一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備方法，屬載藥緩釋磁靶向納米微球領(lǐng)域。該材料可延緩蟲草素在體內(nèi)的代謝時間并具備磁靶向功能，制備過程是將Fe3O4磁性納米顆粒、海藻酸鈉溶于蒸餾水中，在超聲和高速攪拌下，將混合形成的磁流體混合液逐滴加入到油相中，形成微乳液體系，再將一定濃度的殼聚糖、蟲草素和氯化鈣混合溶液逐滴加入到微乳液中，反應(yīng)一定時間后，分別經(jīng)洗滌、磁分離、過濾，獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球，然后將該微球倒入槲皮素或染料木素的水溶液中振蕩吸附平衡，過濾后再倒入殼聚糖溶液中，反應(yīng)完畢，最后再經(jīng)洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得蟲草素緩釋磁性納米微球。
【專利說明】一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備方法，屬載藥緩釋磁靶向納米微球領(lǐng)域。特別是涉及一種利用海藻酸鈉包覆Fe3O4磁性納米顆粒，再吸附蟲草素和殼聚糖，再吸附槲皮素，最后再用殼聚糖包覆保護的蟲草素緩釋磁靶向納米微球的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蟲草素蟲草素(3’ -脫氧腺苷)具有多種生物活性，在分子水平上對DNA及RNA合成、hnRNA和mRNA轉(zhuǎn)錄后修飾、腺苷酸環(huán)化酶活化以及特異性蛋白質(zhì)合成等過程具有抑制作用；在細胞水平上能促進細胞分化、增強巨噬細胞系的趨化性；在整體水平上具有抗真菌、抗瘧疾、抗衰老、免疫調(diào)節(jié) 、抗病毒、抑制血管內(nèi)皮平滑肌細胞增生、抗缺血再罐注損傷、抗血小板聚集及抗腫瘤等藥理作用。多年來大部分研究將其作為病毒DNA延長鏈的終止劑，被用來治療白血病，腎病，增強放療及化療的敏感性，增強NK細胞對腫瘤細胞的殺傷力，有調(diào)節(jié)免疫的作用，可誘導紅細胞凋亡。蟲草素的抗腫瘤作用引起全球科學家的關(guān)注，對蟲草素在抗菌、抗炎、抗HIV-1型病毒、選擇性抑制梭菌以及免疫調(diào)節(jié)等藥理學方面開展了大量研究，并取得了突破性進展。
[0003]蟲草素在體內(nèi)大部分在腺苷脫氨酶的作用下快速脫氨基而成為無生物活性的代謝產(chǎn)物一3’ -脫氧次黃嘌呤核苷，蟲草素的快速脫氨基對其單獨用于體內(nèi)實驗帶來很大的局限性，也使其作為藥物進行研發(fā)造成了較大的困難，這就是蟲草素50年代被發(fā)現(xiàn)以來甚少臨床運用的重要原因，所以解決延緩蟲草素在體內(nèi)代謝問題是解決蟲草素臨床廣泛運用的難題之一。
[0004]目前延緩蟲草素在體內(nèi)代謝的一般方法是采用附加防止脫氨基的側(cè)鏈基團以及與腺苷脫氨酶ADA抑制劑聯(lián)合應(yīng)用兩種方式。盡管在蟲草素的結(jié)構(gòu)上附加某些側(cè)鏈基團可以延緩其代謝，但仍然不能完全阻斷脫氨基作用，維持其濃度的最好辦法是使用ADA抑制劑。
[0005]20世紀90年代，蟲草素的研究獲得突破性進展，研究人員發(fā)現(xiàn)添加腺苷脫氨酶抑制劑對其抗腫瘤活性的表達起著重要作用，1997年美國已將蟲草素用于一期臨床實驗，治療急性前B和前T淋巴細胞白血病患者。
[0006]目前使用最多的和蟲草素聯(lián)合應(yīng)用的ADA抑制劑2’_dCF，2002年由FDA正式批準成為藥物，主要用于白血病，尤其是毛細胞性白血病的治療。2’-dCF由美國SuperGen公司生產(chǎn)，在全球的銷售目前只限于北美洲和歐洲，價錢昂貴，不利于蟲草素大范圍的臨床研究和應(yīng)用。
[0007]槲皮素屬于黃酮類化合物，具有抗腫瘤、抗炎和抗病毒的作用，另外已被證實可作為優(yōu)良的腺苷脫氨酶抑制劑，比ADA抑制劑2’ -dCF便宜，來源廣泛，可直接提取自植物，使其純品更加安全穩(wěn)定。
[0008]染料木素具有誘發(fā)細胞程序性死亡、提高抗癌藥效、抗氧化作用、抑制血管生成等作用，是一種很有潛力的癌癥化學預防劑，其抗癌作用及機制具有廣泛的應(yīng)用前景，可抑制拓析異物酶II的活性，可抑制酪氨酸蛋白激酶PTK的活性。
[0009]海藻酸鹽普遍存在于褐藻類中，為組成細胞膜的主要成分，海藻酸鹽無毒性，具有生物黏附性、生物相容性和生物降解性以及凝膠形成性，被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)、醫(yī)藥工業(yè)等，尤其是在生物醫(yī)療領(lǐng)域，作為細胞載體、藥物載體、分離純化用介質(zhì)、酶固定化介質(zhì)等的應(yīng)用備受注目，而這些應(yīng)用大多采用微球和微膠囊的形式。
[0010]殼聚糖是一種無毒性、具有生物粘附性、生物相容性和生物降解性及良好的成膜性，這些獨特的性能使其被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥緩釋載體。
[0011]Fe3O4磁性納米顆粒被廣泛應(yīng)用于制備磁響應(yīng)造影劑、磁祀向功能的藥物載體等。
[0012]本發(fā)明中首次采用Fe3O4磁性納米顆粒為核，海藻酸鈉為載體，吸附蟲草素和殼聚糖，直接制成蟲草素緩釋磁靶向納米微球 ，實現(xiàn)延緩蟲草素在體內(nèi)代謝；或再吸附槲皮素，最后用殼聚糖包覆保護制成蟲草素緩釋磁靶向納米微球，從而實現(xiàn)槲皮素作為腺苷脫氨酶抑制劑和蟲草素的聯(lián)合應(yīng)用，有效延緩蟲草素在體內(nèi)代謝的過程，為蟲草素的臨床應(yīng)用提供了一種更加便宜實用的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

1.一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備，其特征在于:將Fe3O4磁性納米顆粒、海藻酸鈉溶于蒸餾水中，在超聲和高速攪拌下，將混合形成的磁流體混合液逐滴加入到油相中，形成微乳液體系，再將一定濃度的殼聚糖、蟲草素和氯化鈣混合溶液逐滴加入到微乳液中，反應(yīng)一定時間后，分別經(jīng)洗滌、磁分離、過濾，獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球，再將該磁性納米微球倒入作為腺苷脫氨酶抑制劑的槲皮素堿性水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入殼聚糖溶液中，反應(yīng)一定時間后經(jīng)洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得蟲草素緩釋磁性納米微球。
2.作為本發(fā)明的一種改進，在獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球后，再將其倒入作為腺苷脫氨酶抑制劑的染料木素堿性水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入殼聚糖溶液中，反應(yīng)一定時間后經(jīng)洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得蟲草素緩釋磁性納米微球。
本發(fā)明的有益效果
利用本發(fā)明的方法，在實現(xiàn)蟲草素和腺苷脫氨酶抑制劑的聯(lián)合應(yīng)用的同時以海藻酸鈉和殼聚糖作為緩釋用載藥材料，顯著提高蟲草素在體內(nèi)的代謝時間和濃度，還使蟲草素載藥材料具備磁靶向功能，因采用了更加廉價、來源更廣的槲皮素和染料木素作為腺苷脫氨酶抑制劑，故為蟲草素在臨床上廣泛應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。
【具體實施方式】
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明進一步描述。
實施例1:將0.5g平均粒徑為20nm的Fe3O4磁性納米顆粒、Ig海藻酸鈉溶于50ml溫度為50°C的蒸懼水中，超聲和高速攪拌30min,形成磁流體混合液,在超聲和高速攪拌下,將混合形成的磁流體混合液逐滴加入到100ml溶解有IOg Span60的環(huán)己烷油相中，保持溫度50°C，形成微乳液體系，再將50ml含蟲草素濃度為200mg/l、氯化鈣質(zhì)量比濃度6%和殼聚糖質(zhì)量比1%的5%醋酸稀溶液逐滴加入到微乳液中，反應(yīng)30min后，分別經(jīng)丙酮蒸餾水洗滌、磁分離、過濾，獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球，再將該磁性納米微球倒入50ml濃度為100mg/l作為腺苷脫氨酶抑制劑的槲皮素堿性水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入100ml含殼聚糖1%的5%醋酸稀溶液中，反應(yīng)30min后經(jīng)丙酮蒸餾水洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得實現(xiàn)槲皮素作為腺苷脫氨酶抑制劑和蟲草素的聯(lián)合應(yīng)用的蟲草素緩釋磁性納米微球。
實施例2:將0.5g平均粒徑為20nm的Fe3O4磁性納米顆粒、1.2g海藻酸鈉溶于50ml溫度為50°C的蒸餾水中，超聲和高速攪拌30min，形成磁流體混合液，在超聲和高速攪拌下，將混合形成的磁流體混合液逐滴加入到100ml溶解有6g SpanSO的正己烷油相中，保持溫度50°C，形成微乳液體系，再將50ml含蟲草素濃度為200mg/l、氯化鈣質(zhì)量比濃度10%和殼聚糖質(zhì)量比1%的4%醋酸稀溶液逐滴加入到微乳液中，反應(yīng)30min后，分別經(jīng)丙酮蒸餾水洗滌、磁分離、過濾，獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球，再將該磁性納米微球倒入50ml濃度為100mg/l作為腺苷脫氨酶抑制劑的染料木素堿性水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入100ml含殼聚糖I %的 4%醋酸稀溶液中，反應(yīng)30min后經(jīng)丙酮蒸餾水洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得實現(xiàn)染料木素作為腺苷脫氨酶抑制劑和蟲草素的聯(lián)合應(yīng)用的蟲草素緩釋磁性納米微球。
實施例3:將0.5g平均粒徑為20nm的Fe3O4磁性納米顆粒、Ig海藻酸鈉溶于50ml溫度為50°C的蒸懼水中，超聲和高速攪拌30min,形成磁流體混合液,在超聲和高速攪拌下,將混合形成的磁流體混合液逐滴加入到100ml溶解有15g琥珀酸二異辛脂磺酸鈉的正庚烷油相中，保持溫度50°C，形成微乳液體系，再將50ml含蟲草素濃度為200mg/l、氯化鈣質(zhì)量比濃度8%和殼聚糖質(zhì)量比1%的4%醋酸稀溶液逐滴加入到微乳液中，反應(yīng)30min后，分別經(jīng)丙酮蒸餾水洗滌、磁分離、過濾，獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球，再將該磁性納米微球倒入50ml濃度為80mg/l作為腺苷脫氨酶抑制劑的槲皮素堿性水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入100ml含殼聚糖1%的5%醋酸稀溶液中，反應(yīng)30min后經(jīng)丙酮蒸餾水洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得實現(xiàn)槲皮素作為腺苷脫氨酶抑制劑和蟲草素的聯(lián)合應(yīng)用的蟲草素緩釋磁性納米微球。
【權(quán)利要求】
1.一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備，其特征在于:將Fe3O4磁性納米顆粒、海藻酸鈉溶于蒸餾水中，在超聲和高速攪拌下，將混合形成的磁流體混合液逐滴加入到油相中，形成微乳液體系，再將一定濃度的殼聚糖、蟲草素和氯化鈣混合溶液逐滴加入到微乳液中，反應(yīng)一定時間后，分別經(jīng)洗滌、磁分離、過濾，獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球，再將該磁性納米微球倒入作為腺苷脫氨酶抑制劑的槲皮素水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入殼聚糖溶液中，反應(yīng)一定時問后經(jīng)洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得蟲草素緩釋磁性納米微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蟲草素緩釋磁性納米微球的制備，其特征是:在獲得磁性海藻酸鈣-殼聚糖納米微球后，再將其倒入作為腺苷脫氨酶抑制劑的染料木素堿性水溶液中，振蕩吸附平衡后過濾，再倒入殼聚糖溶液中，反應(yīng)一定時間后經(jīng)洗滌、過濾、冷凍干燥即獲得蟲草素緩釋磁性納米微球。`
【文檔編號】A61K47/36GK103720659SQ201210398518
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年10月10日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月10日
【發(fā)明者】巫瑩柱, 賈永堂 申請人:五邑大學