專利名稱：低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫調(diào)節(jié)領(lǐng)域，主要涉及一種藥物聯(lián)合使用作為制備抗癌藥物中的應(yīng)用，具體說是利用低劑量納曲酮(LDN)聯(lián)合蛋氨酸腦腓肽(MENK)體內(nèi)給藥作為治療癌癥藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腫瘤治療包括手術(shù)、放療、化療和生物治療。通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫細(xì)胞來治療癌癥的方法稱作腫瘤免疫治療技術(shù)，屬生物治療范疇。既是通過調(diào)整或增強(qiáng)機(jī)體本來就有的內(nèi)在防御機(jī)制來抑制或殺傷腫瘤細(xì)胞，或通過抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化來降低腫瘤的惡性度。具體機(jī)理為1，外源給予免疫刺激劑或調(diào)節(jié)劑，糾正免疫功能底下狀態(tài)。2，直接給予具有免疫效應(yīng) 的細(xì)胞或具有抗癌活性的細(xì)胞因子，或采用過繼性細(xì)胞免疫治療。3，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)機(jī)體抗腫瘤效應(yīng)的敏感性。4，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤對(duì)機(jī)體所致?lián)p傷的耐受。5，抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化或通過基因治療使腫瘤細(xì)胞凋亡。1975年Hughes等從豬腦抽提液中分離的、具有內(nèi)源性嗎啡樣活性的蛋氨酸腦啡肽。后來研究發(fā)現(xiàn)是由腎上腺產(chǎn)生的前激素和前腦啡肽衍生來，釋放入血，由五個(gè)氨基酸構(gòu)成的五肽。正常體內(nèi)含量極低，每毫升血衆(zhòng)50-150pg。蛋氨酸腦啡肽是一種神經(jīng)肽，是連接神經(jīng)和免疫兩個(gè)系統(tǒng)重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)分子之一。能夠和阿片受體結(jié)合而使人或動(dòng)物(類似內(nèi)啡肽)產(chǎn)生鎮(zhèn)定和止痛作用，并且有直接抑制腫瘤生長的功能。后繼研究發(fā)現(xiàn)正常的T淋巴細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，自然殺傷細(xì)胞(NK)含有阿片受體。大量研究證明蛋氨酸腦啡肽對(duì)免疫系統(tǒng)具有如下作用
細(xì)胞活性，增加CD2，CD4，CD8等受體分子的表達(dá)，特別是增加CD4分子的表達(dá)，增加T細(xì)胞玫瑰花節(jié)形成率，增加NK細(xì)胞活性，增加有絲分裂素誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖，增加單核細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)和中性粒細(xì)胞的趨化作用，誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞向Ml型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化，對(duì)樹突狀細(xì)胞的成熟和活性有明顯的促進(jìn)作用。還可以增加Y-干擾素，白介素-2和腫瘤壞死因子等多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生。特別是可以明顯地抑制調(diào)節(jié)性T細(xì)胞活性。在與白細(xì)胞介素-2比較時(shí)顯示出，用量小，副作用小，活性高，安全性高的優(yōu)點(diǎn)。納曲酮為羥二氫嗎啡酮的衍生物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與嗎啡相似，僅在嗎啡的n-位甲基以烯丙基取代，6位羥基變?yōu)橥?，而它的藥理作用卻與嗎啡安全相反，是阿片受體的特異性拮抗劑，它與阿片受體的親和力大于嗎啡與￠-內(nèi)啡肽的親和力，能競爭性阻止并取代嗎啡樣物質(zhì)與受體結(jié)合，從而阻斷嗎啡樣物質(zhì)的作用。近年來有研究證明低劑量納曲酮對(duì)免疫系統(tǒng)細(xì)胞有很強(qiáng)的刺激作用，如可以增加T細(xì)胞，NK細(xì)胞，巨噬細(xì)胞活性等，但是對(duì)于納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽刺激免疫系統(tǒng)細(xì)胞和用于癌癥則沒有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的
本發(fā)明提供一種低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物中的應(yīng)用，其目的在于解決現(xiàn)有方法用量大、副作用大、療效及安全性差、沒有突破性等方面存在的問題。技術(shù)方案
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的
低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于所述納曲酮學(xué)名為17_(環(huán)丙甲基)_4，5-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341. 4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 780 ;納曲酮與蛋氨酸腦啡肽二者以I :1比例聯(lián)合，以口服或注射使用，作為治療癌癥的藥物。將納曲酮配成0. 01 10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. 01 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。

將納曲酮配成0. I I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。納曲酮使用量為每次口服I 50暈克，或者注射每次I 20暈克；同時(shí)，蛋氨酸腦啡肽的使用量范圍為每次口服0. I 50暈克，注射為0. I 10暈克。免疫系統(tǒng)指標(biāo)包括⑶4+T細(xì)胞，⑶8+T細(xì)胞，NK細(xì)胞，NET細(xì)胞，、6 T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。優(yōu)點(diǎn)及效果
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明涉及一種低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物中的應(yīng)用，機(jī)體免疫系統(tǒng)細(xì)胞，如T細(xì)胞，NK細(xì)胞，巨噬細(xì)胞等表面存在阿片受體，低劑量納曲酮和蛋氨酸腦啡肽通過與上述受體結(jié)合，能夠刺激免疫細(xì)胞的活化，增殖和改善免疫功能。低劑量納曲酮對(duì)免疫系統(tǒng)細(xì)胞有很強(qiáng)的刺激作用，應(yīng)用本發(fā)明方法，使用低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽用于制備治療晚期癌癥藥物的研究，取得一定很好治療效果，具有用量小，副作用小，活性高，安全性高的優(yōu)點(diǎn)。


圖I為腫瘤小鼠生存率不意 圖2為小鼠DC細(xì)胞不意 圖3為人淋巴細(xì)胞總數(shù)示意 圖4為人⑶8+⑶28+活性T細(xì)胞示意 圖5為人DC細(xì)胞示意 圖6為人NK cell不意 圖7為人NKT cell示意 圖8為人Y 5 T cell不意 圖9為人Treg cell示意 圖10為樹突狀細(xì)胞電鏡照片MENK ；
圖11為樹突狀細(xì)胞電鏡照片MENK+LDNX2000 ；
圖12為樹突狀細(xì)胞電鏡照片正常對(duì)照RPMI 1640X5000 ；
圖13為患者治療前后CT對(duì)照圖。
具體實(shí)施例方式經(jīng)過系統(tǒng)研究了蛋氨酸腦啡肽對(duì)樹突狀細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞作用，做了對(duì)多例免疫系統(tǒng)遭受放化療損傷的癌癥患者免疫系統(tǒng)作用觀察，同時(shí)聯(lián)合低劑量納曲酮對(duì)癌癥患者進(jìn)行了系統(tǒng)治療研究，在此基礎(chǔ)上形成了新的、獨(dú)特的腫瘤免疫治療方法的藥物。低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于所述納曲酮學(xué)名為17_(環(huán)丙甲基)_4，5-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met,為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 780 ;納曲酮與蛋氨酸腦啡肽二者以I :1比例(體積比)聯(lián)合，以口服或注射使用，作為治療癌癥的藥物。將納曲酮配成0. 01 10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. 01 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。將納曲酮配成0. I I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I 10毫克/ml，二者按照1:1比例使用。 納曲酮使用量為每次口服I 50暈克，或者注射每次I 20暈克；同時(shí)，蛋氨酸腦啡肽的使用量范圍為每次口服0. I 50暈克，注射每次為0. I 10暈克。本方法適用于大多數(shù)癌癥，患者治療前后免疫系統(tǒng)大大改善，癥狀有明顯改善。癌癥患者免疫系統(tǒng)指標(biāo)明顯改善，包括CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞，NK細(xì)胞，NET細(xì)胞，Y S T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明
實(shí)施例I :
納曲酮學(xué)名為17_(環(huán)丙甲基)_4，5-環(huán)氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 ；
將納曲酮配成0. 01毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. 01毫克/ml，使用時(shí)按照二者I :1比例使用。實(shí)施例2
納曲酮學(xué)名為17_(環(huán)丙甲基)_4，5-環(huán)氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量780 ；
將納曲酮配成0. I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I毫克/ml，使用時(shí)按照二者I :1比例使用。實(shí)施例3
納曲酮學(xué)名為17_(環(huán)丙甲基)_4，5-環(huán)氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量770 ；
將納曲酮配成I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成0. I毫克/ml，使用時(shí)按照二者I 1比例使用。實(shí)施例4
納曲酮學(xué)名為17_(環(huán)丙甲基)_4，5-環(huán)氧-3，14- 二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341.4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 ；
將納曲酮配成10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成10毫克/ml，使用時(shí)按照二者I 1比例使用。以上實(shí)施例得到的溶液，分別配置成注射液。通過對(duì)自愿患者24人進(jìn)行免疫系統(tǒng)激活實(shí)驗(yàn)，將這24人分為3組，一組為納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽組(MENK+LDN)，一組為蛋氨酸腦啡肽組(MENK)，一組為對(duì)照組(RPMI1640)。對(duì)實(shí)驗(yàn)組采用實(shí)施例I藥物進(jìn)行治療，然后檢測外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)和分別亞群數(shù)目，結(jié)果顯著，淋巴細(xì)胞總數(shù)和亞群數(shù)量明顯上升，而調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)得到有效抑制，參見圖3-圖12。實(shí)施例5
取C57小鼠，分成三組，分別為正常對(duì)照組(RPMI1640組)，蛋氨酸腦啡肽治療組(MENK·組)和蛋氨酸腦啡肽加納曲酮組(MENK+LDN組)。每組10只，標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)，將三組小鼠每只皮下接種肝癌細(xì)胞5X IO6個(gè)。同時(shí)，給予藥物治療。蛋氨酸腦啡肽組每只小鼠給予蛋氨酸腦啡肽0.01毫克；蛋氨酸腦啡肽加納曲酮組每只小鼠給予納曲酮0.01毫克，給予蛋氨酸腦啡肽0. 01毫克；正常對(duì)照組每只小鼠給予生理鹽水0. 5毫升，上述均為腹腔給藥。小鼠飼養(yǎng)經(jīng)過20天，計(jì)算生存率，取外周血檢測樹突狀細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)分析，見圖I與圖2結(jié)果。結(jié)果表明蛋氨酸腦啡肽加納曲酮顯出明顯的腫瘤治療作用，比單純使用蛋氨酸腦啡肽效果好，說明二者聯(lián)合的用法具有優(yōu)越性。實(shí)施例6
患者李某，女，61歲，患胰腺癌中期，臨床已經(jīng)沒有治療選擇，外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測表明患者⑶4+T細(xì)胞明顯下降(21)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯上升(46)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯下降(0. 52)，NK明顯下降(2%)，整個(gè)免疫系統(tǒng)已經(jīng)明顯失衡，生命瀕臨死亡。采用納絡(luò)酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽注射液治療，I毫克/每天，連續(xù)30天，患者外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測表明⑶4+T細(xì)胞明顯上升(31)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯下降(22)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯上升(I. 42)，NK明顯上升(8%)?；颊呙庖呦到y(tǒng)恢復(fù)近正常值，繼續(xù)維持治療3個(gè)月，患者生命得以挽救。實(shí)施例I
患者謝某，女，57歲，患乳腺癌晚期，全身轉(zhuǎn)移至骨髓，臨床已經(jīng)沒有治療選擇，外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測表明患者⑶4+T細(xì)胞明顯下降(18)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯上升(52)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯下降(0. 34)，NK明顯下降(3%)，整個(gè)免疫系統(tǒng)已經(jīng)明顯失衡，生命瀕臨死亡。采用納絡(luò)酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽注射液治療，5毫克/每天，連續(xù)30天，患者外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測表明⑶4+T細(xì)胞明顯(38)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯下降(35)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯上升(I. I), NK明顯上升(7%)。患者免疫系統(tǒng)恢復(fù)近正常值，繼續(xù)維持治療3個(gè)月，患者生命得以挽救，全面恢復(fù)。實(shí)施例8
患者趙某，58歲，患直腸癌，手術(shù)后轉(zhuǎn)移，肝臟，臨床已經(jīng)沒有治療選擇，外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測表明患者⑶4+T細(xì)胞明顯下降(18)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯上升(50)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯下降(0. 35)，NK明顯下降(3%)，整個(gè)免疫系統(tǒng)已經(jīng)明顯失衡，生命瀕臨死亡。采用納絡(luò)酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽注射液治療，5毫克/每天，連續(xù)30天，患者外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測表明⑶4+T細(xì)胞明顯(35)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯下降(31)，⑶4+T/⑶8+T比值明顯上升(I. I), NK明顯上升(7%)?；颊呙庖呦到y(tǒng)恢復(fù)近正常值，繼續(xù)維持治療3個(gè)月，患者生命得以挽救，全面恢復(fù)見附圖13及參考圖片。結(jié)論機(jī)體免疫系統(tǒng)細(xì)胞表面存在阿片受體，低劑量納曲酮和蛋氨酸腦啡肽通過與上述受體結(jié)合，能夠刺激免疫細(xì)胞的活化，增殖和改善免疫功能，患者治療前后免疫系統(tǒng)大大改善，癥狀有明顯改善；本發(fā)明填補(bǔ)了納絡(luò)酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽作為制備治療癌癥藥物方面使用的空白?！?br> 權(quán)利要求
1.低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于所述納曲酮學(xué)名為17-(環(huán)丙甲基)-4，5-環(huán)氧-3，14-二羥基嗎啡烷-6-酮，分子式C20H23N04，分子量341. 4，為人工合成鹽酸鹽白色粉末；蛋氨酸腦啡肽分子結(jié)構(gòu)為Tyr-Gly-Gly-Phe-Met，為采用固相或液相法人工合成的白色粉末，分子量760 780 ;納曲酮與蛋氨酸腦啡肽二者以I :1比例聯(lián)合，制備成口服或注射劑作為治療癌癥的藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于將納曲酮配成O. 01 10毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成O. 01 10毫克/ml，二者按照I: I比例使用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于將納曲酮配成O. I I毫克/ml的濃度，將蛋氨酸腦啡肽配成O. I 10毫克/ml，二者按照I: I比例使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于納曲酮使用量為每次口服I 50毫克，或者注射每次I 20毫克；同時(shí)，蛋氨酸腦啡肽的使用量范圍為每次口服O. I 50暈克，注射為O. I 10暈克。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，其特征在于免疫系統(tǒng)指標(biāo)包括⑶4+T細(xì)胞，⑶8+T細(xì)胞，NK細(xì)胞，NET細(xì)胞，γ δΤ細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明涉及低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡呔作為制備抗癌藥物的應(yīng)用，利用低劑量納曲酮和蛋氨酸腦啡肽通過與機(jī)體免疫系統(tǒng)細(xì)胞表面的阿片受體結(jié)合，能夠刺激免疫細(xì)胞的活化，增殖和改善免疫功能的作用，使用低劑量納曲酮聯(lián)合蛋氨酸腦啡肽用于作為制備治療癌癥的藥物，形成具有突破性療效的腫瘤生物治療新方法，具有用量小，副作用小，活性高，安全性高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/485GK102784384SQ201210302259
公開日2012年11月21日 申請日期2012年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月23日
發(fā)明者單風(fēng)平, 尼古拉菠蘿尼科夫, 諾瑞·格瑞芬 申請人:單風(fēng)平