專利名稱：基于雌馬酚激活BK_Ca通道的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于K+通道刺激技術(shù)領(lǐng)域，涉及基于雌馬酚激活BKca通道的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
K+通道在維持動脈平滑肌細(xì)胞膜電位中起重要作用，并調(diào)節(jié)著血管張力。根據(jù)門控特性的不同，血管平滑肌的K+通道至少可分為4種，即電壓門控性K+通道(voltage-gated K+ channel, Kv 通道)、內(nèi)向整流 K+通道(inward rectifier K+ channel,Kir通道)、ATP敏感性K+通道(ATP-sensitive K+ channel, Katp通道)和鈣激活的K+通道(Ca2+-activated K+ channel, Kca 通道)。根據(jù)單通道電導(dǎo)大小和藥理學(xué)特性的差異，Kca通道又可分為三個(gè)亞類大電導(dǎo)鈣·激活的 K+通道(big conductance Ca2+_activated K+ channels, BKca 通道)、中電導(dǎo)I丐激活的 K+通道(intermediate conductance Ca2+-activated K+channels, IKca 通道)及小電導(dǎo)隹丐激活的 K+通道(small conductance Ca2+_activated K+ channels, SKca 通道)。收縮表型的血管平滑肌主要表達(dá)BKca通道，該通道由四個(gè)孔形成亞單位a和調(diào)節(jié)亞單位P I共同組成跨膜蛋白復(fù)合體。P I亞單位影響通道的Ca2+/電壓敏感性、對藥理學(xué)調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)以及通道向質(zhì)膜的運(yùn)輸。血管BKca通道激活引起平滑肌細(xì)胞膜電位超極化，關(guān)閉電壓依賴性Ca2+通道，導(dǎo)致血管擴(kuò)張，從而對抗壓力和血管收縮劑引起的血管收縮。更為重要的是，BKea通道呈現(xiàn)組織和功能異質(zhì)性。在腦動脈平滑肌細(xì)胞，BKea通道電流密度、對雌激素(作用于P I亞單位)的敏感性、^ I亞單位在mRNA和蛋白水平的表達(dá)以及P I與a亞單位蛋白的比值均明顯高于骨骼肌等外周小動脈平滑肌細(xì)胞。提示P I亞單位可能在腦血管BKca通道的調(diào)節(jié)中意義更為重要。因此，BKca通道的開放劑，尤其是選擇性激活BKca通道3 I亞單位的藥物對腦血管具有更強(qiáng)的選擇性擴(kuò)張作用。Iberiotoxin (IbTX)能特異性地阻斷BKea通道,而Paxilline (PAX)也是較特異的BKea通道阻斷劑。大豆黃素(daidzin)是存在于大豆中的異黃酮類化合物，用于防治心腦血管疾病、骨質(zhì)疏松癥及更年期綜合征等。近年發(fā)現(xiàn)，大豆黃素的代謝產(chǎn)物雌馬酚(equol)具有更高的生物活性，大豆黃素的生物學(xué)作用在一定程度上可能歸因于其代謝產(chǎn)物雌馬酚。然而，人群中能代謝大豆黃素為雌馬酚者約為309^50%。因此，人體能否將大豆黃素代謝為雌馬酚是決定大豆黃素能否更有效地發(fā)揮其藥理作用的關(guān)鍵。雌馬酚具有抗氧化、抑制心肌鈣超載、影響血管反應(yīng)性、抗腫瘤、防治更年期綜合癥和骨質(zhì)疏松等作用?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究活性成分的藥理作用通常采用三類模型，一類是整體動物模型，另一類是離體器官模型，還有一類是細(xì)胞模型。前者主要用于藥效學(xué)觀察，后兩者主要用于探索藥物作用機(jī)制。整體動物模型是現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)研究中極其重要的實(shí)驗(yàn)方法和手段，主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)治療學(xué)，尤其是新藥篩選研究。通過整體動物模型的研究，可以有意識地改變那些自然條件下不可能或不容易排除的因素，以便更加準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并將研究結(jié)果推及于人類疾病，從而有助于更方便、更有效地認(rèn)識人類疾病的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律和研究防治措施。線栓法制備的大鼠大腦中動脈阻塞(middle cerebralartery occlusion, MCAO)再灌注模型因很好的模擬了臨床大腦中動脈阻塞溶栓治療的狀況，是目前最常用的研究抗腦缺血再灌注損傷藥物的動物模型。血壓測量是醫(yī)學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中掌握實(shí)驗(yàn)對象生命活動的常用手段之一。最準(zhǔn)確、可靠的測量方法是大動脈插管直接測量，但該方法需要實(shí)施麻醉，創(chuàng)傷大，對實(shí)驗(yàn)技術(shù)和條件均要求較高。無創(chuàng)血壓測量法可以測量清醒動物，能夠獲取正常狀態(tài)下的血壓值，在基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究中，常采用尾套測壓法測量清醒大鼠的血壓，該方法操作簡便、無創(chuàng)、可重復(fù)。整體動物模型的微循環(huán)觀察是研究微循環(huán)血流動力學(xué)最基本、最重要的方法，可以定量檢測組織血流量、血流速度等動態(tài)功能指標(biāo)。其中激光多普勒血流儀(LaserDoppler Flowmetry, LDF)以其適應(yīng)范圍廣、操作簡便、無創(chuàng)得到了廣泛應(yīng)用。離體器官模型為藥理研究中重要而簡便的方法。通過觀察活性成分對特定離體組 織器官的作用，可以分析活性成分的藥理作用和可能的作用原理。其中，離體血管環(huán)實(shí)驗(yàn)是篩選血管活性物質(zhì)和研究其作用機(jī)制的常用模型，而選擇不同部位的血管還可以直接觀察化合物的組織選擇性。研究結(jié)果明確，并且可以進(jìn)行定量分析。將人不同離子通道功能亞單位(a亞單位)或輔助亞單位(如^亞單位等)分別或共轉(zhuǎn)染于J1EK293細(xì)胞，經(jīng)克隆篩選可建立穩(wěn)定表達(dá)某種離子通道的細(xì)胞系。應(yīng)用膜片鉗結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)可在體外研究該通道的特性、調(diào)節(jié)因素，并可用于篩選選擇性作用于通道不同亞單位的化合物及確定藥物對通道作用的結(jié)合位點(diǎn)。這是目前進(jìn)行高通量藥物篩選和研究藥物作用機(jī)制的常用細(xì)胞模型。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的問題在于提供基于雌馬酚激活BKca通道P I亞單位的應(yīng)用，通過多種方法驗(yàn)證了雌馬酚通過激活BKea通道3 I亞單位，可擴(kuò)張血管、增加腦血流量、保護(hù)缺血再灌注腦組織，有益于缺血性腦卒中的防治，可用于相關(guān)藥物的制備。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)雌馬酚在制備保護(hù)腦缺血再灌注損傷的藥物的應(yīng)用。雌馬酚在制備增加腦血流量的藥物的應(yīng)用。所述的增加腦血流量的藥物為不影響血壓的藥物。雌馬酚在制備舒張血管的藥物的應(yīng)用。所述的藥物為舒張腦血管的藥物。雌馬酚在制備激活BKea通道的藥物的應(yīng)用。所述的藥物為激活BKea通道的P I亞單位的藥物。雌馬酚在制備防治缺血性腦卒中的藥物的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果本發(fā)明提供的基于雌馬酚激活BKea通道的應(yīng)用，是在采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型、尾套法測量大鼠血壓、激光多普勒血流儀觀測腦實(shí)質(zhì)和軟腦膜血流量及離體血管肌張力描記和膜片鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上對雌馬酚藥用活性的檢測，結(jié)果表明，雌馬酚具有以下作用
I、雌馬酚對腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用；2、雌馬酚在治療劑量對血壓無影響，不會因降低血壓而減少腦血流量；3、雌馬酚可明顯增加腦血流量；4、雌馬酚有明顯的舒張血管作用，且對腦血管選擇性更強(qiáng)，血管舒張作用與激活血管平滑肌BKea通道有關(guān)；5、雌馬酚對BKea通道的激活依賴于@ I亞單位的存在；這表明雌馬酚通過激活血管平滑肌BKca通道3 I亞單位，舒張腦血管、增加腦血流、保護(hù)缺血再灌注腦組織，有益于缺血性腦卒中的防治，可用于相關(guān)藥物的制備。


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圖1-1為雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠腦梗死容積的影響；圖1-2為雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響；圖1-3為雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠死亡率的影響；圖1-4為雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠血清LDH活力的影響；圖1-5為雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠血清MDA含量的影響；圖2-1為雌馬酚對大鼠血壓的影響；圖3-1為雌馬酚對大鼠腦血流量的影響；圖4-1為雌馬酚對5-HT誘導(dǎo)的大鼠去內(nèi)血管的舒張作用；圖4-2為Paxilline對雌馬酚血管舒張作用的影響；圖4-3為Iberiotoxin對雌馬酌■血管舒張作用的影響；圖5-1為雌馬酚濃度依賴性激活重組人BKca通道(Slo a / P )電流；圖5-2為雌馬酚對重組人BKca通道a亞單位(Slo)電流無激活作用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明分別采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型、尾套法測量大鼠血壓、激光多普勒血流儀觀測腦實(shí)質(zhì)和軟腦膜血流量及離體血管肌張力描記和膜片鉗技術(shù)，對雌馬酚的抗腦缺血作用進(jìn)行驗(yàn)證說明，結(jié)果表明雌馬酚通過激活BKca通道P I亞單位，擴(kuò)張血管、增加腦血流量、保護(hù)缺血再灌注腦組織，可應(yīng)用相關(guān)藥物的制備。下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。一、雌馬酚對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用I.材料I. I儀器GPS型雙極電凝器(上海醫(yī)用激光儀器廠)，電熱三用水箱(SHHW21. 420，天津泰斯特儀器有限公司)，YP3001電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)，TDZ4-WS低速臺式離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)，4-0單絲尼龍線(美國ETHIC0N公司)。I. 2藥品雌馬酚(南京萊茵醫(yī)藥科技有限公司)；2，3，5-氯化三苯基四氮唑(TTC)(上?；瘜W(xué)試劑公司)。乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)I. 3動物健康雄性SD大鼠，體重220_250g，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。2.方法
2. I動物分組與給藥將體重220_250g的健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組，分別為假手術(shù)組(Sham)、模型組(Vehicle)和雌馬酹 5. 0mg/kg、2. 5mg/kg>I. 25mg/kg、0. 625mg/kg 組。各給藥組連續(xù)灌胃給藥3天，I次/日，第4日手術(shù)前30min再灌胃給藥I次。模型組和假手術(shù)組大鼠灌胃給予等容積的賦形劑。2. 2大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的建立按照Longa等人的線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型。大鼠用10%水合三氯乙醛經(jīng)腹腔注射(4ml/kg)麻醉后，仰位固定于鼠板上，酒精消毒頸部皮膚，沿頸部正中做切口，暴露左側(cè)頸總動脈(commom carotid artery, CCA)和迷走神經(jīng)。小心分離頸總動脈和迷走神經(jīng)，然后鈍性分離頸內(nèi)動脈(internal carotid artery, ICA)和頸外動脈(externalcarotid artery, ECA)。在ECA下穿兩根線備用,用雙極電凝器將ICA、ECA小分支電凝,結(jié)扎ECA遠(yuǎn)心端備用，在CCA和ICA上用無損傷動脈夾阻斷血流。在ECA近心端剪一小口，將一端為杵狀的4-0單絲尼龍線插入小口，緩緩送入，取下ICA上的動脈夾，線栓自ECA經(jīng)CCA·分叉處插入ICA，將尼龍線緩緩?fù)迫氪竽X中動脈，稍遇阻力即止，自頸內(nèi)、外動脈分叉處算起線栓插入約17mm 22_。此時(shí)左側(cè)大腦中動脈的血供來源被完全阻斷,記錄下時(shí)間為腦缺血開始時(shí)間。取下CCA上的動脈夾，消毒，縫合傷口。在缺血2h后拔出線栓行再灌注。假手術(shù)組僅將尼龍線栓放入ECA，不進(jìn)入ICA，模擬腦缺血再灌，手術(shù)過程應(yīng)無出血，呼吸節(jié)律正常，手術(shù)時(shí)間控制在30min內(nèi)。術(shù)后記錄各組大鼠死亡情況，計(jì)算死亡率。2. 3神經(jīng)行為癥狀評分大鼠左側(cè)MCAO 2h再灌注4h后進(jìn)行神經(jīng)行為癥狀評分，采用10分法進(jìn)行行為缺陷評分，評分標(biāo)準(zhǔn)如下①提鼠尾觀察前肢屈曲情況，雙前肢對稱伸向地面0分，手術(shù)對側(cè)(右)前肢輕度屈曲I分，前肢中度或嚴(yán)重屈曲2分；②提鼠尾觀察軀干扭曲情況，無扭曲0分，輕度扭曲I分，中度或嚴(yán)重扭曲2分將大鼠置于平地上，分別推雙肩向?qū)?cè)移動檢查阻力，如雙側(cè)阻力對等且有力0分，如向手術(shù)對側(cè)推動時(shí)阻力輕度下降者I分，重度下降2分；④將大鼠雙前肢置于一金屬網(wǎng)上，觀察雙前肢張力，對等有力0分，對側(cè)前肢張力下降I分將大鼠置于水平地面，觀察其運(yùn)動情況，運(yùn)動正常0分，自發(fā)運(yùn)動減少I分，給予刺激才運(yùn)動2分，對刺激無反應(yīng)3分。滿分10分，分?jǐn)?shù)越高，行為障礙越嚴(yán)重。2. 4腦梗死范圍測定及血清LDH活力和MDA含量測定大鼠腦缺血24h后，用水合三氯乙醛經(jīng)腹腔注射麻醉，仰位固定于鼠板上，打開腹腔，暴露腹主動脈，用無菌注射器從腹主動脈采血，轉(zhuǎn)移至一次性試管靜置，待血液凝固后800rpm離心lOmin，收集析出的血清，保存至_80°C低溫冰箱，隨后檢測血清中LDH活力及MDA的含量。取血后迅速斷頭取出大腦，將其置于_20°C的冰箱內(nèi)約lOmin，之后取出連續(xù)冠狀切片，每片腦片厚約2mm，共6片，置于2%TTC溶液中37°C水浴箱中孵育30min，然后取出用PBS沖洗3次，再用4%多聚甲醛溶液固定6h。梗死的腦組織染色后呈白色，正常腦組織染色后呈紅色。腦片用數(shù)碼照相機(jī)拍照，用圖像處理軟件Adobe photoshop分析，計(jì)算連續(xù)冠狀切片的腦組織的梗死容積百分比。2. 5數(shù)據(jù)處理統(tǒng)計(jì)分析用SPSS 13. 0軟件,數(shù)據(jù)以mean土SE表示,用SigmaplotlO. 0軟件做統(tǒng)計(jì)圖。腦組織梗死容積百分比的組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，神經(jīng)行為癥狀評分、血清LDH活力和MDA含量組間比較采用one-way ANOVA檢驗(yàn)，死亡率組間比較采用X2檢驗(yàn)。P〈0. 05和P〈0. 01為差異具有顯著性，分別以和“**”表示。3.結(jié)果3. I雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠腦梗死容積的影響由圖1-1 可見(n=8，*P < 0. 05，**P < 0. 01 vs. Vehicle)，與 Vehicle 組比較，當(dāng)給予大鼠0. 625mg/kg 2. 5mg/kg的雌馬酹時(shí),腦缺血再灌注大鼠腦梗死容積隨劑量增加而減小(P〈0. 05或P〈0. 01)，而劑量增至5mg/kg時(shí)，作用反而 減弱。表明雌馬酚在一定劑量范圍對腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用。3. 2雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響大鼠左側(cè)MCA02h再灌注4h時(shí)，雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)癥狀評分的影響的檢測結(jié)果如圖1-2 (n=10,**P < 0.01 vs. Vehicle)所示，Vehicle組神經(jīng)癥狀嚴(yán)重，應(yīng)用不同劑量雌馬酚后，可明顯減輕腦局部缺血再灌注損傷引起的神經(jīng)癥狀(P〈0. 01)，說明雌馬酚能改善腦缺血再灌注引起的神經(jīng)功能障礙。3. 3雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠死亡率的影響如圖1-3所示(*P < 0. 05 vs. Vehicle，圖中數(shù)字為動物數(shù))，與Vehicle組比較，給予不同劑量的雌馬酚均有降低腦缺血再灌注動物死亡率的趨勢，其中2. 5mg/kg劑量組的作用有顯著性差異(P〈0. 05)。3. 4雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠血清LDH活力的影響由圖1-4 可見(n=10, mP < 0. Olvs. Sham, **P < 0. 01 vs. Vehicle),與 Sham 組相比，Vehicle組和各給藥組動物血清中LDH的活力均升高(P〈0. 01 )，提示缺血再灌注引起神經(jīng)細(xì)胞膜等損傷，細(xì)胞內(nèi)LDH釋放入血。與Vehicle組比較，給予不同劑量的雌馬酚均能降低腦缺血再灌注動物血清中LDH的活力，以2. 5mg/kg和I. 25mg/kg劑量組的血清LDH活力降低較明顯(P〈0. 01 )，這進(jìn)一步從血液生化角度表明了雌馬酚抗腦缺血再灌注損傷的效果。3. 5雌馬酚對腦缺血再灌注大鼠血清MDA含量的影響如圖1-5 所示(n=8，##P < 0. Olvs. Sham *P < 0. 05, **P < 0. 01 vs. Vehicle)，與Sham組相比，Vehicle組和各給藥組動物血清中MDA的含量均升高(P〈0. 01 )，這符合腦缺血再灌注損傷以脂質(zhì)過氧化為標(biāo)志的特征。給予不同劑量的雌馬酚均能降低腦缺血再灌注動物血清中的MDA含量，以2. 5mg/kg和I. 25mg/kg劑量組的血清MDA含量降低較明顯(P〈0. 01或P〈0. 05)，表明雌馬酚能抑制腦組織脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)腦缺血再灌注損傷。上述檢測結(jié)果表明雌馬酚對腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。二、雌馬酚對大鼠血壓的影響I.材料I. I儀器BP-6動物無創(chuàng)血壓采集處理系統(tǒng)，TM_WAVE動物無創(chuàng)血壓測試軟件，BP-6動物無創(chuàng)血壓測試箱，大鼠鼠籠均購自成都泰盟科技有限公司I. 2藥品雌馬酚購自南京萊茵醫(yī)藥科技有限公司。I. 3動物健康雄性SD大鼠，體重220_250g，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。2.方法2. I動物分組與給藥
體重220_250g的健康雄性SD大鼠，依次測量血壓后隨機(jī)分為3組，分別為雌馬酚給藥2. 5mg/kg、l. 25mg/kg、0. 625mg/kg。連續(xù)灌胃給藥4天，I次/日，于末次給藥后30min再次測量血壓。2. 2血壓的測量將大鼠放入鼠籠中，露出鼠尾，將其穿過加壓尾套并盡可能固定在鼠尾根部。隨后將大鼠放入血壓測試箱中(溫度設(shè)定在37°C )。打開TM_WAVE軟件，觀察顯示窗口的脈搏波形是否穩(wěn)定。待動物安靜并出現(xiàn)穩(wěn)定的脈搏波形時(shí)，開始測量血壓。先給尾套充氣加壓，脈搏波逐漸減小，當(dāng)脈搏波消失時(shí)停止充氣，開始放氣。當(dāng)尾套壓力等于收縮壓時(shí)脈搏波開始出現(xiàn)，此點(diǎn)的血壓值即為鼠尾血壓值。重復(fù)測量3次，取其平均值。2. 3數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)測量采用TM_WAVE軟件，統(tǒng)計(jì)分析用SPSS 13. 0軟件，數(shù)據(jù)以mean±SE表示， 用Sigmaplot 10. 0軟件做統(tǒng)計(jì)圖。給藥前后比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P〈0. 05和P〈0. 01為差異具有顯著性，分別以和“**”表示。3.結(jié)果檢測結(jié)果如圖2-1所示(n=8)，雌馬酚3個(gè)劑量組給藥前后的血壓無明顯變化。說明雌馬酹在0. 625mg/kg^2. 5mg/kg劑量范圍對血壓無影響。三、雌馬酚對大鼠腦血流量的影響I.材料I. I儀器大鼠立體定位儀(日本Narishige, SN-2N);激光多普勒血流測定儀(瑞典Perimed, PF5001 )、激光針式探頭(瑞典 Perimed, probe-407)> PSff 軟件(瑞典 Perimed)I. 2藥品雌馬酚購自南京萊茵醫(yī)藥科技有限公司。I. 3動物健康雄性SD大鼠，體重220_250g，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。2.方法2. I腦血流量測定大鼠腹腔注射10%水合三氯乙醒(4ml/kg)麻醉,將頭部固定在大鼠立體定位儀上，剪開頭部皮膚及皮下組織，暴露顱骨，在大腦頂葉頂端鉆孔、開窗(大小以能放置針式探頭即可)，并小心去除硬腦膜。使用激光多普勒血流測定儀觀測腦血流約20min，若血流值一直較穩(wěn)定，則開始腹腔注射給藥。藥物劑量分為2. 5mg/kg、I. 25mg/kg和0. 625mg/kg三組，給藥后觀察腦血流量的變化。觀察時(shí)間約2-3h，以腦血流量穩(wěn)定至給藥前水平為止。2. 2數(shù)據(jù)處理統(tǒng)計(jì)分析用SPSS 13. 0軟件,數(shù)據(jù)以mean土SE表示,用Sigmaplot 10. 0軟件做統(tǒng)計(jì)圖，給藥前后比較采用one-way ANOVA檢驗(yàn)。P〈0. 05和P〈0. 01為差異具有顯著性，分別以和“**”表示。3.結(jié)果檢測結(jié)果見圖3-1 (n=6, **P < 0. 01 vs. Vehicle), 2. 5mg/kg、I. 25mg/kg 兩個(gè)劑量組的腦血流量與給藥前相比明顯增加(P〈0. 01)，0. 625mg/kg組的腦血流量與給藥前相比無明顯改變。結(jié)果表明中、大劑量的雌馬酚可顯著增加腦血流量。四、雌馬酚對大鼠腦基底動脈及腸系膜動脈的舒張作用I.材料
I. I儀器血管張力測定儀(丹麥DMTA/S公司，610M);SHB_3循環(huán)水多用真空泵(鄭州杜普儀器廠)；解剖顯微鏡(日本Olympus公司，SZ1145) ;pH計(jì)(瑞士 MEITLER TOLEDO公司，DELTA 320);電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司，BSA124S);供氧裝置；顯微外科手術(shù)器械；可調(diào)微量加樣器(美國Eppendoff公司)；小型注射器。I. 2藥品5-輕色胺(5-HT)購自Sigma公司，溶于蒸懼水中；Paxilline (PAX)和Iberiotoxin (IbTX)購自Sigma公司，雌馬酚購自南京萊茵醫(yī)藥科技有限公司，以上三藥均溶于二甲亞砜中；所有藥物分別配成適當(dāng)濃度分裝保存于_20°C，應(yīng)用時(shí)稀釋成所需濃度。I. 3動物健康雄性SD大鼠，體重220-250g，由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。2.方法2. I營養(yǎng)液配制Krebs-Henseleit 液(KH 液)
權(quán)利要求
1.雌馬酚在制備保護(hù)腦缺血再灌注損傷的藥物的應(yīng)用。
2.雌馬酚在制備增加腦血流量的藥物的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是激活BKea通道的藥物。
4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物為不影響血壓的藥物。
5.雌馬酚在制備舒張血管的藥物的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是激活BKea通道的藥物。
7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物為舒張腦血管的藥物。
8.雌馬酚在制備激活BKea通道的藥物的應(yīng)用。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物為激活BKea通道的￠1亞單位的藥物。
10.雌馬酚在制備防治缺血性腦卒中的藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了基于雌馬酚激活BKCa通道的應(yīng)用，在采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型、尾套法測量大鼠血壓、激光多普勒血流儀觀測腦實(shí)質(zhì)和軟腦膜血流量及離體血管肌張力描記和膜片鉗技術(shù)的基礎(chǔ)上對雌馬酚藥用活性的檢測，結(jié)果表明雌馬酚通過激活BKCa通道β1亞單位，擴(kuò)張血管、增加腦血流量、保護(hù)缺血再灌注腦組織，有益于缺血性腦卒中的防治，可用于相關(guān)藥物的制備。
文檔編號A61K31/353GK102784135SQ20121023164
公開日2012年11月21日 申請日期2012年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月5日
發(fā)明者于瑋, 王燕, 鄧秀玲 申請人:西安交通大學(xué)