具有增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞作用的組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種具有增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞作用的組合物及其制備方法，所述組合物由以下原料制成：黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧。
【專利說明】具有增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞作用的組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及ー種具有增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞作用的組合物及其制備方法，所述組合物由以下原料制成:黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧。
【背景技術(shù)】
[0002]疲勞是機(jī)體在一定環(huán)境條件下，由于長(zhǎng)時(shí)間或過于繁重、緊張的勞動(dòng)(包括腦カ和體力)而引起的工作效率暫時(shí)降低的ー種生理心理現(xiàn)象。免疫カ是人體自身的防御機(jī)制，是人體識(shí)別和消滅外來侵入的任何異物(病毒、細(xì)菌等)；處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細(xì)胞以及識(shí)別和處理體內(nèi)突變細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的能力。
[0003]隨著社會(huì)的進(jìn)步，人們的生活、工作節(jié)奏不斷加快，不斷面臨著來自社會(huì)、家庭的各種壓力，經(jīng)常出現(xiàn)飲食不合理、起居不規(guī)律、勞逸失衡、休息不足、過度緊張、壓カ過大以及不良情緒等身心問題，而自然環(huán)境的污染和惡化也威脅著人們的身心健康。這些因素導(dǎo)致身心失調(diào)，機(jī)體處于亞健康狀態(tài)，免疫力下降，容易疲勞，甚至未老先衰。根據(jù)對(duì)2.3萬的人流行病學(xué)調(diào)查，18-40歲的人隨著年齡增長(zhǎng)，心身輕度失調(diào)呈緩慢上升趨勢(shì)；到了 40歲以上，潛臨床狀態(tài)的比例陡然升高；55歲前后進(jìn)入前臨床狀態(tài)的明顯增多；65歲以上的人即使沒有明確的病變存在，大多數(shù)人也處于生理性衰老狀態(tài)。這告訴我們，亞健康狀態(tài)在中年以后變得明朗化，滑向疾病的步伐迅速加快。因此，積極預(yù)防、改善和治療亞健康狀態(tài)對(duì)于疾病的預(yù)防非常重要。
[0004]亞健康的發(fā)病多因七情內(nèi)傷，加之勞倦、飲食、生活不節(jié)等導(dǎo)致體內(nèi)陰陽平衡失調(diào)，升降失常，氣血津液、臟腑經(jīng)絡(luò)功能紊亂，出現(xiàn)心脾氣血兩虧、脾虛濕盛、肝郁氣滯、氣滯血疲、肝腎陰虧等；如不加調(diào)整進(jìn)ー步發(fā)展，引起臟腑氣血功能失調(diào)，將會(huì)導(dǎo)致氣滯、血疲、痰濕、郁久化熱進(jìn)而出現(xiàn)熱、毒、疲、虛的一系列病理變化。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，應(yīng)主要通過藥物協(xié)調(diào)陰陽，調(diào)理臟腑，補(bǔ)氣健脾等來治療亞健康狀態(tài)。亞健康人群以中年以上人群居多，他們大多數(shù)臟腑虛弱，氣血虧少陰陽偏頗，故用藥當(dāng)以平和為主，重在調(diào)和氣血陰陽，健脾和胃益腎。
[0005]因此，本領(lǐng)域需要能夠有效增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞作用的藥品、保健食品，以預(yù)防、改善和治療亞健康狀態(tài)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)方面，提供了ー種具有增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞作用的組合物，其特征在于所述組合物由以下原料制得:
[0007]黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧。
[0008]根據(jù)本發(fā)明的另ー個(gè)方面，提供了上述本發(fā)明的組合物的制備方法，所述方法包括以下步驟:
[0009](a)將黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧混合；
[0010](a)用足量水、醇或醇的水溶液提取(a)中所得混合物；[0011](b)過濾步驟(b)所得混合物，收集濾液；
[0012](c)任選地再將步驟(b)和(C)重復(fù)進(jìn)行1-3次，優(yōu)選2次，并且合并收集的濾液；
[0013](d)任選地將合并的濾液濃縮和/或干燥；和
[0014](e)任選地加入藥學(xué)或食品可接受的添加剤。
[0015]本發(fā)明的組合物具有增強(qiáng)免疫功能和緩解疲勞的作用，可以用于預(yù)防、改善和/或治療免疫力下降，亞健康狀態(tài)，疲勞綜合征，消化系統(tǒng)疾病如厭食、消化不良、腹脹噯氣、便秘或腹瀉、慢性胃炎、萎縮性胃炎、胃腸功能紊亂等，呼吸系統(tǒng)疾病如流行性感冒、病毒性感冒以及易感體質(zhì)、久咳、哮喘、慢性氣管炎及支氣管炎等，月經(jīng)不調(diào)、貧血、神經(jīng)衰弱、腰膝酸軟、頭暈耳鳴、視カ下降、尿頻、夜尿、陽痿早泄、性欲減退、記憶カ下降等癥狀或疾病。
【具體實(shí)施方式】
[0016]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物由以下原料制得:
[0017]20-80重量份、優(yōu)選30-60重量份、更優(yōu)選40重量份的黃苗；10-40重量份、優(yōu)選15-30重量份、更優(yōu)選20重量份的人參；15-60重量份、優(yōu)選22.5_45重量份、更優(yōu)選30重量份的乳鴿肉；10-40重量份、優(yōu)選15-30重量份、更優(yōu)選20重量份的山藥；13-52重量份、優(yōu)選19.5-39重量份、更優(yōu)選26重量份的枸杞子；3-12重量份、優(yōu)選4.5-9重量份、更優(yōu)選6重量份的龍眼肉；8-32重量份、優(yōu)選12-24重量份的大棗、更優(yōu)選16重量份的大棗；和3_12重量份、優(yōu)選4.5-9重量份、更優(yōu)選6重量份的蛤蚧。
[0018]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物由以下原料制得:
[0019]20-80重量份的黃芪、10-40重量份的人參、15-60重量份的乳鴿肉、10-40重量份的山藥、13-52重量份的枸杞子·、3-12重量份的龍眼肉、8-32重量份的大率和3_12重量份的蛤蚧。
[0020]在進(jìn)ー步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物由以下原料制得:
[0021]30-60重量份的黃芪、15-30重量份的人參、22.5-45重量份的乳鴿肉、15-30重量份的山藥、19.5-39重量份的枸杞子、4.5-9重量份的龍眼肉、12-24重量份的大棗和4.5-9重量份的蛤蚧。
[0022]在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物由以下原料制得:
[0023]40重量份的黃芪、20重量份的人參、30重量份的乳鴿肉、20重量份的山藥、26重量份的枸杞子、6重量份的龍眼肉、16重量份的大棗和6重量份的蛤蚧。
[0024]本文使用的術(shù)語“黃苗”指豆科植物蒙古黃苗Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.var.mongho丄icus (Bge?ノHsiao 或月臭類黃 Artragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根，可以是生黃芪、炒黃芪和炙黃芪。
[0025]本文使用的術(shù)語“人參”指五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根莖，可以是各種種類的參，如園參、山參、生曬參、生曬山參、白糖參、紅參；還可以選用人參葉替代所述人參。所述人參葉為五加科植物人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥葉。
[0026]本文使用的術(shù)語“乳鴿肉”是指將體重為0.30-0.40kg的家鴿(鴿形目(Columbiformes)鳩鴻科(Columbidae)鴻屬(Columba))除去毛和內(nèi)臟的鴻肉用烤箱于約120-140°C如約130°C，烘烤2-4小時(shí)如約3.5小時(shí)得到的干肉。使用前可于4°C或更低溫度下儲(chǔ)存，儲(chǔ)存期限為約2年。[0027]本文使用的術(shù)語“山藥”指薯菌科植物薯菌Dioscorea opposita Thunb.的干燥根莖。
[0028]本文使用的術(shù)語“枸杞子”指爺科植物寧夏枸杞Lycium barb arum L.的干燥成熟果實(shí)。
[0029]本文使用的術(shù)語“龍眼肉”指無患子科植物龍眼Dimocarpus longan Lour.的假種皮。
[0030]本文使用的術(shù)語“大棗”指鼠李科植物棗Ziziphus jujuba Mill.的干燥成熟果實(shí)。
[0031] 本文使用的術(shù)語“蛤階”指壁虎科動(dòng)物蛤階Gekko gecko Linnaeus的干燥體。
[0032]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可以通過本領(lǐng)域中的常規(guī)方法和技術(shù)來制備，例如通過用水、醇(如甲醇或こ醇或其組合，優(yōu)選こ醇)或醇的水溶液提取所述原料制得。優(yōu)選地，所述組合物通過用こ醇水溶液提取所述原料制得，所述提取優(yōu)選通過浸潰法或滲漉法進(jìn)行。所述こ醇水溶液的こ醇濃度為20%-99% (v/v)，優(yōu)選為20%-75% (v/v)，更優(yōu)選為20%-55% (v/v)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述こ醇水溶液可以為適合的食用或飲用酒，包括釀造酒和蒸餾酒。
[0033]本文使用的術(shù)語“釀造酒”是指以谷物、水果等為原料經(jīng)發(fā)酵而制得的含有こ醇的酒精飲料。釀造酒不經(jīng)過進(jìn)ー步的蒸餾。所述釀造酒包括米酒(又稱“醪糟”或“黃酒”等)、葡萄酒、果汁酒等。
[0034]本文所用的術(shù)語“蒸餾酒”是指通過蒸餾由谷物、水果或植物等發(fā)酵得到的こ醇而制得的含有こ醇的酒精飲料，包括白酒、清酒、白蘭地、伏特加、威士忌、朗姆酒、龍舌蘭酒、金酒等。其中，由谷物為原料制備的蒸餾酒稱作“谷類酒”，如白酒、清酒、威士忌等。
[0035]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述こ醇水溶液為釀造酒，例如米酒。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，所述こ醇水溶液為蒸餾酒，優(yōu)選谷類酒，例如白酒。
[0036]上文提及各種酒是可以商購得到的，或者可以通過釀酒【技術(shù)領(lǐng)域】的常規(guī)方法和技術(shù)來制備得到。
[0037]本發(fā)明的組合物可以多種形式存在。
[0038]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述組合物可以為溶液、懸浮液、流浸膏、浸膏或干燥固體如粉末、顆粒的形式。所述組合物為含有こ醇的溶液的形式，其中こ醇濃度為20%-75%(v/v)，優(yōu)選為 20%-55% (v/v)，更優(yōu)選為 20%-45% (v/v)。
[0039]任選地，所述組合物還包含藥學(xué)或食品可接受的添加剤。所述添加劑可選自適合的賦形劑、填充劑、防腐剤、抗氧化劑、粘合劑、載體(如水、糖衆(zhòng)、酒基等)、著色劑、澄清劑、芳香剤、濕潤(rùn)劑、增塑劑、助懸劑、甜味劑、抗粘附劑、粘合剤、稀釋劑、崩解劑、助流劑、潤(rùn)滑劑、增稠劑、張カ劑等。
[0040]本發(fā)明的組合物可以是藥物制劑的形式。
[0041]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是ロ服藥物制劑的形式，并且可以按照本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
[0042]在進(jìn)ー步的實(shí)施方案中，所述ロ服藥物制劑可以為液體制劑、混懸劑、浸膏劑、流浸膏劑或固體制劑的形式，例如酒劑、酉了劑、合劑、糖漿劑、丸劑、散劑、片劑、膠囊、顆粒劑或滴丸。優(yōu)選地，所述ロ服藥物制劑為酒劑、酊劑、合劑或糖漿劑的形式，更優(yōu)選為酒劑的形式。優(yōu)選地，所述酒劑的こ醇濃度為20%-75% (v/v)，優(yōu)選為20%-55% (v/v)，更優(yōu)選為20%-45% (v/v)，例如 20%、32%、35%、38%、39%、40%、42%、45%、50% 或 52% (v/v)。以本發(fā)明組合物的原料(生藥)的總重量計(jì)，所述酒劑包含約0.08-0.33、優(yōu)選約0.12-0.25g、更優(yōu)選約0.16g生藥/ml酒劑。所述酒劑的日服用量可以為例如30ml或更少至150ml或更多/日，如50-120ml或75ml/日，可分I或2次服用，并且可每日、每隔一日、每隔二日或以其他時(shí)間間隔服用，視服用者的性別、年齡、體重、生活方式或一般健康情況等條件而定。
[0043] 也可以將本發(fā)明的組合物配制成食品的形式，特別是酒精飲料的形式。優(yōu)選地，所述酒精飲料的こ醇濃度為20%-75% (v/v)，優(yōu)選為20%-55% (v/v)，更優(yōu)選為20%_45% (v/V)。以本發(fā)明組合物的原料(生藥)的總重量計(jì)，所述酒精飲料包含約0.08-0.33、優(yōu)選約0.12-0.25g、更優(yōu)選約0.16g生藥/ml酒精飲料。所述酒精飲料的日服用量可以為例如30ml或更少至150ml或更多/日，如50-120ml或75ml/日，可分I或2次服用，并且可每日、每隔一日、每隔二日或以其他時(shí)間間隔服用，視服用者的性別、年齡、體重、生活方式或一般健康情況等條件而定。
[0044]可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法和食品可接受的添加劑將本發(fā)明的組合物配制成食品特別是酒精飲料的形式。
[0045]本申請(qǐng)還提供上述本發(fā)明的組合物的制備方法。所述方法可包括將上述本發(fā)明組合物的原料分開地提取，然后合并所得提取物的步驟；或者所述方法可包括將所述原料混合在一起提取的步驟。
[0046]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物通過包括以下步驟的方法制備:
[0047](a)將黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧混合；
[0048](b)用足量水、醇或醇的水溶液提取(a)中所得混合物；
[0049](c)過濾步驟(b)所得混合物，收集濾液；
[0050]任選地再將步驟(b)和(C)重復(fù)進(jìn)行1-3次，優(yōu)選2次，并且合并收集的濾液；[0051 ] 任選地將合并的濾液濃縮和/或干燥；和
[0052]任選地加入藥學(xué)或食品可接受的添加剤。
[0053]在上述方法中，所述醇可以為甲醇、こ醇或其組合，優(yōu)選こ醇，所述醇的水溶液可以為甲醇水溶液、こ醇水溶液或其組合，優(yōu)選こ醇水溶液。
[0054]在一個(gè)實(shí)施方案中，在上述方法的步驟(b)中，使用こ醇水溶液進(jìn)行所述提取，優(yōu)選通過浸潰法或滲漉法，更優(yōu)選通過浸潰法進(jìn)行所述提取。
[0055]在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，在上述方法的步驟(b)中，使用こ醇水溶液通過浸潰法進(jìn)行所述提取，其中所述こ醇水溶液的こ醇濃度為20%-99% (v/v)，優(yōu)選為20%-75% (v/V)，更優(yōu)選為20%-55% (v/v)。優(yōu)選地，所述こ醇水溶液為食用或飲用酒，包括釀造酒如米酒和蒸餾酒如谷類酒。優(yōu)選地，在所述特別的實(shí)施方案中，在上述方法的步驟(b)中，于約18-32°C如約20-25°C，在密閉容器中進(jìn)行所述浸潰6_24天，優(yōu)選10-20天，更優(yōu)選15天。從經(jīng)濟(jì)學(xué)的角度考慮，為了充分提取所述原料，所述方法可包括上述步驟(d)。進(jìn)ー步地，例如為了制備濃縮的浸膏或流浸膏、或者固體形式的組合物，或者利用如此獲得組合物進(jìn)ー步配制成藥物制劑或食品的形式，所述方法還可包括上述步驟(e)和/或(f)。或者，進(jìn)ー步地，例如為了制備溶液形式的組合物，上述方法還可包括以下步驟:(g)于約18-32°C如約20-25°C，在密閉容器中將步驟(c)或(d)中所得濾液陳化10-20天，優(yōu)選12-18天，更優(yōu)選15天，過濾并收集濾液，從而避免長(zhǎng)期保存時(shí)析出沉淀。更優(yōu)選地，上述方法還包括以下步驟:(h)將步驟(g)中所得濾液的こ醇濃度調(diào)整到20%-75% (v/v)，優(yōu)選20%-55% (v/v),更優(yōu)選20%-45%(v/v)。由所述步驟(g)和/或(h)所得的液體組合物可以作為、或用于制備本發(fā)明的溶液形式、ロ服液體藥物制劑形式或酒精飲料形式的組合物。其中，こ醇濃度的調(diào)整是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，例如可以通過濃縮濾液和/或加入こ醇或更高濃度的こ醇水溶液來提高こ醇濃度，或者通過加入水或更低濃度的こ醇水溶液來降低こ醇濃度。
[0056]在ー個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物通過包括以下步驟的方法制備:
[0057](a)將 200-800g 黃芪、100-400g 人參、150-600g 乳鴿肉、100-400g 山藥、130_520g枸杞子、30-120g龍眼肉、80-320g大棗和30_120g蛤蚧混合；
[0058](b)于約 18-32°C (如約 20-25°C)，用 1750_7000ml こ醇濃度為 20%_55%(v/v)、優(yōu)選20%的こ醇水溶液(優(yōu)選米酒或白酒)在密閉容器中浸潰(a)中所得混合物10-20天，優(yōu)選15天；
[0059](c)過濾步驟(b)所得混合物，收集濾液；[0060](d)再重復(fù)進(jìn)行步驟(b)和(C) 1-3次，優(yōu)選2次，并且合并收集的濾液；
[0061](e)于約18_32°C(如約20_25°C )，在密閉容器中將濾液陳化10-20天，優(yōu)選12-18天，更優(yōu)選15天，過濾并收集濾液；
[0062](f)將所得濾液的こ醇濃度調(diào)整到20%_55% (v/v)，優(yōu)選20%_45% (v/v);和
[0063](g)任選地加入藥學(xué)或食品可接受的添加剤。
[0064]在另ー個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物通過包括以下步驟的方法制備:
[0065](a)將400g黃芪、200g人參、300g乳鴿肉、200g山藥、260g枸杞子、60g龍眼肉、160g大棗和60g蛤蚧混合；
[0066](b)于約18_32°C (如約20_25°C)，用3500mlこ醇濃度為20%(v/v)的こ醇水溶液(優(yōu)選米酒或白酒)在密閉容器中浸潰(a)中所得混合物15天；
[0067](C)過濾步驟(b)所得混合物，收集濾液。
[0068](d)再重復(fù)進(jìn)行步驟(b)和(C) 2次，并且合并收集的濾液。
[0069](e)于約18_32°C (如約20_25°C )，在密閉容器中將濾液陳化15天，過濾并收集濾液。
[0070](f)將所得濾液的こ醇濃度調(diào)整到20%(v/v);和
[0071](g)任選地加入藥學(xué)或食品可接受的添加剤。
[0072]所述任選加入的藥學(xué)或食品可接受的添加劑可選自適合的防腐劑、抗氧化劑、著色劑、澄清劑、芳香剤、助懸劑、甜味劑、張カ劑等。
[0073]實(shí)驗(yàn)證明:(I)本發(fā)明的組合物能促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞増殖、轉(zhuǎn)化能力，促進(jìn)小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，促進(jìn)小鼠的抗體生成細(xì)胞増殖，提高小鼠的血清溶血素水平，促進(jìn)小鼠的單核-巨噬細(xì)胞的吞噬功能，而對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值及NK細(xì)胞活性無明顯影響，表明本發(fā)明的組合物具有增強(qiáng)免疫功能的作用；
(2)本發(fā)明的組合物能延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，減少疲勞小鼠的血清尿素產(chǎn)生，増加小鼠的肝糖原的儲(chǔ)備量，減少小鼠運(yùn)動(dòng)后的血乳酸曲線下面積，而對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)無明顯影響，表明本發(fā)明的組合物具有緩解疲勞的作用。
[0074]因此，本發(fā)明的組合物、制劑、食品和酒精飲料可用于預(yù)防、改善和/或治療免疫力下降，亞健康狀態(tài)，疲勞綜合征，消化系統(tǒng)疾病如厭食、消化不良、腹脹噯氣、便秘或腹瀉、慢性胃炎、萎縮性胃炎、胃腸功能紊亂等，呼吸系統(tǒng)疾病如流行性感冒、病毒性感冒以及易感體質(zhì)、久咳、哮喘、慢性氣管炎及支氣管炎等，月經(jīng)不調(diào)、貧血、神經(jīng)衰弱、腰膝酸軟、頭暈耳鳴、視カ下降、尿頻、夜尿、陽痿早泄、性欲減退、記憶カ下降等癥狀或疾病。
[0075]下面通過實(shí)施例更詳細(xì)地例示本發(fā)明，但下述實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制，本發(fā)明的范圍僅由所附權(quán)利要求定義。
[0076]實(shí)施例
[0077]實(shí)施例1 一本發(fā)明的溶液形式的組合物的制備 [0078]取黃芪400g、人參200g、乳鴿肉300g、山藥200g、枸杞子260g、龍眼肉60g、大棗160g和蛤蚧60g，置于容器中，用20%(v/v)的白酒3500ml于室溫、密閉條件下浸泡15天，過濾并收集濾液。再重復(fù)以上浸泡和過濾操作2次，并且合并收集的濾液，于室溫下在密閉容器中陳化15天，并調(diào)整酒精度到20%，攪勻，過濾，得到約10000ml本發(fā)明的組合物。
[0079]實(shí)施例2 —本發(fā)明的溶液形式的組合物的制備
[0080]取黃芪200g、人參100g、乳鴿肉150g、山藥100g、枸杞子130g、龍眼肉30g、大棗80g和蛤蚧30g，置于容器中，用52%(v/v)的白酒1200ml于室溫、密閉條件下浸泡10天，過濾并收集濾液。再重復(fù)以上浸泡和過濾操作3次，并且合并收集的濾液，得到約4600ml濾液，即為本發(fā)明的組合物。
[0081]實(shí)施例3 —本發(fā)明的溶液形式的組合物的制備
[0082]除用約75%(v/v)的白酒、每次用5000ml浸潰并最后通過加入飲用水將酒精度調(diào)整到50%以外，以與實(shí)施例1相同的方法，用黃芪700g、人參150g、乳鴿肉500g、山藥100g、枸杞子400g、龍眼肉30g、大棗100g和蛤蚧80g制得酒精度為50%的約20000ml本發(fā)明的
組合物。
[0083]實(shí)施例4 一本發(fā)明的流浸膏形式的組合物的制備
[0084]取黃芪200g、人參400g、乳鴿肉150g、山藥150g、枸杞子130g、龍眼肉30g、大棗80g和蛤蚧40g，將乳鴿肉切碎，將其余藥材粉碎成粗粉，置于容器中。用70%こ醇水溶液作溶劑，浸潰24小時(shí)后，以每分鐘l_3ml的速度緩緩滲漉，收集初漉液900ml，另器保存。繼續(xù)滲漉并收集續(xù)漉液，至滲漉液色淡為止，濃縮至稠膏狀，加入初漉液，混勻，用60%こ醇水溶液稀釋至1000ml，靜置至澄清，濾過，即得本發(fā)明的組合物。
[0085]實(shí)施例5 —本發(fā)明的浸膏形式的組合物的制備
[0086]取黃芪300g、人參100g、乳鴿肉300g、山藥400g、枸杞子400g、龍眼肉120g、大棗300g和蛤蚧100g，將乳鴿肉切碎，將其余藥材粉碎成粗粉，置于容器中。用75%こ醇水溶液回流提取2次(10000ml，然后8000ml)，每次1.5小時(shí)，合并提取液。濾過，減壓濃縮濾液并回收こ醇至稠膏狀，即得本發(fā)明的組合物。
[0087]實(shí)施例6-8 —本發(fā)明的固體形式的組合物的制備
[0088]采用與實(shí)施例1-3相同的方法，在收集浸潰液之后，減壓濃縮并回收こ醇，至浸膏狀，干燥，研細(xì)并過四號(hào)篩，即得粉末形式的本發(fā)明的組合物。
[0089]實(shí)施例9-11 一本發(fā)明的固體形式的組合物的制備
[0090]分別取如實(shí)施例1-3所述的原料，置于容器中，加足量水煎煮三次，毎次煎煮時(shí)間為約2小吋。合并三次煎煮所得煎液，濾過，并將濾液真空濃縮成浸膏，干燥，研細(xì)并過四號(hào)篩，即得粉末形式的本發(fā)明的組合物。
[0091]實(shí)施例12 —包含本發(fā)明組合物的酒精飲料的制備
[0092]將實(shí)施例1制備的本發(fā)明組合物，分裝為75ml/杯的形式，檢驗(yàn)合格后即得本發(fā)明的酒精飲料。
[0093]實(shí)施例13 —包含本發(fā)明組合物的酒精飲料的制備
[0094]將實(shí)施例2制備的本發(fā)明組合物干室溫下在密閉容器中陳化18天，加入飲用水約716ml并攪勻，將酒精度調(diào)整到約45%，過濾，得到約5315ml濾液。將濾液分裝為75ml/杯的形式，檢驗(yàn)合格后即得本發(fā)明的酒精飲料。
[0095]實(shí)施例14 一包含本發(fā)明組合物的酒精飲料的制備
[0096]將實(shí)施例3制備的本發(fā)明組合物分裝為75ml/杯的形式，檢驗(yàn)合格后即得本發(fā)明的酒精飲料。
[0097]實(shí)駘例
[0098]實(shí)驗(yàn)例I 一本發(fā)明的酒精飲料增強(qiáng)免疫功能的作用
[0099]1.材料和方法
[0100]1.1.供試品:實(shí)施例12的酒精飲料，規(guī)格為75mL/杯，產(chǎn)品批號(hào):20100501。成人ロ服推薦用量為1.25mL/kg體重/天。以送檢的20倍濃縮液樣品(不含こ醇，以下稱“濃縮液樣品”，置4°C冰箱保存)和50%こ醇濃度的酒基進(jìn)行試驗(yàn)。
[0101]1.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SPF·級(jí)健康昆明種雄性小鼠，體重為18~22克，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。共設(shè)6組:第I組進(jìn)行ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn):第II組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn);第III組進(jìn)行臟/體比值測(cè)定、血清溶血素測(cè)定和抗體生成細(xì)胞數(shù)測(cè)定；第IV~VI組分別進(jìn)行碳廓清實(shí)驗(yàn)、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測(cè)定。實(shí)驗(yàn)室溫度:22~25°C，相対濕度:55~70%。
[0102]1.3.劑量與給藥方式:根據(jù)上述成人ロ服推薦用量，設(shè)低、中、高劑量組，分別為
6.3,12.5,25.0mL/kg體重(分別相當(dāng)于人推薦用量的5、10、20倍)，并設(shè)ー個(gè)陰性對(duì)照組和一個(gè)酒基(溶剤)對(duì)照組，每組10只動(dòng)物。用純水將こ醇濃度為50%的酒基稀釋成15%的こ醇濃度。量取12.5mL濃縮液樣品，加こ醇濃度為50%的酒基60mL，再加純水至200mL，混勻，配成6.25%的溶液作為高劑量組溶液(こ醇終濃度為15%);再用こ醇濃度為15%的酒基溶液將該溶液依次對(duì)倍稀釋(取IOOmL,加こ醇濃度為15%的酒基溶液至200mL)，分別配成
3.125%、1.563%的溶液作為中、低劑量組溶液。按0.2mL/10g體重的體積分別給相應(yīng)劑量組動(dòng)物灌胃，陰性對(duì)照組給予等體積的純水，酒基對(duì)照組給予等體積的こ醇濃度為15%的酒基，每天灌胃一次，連續(xù)灌胃30天。
[0103]1.4?實(shí)驗(yàn)方法:
[0104]1.4.1.臟器/體重比值測(cè)定:稱重后處死小鼠，取出胸腺和脾臟，在電子分析天平上稱重，計(jì)算臟/體比值。
[0105]1.4.2.ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(MTT法):
[0106]無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’s液的小平皿中，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾。
[0107]用Hank’s液洗漆三次,離心10min(1000r/min)。然后將細(xì)胞懸浮于ImL完全培養(yǎng)液中，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3X IO6個(gè)/mL。再將細(xì)胞懸液加A 24孔培養(yǎng)板的2個(gè)孔中，每孔ImL,在其中一孔加75 u L ConA液(相當(dāng)于7.5 y g/mL),另一孔作為對(duì)照，置5%C02、37°C二氧化碳孵箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，從每孔輕輕吸去上清液0.7mL,加入0.7mL不含小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT (5mg/mL)50 u L/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解。然后，將每個(gè)孔中的溶液平行三份地添加到96孔培養(yǎng)板中，以570nm波長(zhǎng)在酶標(biāo)儀中測(cè)定光密度值。
[0108]淋巴細(xì)胞的増殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表示。
[0109]1.4.3.二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠DTH實(shí)驗(yàn)(耳腫脹法): [0110]實(shí)驗(yàn)結(jié)束前5天用硫化鋇將小鼠腹部皮膚脫毛約3cmX3cm范圍，用50 y L DNFB溶液均勻涂抹致敏，5天后將IOii L DNFB均勻涂抹于小鼠右耳兩面進(jìn)行攻擊,24小時(shí)后頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下8mm直徑的耳片、稱重，以左右耳重量之差值表示DTH的程度。
[0111]1.4.4.抗體生成細(xì)胞檢測(cè)(Jeren改良玻片法)
[0112]取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心10min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2% (v/v)的細(xì)胞懸液，每只小鼠腹腔注射0.2mL。將免疫后5天的小鼠處死，取脾臟置盛有Hank’s液的平皿內(nèi)，輕輕磨碎脾臟，制成細(xì)胞懸液，經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，離心IOmin (2000r/min),用Hank’s液洗漆2遍,最后將細(xì)胞懸浮在8mL Hank’s液中。將表層培養(yǎng)基(Ig瓊脂糖加雙蒸水至IOOmL)加熱溶解后，置于45~50°C水浴保溫，與等量的2倍濃度的Hank，s液(pH 7.2~7.4)混合，分裝入小試管，每管0.5mL，再向管內(nèi)加入50 u L10%SRBC(v/v，用SA緩沖液配制)、25 u L脾細(xì)胞懸液，迅速混勻后傾倒于已涂覆瓊脂糖薄層的玻片上，做平行片。待瓊脂凝固后，將玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育1.5h，將用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1:8)加入玻片架凹槽內(nèi)，繼續(xù)孵育1.5h，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。用空斑數(shù)/IO6脾細(xì)胞表示抗體生成細(xì)胞數(shù)。
[0113]1.4.5.血清溶血素的測(cè)定(血凝法)
[0114]取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心10min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2% (v/v)的細(xì)胞懸液，每只小鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除小鼠的眼球，取血于離心管內(nèi)，放置約lh，2000r/min離心lOmin，分離、收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別置于微量血凝板內(nèi)，每孔100 u L，再加入100 u L0.5% (v/v)的SRBC懸液，混勻，裝入濕潤(rùn)的平盤內(nèi)并加蓋，于37°C溫箱孵育3h，觀察血球凝集程度。按下式計(jì)算抗體積數(shù):
[0115]抗體積數(shù)=(Si+2S2+3S3......n Sn)
[0116]式中1、2、3……n為對(duì)倍稀釋的指數(shù)，S為凝集程度的級(jí)別。
[0117]1.4.6.小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)
[0118]經(jīng)尾靜脈給小鼠注射用生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射0.lmL。墨汁注入后立即計(jì)時(shí)，于注入墨汁后第2、10min，分別從內(nèi)眥靜脈叢取血20y L，加入到2mL
0.l%Na2C03溶液中，搖勻。以Na2CO3溶液作空白対照，以600nm波長(zhǎng)測(cè)光密度值(0D)。將小鼠處死，取肝、脾臟，稱重。按下式計(jì)算吞噬指數(shù)a。
[0119]a=K1/3X 體重 / (肝重 +脾重)，式中 K= (lg OD1-1g OD2) / (Vt1)
[0120]1.4.7.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(半體內(nèi)法)[0121]向小鼠腹腔注射雞紅細(xì)胞懸液(20% (v/v)，用生理鹽水配制)，每只小鼠lmL，間隔30min，頸椎脫臼處死小鼠，正中剪開腹腔皮膚，向腹腔注入2mL生理鹽水，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板lmin，吸出腹腔洗液lmL，平均滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，取出玻片于生理鹽水中漂洗后晾干，用甲醇:丙酮(1:1)溶液固定，用4% (v/v) Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用純水漂洗、晾干。于油鏡下每片計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)。
[0122]吞噬率(％)=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100
[0123]吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)的巨噬細(xì)胞數(shù)X 100
[0124]1.4.8.NK細(xì)胞活性測(cè)定(LDH測(cè)定法)
[0125]將小鼠頸椎脫曰處死，無菌取脾，制成脾細(xì)胞懸液，用Hank’ s液洗2次，每次離心IOmin (1000r/min)。棄上清將細(xì)胞漿彈起，加入0.5mL滅菌純水，放置20秒，裂解紅細(xì)胞后再加入 0.5mL 2 倍 Hank，s 液及 8mL Hank，s 液，1000r/min 離心 IOmin,用 ImL 含 10% 小牛血清的RPMI 1640完全培養(yǎng)液重懸，用1%冰醋酸稀釋后計(jì)數(shù)(活細(xì)胞數(shù)應(yīng)在95%以上)，用臺(tái)酚蘭染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，最后用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至2 X IO7個(gè)/mL，此為效應(yīng)細(xì)胞。取傳代后24h生長(zhǎng)良好的YAC-1細(xì)胞，用RPMI 1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至4X IO5個(gè)/mL，此為靶細(xì)胞。取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各IOOiiL (效應(yīng)細(xì)胞:靶細(xì)胞的比為50:1 )，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 u L，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%NP40各100 uし上述各項(xiàng)各設(shè)3個(gè)平行孔，置于37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h。然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100 u L置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)液100 u L，反應(yīng)8分鐘，每孔加入lmol/L的HCl 30 u L，在酶標(biāo)儀中于490nm處測(cè)定光密度(OD)值。按下式計(jì)算NK細(xì)胞活性。
[0126]NK細(xì)胞活性(％)=(反應(yīng)孔OD-自然釋放孔0D) / (最大釋放孔OD-自然釋放孔0D) X100%
[0127]1.5.結(jié)果判定:如果在細(xì)`胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細(xì)胞功能和NK細(xì)胞活性四方面中任兩個(gè)方面的結(jié)果為陽性，則可判定該供試品具有增強(qiáng)免疫功能的作用。
[0128]2.結(jié)果
[0129]2.1.對(duì)小鼠體重的影響
[0130]與酒基對(duì)照組、陰性對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)初、實(shí)驗(yàn)中期、實(shí)驗(yàn)?zāi)┢诟鲃┝拷M的小鼠體重及實(shí)驗(yàn)期間小鼠體重增長(zhǎng)值均無顯著性差異(P>0.05)，表明該供試品對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)無明顯影響。
[0131]2.2.對(duì)小鼠免疫器官/體重比值的影響
[0132]表1.免疫器官/體重比值(J士S)
[0133]
【權(quán)利要求】
1.一種組合物，其特征在于所述組合物由以下原料制得: 黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧。
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述組合物由以下原料制得: 20-80重量份、優(yōu)選30-60重量份、更優(yōu)選40重量份的黃芪；10_40重量份、優(yōu)選15-30重量份、更優(yōu)選20重量份的人參；15-60重量份、優(yōu)選22.5-45重量份、更優(yōu)選30重量份的乳鴿肉；10_40重量份、優(yōu)選15-30重量份、更優(yōu)選20重量份的山藥；13-52重量份、優(yōu)選19.5-39重量份、更優(yōu)選26重量份的枸杞子；3-12重量份、優(yōu)選4.5-9重量份、更優(yōu)選6重量份的龍眼肉；8-32重量份、優(yōu)選12-24重量份的大棗、更優(yōu)選16重量份的大棗；和3_12重量份、優(yōu)選4.5-9重量份、更優(yōu)選6重量份的蛤蚧。
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于所述組合物通過用こ醇水溶液提取所述原料制得，所述提取優(yōu)選通過浸潰法或滲漉法進(jìn)行。
4.如權(quán)利要求3所述的組合物，其特征在于所述こ醇水溶液的こ醇濃度為20%-99%(V/V)，優(yōu)選為 20%-75% (v/v)，更優(yōu)選為 20%-55% (v/v)。
5.如權(quán)利要求3或4所述的組合物，其特征在于所述こ醇水溶液為食用或飲用酒，包括釀造酒如米酒和蒸餾酒如谷類酒。
6.如權(quán)利要求3或4所述的組合物，其特征在于所述組合物為溶液、懸浮液、流浸膏、浸膏或干燥固體的形式，優(yōu)選為含有こ醇的溶液的形式。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于，所述組合物為含有こ醇的溶液的形式，其中こ醇濃度為20%-75% (v/v)，優(yōu)選為20%-55% (v/v)，更優(yōu)選為20%_45% (v/v)。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物還包含藥學(xué)或食品可接受的添加剤。
9.如權(quán)利要求8所述的組合物，其為ロ服藥物制劑如液體制劑、混懸劑、浸膏劑、流浸膏劑或固體制劑的形式，特別是酒劑、酊劑、合劑或糖漿劑的形式。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其為酒劑的形式。
11.如權(quán)利要求8所述的組合物，其為食品，特別是酒精飲料的形式。
12.權(quán)利要求1的組合物的制備方法，所述方法包括以下步驟: (a)將黃芪、人參、乳鴿肉、山藥、枸杞子、龍眼肉、大棗和蛤蚧混合； (b)用足量水、醇或醇的水溶液提取(a)中所得混合物； (C)過濾步驟(b)所得混合物，收集濾液； (d)任選地再將步驟(b)和(C)重復(fù)進(jìn)行1-3次，優(yōu)選2次，并且合并收集的濾液； (e)任選地將合并的濾液濃縮和/或干燥；和 (f)任選地加入藥學(xué)或食品可接受的添加剤。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述醇的水溶液為こ醇水溶液如食用或飲用酒，包括釀造酒如米酒和蒸餾酒如谷類酒。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中在步驟(b)中，通過浸潰法或滲漉法進(jìn)行所述提取，優(yōu)選通過浸潰法進(jìn)行所述提取。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述こ醇水溶液的こ醇濃度為20%-99%(v/v)，優(yōu)選為 20%-75% (v/v)，更優(yōu)選為 20%-55% (v/v)。
16.如權(quán)利要求14或15所述的方法，其中在步驟(b)中，于約18-32°C如約20-25°C，在密閉容器中進(jìn)行所述浸潰6-24天，優(yōu)選10-20天，更優(yōu)選15天。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于所述方法還包括以下步驟: (g)于約18-32°C如約20-25°C，在密閉容器中將步驟(c)或(d)中所得濾液陳化10-20天，優(yōu)選12-18天，更優(yōu)選15天，過濾并收集濾液。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于所述方法還包括以下步驟:
(h)將步驟(g)中所得濾液的こ醇濃度調(diào)整到20%-75%(v/v)，優(yōu)選20%-55%(v/v)，更優(yōu)選 20%-45% (v/v)。
【文檔編號(hào)】A61P37/04GK103585400SQ201210288197
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2012年8月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月14日
【發(fā)明者】江佩珍 申請(qǐng)人:廣西金嗓子有限責(zé)任公司, 廣西金嗓子藥業(yè)股份有限公司