專利名稱：L-半胱氨酸在制備解酒藥物、保護肝臟及腎臟藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及ー種L-半胱氨酸，尤其是ー種L-半胱氨酸在制備解酒藥物、保護肝臟及腎臟藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人體內(nèi)攝入的酒精僅有5%會無變化的排出體外，其余95%則會在體內(nèi)(主要是肝臟)被代謝為こ醛，こ醛在こ醛脫氫酶(ALDH)的催化下轉(zhuǎn)化成こ酸，こ酸進ー步轉(zhuǎn)化成こ酰輔酶A，こ酰輔酶A可進入三羧酸循環(huán)進ー步產(chǎn)生ニ氧化碳、水和能量。香煙也是こ醛的ー大來源，長期吸煙會改變口腔菌群，這些微生物產(chǎn)生こ醛，但轉(zhuǎn)化こ醛能力很低，使こ醛積累。人體內(nèi)的ALDH含量極低，不能及時地將こ醛轉(zhuǎn)化為こ酸，導(dǎo)致こ醛在體內(nèi)(尤其是ロ腔 和肝臟等)積累，對機體各器官組織造成巨大的傷害。こ醛的一般毒性主要表現(xiàn)為對皮膚、眼睛和上呼吸道粘膜的直接刺激作用，使痰增多，眼充血紅腫，引起過敏、頭痛等。吸入高濃度的こ醛則會引起窒息，甚至呼吸麻痹而死亡。研究表明，こ醛可引起線粒體的功能障礙，使線粒體的呼吸功能、脂肪酸氧化能力受到損傷；こ醛還影響胚胎的發(fā)育；此外，こ醛能夠與DNA共價結(jié)合形成加合物，引起DNA鏈間交聯(lián)及DNA斷裂，導(dǎo)致細胞癌變。鑒于こ醛的種種危害，對こ醛的消除及降低其引起的氧化損傷是非常有必要的。目前市場上關(guān)于解酒的藥物有很多，但大多都是只注重加快酒精向こ醛的轉(zhuǎn)化，而并未注意到こ醛的去路問題，同時也并未注意到こ醛對機體的隱形危害。酒精對人體的傷害只是短暫性的，こ醛才是危害機體健康的罪魁禍首，因此對こ醛的消除及降低其造成的傷害是非常有必要的。通過檢索，尚未發(fā)現(xiàn)與本專利申請相關(guān)的專利公開文獻。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供ー種L-半胱氨酸在制備解酒藥物、保護肝臟及腎臟藥物中的應(yīng)用，為新型解酒產(chǎn)品及保護肝臟及腎臟藥物的開發(fā)制備提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。本發(fā)明實現(xiàn)目的的技術(shù)方案是ー種L-半胱氨酸用于降低細胞こ醛氧化損傷的用途?！NL-半胱氨酸在制備解酒藥物中的應(yīng)用。ー種L-半胱氨酸在制備保護肝臟藥物中的應(yīng)用。ー種L-半胱氨酸在制備保護腎臟藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果為I、本發(fā)明L-半胱氨酸在制備解酒藥物、保護肝臟及腎臟藥物中的應(yīng)用可為新型解酒產(chǎn)品及保護肝臟及腎臟藥物的開發(fā)制備提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)，為飲酒者提供ー個保障。2、本發(fā)明L-半胱氨酸在制備解酒藥物、保護肝臟及腎臟藥物中的應(yīng)用，由于L-半胱氨酸具有可用于降低細胞こ醛氧化損傷的作用，L-半胱氨酸能消除こ醛，加快こ醛消除從而有效地促進酒精代謝，降低酒精產(chǎn)生的各種不良癥狀，如頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、煩渴等，因而可用于制備解酒藥物，在喝酒前或喝酒中飲用可増加酒量，此種解酒藥物可保護肝臟。L-半胱氨酸可以清除人體胃腸道存留的こ醛毒素，減輕人體解毒排毒的重要器官一肝臟、腎臟的解毒負擔(dān)而保肝護腎，從而可應(yīng)用在保護肝臟及腎臟藥物的制備。


圖I為こ醛對A549細胞生長活性的影響圖；圖2為本發(fā)明L-半胱氨酸對A549細胞生長活性的影響圖；
圖3為本發(fā)明L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞生長活性的影響圖；圖4為こ醛對A549細胞上清液中NO含量的影響圖；圖5為本發(fā)明L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞上清液中NO活力的影響圖；圖6為こ醛對A549細胞中MDA含量的影響圖；圖7為本發(fā)明L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞中MDA含量的影響圖。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明作進ー步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明通過建立細胞模型，檢測L-半胱氨酸降低こ醛氧化損傷危害的效果，主要從L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞増殖、一氧化氮(NO)含量和丙ニ醛(MDA)含量的影響來驗證L-半胱氨酸降低こ醛氧化損傷危害的效果。本實施方式中所使用的各種物質(zhì)如無特殊說明，均為市售產(chǎn)品。數(shù)據(jù)處理方式為數(shù)據(jù)結(jié)果以平均值土標(biāo)準差(て±ゝ，表示，以Ρ〈0· 05為有統(tǒng)計學(xué)意義，記為“*”，ρ<0.01為極顯著意義，記為采用SPSS19. O統(tǒng)計軟件包作為統(tǒng)計エ具，全部數(shù)據(jù)采用單因素方差分析(AN0VA)。實施例IMTT法檢測細胞生長活性用含10%胎牛血清的1640培養(yǎng)基稀釋細胞至6 X IO4個/mL，并接種至96孔培養(yǎng)板，每孔加入100 μ L細胞懸液(空白孔不加細胞，只加培養(yǎng)基)培養(yǎng)24h，待細胞長滿80%左右，換成無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細胞同步化；然后分別加入L-半胱氨酸、こ醛等處理因素，每個劑量重復(fù)3孔，置培養(yǎng)箱中孵育24h后進行檢測。吸棄上清液20 μ L，每孔加入20 μ L濃度為5mg/mL MTT(終濃度為O. 5mg/mL),繼續(xù)孵育4h后棄培養(yǎng)基，每孔加入150 μ LDMSO終止反應(yīng)，避光低速振搖IOmin使深紫色沉淀溶解，于酶標(biāo)儀570nm處測定OD值，實驗重復(fù)多次。實施例2細胞上清液中NO活性測定將細胞制成密度為6X IO4個/mL的細胞懸液，接種在24孔培養(yǎng)板中進行培養(yǎng)，待細胞長滿80%吋，按上面分組處理，每組設(shè)3個復(fù)孔。每孔取上清液100 μ L，按照南京建成試劑盒要求測定NO含量，NO含量計算參見公式I。實驗重復(fù)多次。M3活力(脾ol/L) =-也~^~X標(biāo)準孔濃度G0/ffliol/L)x稀釋倍數(shù)<2倍)
促*標(biāo)準對照'⑩標(biāo)準空白
(公式)實施例3細胞內(nèi)MDA含量測定將細胞制成密度為6 X IO4個/mL的細胞懸液，接種在24孔培養(yǎng)板中進行培養(yǎng)，待細胞長滿80%時，按上面分組處理，每組設(shè)3個復(fù)孔。終止培養(yǎng)后，加入細胞裂解液，4° C裂解30min, 12000rpm,離心15min,取上清BCA法測定蛋白濃度，同時按照南京建成試劑盒 要求測定MDA含量，MDA含量計算參見公式2。實驗重復(fù)多次。
AffM含量(nmolImgport)=)測定-~標(biāo)準品濃度(10nmo//m/) +待測樣木蚩白濃度(mgport/ml、(公
0 準-冊標(biāo)準空白
式2)實驗結(jié)果與討論(一)MTT法檢測細胞生長活性こ醛對A549細胞生長活性的影響見圖I ;L_半胱氨酸對A549細胞生長活性的影響見圖2 ；L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞生長活性的影響見圖3。圖I、圖2及圖3中的實驗結(jié)果表明①隨著こ醛濃度増大，A549細胞的生長活性明顯下降；②L-半胱氨酸濃度在0-640 μ mo I/L范圍內(nèi)，對A549細胞的生長無抑制作用，且在0-160 μ mol/L范圍內(nèi)，隨著濃度増大，L-半胱氨酸對A549細胞生長起到增值作用；③L-半胱氨酸濃度在0-160 μ mol/L范圍內(nèi)，其濃度與A549細胞生長活性呈正相關(guān)，表明在該濃度范圍內(nèi)L-半胱氨酸濃度對受損A549細胞的保護作用呈濃度依賴性。(ニ)細胞上清液中NO活性測定こ醛對A549細胞上清液中NO含量的影響見圖4山-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞上清液中NO活力的影響見圖5。圖5及圖6的結(jié)果表明①隨著こ醛濃度増大，A549細胞上清液中NO含量逐漸上升，說明こ醛能夠誘導(dǎo)或促進NO的釋放；②L-半胱氨酸濃度為0-160 μ mol/L范圍內(nèi)，其濃度與A549細胞上清液中NO含量呈負相關(guān)，表明在該濃度范圍內(nèi)L-半胱氨酸對こ醛誘導(dǎo)或促進NO釋放起到抑制或修復(fù)的作用，說明L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞具有保護作用。(三)細胞內(nèi)MDA含量測定こ醛對A549細胞中MDA含量的影響見圖6 ;L_半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞中MDA含量的影響見圖7。圖6及圖7的結(jié)果表明①隨著こ醛濃度増大，A549細胞內(nèi)MDA含量逐漸上升，說明こ醛能夠誘導(dǎo)或促進MDA的產(chǎn)生；②L-半胱氨酸濃度為0-160 μ mol/L范圍內(nèi)，隨著L-半胱氨酸濃度的增加，MDA的含量逐漸降低，表明在該濃度范圍內(nèi)L-半胱氨酸對こ醛誘導(dǎo)或促進MDA產(chǎn)生起到抑制或修復(fù)的作用，說明L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞具有保護作用。綜上細胞存在助氧化或活性氧族(Reactive Oxygen Species, R0S)系統(tǒng),如氧自由基等，同時細胞也存在抗氧化系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶等。在正常情況下，無論在極性氧化或還原條件下，體內(nèi)自身助氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)可保持機體動態(tài)平衡。こ醛是ー種氧化劑，對生物大分子有直接的氧化作用，打破動態(tài)平衡，使其抗氧化能力降低，體內(nèi)自由基不能及時清除，對組織細胞間接地造成氧化損傷。本發(fā)明使用不同濃度こ醛與A549細胞共培養(yǎng)24h后發(fā)現(xiàn)，A549細胞生長活性呈下降趨勢，而細胞內(nèi)的MDA含量呈上升趨勢，上清液中的NO含量也呈上升趨勢，說明こ醛可以使A549細胞產(chǎn)生氧化損傷并誘導(dǎo)或促進MDA和NO產(chǎn)生。而L-半胱氨酸與こ醛同時處理A549細胞24h后發(fā)現(xiàn)，A549細胞生長活性呈上升趨勢，而細胞內(nèi)的MDA含量和上清液中的NO含量呈下降趨勢，說明L-半胱氨酸對こ醛損傷A549細胞具有保護作用。由以上的實驗結(jié)果可見，L-半胱氨酸可應(yīng)用在解酒藥物、保護肝臟藥物及保護腎臟藥物中的制備。
權(quán)利要求
1.一種L-半胱氨酸用于降低細胞乙醛氧化損傷的用途。
2.—種L-半胱氨酸在制備解酒藥物中的應(yīng)用。
3.—種L-半胱氨酸在制備保護肝臟藥物中的應(yīng)用。
4.一種L-半胱氨酸在制備保護腎臟藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種L-半胱氨酸用于降低細胞乙醛氧化損傷的用途，L-半胱氨酸可應(yīng)用在解酒藥物、保護肝臟藥物及保護腎臟藥物中的制備。本發(fā)明L-半胱氨酸用于降低細胞乙醛氧化損傷的用途可為新型解酒產(chǎn)品的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)，為飲酒者提供一個保障。
文檔編號A61K31/198GK102727474SQ20121021984
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月29日
發(fā)明者張曉紅, 羅成 申請人:天津科技大學(xué)