專利名稱：用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組織工程學(xué)和材料學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片及其制備方法。
背景技術(shù)：
后鞏膜加固手術(shù)是治療進(jìn)行性近視，高度近視安全有效的方法。在以往臨床應(yīng)用中，后鞏膜加固手術(shù)所使用的材料，大多取自同種異體尸源身上的硬腦膜或鞏膜，經(jīng)過眼科醫(yī)生的簡單處理后即直接用于手術(shù)臨床。然而，受到醫(yī)師技能水平和醫(yī)療條件的制約，自制的后鞏膜片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不一，存在一定的手術(shù)風(fēng)險，另外，如果尸源生前罹患某些重大疾病，則不適于作為供體。由于取材的限制使得后鞏膜加固手術(shù)發(fā)展緩慢，無法大規(guī)模推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種基材來源廣泛，硬度和彈性適宜，易于植入且無排異反應(yīng)的適用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片。本發(fā)明的另一目的是提供上述適用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片，所述異種鞏膜片包括三種規(guī)格第一種規(guī)格鞏膜片呈長方形，長為If 22mm，寬為8 12mm (優(yōu)選長X寬為20mmX10mm);第二種規(guī)格鞏膜片呈長方形，長為75 80mm,寬為8 12mm (優(yōu)選IOmm)；第三種規(guī)格鞏膜片呈左右不對稱的倒“凹”字形，且各邊具有一定弧度，該倒“凹”字形鞏膜片的長為2Γ26πιπι，寬為19 20mm ;以上三種規(guī)格鞏膜片的厚度均為O. 6-lmm ;鞏膜片的基材來源于動物的心包膜或鞏膜。所述動物為牛、豬或家兔等家畜。優(yōu)選兩年左右的健康家畜。本發(fā)明還提供上述用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片的制備方法，包括以下步驟I)基材選擇選取動物的心包膜或鞏膜；2)基材預(yù)處理除去心包膜或鞏膜上的多余組織(如脂肪組織)，然后將基材浸泡于去污劑中去除雜質(zhì),制成毛材；3)剪裁成形根據(jù)需要，將毛材剪裁或切割成所需規(guī)格的后鞏膜片形狀；4)脫細(xì)胞處理分別用胰蛋白酶液和TritonX-IOO處理成形的毛材，以充分消化和裂解細(xì)胞，制成精材；5)消毒殺菌對精材進(jìn)行化學(xué)或物理滅菌；6)調(diào)pH值用pH值7. 2-7. 4的PBS緩沖液清洗滅菌后的精材，即得成品。前述方法中，步驟I)中所述動物為牛、豬或家兔等家畜。前述方法中，步驟2)中所述去污劑為氯己定，浸泡時間為30_40min。主要目的是利用去污劑對細(xì)胞膜脂和脂蛋白的破壞作用，破壞細(xì)菌胞漿膜上的滲透屏障，導(dǎo)致部分胞漿滲漏，胞漿凝聚變性，起到殺菌消毒作用。前述方法中，步驟4)中使用的胰蛋白酶液和TritonX-IOO的濃度分別為O. 25%和2%ο具體為將成形的毛材浸泡于胰蛋白酶液中12h，然后轉(zhuǎn)移至TritonX-IOO中振蕩處理36h。經(jīng)抑制劑胰蛋白酶的消化，使細(xì)胞膜上的蛋白變性，通過胰蛋白酶對細(xì)胞核的水解作用，有效地去除了組織中的細(xì)胞成分。采用中性去污劑TrtionX-IOO在恒溫振蕩器中裂解細(xì)胞，經(jīng)過處理的毛材保持天然的結(jié)構(gòu)，蛋白結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定狀態(tài)，使經(jīng)過裂解的細(xì)胞喪失活力。前述方法中，步驟5)的滅菌方式優(yōu)選為用戊二醛處理精材lh。戊二醛能與蛋白質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，從而殺滅各種微生物。前述方法中，步驟5)滅菌采用鈷-60輻照滅菌。前述方法中，還包括將鞏膜片成品保存于75%的乙醇溶液中。三種規(guī)格的異種后鞏膜片使用說明如下I、第一種規(guī)格為四片包裝的后鞏膜片，主要適用于近視度在20(Γ500度的輕度近視青少年患者。 2、第二種規(guī)格為一片包裝的后鞏膜片，主要適用于50(Γ900度的高度近視患者。3、第三種呈左右不對稱的倒“凹”字形的后鞏膜片，主要針對高度近視并發(fā)癥患者。采用去污劑聯(lián)合酶脫細(xì)胞技術(shù)可以徹底脫去組織中的所有細(xì)胞、抗原、脂質(zhì)、可溶性蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保留具有完整外觀形態(tài)和組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的不溶性基質(zhì)成分，主要包括膠原、彈性蛋白、蛋白多糖、糖胺多糖和非膠原糖蛋白等，除去了引起免疫反應(yīng)的細(xì)胞成分，使基材只起到支架作用的載體。本發(fā)明使用異種家畜的心包膜或鞏膜替代同種人源鞏膜材料，解決了長期以來后鞏膜加固術(shù)材料資源稀缺，材料安全性差及受到醫(yī)學(xué)倫理的限制等問題，僅需對來源于家畜的心包膜或鞏膜基材進(jìn)行清洗、去脂肪、去污、脫細(xì)胞、殺菌等加工處理工序。采用本發(fā)明方法制成的異體后鞏膜片，硬度和彈性適宜，順應(yīng)性好，易于植入，容易與受體鞏膜貼付和縫合固定；植入人體后毒性低，機(jī)械強(qiáng)度高，無排異反應(yīng)，組織相容性好，不會留下疤痕，抗降解能力強(qiáng)，不易鈣化，鞏膜片呈特殊形狀設(shè)計，能夠避免渦靜脈受壓和損傷，植入穿行過程中，不容易引起扭曲翻轉(zhuǎn)，可長期停留于體內(nèi)，避免了因頻繁手術(shù)操作引起的并發(fā)癥，達(dá)到長期治療進(jìn)行性近視和高度近視的效果。通過對四種后鞏膜材料(牛心包補(bǔ)片、豬心包補(bǔ)片、兔鞏膜片及人鞏膜片)進(jìn)行力學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果表明牛心包是用于后鞏膜加固手術(shù)最佳的材料。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例I的用于后鞏膜加固術(shù)的鞏膜片的制備工藝流程圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例I中制備的第一種規(guī)格的后鞏膜片。圖3為本發(fā)明實(shí)施例I中制備的第二種規(guī)格的后鞏膜片。圖4為本發(fā)明實(shí)施例I中制備的第三種規(guī)格的后鞏膜片。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。實(shí)施例I用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片的制備
I材料及來源取屠宰的牛心包膜為基材，牛為檢疫無病，取材和運(yùn)輸過程要注意無菌操作。2用于后鞏膜加固術(shù)的鞏膜片的制備工藝(參見圖I)2. I基材預(yù)處理去除心包膜上的雜質(zhì)和多余部分(如脂肪組織)，以蒸餾水浸泡，崩解血細(xì)胞；然后將基材浸泡于去污劑氯己定中40min，去除雜質(zhì)，制成毛材。2. 2剪裁成形去除經(jīng)2. I處理后毛材上厚度、彈性、硬度和顏色不均的部分，選取厚度O. 6-lmm的部位，將毛材剪裁或切割成不同規(guī)格的形狀。2. 3脫細(xì)胞處理將成形的毛材浸泡于O. 25%的胰蛋白酶液中12h消化細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移至2%的中性去污劑TrtionX-IOO在恒溫(37°C )振蕩器中裂解細(xì)胞36h，制成精材。
2. 4消毒殺菌將上述制得的精材浸泡于戊二醛中l(wèi)h。2. 5調(diào)pH值滅菌結(jié)束后，取出精材用pH值7. 2-7. 4的PBS緩沖液清洗，即得用于后鞏膜加固術(shù)的鞏膜片成品。2. 6將鞏膜片成品保存于75%的乙醇溶液中備用。在進(jìn)行后鞏膜加固手術(shù)時，可根據(jù)患者的實(shí)際需求對鞏膜片成品進(jìn)行適當(dāng)修剪。三種規(guī)格的異異種后鞏膜片及其使用說明I、第一種規(guī)格長X寬=20mmX IOmm (參見圖2)，為四片包裝的后鞏膜片，主要適 用于近視度在20(Γ500度的輕度近視青少年患者。2、第二種規(guī)格長X寬=75 80mmX IOmm (參見圖3)，為一片包裝的后鞏膜片，主要適用于500、00度的高度近視患者。3、第三種呈左右不對稱的倒“凹”字形的后鞏膜片(參見圖4)，主要針對高度近視并發(fā)癥患者。實(shí)施例2異種后鞏膜加固術(shù)后鞏膜片的生物力學(xué)特性的研究I材料及制備分別以牛心包補(bǔ)片、豬心包補(bǔ)片和兔鞏膜片為基材，同實(shí)施例I的制備工藝，制成相應(yīng)的后鞏膜片。2不同材料的后鞏膜片的生物力學(xué)研究本實(shí)施例中，用顯微測厚儀測量后鞏膜的厚度，得出后鞏膜片的截面積。用萬能拉力機(jī)，對待測后鞏膜片施以不同的拉力，可測量后鞏膜片的力學(xué)性能。在對牛心包、豬心包、兔鞏膜的動物實(shí)驗(yàn)的力學(xué)觀察中，選擇兔做為實(shí)驗(yàn)對象。對實(shí)驗(yàn)兔左眼實(shí)施后鞏膜加固手術(shù)，右眼不做手術(shù)，經(jīng)過180天觀察，處死動物，取出實(shí)驗(yàn)兔眼球在光鏡、透射電鏡下動態(tài)觀察。結(jié)果顯示牛心包補(bǔ)片材料最終被自身結(jié)締組織替代；牛心包補(bǔ)片逐漸形成植片纖維與自身結(jié)締組織相互交織的組織形態(tài)；材料的纖維成分與宿主纖維結(jié)締組織相互交織，其纖維成為支架，植片周圍亦包裹著纖維組織，不易移動和分離。光鏡下所見異物巨細(xì)胞和透射電鏡觀察細(xì)胞質(zhì)內(nèi)粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體增多，表明以上三種材料中，牛心包的單軸拉伸、蠕變、極限抗拉強(qiáng)都好于其他材料，同時會刺激宿主細(xì)胞代謝活動增強(qiáng)，組織增生活躍，但其成分并不被吸收，能夠與鞏膜形成牢固的關(guān)系。牛心包材料作為后鞏膜加固術(shù)治療是穩(wěn)定安全的最佳材料。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的 范圍。
權(quán)利要求
1.用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片，其特征在于，所述鞏膜片包括三種規(guī)格第一種規(guī)格鞏膜片呈長方形，長為If 22mm，寬為8 12mm ;第二種規(guī)格鞏膜片呈長方形，長為75 80mm，寬為8 12mm ;第三種規(guī)格鞏膜片呈左右不對稱的倒“凹”字形，且各邊具有一定弧度，該倒“凹”字形鞏膜片的長為2r26mm，寬為19 20mm ;以上三種規(guī)格鞏膜片的厚度均為0.6-lmm ;異種鞏膜片的基材來源于動物的心包膜或鞏膜。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的異種鞏膜片，其特征在于，所述動物為牛、豬或家兔。
3.用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片的制備方法，其特征在于， 包括以下步驟 1)基材選擇選取動物的心包膜或鞏膜； 2)基材預(yù)處理除去心包膜或鞏膜上的多余組織，然后將基材浸泡于去污劑中去除雜質(zhì)，制成毛材； 3)剪裁成形根據(jù)需要，將毛材剪裁或切割成所需規(guī)格的后鞏膜片形狀； 4)脫細(xì)胞處理分別用胰蛋白酶液和TritonX-IOO處理成形的毛材，以充分消化和裂解細(xì)胞，制成精材； 5)消毒殺菌對精材進(jìn)行化學(xué)或物理滅菌； 6)調(diào)pH值用pH值7.2-7. 4的PBS緩沖液清洗滅菌后的精材，即得成品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟I)中所述動物為牛、豬或家兔。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述去污劑為氯己定，浸泡時間為30-40min。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟4)中使用的胰蛋白酶液和TritonX-IOO的濃度分別為0. 25%和2%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟4)具體為將成形的毛材浸泡于胰蛋白酶液中12h，然后轉(zhuǎn)移至TritonX-IOO中振蕩處理36h。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟5)為用戊二醛處理精材lh。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟5)為采用鈷60輻照滅菌。
10.根據(jù)權(quán)利要求3-9任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，將鞏膜片成品保存于75%的乙醇溶液中。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于后鞏膜加固術(shù)的異種鞏膜片及其制備方法。其基材來源廣泛，硬度和彈性適宜，順應(yīng)性好，易于植入，容易與受體鞏膜貼付和縫合固定；植入人體后無毒性，機(jī)械強(qiáng)度高，無排異反應(yīng)，組織相容性好，不會留下疤痕，抗降解能力強(qiáng)，不易鈣化，鞏膜片特殊的形狀設(shè)計，能夠避免渦靜脈受壓和損傷，植入穿行過程中，不容易引起扭曲翻轉(zhuǎn)，可長期停留于體內(nèi)，避免了因頻繁手術(shù)操作引起的并發(fā)癥，達(dá)到長期治療進(jìn)行性近視和高度近視的效果。
文檔編號A61L27/36GK102793593SQ20121032264
公開日2012年11月28日 申請日期2012年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月3日
發(fā)明者于好勇 申請人:于好勇