專利名稱:一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域,更具體地說涉及一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法。
背景技術(shù):
膠原蛋白是動物體內(nèi)含量最豐富的蛋白質(zhì),它屬于不溶性纖維型蛋白質(zhì),也是細(xì)胞外基質(zhì)中的一類,膠原蛋白可以從動物中提取不同組織中不同類型的膠原蛋白,其功能和作用也不同。提取膠原蛋白能夠溶解的一般是前膠原。膠原蛋白是人體皮膚中的主要成分,皮膚中膠原蛋白占了 72 %,真皮中80 %是膠原蛋白,膠原蛋白在皮膚中構(gòu)成了一張細(xì)密的彈力網(wǎng),鎖住水分,如支架般支撐著皮膚,承托著乳房,它使細(xì)胞胞漿豐滿、水分充盈, 皮膚充滿彈性、潤澤、細(xì)膩、光滑”。膠原蛋白可使血液凝固,具有凝血功能,用作傷口止血敷料,主要是基于膠原蛋白能夠與傷口緊密結(jié)合,滲入新生組織當(dāng)中,并作為細(xì)胞生長時(shí)之支架。I型膠原蛋白屬于序列保守性的蛋白質(zhì),在哺乳動物不同種屬之間氨基酸種類,數(shù)目和排列順序上基本相同,因此抗原性很低;再通過生化方法切去兩端非螺旋性的多肽,進(jìn)一步降低其抗原性,使通過生化提取膠原蛋白并應(yīng)用成為可能。聚乳酸-輕基乙酸共聚物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)由兩種單體——乳酸和羥基乙酸隨機(jī)聚合而成,是一種可降解的功能高分子有機(jī)化合物,具有良好的生物相容性、無毒、良好的成囊和成膜的性能,被廣泛應(yīng)用于制藥、醫(yī)用工程材料和現(xiàn)代化工業(yè)領(lǐng)域。在美國PLGA通過FDA認(rèn)證,被正式作為藥用輔料收錄進(jìn)美國藥典。PLGA可以通過靜電紡絲的方法制成一定強(qiáng)度的紗線,經(jīng)編織成網(wǎng)做成支架纖維,具有生物可降解性、可被人體吸收。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是針對現(xiàn)有技術(shù)之不足,而提供帶傳感器的輪轂軸承,它制備出來的人工皮膚,可以用于各種創(chuàng)面修復(fù),生物相容性好,可替代自體植皮,用途廣泛,前景廣闊。本發(fā)明的技術(shù)解決措施如下一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法,它包括以下步驟a、膠原蛋白的提取,取新鮮牛跟腱,去除筋膜,切成Icm 2cm長的小段,倒入氫氧化鈉溶液中充分?jǐn)嚢柽M(jìn)行病毒滅活,反應(yīng)結(jié)束用4°C的純化水充分洗滌至中性;將經(jīng)預(yù)處理的牛跟腱放入組織搗碎機(jī)中充分搗碎,經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應(yīng)釜中,加入4°C、pH=2的醋酸溶液,按重量計(jì)經(jīng)搗碎的牛跟腱醋酸溶液=1:60 80,再添加胃蛋白酶,胃蛋白酶的添加量為按重量計(jì)醋酸溶液的3% 10%,反應(yīng)24h 48h ;反應(yīng)結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150,稀釋后的膠原溶液真空抽濾,收集濾液,不濾物進(jìn)行2次提取,濾液中加入過氧化氫溶液滅酶,將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心,取上清液,將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上,用飽和氯化鈉溶液鹽析,直至氯化鈉的終濃度約為5%,經(jīng)鹽析的膠原溶液經(jīng)高速離心甩干去除多余水分;將經(jīng)甩干的膠原放入截留分子量為8000-14000Da的透析袋中,于4°C條件下進(jìn)行透析脫鹽直至透析液中無氯離子檢出,將透析得到的膠原配制成5mg/ml的溶液;b、膠原蛋白與殼聚糖的復(fù)配,按O. 5%的比例將殼聚糖倒入蒸餾水中充分混勻,再按O. 5%的濃度加入醋酸充分?jǐn)嚢钃u勻,使殼聚糖溶解,按膠原蛋白殼聚糖=9:1的比例配制膠原-殼聚糖溶液,按O. 1%的比例加入戊二醛溶液進(jìn)行交聯(lián),配制好的溶液于負(fù)壓條件下除氣泡;C、膠原蛋白與PLGA得復(fù)合,將PLGA立體支架放入模具中,注入膠原溶液使其沒過支架,于-20°C凍結(jié),該P(yáng)LGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成,將經(jīng)凍結(jié)的模具進(jìn)行真空冷凍干燥,得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復(fù)合支架。
本發(fā)明的有益效果在于采用PLGA靜電紡絲然后制備出纖維支架,再復(fù)合膠原蛋白,制備人工皮膚,可以用于各種創(chuàng)面修復(fù),生物相容性好,可替代自體植皮,用途廣泛,前景廣闊。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法,它包括以下步驟a、膠原蛋白的提取,取新鮮牛跟腱,去除筋膜,切成Icm 2cm長的小段,倒入氫氧化鈉溶液中充分?jǐn)嚢柽M(jìn)行病毒滅活,反應(yīng)結(jié)束用4°C的純化水充分洗滌至中性;將經(jīng)預(yù)處理的牛跟腱放入組織搗碎機(jī)中充分搗碎,經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應(yīng)釜中,加入4°C、pH=2的醋酸溶液,按重量計(jì)經(jīng)搗碎的牛跟腱醋酸溶液=1:60 80,再添加胃蛋白酶,胃蛋白酶的添加量為按重量計(jì)醋酸溶液的3% 10%,反應(yīng)24h 48h ;反應(yīng)結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150,稀釋后的膠原溶液真空抽濾,收集濾液,不濾物進(jìn)行2次提取,濾液中加入過氧化氫溶液滅酶,將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心,取上清液,將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上,用飽和氯化鈉溶液鹽析,直至氯化鈉的終濃度約為5%,經(jīng)鹽析的膠原溶液經(jīng)高速離心甩干去除多余水分;將經(jīng)甩干的膠原放入截留分子量為8000-14000Da的透析袋中,于4°C條件下進(jìn)行透析脫鹽直至透析液中無氯離子檢出,將透析得到的膠原配制成5mg/ml的溶液;b、膠原蛋白與殼聚糖的復(fù)配,按O. 5%的比例將殼聚糖倒入蒸餾水中充分混勻,再按O. 5%的濃度加入醋酸充分?jǐn)嚢钃u勻,使殼聚糖溶解,按膠原蛋白殼聚糖=9:1的比例配制膠原-殼聚糖溶液,按O. 1%的比例加入戊二醛溶液進(jìn)行交聯(lián),配制好的溶液于負(fù)壓條件下除氣泡;C、膠原蛋白與PLGA得復(fù)合,將PLGA立體支架放入模具中,注入膠原溶液使其沒過支架,于-20°C凍結(jié),該P(yáng)LGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成,將經(jīng)凍結(jié)的模具進(jìn)行真空冷凍干燥,得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復(fù)合支架。
權(quán)利要求
1.一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法,其特征在于它包括以下步驟 a、膠原蛋白的提取,取新鮮牛跟腱,去除筋膜,切成Icm 2cm長的小段,倒入氫氧化鈉溶液中充分?jǐn)嚢柽M(jìn)行病毒滅活,反應(yīng)結(jié)束用4°C的純化水充分洗滌至中性;將經(jīng)預(yù)處理的牛跟腱放入組織搗碎機(jī)中充分搗碎,經(jīng)搗碎的牛跟腱放入反應(yīng)釜中,加入4°C、pH=2的醋酸溶液,按重量計(jì)經(jīng)搗碎的牛跟腱醋酸溶液=1:60 80,再添加胃蛋白酶,胃蛋白酶的添加量為按重量計(jì)醋酸溶液的3% 10%,反應(yīng)24h 48h ; 反應(yīng)結(jié)束將膠原溶液稀釋至料液比1:150,稀釋后的膠原溶液真空抽濾,收集濾液,不濾物進(jìn)行2次提取,濾液中加入過氧化氫溶液滅酶,將經(jīng)過滅酶處理的膠原溶液經(jīng)4000r/min離心,取上清液,將澄清的膠原溶液至于鹽析操作臺上,用飽和氯化鈉溶液鹽析,直至氯化鈉的終濃度約為5%,經(jīng)鹽析的膠原溶液經(jīng)高速離心甩干去除多余水分;將經(jīng)甩干的膠原放入截留分子量為8000-14000Da的透析袋中,于4°C條件下進(jìn)行透析脫鹽直至透析液中無氯離子檢出,將透析得到的膠原配制成5mg/ml的溶液; b、膠原蛋白與殼聚糖的復(fù)配,按O.5%的比例將殼聚糖倒入蒸餾水中充分混勻,再按O.5%的濃度加入醋酸充分?jǐn)嚢钃u勻,使殼聚糖溶解,按膠原蛋白殼聚糖=9:1的比例配制膠原-殼聚糖溶液,按O. 1%的比例加入戊二醛溶液進(jìn)行交聯(lián),配制好的溶液于負(fù)壓條件下除氣泡; C、膠原蛋白與PLGA得復(fù)合,將PLGA立體支架放入模具中,注入膠原溶液使其沒過支架,于-20°C凍結(jié),該P(yáng)LGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成,將經(jīng)凍結(jié)的模具進(jìn)行真空冷凍干燥,得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復(fù)合支架。
全文摘要
一種膠原蛋白組織工程皮膚的制備方法,它包括以下步驟a、膠原蛋白的提取,b、膠原蛋白與殼聚糖的復(fù)配,c、膠原蛋白與PLGA得復(fù)合,將PLGA立體支架放入模具中,注入膠原溶液使其沒過支架,于-20℃凍結(jié),該P(yáng)LGA立體支架由PLGA溶液經(jīng)靜電紡根據(jù)模具的規(guī)格制成,將經(jīng)凍結(jié)的模具進(jìn)行真空冷凍干燥,得到由膠原-殼聚糖和PLGA組成的復(fù)合支架。它制備出來的人工皮膚,可以用于各種創(chuàng)面修復(fù),生物相容性好,可替代自體植皮,用途廣泛,前景廣闊。
文檔編號A61L27/24GK102836462SQ201210353249
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者張新強(qiáng), 韓春茂, 胡修元, 張銳 申請人:紹興好士德醫(yī)用品有限公司