專利名稱：一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物及其制備工藝，屬于治療真菌感染疾病技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
我國(guó)中醫(yī)藥學(xué)歷史悠久，中藥業(yè)是我國(guó)傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)之一。中藥企業(yè)在生產(chǎn)出大量中成藥的同時(shí)，會(huì)產(chǎn)生相當(dāng)數(shù)量的藥渣，藥渣一般為濕物料，極易腐敗，味道臭異。早期中藥渣處理的形式主要包括填埋、焚燒、固定區(qū)域堆放等。這些處理方法不僅耗去大量資金，更造成了資源浪費(fèi)和嚴(yán)重的污染，如何處理中藥渣已經(jīng)成為一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。所以，利用生物技術(shù)對(duì)中藥藥渣進(jìn)行處理，以期達(dá)到變廢為寶，提高中藥資源的利用率備受人們的關(guān)·注。藥渣中不僅含有豐富的蛋白質(zhì)、纖維素等初生物質(zhì)，而且由于現(xiàn)在的提取工藝比較單一(水煎煮)，這些經(jīng)過(guò)提取、煎煮后的中藥中的部分活性成分仍殘留在藥渣中，這些殘留的初生及次生物質(zhì)使得藥渣具有很高的再利用價(jià)值，因此，藥渣作為一種資源開(kāi)始受到人們的重視，已成為中藥現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容之一。隨著大量廣譜抗生素的應(yīng)用、骨髓及器官移植的開(kāi)展、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑的應(yīng)用，導(dǎo)管介入治療，特別是艾滋病的流行，念珠菌血癥和皮膚、粘膜等真菌感染疾病逐漸增多。真菌感染發(fā)生率不斷上升，除了常見(jiàn)病原菌感染的數(shù)量不斷增多外，一些罕見(jiàn)的真菌感染也時(shí)有報(bào)道，針對(duì)真菌病日趨嚴(yán)重的形勢(shì)，對(duì)抗真菌藥物的研究也日益增多，但目前療效高、副作用低的抗真菌藥物不多。因此，研究開(kāi)發(fā)高校、無(wú)毒、價(jià)格低廉、應(yīng)用方便的抗真菌藥物具有深遠(yuǎn)的意義。金蓮花是毛茛科植物金蓮花(Trollius chinensis Bunge)的干燥花及花蕾,廣泛分布于西南、西北、華北、東北等地區(qū)。金蓮花具有悠久的藥用歷史，民間用開(kāi)水沏當(dāng)茶，具有清熱解毒之功效。目，國(guó)內(nèi)有數(shù)十家制藥公司生產(chǎn)金蓮花中藥，有金蓮花膠囊、金蓮花片齊U、金蓮花口服液、金蓮花注射液等制劑，臨床主要用于治療感冒、發(fā)燒、慢性扁桃體炎、急性鼓膜炎、尿路感染等炎癥。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，全國(guó)每年利用金蓮花制藥產(chǎn)生的藥渣有數(shù)百萬(wàn)噸，而絕大多數(shù)被廢棄掉，不僅污染環(huán)境，而且藥廠為處理藥渣還要消耗大量費(fèi)用。因此如何將金蓮花藥渣充分利用，變廢為寶，意義深遠(yuǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物及其制備工藝，工藝流程簡(jiǎn)單、成本低廉、應(yīng)用方便，效果好，解決背景技術(shù)中存在的上述問(wèn)題。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物制備工藝，包含如下工藝步驟
①將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培養(yǎng)，取高壓滅菌后的增菌液體培養(yǎng)基于無(wú)菌容器內(nèi)，無(wú)菌環(huán)境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5_7 h ；③將活化增值的酵母菌液加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40—60%的金蓮花藥渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均勻后繼續(xù)發(fā)酵；
④發(fā)酵條件為培養(yǎng)溫度30—37°C，培養(yǎng)時(shí)間72— 96小時(shí)；
⑤發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物加入無(wú)水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，將提取液1500-2500轉(zhuǎn)/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發(fā)酵物。所述的金蓮花藥渣發(fā)酵物提取率為4-8%，即100克金蓮花藥渣發(fā)酵后用乙醇提取獲得4-8克金蓮花藥渣發(fā)酵物，每克金蓮花藥渣發(fā)酵物相當(dāng)含藥渣12. 5-25g。所述的增菌液體培養(yǎng)基比例為蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000 ml蒸餾水中。一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物，將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末作為原料，以安琪酵母菌為發(fā)酵菌種，同時(shí)加入酵母菌生長(zhǎng)必須的蛋白胨、葡萄糖營(yíng)養(yǎng)成分，提取金蓮花藥渣發(fā)酵物，所述金蓮花藥渣發(fā)酵物為發(fā)酵品的乙醇提取物，干燥后每克金蓮花藥渣發(fā)酵物相當(dāng)含藥渣12. 5-25g。金蓮花藥渣發(fā)酵物根據(jù)需要制成不同劑型，作為抗真菌藥物，用于人體的體內(nèi)、夕卜真菌感染治療與畜禽真菌感染疾病治療。將所述金蓮花藥渣發(fā)酵物研磨粉末后，可制成片齊U、膠囊或顆粒劑等劑型，用于口服治療全身真菌感染疾?。灰部梢灾瞥伤?jiǎng)?、軟膏、洗劑或噴霧劑，治療皮膚、粘膜等真菌感染。用金蓮花藥渣發(fā)酵物治療動(dòng)物體內(nèi)不同途徑真菌感染模型，觀察其動(dòng)物體內(nèi)外感染真菌的治療效果，同時(shí)觀察了其毒性。結(jié)果表明金蓮花藥渣發(fā)酵物對(duì)感染真菌的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有很好的治療效果，并未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用；體外直接抗真菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明對(duì)臨床分離的致病及耐藥真菌菌株有良好的抑制或殺滅效果，其抗真菌濃度明顯低于常規(guī)的艾葉水煎劑和乙醇提取物。本發(fā)明為臨床或牲蓄抗真菌藥物提供一種新的選擇，具有成本低廉、應(yīng)用方便、效益高等特點(diǎn)。本發(fā)明的積極效果是(I)金蓮花藥渣資源豐富，把金蓮花提取藥用成分后的藥渣和廢棄物治理及其資源充分利用有效結(jié)合，符合可持續(xù)發(fā)展和循環(huán)經(jīng)濟(jì)的基本國(guó)策，對(duì)國(guó)家、企業(yè)、消費(fèi)者都有益，具有推廣應(yīng)用前景，會(huì)產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益；(2)金蓮花藥渣發(fā)酵藥用價(jià)值高，制藥企業(yè)生產(chǎn)金蓮花制劑絕大多數(shù)是水煎煮提物有效成分，部分有效成分殘留在藥渣中。本發(fā)明應(yīng)用微生物發(fā)酵，經(jīng)微生物酶的作用可以使一些成分進(jìn)一步轉(zhuǎn)化，另一方面一些有效成分可用乙醇進(jìn)一步萃取出來(lái)，為金蓮花資源的再利用和新用途提供科學(xué)依據(jù)；(3)制備工藝簡(jiǎn)單本方法工藝流程簡(jiǎn)單，不需要特殊儀器和設(shè)備，成本低，生產(chǎn)周期短，適合于工業(yè)化生產(chǎn)；(4)應(yīng)用方便，效果明顯該制劑用量小、效價(jià)比高、儲(chǔ)存及應(yīng)用均方便。并能明顯增加真菌感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的治療效果；(5)減少污染，增加經(jīng)濟(jì)效益金蓮花藥渣含水量較高，極易腐敗，會(huì)對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重的污染，并且藥渣的廢棄物中尚含有蛋白質(zhì)、多糖、各種微量元素和維生素及一定量可利用成分，及時(shí)對(duì)其進(jìn)行綜合利用，不僅可以解決污染問(wèn)題，還可帶來(lái)一定的經(jīng)濟(jì)效益，具有廣闊的前景。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。、
一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物制備工藝，包含如下工藝步驟
①將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培養(yǎng)，取高壓滅菌后的增菌液體培養(yǎng)基于無(wú)菌容器內(nèi)，無(wú)菌環(huán)境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5_7 h ；
③將活化增值的酵母菌液加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40—60%的金蓮花藥渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均勻后繼續(xù)發(fā)酵；
④發(fā)酵條件為培養(yǎng)溫度30—37°C，培養(yǎng)時(shí)間72— 96小時(shí)；
⑤發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物加入無(wú)水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，將提取液1500-2500轉(zhuǎn)/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發(fā)酵物。在實(shí)施例中，本發(fā)明按上述制備工藝將金蓮花藥渣進(jìn)行發(fā)酵，在規(guī)定的范圍內(nèi)進(jìn)行了幾個(gè)方案的制備，并對(duì)其發(fā)酵產(chǎn)物提取物進(jìn)行了體外和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，均得到一致的有益結(jié)果。實(shí)施例一
①酵母菌活化增殖培養(yǎng)增菌液體培養(yǎng)基酵母菌=IOOml :5g，35°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7
h0②活化酵母菌與金蓮花藥渣比例活化酵母菌液金蓮花藥渣=IOOml :40g。③發(fā)酵條件為溫度30°C，時(shí)間96小時(shí)。④發(fā)酵物提取方法發(fā)酵物加入無(wú)水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到60%，70°C萃取2h，提取液1500轉(zhuǎn)/分離心25min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70 V水浴成膏狀，80 V烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發(fā)酵提取物。實(shí)施例二
①酵母菌活化增殖培養(yǎng)增菌液體培養(yǎng)基酵母菌=IOOml :8g，36°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)6
h0②活化酵母菌與金蓮花藥渣比例活化酵母菌液金蓮花藥渣=IOOml :50g。③發(fā)酵條件為溫度34°C，時(shí)間84小時(shí)。④發(fā)酵物提取方法發(fā)酵物加入無(wú)水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到70%，70°C萃取4h，提取液2000轉(zhuǎn)/分離心20min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發(fā)酵提取物。實(shí)施例三
①酵母菌活化增殖培養(yǎng)=YPD液體培養(yǎng)基酵母菌=IOOml :10g，37°C恒溫培養(yǎng)箱 培養(yǎng)5
h0②活化酵母菌與金蓮花藥渣比例活化酵母菌液金蓮花藥渣=IOOml :60g。③發(fā)酵條件為溫度37°C，時(shí)間72小時(shí)。④發(fā)酵物提取方法發(fā)酵物加入無(wú)水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到80%，70°C萃取3h，提取液2500轉(zhuǎn)/分離心15min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發(fā)酵提取物。將實(shí)施例一、二、三研磨成粉末，分別制成膠囊、片劑、顆?？诜糜趧?dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，制成霜?jiǎng)?、軟膏、洗劑外用進(jìn)行皮膚粘膜抗真菌實(shí)驗(yàn)。
體外抗真菌實(shí)驗(yàn)
采用試管法和平皿法觀察金蓮花藥渣發(fā)酵提取物(試樣)對(duì)白色念珠菌和羊毛狀小孢子菌體外抗真菌作用，并以氟康唑?yàn)殛?yáng)性對(duì)照藥，測(cè)定最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC);結(jié)果見(jiàn)表I。表I結(jié)果顯示，試樣對(duì)白色念珠菌的抑制作用和殺滅作用幾乎與氟康唑相近，只相差一個(gè)梯度；試樣對(duì)羊毛狀小孢子菌的抑制作用和殺滅作用與氟康唑一致。其最低抑真菌濃度MIC和殺真菌濃度均較低。表I.試樣對(duì)白色念珠菌和羊毛狀小孢子菌的MIC和MBC
權(quán)利要求
1.一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物制備工藝，其特征在于包含如下工藝步驟 ①將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末； ②酵母菌活化增殖培養(yǎng)，取高壓滅菌后的增菌液體培養(yǎng)基于無(wú)菌容器內(nèi)，無(wú)菌環(huán)境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5_7 h ； ③將活化增值的酵母菌液加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40—60%的金蓮花藥渣粉末、4%蛋白胨、4%葡萄糖，混合均勻后繼續(xù)發(fā)酵； ④發(fā)酵條件為培養(yǎng)溫度30—37°C，培養(yǎng)時(shí)間72— 96小時(shí)； ⑤發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物加入無(wú)水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到60-80%，在提取器中70°C萃取2-4h，將提取液1500-2500轉(zhuǎn)/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到金蓮花藥渣發(fā)酵物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物制備工藝，其特征在于所述的金蓮花藥渣發(fā)酵物提取率為4-8%，即100克金蓮花藥渣發(fā)酵后用乙醇提取獲得4-8克金蓮花藥渣發(fā)酵物，每克金蓮花藥渣發(fā)酵物相當(dāng)含藥渣12. 5-25g。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物制備工藝，其特征在于所述的增菌液體培養(yǎng)基比例為蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000ml蒸餾水中。
4.一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物，其特征在于將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末作為原料，以安琪酵母菌為發(fā)酵菌種，同時(shí)加入酵母菌生長(zhǎng)必須的蛋白胨、葡萄糖營(yíng)養(yǎng)成分，提取金蓮花藥渣發(fā)酵物，所述金蓮花藥渣發(fā)酵物為發(fā)酵品的乙醇提取物，干燥后每克金蓮花藥渣發(fā)酵物相當(dāng)含藥渣12. 5-25g。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物，其特征在于所述金蓮花藥渣發(fā)酵物作為抗真菌藥物，用于人體的全身或局部真菌感染治療與畜禽全身或局部真菌感染疾病的治療。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述之一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物，其特征在于所述金蓮花藥渣發(fā)酵物研磨粉末后，制成片劑、膠囊或顆粒劑劑型，用于口服治療全身真菌感染疾??；制成霜?jiǎng)④浉?、洗劑或噴霧劑，治療皮膚、粘膜等真菌感染。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗真菌作用的金蓮花藥渣發(fā)酵物及其制備工藝，屬于治療真菌感染疾病技術(shù)領(lǐng)域。技術(shù)方案是將干燥后的金蓮花藥渣粉碎成粉末作為原料，以安琪酵母菌為發(fā)酵菌種，同時(shí)加入酵母菌生長(zhǎng)必須的蛋白胨、葡萄糖營(yíng)養(yǎng)成分，提取金蓮花藥渣發(fā)酵物，所述金蓮花藥渣發(fā)酵物為發(fā)酵品的乙醇提取物，干燥后每克金蓮花藥渣發(fā)酵物相當(dāng)含藥渣12.5-25g。試驗(yàn)結(jié)果表明金蓮花藥渣發(fā)酵物對(duì)感染真菌的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有很好的治療效果，并未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用；對(duì)臨床分離的致病及耐藥真菌菌株有良好的抑制或殺滅效果，其抗真菌濃度與臨床常用的抗真菌藥物氟康唑、潔爾陰一致。本發(fā)明為臨床或牲蓄抗真菌藥物提供一種新的選擇，具有成本低廉、應(yīng)用方便、效益高等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/10GK102727599SQ20121023618
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月10日
發(fā)明者儲(chǔ)金秀, 勾向博, 安春娜, 張博男, 張瀟, 王建行, 王志路, 王樹(shù)華, 白靜, 胡雷, 韓婷, 韓淑英 申請(qǐng)人:河北聯(lián)合大學(xué)