡下放大50倍)。圖IB以處理24小時(shí)后的閉合百分比顯示了創(chuàng)傷閉合。圖2A是顯示了在制劑A中的藥物組合物促進(jìn)顯著的創(chuàng)傷閉合的圖。圖2B是采用各種制劑處理后的代表性創(chuàng)傷的照片。圖3是顯示了在各種制劑中處理后的創(chuàng)傷部位的炎癥負(fù)擔(dān)的圖。圖4是顯示了采用各種制劑處理后的肉芽組織形成的圖。圖5是顯示了在各種制劑中Myr-假底物PKC α肽抑制PKC α活性的能力的圖。圖6Α是細(xì)胞培養(yǎng)皿的放大圖(在Axiovert 25 Zeiss顯微鏡下放大200倍)，其 顯示了在各種制劑中胰島素對(duì)創(chuàng)傷閉合及細(xì)胞增殖的影響。圖6Β是顯示了以采用各種制劑在胰島素存在或不存在的情況下處理24小時(shí)后占對(duì)照的百分比形式表示的體外創(chuàng)傷閉合的圖。圖6C是顯示了根據(jù)通過(guò)胸腺嘧啶摻入測(cè)量的細(xì)胞增殖的圖。圖7是顯示了在更換細(xì)胞培養(yǎng)基之前或之后胰島素和胰島素+PKCa抑制劑對(duì)來(lái)自7個(gè)月大至2年大的小鼠的角質(zhì)化細(xì)胞增殖的影響的圖。圖8Α提供了顯示采用在各種制劑中的藥物組合物治療慢性足潰瘍及其增加的閉合的照片和圖。圖8Β是顯示了在各種制劑中在第O天和第60天時(shí)患者的慢性糖尿病創(chuàng)傷的治療和增加的閉合的照片。圖9提供了顯示在第O天、3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)采用藥物組合物治療馬慢性贅肉創(chuàng)傷的照片。
圖10提供了顯示在第0、30和60天時(shí)用藥物組合物治療伴隨骨髓炎的慢性日光性膿腫的照片。圖11提供了顯示在第O天、2個(gè)月和3. 5個(gè)月時(shí)采用藥物組合物治療由自損傷引起的未愈合肢端舔的創(chuàng)傷的進(jìn)展的照片。圖12是表示以商標(biāo)HUMALOG 而為人所知的人類胰島素類似物賴脯胰島素(rDNA起源)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的示意圖。圖13是表示以商標(biāo)NOVOLOG 而為人所知的人類胰島素類似物天冬胰島素(rDNA起源)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的示意圖。圖14是表示商標(biāo)；LANTUS 而為人所知的人類胰島素類似物甘精胰島素(rDNA起源)的一級(jí)結(jié)構(gòu)的示意圖。圖15是表示也以商標(biāo)NO VOLIN R而為人所知的人類胰島素類似物HUMULIN R的一級(jí)結(jié)構(gòu)的示意圖。圖16是顯示了在用胰島素類似物(單獨(dú)在制劑A中提供的)治療后通過(guò)表皮和肉芽組織的形成而測(cè)量的創(chuàng)傷愈合的百分比并與未治療的對(duì)照創(chuàng)傷比較的圖。所研究的胰島素類似物是賴脯胰島素(HumL)、天冬胰島素(Novo)、甘精胰島素(LANTUS )和優(yōu)泌林㊣ R (HumR)。圖17是顯示了單獨(dú)用優(yōu)泌林 R(HumR)、USP胰島素(Ins USP)和PKC α假底物抑制肽(Pep)或與胰島素類似物以及抑制肽組合治療的、通過(guò)肉芽組織的形成測(cè)量的促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的圖。
圖18是顯示了單獨(dú)用優(yōu)泌林 R(HumR)、賴脯胰島素(HumL)和PKC α假底物抑制肽(pep)治療或與胰島素類似物以及抑制肽協(xié)同組合治療的嚴(yán)重炎癥的百分比的圖。圖19A和圖19B顯示了在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中培養(yǎng)的原代皮膚角質(zhì)化蛋白中，在用內(nèi)臟脂肪素(visfatin)或L-α-磷脂酰肌醇-3，4，5_三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽處理后，在7個(gè)月大至2年大的小鼠角質(zhì)化細(xì)胞中角蛋白I的表達(dá)。發(fā)明詳沭本公開的藥物組合物包含藥學(xué)上可接受的載體和PKC α抑制劑和/或胰島素，其中所述的藥學(xué)上可接受的載體包含在各種溶劑中的不同的無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)鹽。示范性的藥學(xué)上可接受的載體的制劑組合物可以含有水、鉀、氯化鈉和生理上可耐受的磷酸鹽，并且可如下制備Α)氯化鉀 O. 2g/L(KCl) B)磷酸二氫鉀(無(wú)水)O. 2g/L (KH2PO4)C)氯化鈉 8. O (g/L) (NaCl)D)磷酸氫二鈉(無(wú)水)I. 15 (g/L) (Na2HPO4)該制劑必須不含有鈣或鎂離子。盡管可以使用任何PKCa抑制劑，但優(yōu)選地該P(yáng)KC α抑制劑為豆蘧?；南鄳?yīng)于 PKC α 的假底物區(qū)的妝(Myr*-Phe-Ala-Arg-Lys-Gly-Ala-Leu-Arg-Gln_OH(SEQ ID NO:ICAS[147217-25-2])。該P(yáng)KCa假底物區(qū)對(duì)這一特定同種型的底物區(qū)具有特別高的親和力?？墒褂玫钠渌黀KC抑制劑的實(shí)例包括下列表I中所示的肽表I. PKC抑制劑肽
權(quán)利要求
1.組合物，其包含S-PKC活化劑、a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。
2.如權(quán)利要求I的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。
3.如權(quán)利要求2的組合物，其中所述的 胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L- α -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽組成的組中的至少一種。
4.如權(quán)利要求2的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
5.如權(quán)利要求4的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
6.如權(quán)利要求2的組合物，其中所述的α-PKC抑制劑是選自由(S)-2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲?；切捂呔兀浑p吲哚基馬來(lái)酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[1-(3_ 二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)馬來(lái)酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。
7.如權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO 6, SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO : 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ IDNO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQID NO 30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO36,SEQ ID NO37,SEQ ID NO 38,SEQ ID NO39,SEQ ID NO40,SEQ ID NO:41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ IDNO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
8.如權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQ IDNO 25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化。
9.如權(quán)利要求2的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQ IDNO 1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧酰化的氨基酸殘基。
10.如權(quán)利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含O. 2g/L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HPO4的水性載體。
11.組合物，其包含胰島素、由SEQID NO :1中所示的氨基酸序列組成的并且在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢碾囊约鞍琌. 2g/L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/LNaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HPO4的不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的水性藥學(xué)上可接受的載體。
12.如權(quán)利要求11的組合物，其包含O.0001單位/L至O. I單位/L的胰島素和I μ M至IOOiiM的所述肽。
13.如權(quán)利要求12的組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素和I y M的所述肽。
14.如組合物，其包含S-PKC活化劑、a-PKC抑制劑、不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體以及藥物流出支架。
15.如權(quán)利要求14的組合物，其中所述的藥物流出支架包含多孔固體。
16.如權(quán)利要求15的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。
17.如權(quán)利要求16的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L- a -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。
18.如權(quán)利要求16的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
19.如權(quán)利要求18的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
20.如權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)-2，6-二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’ -N-苯甲酰基星形孢菌素；雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)-6，7，12，13_四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3_(1H-吲哚-3-基)馬來(lái)酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。
21.如權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ IDNO 5, SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO 11、SEQ ID NO 12, SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ IDNO 17, SEQ ID NO 18, SEQ ID NO 19, SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQID NO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 30, SEQ ID NO 3USEQ ID NO 32, SEQ ID NO 33, SEQ ID NO 34, SEQ ID NO:35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ IDNO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQID NO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
22.如權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO :25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧酰化的氨基酸殘基，并且在其羧基末端處被酰胺化.
23.如權(quán)利要求16的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQID NO 1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧酰化的氨基酸殘基。
24.如權(quán)利要求23的組合物，其包含0.0001單位/L至0. I單位/L的胰島素和I y M至IOOii M的所述肽。
25.如權(quán)利要求23的組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素和I y M的所述肽。
26.如權(quán)利要求14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25的組合物，其中所述的藥物流出支架是海綿。
27.如權(quán)利要求26的組合物，其包含不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體，該藥學(xué)上可接受的載體包含O. 2g/L KCl、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HPO4。
28.如由包括以下步驟的方法制得的藥物組合物 a)提供δ-PKC活化劑、a -PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體；以及 b)混合所述δ-PKC活化劑、a -PKC抑制劑以及不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體； 由此制得藥物組合物。
29.如權(quán)利要求28的組合物，其中所述的δ-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。
30.如權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L- α -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚酰基_，七銨鹽組成的組中的至少一種。
31.如權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
32.如權(quán)利要求31的藥物組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
33.如權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的α-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(I-(I-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲酰基星形孢菌素；雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)馬來(lái)酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。
34.如權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQID NO :5、SEQ IDNO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :10、SEQ IDNO1U SEQ ID NO12,SEQ ID NO13,SEQ ID NO14,SEQ ID NO :15、SEQ ID NO16,SEQID NO 17, SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO23,SEQ ID NO24,SEQ ID NO 26,SEQ ID NO27,SEQ ID NO28,SEQ ID NO:29、SEQ ID NO :30、SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ IDNO 35, SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQID NO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO 47, SEQ ID NO 48, SEQ ID NO 49, SEQ ID NO 50, SEQ ID NO 5USEQ ID NO:52、SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
35.如權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQID NO :25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化.
36.如權(quán)利要求29的藥物組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQID NO :1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?。
37.如權(quán)利要求36的藥物組合物，其包含0.0001單位/L至0. I單位/L的胰島素和Iii M至IOOii M的所述肽。
38.如權(quán)利要求36的藥物組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素和I y M的所述肽。
39.如權(quán)利要求28、29、30、31、32、33、34、35、36、37或38的藥物組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0. 2g/L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/LNaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HPO4的水性載體。
40.組合物，其包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。
41.如權(quán)利要求40的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L- a -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。
42.如權(quán)利要求40的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
43.如權(quán)利要求42的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
44.如權(quán)利要求40的組合物，其包含0.0001單位/L至0. I單位/L的胰島素或胰島素類似物。
45.如權(quán)利要求40的組合物，其包含0.0001單位/L的胰島素或胰島素類似物。
46.如權(quán)利要求40-45中任一項(xiàng)的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0. 2g/L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HPO4的水性載體。
47.組合物，其包含0.0001單位/L至0. I單位/L的胰島素和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。
48.如權(quán)利要求47的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
49.如權(quán)利要求48的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
50.如權(quán)利要求47、48或49的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含 0. 2g/L KCl、0. 2g/L 無(wú)水 KH2P04、8g/L NaCl 和 I. 15g/L 無(wú)水 Na2HPO4 的水性載體。
51.組合物，其包含S-PKC活化劑、a -PKC抑制劑和含有K+陽(yáng)離子而不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。
52.如權(quán)利要求51的組合物，其中所述的S-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。
53.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L- a -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。
54.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
55.如權(quán)利要求54的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
56.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(l-(l-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’ -N-苯甲?；切捂呔?；雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2_氰基乙基)_6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)馬來(lái)酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。
57.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:5, SEQ ID NO 6, SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO 10, SEQ IDNO :11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ IDNO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQID NO 30, SEQ ID NO :31、SEQ ID NO :32、SEQ ID NO :33、SEQ ID NO :34、SEQ ID NO :35、SEQ ID NO36,SEQ ID NO37,SEQ ID NO 38,SEQ ID NO39,SEQ ID NO40,SEQ ID NO:41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ IDNO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
58.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQID NO 25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化.
59.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQID NO 1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?。
60.組合物，其包含δ-PKC活化劑和含有K+陽(yáng)離子而不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。
61.如權(quán)利要求60的組合物，其中所述的δ-PKC活化劑是選自由胰島素和胰島素類似物組成的組中的至少一種。
62.如權(quán)利要求61的組合物，其中所述的胰島素類似物是選自由賴脯胰島素、天冬胰島素、甘精胰島素、內(nèi)臟脂肪素和L- α -磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸，二棕櫚?；鵢，七銨鹽組成的組中的至少一種。
63.如權(quán)利要求61的組合物，其中所述的胰島素是選自由人胰島素、牛胰島素和豬胰島素組成的組中的至少一種。
64.如權(quán)利要求63的組合物，其中所述的胰島素是重組表達(dá)的。
65.組合物，其包含a-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體。
66.如權(quán)利要求65的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是選自由(S)_2，6_二氨基-N-[(I-(I-氧代十三烷基)-2-哌啶基)甲基]己酰胺二鹽酸鹽水合物；4’-N-苯甲酰星形孢菌素；雙吲哚基馬來(lái)酰亞胺IX，甲磺酸鹽；12-(2-氰基乙基)-6，7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5H-吲哚并[2，3-a]吡咯并[3，4_c]咔唑；2-[I-(3-二甲基氨基丙基)-IH-吲哚-3-基]-3-(1Η-吲哚-3-基)馬來(lái)酰亞胺和阿普卡生組成的組中的至少一種。
67.如權(quán)利要求65的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑選自由具有在以下中所示的氨基酸序列的肽組成的組中的至少一種SEQ IDNO 2, SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ IDNO 5, SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ IDNO .11、SEQ ID NO 12, SEQ ID NO :13、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ IDNO17,SEQ ID NO18,SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO2U SEQ ID NO :22、SEQID NO 23, SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 30, SEQ ID NO 3USEQ ID NO 32, SEQ ID NO 33, SEQ ID NO 34, SEQ ID NO:.35、SEQ ID NO :36、SEQ ID NO :37、SEQ ID NO :38、SEQ ID NO :39、SEQ ID NO :40、SEQ IDNO :41、SEQ ID NO :42、SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQID NO 47, SEQ ID NO :48、SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO 53, SEQ ID NO :54 和 SEQ ID NO :55。
68.如權(quán)利要求65的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQID NO 25中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?，并且在其羧基末端處被酰胺化.
69.如權(quán)利要求65的組合物，其中所述的a-PKC抑制劑是由SEQIDNO :1中所示的氨基酸序列組成的肽，其在其氨基末端處具有豆蘧?；陌被釟埢?。
70.如權(quán)利要求69的組合物，其中所述的藥物組合物包含Iy M至100 ii M的所述肽。
71.如權(quán)利要求70的組合物，其中所述的藥物組合物包含IU M的所述肽。
72.如權(quán)利要求65-71中任一項(xiàng)的組合物，其中所述的不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體是包含0. 2g/L KC1、0. 2g/L無(wú)水KH2P04、8g/L NaCl和I. 15g/L無(wú)水Na2HPO4的水性載體。
全文摘要
本公開涉及用于加速創(chuàng)傷愈合、增加皮膚創(chuàng)傷閉合以及減少皮膚創(chuàng)傷部位感染的組合物和方法。具體而言，本發(fā)明涉及包含δ-PKC活化劑、α-PKC抑制劑和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本發(fā)明還涉及包含胰島素或胰島素類似物和不含Ca2+和Mg2+陽(yáng)離子的藥學(xué)上可接受的載體的組合物。
文檔編號(hào)A61K45/06GK102755649SQ20121021981
公開日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2008年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月30日
發(fā)明者E·布雷納, I·索羅莫尼克, L·布賴曼-維克斯曼, O·萊維-哈查姆, T·滕寧鮑姆 申請(qǐng)人:希爾洛有限公司