專利名稱：一種雙歧桿菌微膠囊的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于益生菌制品制備技術領域，具體涉及一種雙歧桿菌微膠囊的制備方法。
背景技術：
正常人體腸道中存在著大量微生物，這些菌群的平衡對人體健康發(fā)揮著重要的作用。腸道內(nèi)正常菌群作為一個整體存在，相互依賴又相互制約，機體腸道內(nèi)菌群失調(diào)則出現(xiàn)一系列的生理功能紊亂，臨床表現(xiàn)為腹瀉和感染等。而近年來益生菌(劑)(probiotics)作為一類對人體有益的細菌的總稱，它對腹瀉和感染等疾病的治療和預防有特殊的功效，已成為微生物學的研究熱點，并在保健食工業(yè)上得到廣泛應用。雙歧桿菌是目前開發(fā)應用最熱門的益生菌之一，與其他藥物不同的是它起到“已病治病、未病防病、無病保健”的作用。雙歧桿菌(Bif idobacterium)是由Tissier于1899年從健康的母乳兒糞便中分離出來的，為革蘭陽性多形態(tài)細長桿菌，呈X字狀、Y字狀、彎曲狀，無芽胞、莢膜及鞭毛，亦無內(nèi)毒素和外毒素，對人獸均無致病性，其典型特征呈分叉生長。它為專性厭氧菌，最適溫度37°C，最適pH7.0，能發(fā)酵糖，產(chǎn)生醋酸和乳酸，以醋酸為主。其代謝產(chǎn)物對宿主的代謝也非常有益，雙歧桿菌制劑中的活菌進入人體后，能在消化道等腔道的粘膜表面形成一層具有保護作用的生物學屏障，阻止病原菌的定植和侵入，還能通過爭奪營養(yǎng)物質(zhì)而拮抗病原菌。隨著人年齡的增長、環(huán)境污染及抗生素的使用等影響，使雙歧桿菌在人體腸道內(nèi)的數(shù)量逐漸下降，從而造成腸道內(nèi)微生態(tài)平衡破壞，導致各種疾病或衰老的發(fā)生。因此，人們一直在尋找向腸道內(nèi)補充雙歧桿菌的方法。經(jīng)文獻檢索，張微、滿朝新等人于2011年9月申請了 “一種嬰兒雙歧桿菌微膠囊的制備方法”的專利，該專利于2012年I月公開，公開號是CN102302160A。此微膠囊的制備中采用轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶對嬰兒雙歧桿菌、明膠以及阿拉伯膠的混合溶液進行交聯(lián)反應。任發(fā)政于2009年5月申請了 “一種微膠囊化雙歧桿菌的制備方法”的專利，該專利于2009年12月公開，公開號是CN101597604。其制備方法是采用脫脂乳作為相分離凝聚法的壁材來源，通過凝乳酶和乳蛋白的相互作用形成微膠囊。上述兩項專利存在可操作性不強及生產(chǎn)成本較高的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術中不足而提供一種雙歧桿菌的存活率提高的雙歧桿菌復合微膠囊的制備方法，在微膠囊中加入促進雙歧桿菌增值的中藥等成分和促進人體腸道蠕動和腸道分泌水分的中藥成分，以達到使人體腸道有益菌群提高、改善便秘人群的便秘癥狀的目的。本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的
一種雙歧桿菌復合微膠囊的制備方法，步驟如下
步驟一復合菌懸液的制備、按照每IOOml蒸懼水中加入3-5g雙歧桿菌菌種、0. 5-lg懷山藥粉(完全過100目尼龍篩網(wǎng))、0. 5-lg水蘇糖(完全過100目尼龍篩網(wǎng))的比例，在20-30°C條件下，將以上三種加入到蒸餾水中，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
按照每IOOml蒸餾水中加入5-12g果膠、0. 5-lg苦杏仁提取物、0. 5-lg砂仁提取物的比例，將以上三種加入到蒸餾水中，用蒸餾水在20-30°C條件下溶脹I I. 5小時后，攪拌溶解，在20-30°C條件下放置4-6小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三按照每IOOml蒸懼水中加入3-5g海藻酸鈉、0. 5-lg橘皮提取物、0. 5-lg桅子提取物的比例，將以上三種加入到蒸餾水中，用蒸餾水在20-30°C條件下溶脹I I. 5小時后，攪拌溶解，在20-30°C條件下放置4-6小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟四復合微膠囊的制備
將3% 5%重量百分比濃度的菌懸液與I. 0% I. 5%重量百分比濃度的溶解后的果膠等體積混合，充分攪拌均勻后，形成耐酸的保護層；
再與I. 5% 2. 5%重量百分比的溶解后的海藻酸鈉混合均勻，形成雙層包埋；
然后用注射的方式將含有雙層包埋的混合液注入到的2. 5% 4%重量百分比濃度的氯化鈣溶液中進行固化30min，得到雙層凝膠珠，然后用蒸餾水清洗2 5次，直至洗去雙層凝膠珠表面的氯化鈣，形成雙歧桿菌復合微膠囊凝膠珠，自然風干即得最終成品。為了更好的實現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的步驟一中的懷山藥粉為完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉。所述的步驟一中的水蘇糖為完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖。本發(fā)明技術方案帶來的有益效果 (I)本發(fā)明提出了一種新的制備雙歧桿菌粉微膠囊的方法，去掉了殼聚糖的成膜反應，降低了生產(chǎn)成本。( 2 )本發(fā)明提供的雙歧桿菌用腸溶性材料對其進行包埋，隔絕外界空氣，讓其在胃酸中幾乎不溶，在腸道中緩釋，經(jīng)腸道消化后提高了生物利用度，且存活率高于文獻報導。中藥等組分的功效研究
懷山藥枸杞及其它中藥對雙歧桿菌(Bifidobacteria)增殖和發(fā)酵影響的研究(四川大學.微生物。2004年。作者為張火云)。文中以青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)為研究對象，以枸杞、山藥等為主要材料，較系統(tǒng)地研究了枸杞及其它中藥對雙歧桿菌生長的影響，研究結果表明山藥對雙歧桿菌的增殖有明顯促進作用。水蘇糖是天然存在的一種四糖，是一種可以顯著促進雙歧桿菌等有益菌增殖的功能性低聚糖。對人體胃腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌群有著極明顯的增殖作用，能迅速改善人體消化道內(nèi)環(huán)境，調(diào)節(jié)微生態(tài)菌群平衡。它能促進形成有益菌在消化道內(nèi)的優(yōu)勢菌地位，抑制產(chǎn)氣產(chǎn)酸梭狀芽孢桿菌等腐敗菌的生產(chǎn)，另外產(chǎn)生大量生理活性物質(zhì)，調(diào)節(jié)腸道pH值、滅殺致病菌，阻遏腐敗產(chǎn)物生成，抑制內(nèi)源致癌物的產(chǎn)生和吸收，并且分解衍生出多重免疫功能因子?？嘈尤侍崛∥餅樗N薇科植物山杏仁的提取物，含苦杏仁甙(amygdalin)約3%，月旨肪油約50%,并含苦杏仁酶(emulsin)、苦杏仁式酶(amygdalase)、樓葉酶(prunase)、醇腈酶(oxynitrilase),以及可溶性蛋白質(zhì)。具有降氣止咳平喘、潤腸通便的功效。用于咳嗽氣喘、胸滿痰多、血虛津枯、熱燥便秘。
砂仁提取物是熱帶和亞熱帶姜科植物的的果實或種子。砂仁主要作用于人體的胃、腎和脾，能夠行氣調(diào)味，和胃醒脾。砂仁常與厚樸、枳實、陳皮等配合，治療胸脘脹滿、腹脹食少等病癥。砂仁提取物中含揮發(fā)油，油中含乙酸龍腦酯、樟腦、樟烯、檸檬烯、^ -菔烯、苦橙油醇(nerolidol)及a -菔烯、茨烯、桉油精、芳樟醇、a -胡椒烯、愈創(chuàng)木醇(guaiaol)等。另含黃酮類成分。橘皮提取物橘皮，又稱為陳皮，為蕓香科植物橘及其栽培變種的成熟果皮。含揮發(fā)油I. 9% 3. 5%.其中主要為朽1檬烯(Limonene)。此外，尚含橙皮式(Hesperidin)、新橙皮式(Neohesperidin)、柑橘素(Tangeretin);黃酮化合物、枸櫞醒、P _谷甾醇(3-Sitosterol)、對輕福林(Synephrine)等。有理氣調(diào)中，燥濕化痰功效,可用于治療脾胃氣滯，脘腹脹滿，嘔吐，或濕濁中阻所致胸悶、納呆，但陰津虧損，內(nèi)有實熱者慎用。桅子提取物
提取物的致瀉作用桅子提取物中含去乙酰車葉草甙酸甲酯，有瀉下作用，小鼠的半數(shù)有效量為0.53g/kg，服用6小時后開始腹瀉。另外，羥異桅子甙亦有導瀉作用，小鼠口服的 半數(shù)有效量為1.2g/kg，服后3小時開始作用。桅子甙的導瀉作用半數(shù)有效量為300mg/kg，服藥后3小時起作用。桅子甙酸的導瀉作用半數(shù)有效量>800mg/kg。
具體實施例方式下面結合具體的實施方式對本發(fā)明作進一步的描述，但是不局限于以下的實施例。
實施例I :
一種雙歧桿菌復合微膠囊的制備方法，步驟如下
步驟一復合菌懸液的制備
在30°C條件下，在IOOml蒸餾水中加入3g雙歧桿菌菌種、Ig完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉、Ig完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
在IOOml蒸餾水中加入5g果膠、Ig苦杏仁提取物、Ig砂仁提取物的比例，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置6小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三在IOOml蒸餾水中加入3g海藻酸鈉、Ig橘皮提取物、Ig桅子提取物的比例，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置6小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三復合微膠囊的制備
將3% 5%重量百分比濃度的菌懸液與步驟二中的I. 0% I. 5%重量百分比濃度的溶解后的液體等體積混合，充分攪拌均勻后，形成耐酸的保護層；
再與步驟三中I. 5% 2. 5%重量百分比的溶解后的液體混合均勻，形成雙層包埋；然后用注射的方式將含有雙層包埋的混合液注入到的2. 5% 4%重量百分比濃度的氯化鈣溶液中進行固化30min，得到雙層凝膠珠，然后用蒸餾水清洗2 5次，直至洗去雙層凝膠珠表面的氯化鈣，形成雙歧桿菌復合微膠囊凝膠珠，自然風干即得最終成品。
實施例2 :與實施例I工藝過程相同，不同的部分如下
步驟一復合菌懸液的制備
在20°C條件下，在IOOml蒸餾水中加入5g雙歧桿菌菌種、0. 5g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉、0. 5g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
按照每IOOml蒸餾水中加入12g果膠、0. 5g苦杏仁提取物、0. 5g砂仁提取物的比例，用蒸餾水在20°C條件下溶脹I小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用； 步驟三按照每IOOml蒸懼水中加入5g海藻酸鈉、0. 5g橘皮提取物、0. 5g桅子提取物的比例，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在20-30°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用；
實施例3 :與實施例I的工藝過程相同，不同如下
步驟一復合菌懸液的制備
在30°C條件下，在IOOml蒸餾水中加入4g雙歧桿菌菌種、0. 7g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉、0. 7g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
按照每IOOml蒸餾水中加入8g果膠、0. Ig苦杏仁提取物、0. Ig砂仁提取物的比例，將以上三種加入到蒸餾水中，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置6小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三按照每IOOml蒸懼水中加入4g海藻酸鈉、0. Ig橘皮提取物、0. 8g桅子提取物的比例，將以上三種加入到蒸餾水中，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置6小時時間，超聲除去氣泡，備用；
實施例4 :與實施例I工藝過程相同，不同如下
步驟一復合菌懸液的制備
在20°C條件下，在IOOml蒸餾水中加入4g雙歧桿菌菌種、0. 6g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉、0.6g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
按照每IOOml蒸餾水中加入6g果膠、0. 6g苦杏仁提取物、0. 6g砂仁提取物的比例，用蒸餾水在25°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在25°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三按照每IOOml蒸懼水中加入4g海藻酸鈉、0. 6g橘皮提取物、0. 6g桅子提取物的比例，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用。實施例5 :與實施例I工藝過程一樣，不同如下
步驟一復合菌懸液的制備
在20°C條件下，在IOOml蒸餾水中加入4g雙歧桿菌菌種、0. 8g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉、0. Sg完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
按照每IOOml蒸餾水中加入8g果膠、0. 8g苦杏仁提取物、0. 8g砂仁提取物的比例，用蒸餾水在25°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在25°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三按照每IOOml蒸懼水中加入4g海藻酸鈉、0. 8g橘皮提取物、0. 8g桅子提取物的比例，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用。實施例6 :與實施例I過程一樣，不同如下
步驟一復合菌懸液的制備
在20°C條件下，在IOOml蒸餾水中加入4g雙歧桿菌菌種、0. 9g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉、0.9g完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用；
步驟二 壁材的溶解
按照每IOOml蒸餾水中加入IOg果膠、0. 9g苦杏仁提取物、0. 9g砂仁提取物的比例，用蒸餾水在25°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在25°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用；
步驟三按照每IOOml蒸餾水中加入4g海藻酸鈉、0. 9g橘皮提取物、0. 9g桅子提取物的比例，用蒸餾水在30°C條件下溶脹I. 5小時后，攪拌溶解，在30°C條件下放置5小時時間，超聲除去氣泡，備用。耐微酸性實驗
(I)時間2012年04月20日一06月25日。(2)原輔料
雙歧桿菌粉武漢東方之子生物工程有限責任公司，含量205億/g 。批號DFZZ20120301；
海藻酸鈉青島鴻杰海藻有限公司批號H20120203 ；
果膠(食用級)安徽宇寧生物科技有限公司批號YN20120211 ；
氯化鈣濰坊龍騰化工有限公司含量94%批號20120101;
表I :
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通過耐微酸性實驗表1，證明試驗達到了預期效果，雙歧桿菌菌粉在胃液中的成活率非常低，滅活非?？臁９局谱鞯碾p歧桿菌復合微膠囊在胃液中的成活率比較高，幾乎無滅活，而且性能比較穩(wěn)定。 腸溶性指標試驗數(shù)據(jù)如下
表2 :
權利要求
1.一種雙歧桿菌復合微膠囊的制備方法，其特征在于步驟如下 步驟一復合菌懸液的制備 按照每IOOml蒸餾水中加入3-5g雙歧桿菌菌種、0. 5-lg懷山藥粉、0. 5_lg水蘇糖的比例，在20-30°C條件下，將以上三種加入到蒸餾水中，攪勻，用24目合成纖維篩網(wǎng)過濾，濾液即是菌懸液，備用； 步驟二 壁材的溶解 按照每IOOml蒸餾水中加入5-12g果膠、0. 5-lg苦杏仁提取物、0. 5-lg砂仁提取物的比例，將以上三種加入到蒸餾水中，用蒸餾水在20-30°C條件下溶脹I I. 5小時后，攪拌溶解，在20-30°C條件下放置4-6小時時間，超聲除去氣泡，備用； 步驟三按照每IOOml蒸懼水中加入3-5g海藻酸鈉、0. 5-lg橘皮提取物、0. 5-lg桅子提取物的比例，將以上三種加入到蒸餾水中，用蒸餾水在20-30°C條件下溶脹I I. 5小時后，攪拌溶解，在20-30°C條件下放置4-6小時時間，超聲除去氣泡，備用； 步驟四復合微膠囊的制備 將3% 5%重量百分比濃度的菌懸液與I. 0% I. 5%重量百分比濃度的溶解后的果膠等體積混合，充分攪拌均勻后，形成耐酸的保護層； 再與I. 5% 2. 5%重量百分比的溶解后的海藻酸鈉混合均勻，形成雙層包埋； 然后用注射的方式將上述的混合液注入到的2. 5% 4%重量百分比濃度的氯化鈣溶液中進行固化30min，得到雙層凝膠珠，然后用蒸餾水清洗2 5次，直至洗去雙層凝膠珠表面的氯化鈣，形成雙歧桿菌復合微膠囊凝膠珠，自然風干即得最終成品。
2.根據(jù)權利要求I所述的一種雙歧桿菌復合微膠囊的制備方法，其特征在于所述的步驟一中的懷山藥粉為完全過100目尼龍篩網(wǎng)的懷山藥粉。
3.根據(jù)權利要求I所述的一種雙歧桿菌復合微膠囊的制備方法，其特征在于所述的步驟一中的水蘇糖為完全過100目尼龍篩網(wǎng)的水蘇糖。
全文摘要
本發(fā)明屬于益生菌制品制備技術領域，具體涉及一種雙歧桿菌微膠囊的制備方法，步驟一復合菌懸液的制備，步驟二壁材的溶解，步驟三復合微膠囊的制備，本發(fā)明提出了一種新的制備雙歧桿菌粉微膠囊的方法，去掉了殼聚糖的成膜反應，降低了生產(chǎn)成本，本發(fā)明提供的雙歧桿菌用腸溶性材料對其進行包埋，隔絕外界空氣，讓其在胃酸中幾乎不溶，在腸道中緩釋，經(jīng)腸道消化后提高了生物利用度，且存活率高于文獻報導。
文檔編號A61K35/74GK102755589SQ201210263548
公開日2012年10月31日 申請日期2012年7月28日 優(yōu)先權日2012年7月28日
發(fā)明者趙振華 申請人:趙振華