專利名稱：用于制備抗凡納濱對蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種滅活疫苗的制備方法，特別涉及一種用于制備抗凡納濱對蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法。
背景技術(shù)：
凡納濱對奸{Li top enaeus vannamei)又稱白對奸、萬氏對奸等,是一熱帶奸種，其具有適鹽范圍廣、耐密養(yǎng)、生長快、抗逆能力強等優(yōu)點，我國于1988年引進后，現(xiàn)已在全國沿海各地大規(guī)模養(yǎng)殖。隨著凡納濱對蝦養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境日益惡化，病害發(fā)生頻率急劇上升，由病原副溶血弧菌(K/Ario parahaemoIyticus)引起的紅體病在全國各養(yǎng)蝦地區(qū)均廣泛流行，且傳播快，可造成海水養(yǎng)殖凡納濱對蝦毀滅性死亡，已成為凡納濱對蝦養(yǎng)殖過程中最常見且是造成經(jīng)濟損失最嚴重的疾病之一。目前凡納濱對蝦海水養(yǎng)殖生產(chǎn)中很難控制副溶血弧菌引起的疾病的發(fā)生與流行，市場上缺乏一種使用方便的抗凡納濱對蝦紅體病的滅活疫苗。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提高凡納濱對蝦針對副溶血弧菌的免疫力、降低凡納濱對蝦海水養(yǎng)殖生產(chǎn)中由病原副溶血弧菌所造成的危害、以滿足凡納濱對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)上的抗病需求的用于制備抗凡納濱對蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明是一種用于制備抗凡納濱對蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法，其特點是它以經(jīng)甲醛溶液滅活后的凡納濱對奸紅體病的病原副溶血弧菌JGB080708-1 ( Vibrio parahaemolyticusW^k^i疫原，以白油、司班80、硬脂酸鋁作油乳劑，以及以黃芪浸出液作為免疫增強劑，乳化制備成油乳劑滅活疫苗；其具體步驟如下
(1)將病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株接種在普通營養(yǎng)瓊脂肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng)24h，加入體積終濃度O. 3%的甲醛28°C滅活48h，離心得滅活菌體；
(2)取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪浸出液；
(3 )將白油加熱至50-55 V，加入硬脂酸鋁，硬脂酸鋁與白油的重量體積比為1-3 :100g / ml，繼續(xù)加熱至65-70°C，加入司班80，司班80與白油的體積比為5-7 :100，直至終溫度115-120°C，維持15-20 min，制得油相，冷卻備用；
(4)將滅活菌體與黃芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原副溶血弧菌JGB080708-1免疫原為10ncells/mL，黃芪浸出液為lg/mL，水相中還加入了終體積濃度為4%的吐溫80 ；
(5)將油相和水相按體積比2:1混合乳化研磨5min，制得黃芪和白油為聯(lián)合佐劑的副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗。
本發(fā)明所述的病原副溶血弧菌JGB080708-1已經(jīng)在公開文獻《凡納濱對蝦{Litopenaeus vannamei)病原副溶血弧菌{Vibrio parahaemolyticus)的表型及分子特征》中所公開(菌株JGB080708-1)，上述公開文獻發(fā)表于《海洋與湖沼》，2009，40 (5)654-661。菌株JGB080708-1的DNA序列長度及Genebank登錄號見下表
權(quán)利要求
1.一種用于制備抗凡納濱對蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法，其特征在于它以經(jīng)甲醛溶液滅活后的凡納濱對蝦紅體病的病原副溶血弧菌JGB080708-1 ( Vibrio作為免疫原，以白油、司班80、硬脂酸鋁作油乳劑，以及以黃芪浸出液作為免疫增強劑，乳化制備成油乳劑滅活疫苗；其具體步驟如下 (1)將病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株接種在普通營養(yǎng)瓊脂肉湯培養(yǎng)基上，28-30°C搖床培養(yǎng)24h，加入體積終濃度O. 3%的甲醛28°C滅活48h，離心得滅活菌體； (2)取黃芪用蒸餾水浸泡30-60min后煎煮，過濾，濃縮至終濃度為原藥lg/mL，得黃芪浸出液； (3 )將白油加熱至50-55 V，加入硬脂酸鋁，硬脂酸鋁與白油的重量體積比為1-3 :100g / ml，繼續(xù)加熱至65-70°C，加入司班80，司班80與白油的體積比為5-7 :100，直至終溫度115-120°C，維持15-20 min，制得油相，冷卻備用； (4)將滅活菌體與黃芪浸出液混合，制得疫苗水相；水相中病原副溶血弧菌JGB080708-1免疫原為10ncells/mL，黃芪浸出液為lg/mL，水相中還加入了終體積濃度為4%的吐溫80 ； (5)將油相和水相按體積比2:1混合乳化研磨5min，制得黃芪和白油為聯(lián)合佐劑的副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗。
全文摘要
一種用于制備抗凡納濱對蝦紅體病的卵黃抗體的滅活疫苗制法，該方法先將病原副溶血弧菌JGB080708-1菌株滅活、離心得滅活菌體；然后制得黃芪浸出液；再由白油、硬脂酸鋁、司班80制得油相，滅活菌體與黃芪浸出液混合制得疫苗水相；最后將油相和水相按體積比2:1混合乳化研磨5min，制得黃芪和白油為聯(lián)合佐劑的副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗。本發(fā)明副溶血弧菌油乳劑滅活疫苗，可以用于免疫成年產(chǎn)蛋雞，進而得到抗凡納濱對蝦紅體病的高免卵黃抗體，能增強凡納濱對蝦對病原副溶血弧菌的免疫力，提高凡納濱對蝦養(yǎng)殖的成活率，增加凡納濱對蝦養(yǎng)殖的產(chǎn)量，提高凡納濱對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。從根本上解決了目前凡納濱對蝦養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中易發(fā)生副溶血弧菌所致疾病的問題。
文檔編號A61K39/106GK102836428SQ20121033605
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者秦國民, 張曉君, 閆斌倫, 畢可然, 陳麗 申請人:淮海工學院