專利名稱：一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物及其制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物及其制備工藝，屬于治療真菌感染疾病藥物的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
艾蒿Artemisia vulgaris L.,也稱艾葉草,為菊科蒿屬多年生野生草本植物。艾蒿為我國傳統(tǒng)中藥，以葉入藥。艾蒿具有溫經(jīng)止血、散寒止痛、調(diào)經(jīng)安胎、除濕止癢、通經(jīng)活絡(luò)等功效艾葉具有抗菌、增強網(wǎng)狀上皮細(xì)胞的吞噬、平喘、抗過敏性休克、鎮(zhèn)咳、祛痰、利膽等作用。艾蒿是一種具有藥、食兩用等多功能植物，分布于全國各地，藥源豐富，毒性低，價廉，具有廣泛的開發(fā)利用價值。艾蒿雖然在民間習(xí)用已有幾千年歷史，但應(yīng)用方法絕大 多數(shù)是艾葉水煎或溶劑提取(多為乙醇)物或常常與其他中藥配伍來治療疾病。艾葉水煎劑或乙醇提取物抗真菌作用有少量文獻(xiàn)報道，且抗真菌作用量較大。應(yīng)用于抗真菌更多的是與其它中藥組成復(fù)方制劑。艾蒿不僅葉中含有活性成分，大量廢棄的根莖也含有較多的有效成分，但絕大多數(shù)用其葉入藥或用葉提取藥用成分，將大量的根莖棄掉，而且傳統(tǒng)的提取方法不能將有效成分充分提取出來，因此，不能充分利用艾蒿的功效作用，也浪費了寶貴的艾蒿中藥資源。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物及其制備工藝，工藝流程簡單、成本低廉、應(yīng)用方便，效果好，解決背景技術(shù)中存在的上述問題。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物制備工藝，包含如下工藝步驟
①將干燥的艾蒿根莖粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培養(yǎng)，取高壓滅菌后的增菌液體培養(yǎng)基于無菌容器內(nèi)，無菌環(huán)境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5_7 h ；
③將活化增值的酵母菌液加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40—60%的艾蒿根莖粉末、6%蛋白胨、6%葡萄糖，混合均勻后繼續(xù)發(fā)酵；
④發(fā)酵條件為培養(yǎng)溫度30—37°C，培養(yǎng)時間72— 96小時；
⑤發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物加入無水乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到60-80%，在提取器中70°C萃取3-5h，將提取液1500-2500轉(zhuǎn)/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，之后再80°C烤箱烤干，即得到艾蒿根莖發(fā)酵物。所述的艾蒿根莖發(fā)酵物提取率為5-10%，即100克艾蒿根莖發(fā)酵后用乙醇提取獲得5-10克艾蒿根莖發(fā)酵物，每克艾蒿根莖發(fā)酵物相當(dāng)含艾蒿根莖10-20g。所述的增菌液體培養(yǎng)基比例為蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000 ml蒸餾水中?！N抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物，將艾蒿干燥根莖粉碎物作為原料，以安琪酵母菌為發(fā)酵菌種，同時加入酵母菌生長必須的蛋白胨、葡萄糖營養(yǎng)成分，提取艾蒿根莖發(fā)酵物，所述艾蒿根莖發(fā)酵物為發(fā)酵品的乙醇提取物，干燥后每克相當(dāng)于含艾蒿根莖10 — 20克。艾蒿根莖發(fā)酵物根據(jù)需要制成不同劑型，作為抗真菌藥物，用于人體的全身、局部真菌感染的治療與畜禽全身、局部 真菌感染疾病治療。將所述艾蒿根莖發(fā)酵物研磨粉末后，可制成片劑、膠囊或顆粒劑等劑型，用于口服治療全身真菌感染疾??；也可以制成霜劑、軟膏、洗劑或噴霧劑，治療皮膚、粘膜等真菌感染。用艾蒿根莖發(fā)酵物治療動物體內(nèi)不同途徑真菌感染模型，觀察其動物體內(nèi)外感染真菌的治療效果，同時觀察了其毒性。結(jié)果表明艾蒿根莖發(fā)酵物對感染真菌的實驗動物有很好的治療效果，并未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用；體外直接抗真菌實驗，結(jié)果表明對臨床分離的致病及耐藥真菌菌株有良好的抑制或殺滅效果，其抗真菌濃度明顯低于常規(guī)的艾葉水煎劑和乙醇提取物。本發(fā)明為臨床或牲蓄抗真菌藥物提供一種新的選擇，具有成本低廉、應(yīng)用方便、效益聞等特點。本發(fā)明的積極效果是(1)艾蒿根莖資源豐富艾蒿是一種具有藥、食兩用等多功能植物，分布于全國各地，藥源豐富，毒性低，價廉。但艾蒿多以葉入藥，大量的根莖被廢棄掉，因此艾蒿根莖資源豐富、經(jīng)濟、易得。(2)艾蒿根莖發(fā)酵藥用價值高本發(fā)明應(yīng)用微生物發(fā)酵艾蒿根莖，微生物有著非常強大的分解轉(zhuǎn)化物質(zhì)的能力，并能產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物，通過微生物的生長代謝和生命活動來炮制中藥，可以比一般的物理或化學(xué)的炮制手段更大幅度地獲得有效藥用成分，提高療效，降低毒副作用，擴大適應(yīng)癥。另一方面本發(fā)明用乙醇將一些有效成分進(jìn)一步萃取出來，為艾蒿資源的充分利用和新用途提供科學(xué)依據(jù)；(3)制備工藝簡單本方法工藝流程簡單，不需要特殊儀器和設(shè)備，成本低，生產(chǎn)周期短，適合于工業(yè)化生產(chǎn)；(4)應(yīng)用方便，效果明顯該制劑用量小、效價比高、儲存及應(yīng)用均方便。并能明顯增加真菌感染實驗動物的治療效果；(5)減少污染，增加經(jīng)濟效益艾葉用于藥用成分，但艾蒿根莖往往被廢棄堆放或被焚燒，既污染環(huán)境也浪費了很好的資源，對其進(jìn)行充分利用，不僅可以解決污染問題，還可帶來一定的經(jīng)濟效益，具有廣闊的前景。
具體實施例方式以下通過實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物制備工藝，包含如下工藝步驟
①將干燥的艾蒿根莖粉碎成粉末；
②酵母菌活化增殖培養(yǎng)，取高壓滅菌后的增菌液體培養(yǎng)基于無菌容器內(nèi)，無菌環(huán)境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5_7 h ；
③將活化增值的酵母菌液加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40—60%的艾蒿根莖粉末、6%蛋白胨、6%葡萄糖，混合均勻后繼續(xù)發(fā)酵；
④發(fā)酵條件為培養(yǎng)溫度30—37°C，培養(yǎng)時間72— 96小時；
⑤發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物加入無水乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到60-80%，在提取器中70°C萃取3-5h，將提取液1500-2500轉(zhuǎn)/分，離心15-25分鐘；取上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，之后再80°C烤箱烤干，即得到艾蒿根莖發(fā)酵物。在實施例中，本發(fā)明按上述制備工藝將艾蒿根莖進(jìn)行發(fā)酵，在規(guī)定的范圍內(nèi)進(jìn)行了幾個方案的制備，并對其提取的艾蒿根莖發(fā)酵物進(jìn)行了體外和體內(nèi)動物實驗，均得到一致的有益結(jié)果。實施例一
①酵母菌活化增殖培養(yǎng)增菌液體培養(yǎng)基酵母菌=IOOml :5g，35°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7h ;②活化酵母菌與艾蒿根莖粉末比例活化酵母菌液艾蒿根莖粉末=IOOml 40g ;③發(fā)酵條件為 溫度30°C，時間96小時；④發(fā)酵物提取方法發(fā)酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到60%，70°C萃取3h，提取液1500轉(zhuǎn)/分離心25min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到艾蒿根莖發(fā)酵物。實施例二
①酵母菌活化增殖培養(yǎng)增菌液體培養(yǎng)基酵母菌=IOOml :8g，36°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)6h ;②活化酵母菌與艾蒿根莖粉末比例活化酵母菌液艾蒿根莖粉末=IOOml 50g ;③發(fā)酵條件為 溫度34°C，時間84小時；④發(fā)酵物提取方法發(fā)酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到70%，70°C萃取4h，提取液2000轉(zhuǎn)/分離心20min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到艾蒿根莖發(fā)酵物。實施例三
①酵母菌活化增殖培養(yǎng)增菌液體培養(yǎng)基酵母菌=IOOml :10g，37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5h ;②活化酵母菌與艾蒿根莖粉末比例活化酵母菌液艾蒿根莖粉末=IOOml 60g ;③發(fā)酵條件為 溫度37°C，時間72小時；④發(fā)酵物提取方法發(fā)酵物加入無水乙醇，使乙醇濃度達(dá)到80%，70°C萃取5h，提取液2500轉(zhuǎn)/分離心15min。上清液回收乙醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，80°C烤箱烤干，即得到艾蒿根莖發(fā)酵物。將實施例一、二、三得到的艾蒿根莖發(fā)酵物研磨成粉末，分別制成膠囊、片劑、顆?？诜糜趧游矬w內(nèi)實驗，制成霜劑、軟膏、洗劑外用進(jìn)行皮膚粘膜抗真菌實驗。體外抗真菌實驗
采用試管法和平皿法觀察艾蒿根莖發(fā)酵提取物(試樣)對白色念珠菌和羊毛狀小孢子菌體外抗真菌作用，并以艾葉水煎劑和乙醇提取物為對照，測定最小抑真菌濃度(MIC)和最小殺真菌濃度(MBC);結(jié)果見表I。表I結(jié)果顯示，試樣對白色念珠菌的抑制作用和殺滅作用明顯強于艾葉水煎劑和乙醇提取物；試樣對羊毛狀小孢子菌的抑制作用和殺滅作用也明顯強于艾葉水煎劑和乙醇提取物。其最低抑真菌濃度MIC和殺真菌濃度MBC均明顯低于艾葉水煎劑和乙醇提取物。表I.試樣對白色念珠菌和羊毛狀小孢子菌的MIC和MBC
藥物白色念珠菌(ug/ml)_ 羊毛狀小孢子菌(Ug/ml)
I_ MIC_MBC[ IIC_HBC
實施例_ (膠棄) 7.312515.62515.62531.25
.實施例二(片剤)7'812515.62515.625氾.比—
實施例三(顆粒)7-812515.62515.62531-25
+…^500.00250.00
艾葉水?dāng)M剤125.00500I
I--j--1-----------------1--1
250.00125.00I
艾葉乙廳提取物 62. 50_ ___ 250,00 [2.體內(nèi)口服抗真菌實驗
實驗選用SPF級健康昆明小鼠，雌雄各半。首先用環(huán)磷酰胺造成小鼠免疫功能低下，之后用白色念珠菌IOVml個菌液尾靜脈注射(0. 2ml/只)，注射真菌同時小鼠灌胃試樣各劑型，按60、30、15mg/kg三個劑量組，每組20只，每天灌胃一次，連續(xù)7天，觀察各組小鼠死亡情況。結(jié)果見表2。表2試樣對白色念珠菌感染小白鼠死亡率(％)的影響(n=20)
權(quán)利要求
1.一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物制備工藝，其特征在于包含如下工藝步驟 ①將干燥的艾蒿根莖粉碎成粉末； ②酵母菌活化增殖培養(yǎng)，取高壓滅菌后的增菌液體培養(yǎng)基于無菌容器內(nèi)，無菌環(huán)境下加安琪干酵母5-10克/100ml，置35-37°C恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)5_7 h ； ③將活化增值的酵母菌液加入質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為40—60%的艾蒿根莖粉末、6%蛋白胨、6%葡萄糖，混合均勻后繼續(xù)發(fā)酵； ④發(fā)酵條件為培養(yǎng)溫度30—37°C，培養(yǎng)時間72— 96小時； ⑤發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵物加入無水乙醇，使乙醇終濃度達(dá)到60-80%，在提取器中70°C萃取3-5h，將提取液1500-2500轉(zhuǎn)/分離心15-25分鐘；取上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上回收乙 醇，回收乙醇后的剩余液70°C水浴成膏狀，之后再80°C烤箱烤干，即得到艾蒿根莖發(fā)酵物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述之一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物制備工藝，其特征在于所述的艾蒿根莖發(fā)酵物提取率為5-10%，即100克艾蒿根莖發(fā)酵后用乙醇提取獲得5-10克艾蒿根莖發(fā)酵物，每克艾蒿根莖發(fā)酵物相當(dāng)含艾蒿根莖10_20g。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述之一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物制備工藝，其特征在于所述的增菌液體培養(yǎng)基比例為蛋白胨40 g、酵母浸粉20 g、葡萄糖40 g，置于1000 ml蒸餾水中。
4.一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物，其特征在于將艾蒿干燥根莖粉碎物作為原料，以安琪酵母菌為發(fā)酵菌種，同時加入酵母菌生長必須的蛋白胨、葡萄糖營養(yǎng)成分，提取艾蒿根莖發(fā)酵物，所述艾蒿根莖發(fā)酵物為發(fā)酵品的乙醇提取物，干燥后每克相當(dāng)于含艾蒿根莖10—20 克。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述之一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物，其特征在于所述艾蒿根莖發(fā)酵物作為抗真菌藥物，用于人體的全身、局部真菌感染的治療與畜禽全身、局部真菌感染疾病治療。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述之一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物，其特征在于所述艾蒿根莖發(fā)酵物研磨粉末后，制成片劑、膠囊或顆粒劑劑型，用于口服治療全身真菌感染疾病；制成霜劑、軟膏、洗劑或噴霧劑，治療皮膚、粘膜等真菌感染。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗真菌作用的艾蒿根莖發(fā)酵物及其制備工藝，屬于治療真菌感染疾病技術(shù)領(lǐng)域。技術(shù)方案是將艾蒿干燥根莖粉碎物作為原料，以安琪酵母菌為發(fā)酵菌種，同時加入酵母菌生長必須的蛋白胨、葡萄糖營養(yǎng)成分，提取艾蒿根莖發(fā)酵物，所述艾蒿根莖發(fā)酵物為發(fā)酵品的乙醇提取物，干燥后每克相當(dāng)于含艾蒿根莖10—20克。試驗結(jié)果表明艾蒿根莖發(fā)酵物對感染真菌的實驗動物有很好的治療效果，并未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用；對臨床分離的致病及耐藥真菌菌株有良好的抑制或殺滅效果，其抗真菌濃度明顯低于常規(guī)的艾葉水煎劑和乙醇提取物。本發(fā)明為臨床或牲蓄抗真菌藥物提供一種新的選擇，具有成本低廉、應(yīng)用方便、效益高等特點。
文檔編號A61P31/10GK102727550SQ20121023618
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月10日
發(fā)明者姜妍, 安春娜, 王志路, 白靜, 胡雷, 趙志宇, 鄭永強, 郭蘭, 韓淑英 申請人:河北聯(lián)合大學(xué)