專利名稱：甲磺酸萘莫司他在制備防治缺血性腦中風藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，具體涉及甲磺酸萘莫司他用于防治缺血性腦中風的新用途。
背景技術：
據(jù)近年資料統(tǒng)計，我國腦中風新發(fā)病者，每年約130 150萬人，死亡約100萬人，死亡率高于歐美國家4 5倍。目前，我國腦卒中的發(fā)病率正以每年近9%的速度上升。腦中風具有高發(fā)病率、高死亡率及高致殘率的特點，給個人、家庭及社會帶來沉重負擔。缺血性腦中風占腦中風病人總數(shù)的70%，是指各種原因所致的腦血流供應障礙，腦組織缺血性壞死，從而出現(xiàn)相應的神經功能缺損癥狀。臨床上常見的腦中風治療藥物主要包括溶栓藥物、抗血小板藥、抗凝藥、擴血管及神經保護劑等。溶栓療法的常用藥物主要是組織型纖溶 酶原激活劑(t-PA)和尿激酶(UK);抗凝療法常用藥物有肝素和華法令；抗血小板聚集的阿司匹林和擴血管的尼莫地平聯(lián)用可用于治療慢性腦梗塞復發(fā)。目前針對急性腦中風還缺乏有效的治療藥物，因此亟待開發(fā)出高效、低毒的腦中風治療藥物。最近研究發(fā)現(xiàn)絲氨酸蛋白酶在腦缺血引起的神經元死亡方面起了重要作用，而絲氨酸蛋白酶抑制劑可能具有神經保護作用。甲磺酸萘莫司他是一種短效的絲氨酸蛋白酶抑制劑，臨床上用于胰腺炎急性癥狀的改善；彌散性血管內凝血(DIC);出血性或有出血傾向的患者進行血液體外循環(huán)時的抗凝。藥理研究顯示，甲磺酸萘莫司他對凝血酶、活性凝血因子(Xlla、Xa、Vila)、血管舒緩素、血纖維蛋白酶、纖維蛋白酶以及補體系統(tǒng)經典途徑的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶有很強的選擇性抑制作用；近年來，還發(fā)現(xiàn)了該化合物能通過其抗炎作用減輕炎癥因子誘導的肺損傷，見參考文獻Miyaso, H. et al. Protectiveeffects of nafamostat mesi late onliver injury induced by lipopolysaccharidein rats possible involvement of CD 14 and TLR-4downregulation on Kupffercells. Dig. Dis. Sci. 51，2007-2012 (2006) ;Yamashita 等人報道了甲磺酸萘莫司他能有效抑制鱗狀癌細胞的增值、侵襲和轉移，提示其能應用于各類腺癌病人的治療，見參考文獻 Yamashita，Y et al. Antitumor effects of Nafamostat mesilate on head andnecksquamous cell carcinoma. Auris Nasus Larynx 34,487-491 (2007) ;Inman等人發(fā)現(xiàn)了甲磺酸萘莫司他具有顯著的抗衣原體屬致病菌的作用，并用實驗證實了該藥能用于治療衣原體屬致病菌誘發(fā)的關節(jié)炎，見參考文獻Inman，R. D. & Chiu, B. Nafamostat mesylate,a serine proteaseinhibitor， demonstrates novel antimicrobial properties andeffectiveness in Chlamydia-inducedarthritis. Arthritis Res. Ther. 14，R150(2012)。目前關于甲磺酸萘莫司他是否可以用于腦中風的治療，還未見報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在于提供了甲磺酸萘莫司他在制備防治缺血性腦中風藥物中的新用途。
甲磺酸萘莫司他(CAS =82956-11-4)是日本鳥居制藥株式會社研究所合成的新型蛋白酶抑制劑。過去研究發(fā)現(xiàn)，甲磺酸萘莫司他對凝血 纖溶系統(tǒng)(凝血酶、VIIa、Xa、VIIa、纖維蛋白溶酶)、激肽釋放酶-激肽系統(tǒng)(激肽釋放酶)、補體系統(tǒng)(Clr-、Cls-, B、D-)、胰腺酶(胰蛋白酶、胰激肽釋放酶)等具有很強的抑制作用。該藥有強大而廣譜的蛋白酶抑制活性，可治療蛋白酶異常引起的疾病。本研究通過實驗證明了靜脈給予甲磺酸萘莫司他，可明顯改善永久性或再灌注性大腦中動脈栓塞模型大鼠的行為功能障礙，降低大鼠腦梗死率。由此可見，甲磺酸萘莫司他對永久性缺血造成的腦損傷或缺血再灌注造成的腦損傷具有一定的防治作用，本發(fā)明結果可望為缺血性腦中風提供新的治療藥物。


附圖I為甲磺酸萘莫司他的化學結構圖； 附圖2為大鼠大腦永久性中動脈栓塞(permanent middle cerebral arteryocclusion, pMCAO)后注射甲磺酸萘莫司他，經四氮唑(TTC)染色的腦切片對比圖；附圖3為大鼠pMCAO后注射甲磺酸萘莫司他，動物腦組織梗死率的比較；附圖4為大鼠腦缺血再灌注即大腦暫時性中動脈栓塞(transient middlecerebral arteryocclusion, tMCAO)后注射甲磺酸萘莫司他,經TTC染色的腦切片對比圖；附圖5為大鼠tMCAO注射甲磺酸萘莫司他后，動物腦組織梗死率的比較；附圖6為大鼠pMCAO手術前注射甲磺酸萘莫司他后，經TTC染色的腦切片對比圖；附圖7為大鼠pMCAO手術前注射甲磺酸萘莫司他后動物腦組織梗死率的比較；附圖8為大鼠tMCAO手術前注射甲磺酸萘莫司他后經TTC染色的腦切片對比圖；附圖9為大鼠tMCAO手術前注射甲磺酸萘莫司他后動物腦組織梗死率的比較。
具體實施例方式甲磺酸萘莫司他的英文名稱為Nafamostat Mesilate或Nafamostat,化學結構如附圖I所示，CAS號82956-11-4，分子式=C19H17N5O2 · 2CH403S。本實驗用到的甲磺酸萘莫司他來源于江蘇杜瑞制藥有限公司，臨用前用5%的葡萄糖溶解。本實驗中用到的陽性藥尼莫地平注射液購自江蘇濟川制藥有限公司，依達拉奉注射液購自江蘇先聲藥業(yè)。實施例I甲磺酸萘莫司他對大鼠永久性腦缺血所致腦損傷的治療作用研究I、實驗方法I)動物分組清潔級雄性SD大鼠(合格證號SCXK(浙)2008-0033)共66只，體重250_280g。假手術組6只；pMCA0模型組12只；陽性藥組12只；甲磺酸萘莫司他低劑量組12只；甲磺酸萘莫司他中劑量組12只；甲磺酸萘莫司他高劑量組12只。2)大鼠永久性腦缺血模型(pMCAO)的建立參考Longa等的方法，采用頸內動脈線栓法制備大鼠pMCAO模型大鼠用3%水合三氯乙醛(300mg/kg，ip)麻醉后仰臥固定，常規(guī)消毒，取頸部正中切開皮膚，鈍性分離各層組織，暴露右側頸總動脈CCA。分離至頸內動脈ICA、頸外動脈ECA分叉后一段，仔細分離避免損傷迷走神經和氣管，置線備用。于頸內、頸總動脈處用動脈夾夾閉，頸外動脈近心端及遠心端結扎，中間剪斷。將頸外動脈游離端拉至與頸內動脈成一條直線，將漁線由頸外動脈插入，打開頸內動脈處動脈夾，將漁線插入頸內動脈，繼續(xù)插入至顱內，插入深度約18. 5±0. 5mm至微感阻力，結扎ICA以固定尼龍線和防止出血,逐層縫合。3)給藥方法甲磺酸萘莫司他組在手術后每隔2h給藥I次，即在手術后0、2、4、6h后分別尾靜脈給藥，給藥4次。給藥劑量低劑量組,0. 3mg/kg ;中劑量組，lmg/kg ;高劑量組,3mg/kg。陽性藥組手術后立即等體積給尼莫地平(5mg/kg)，給藥I次。pMCAO模型組手術后0、2、4、6h后分別尾靜脈給予等體積5%葡萄糖溶液，給藥4次。假手術組常規(guī)分離各層組織和血管，但不插管。假手術后同樣給予等體積5%葡 萄糖溶液，給藥4次。4)檢測指標①行為學評分參考Longa及Bederson的5分制法在動物處死前進行評分。O分無神經損傷癥狀；I分不能完全伸展對側前爪；2分向對側行走；3分向對側追尾；4分不能自發(fā)行走，意識喪失。分值越高，說明動物行為障礙越嚴重。②腦切片TTC染色缺血24h后，大鼠斷頭處死并取腦，將取出的腦組織測定腦總重，然后迅速將腦組織置于-80°C冰箱，IOmin后取出，使用刀片制作冠狀腦切片，每個大腦制作5片(每隔2mm切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。將腦片置于2%的TTC中染色，37°C恒溫、避光孵育20min。取出腦片，排列整齊，拍照保存。TTC染色后，正常組織呈紅色，梗死組織未被染色即呈白色。③腦梗死率的測定TTC染色后，使用分析天平測定梗死區(qū)重量(梗死重)。梗死率計算方法如下梗死率=梗死重/腦總重X 100%5)數(shù)據(jù)處理計算結果用均值土SD表示，采用t檢驗方法對各組梗死率進行顯著性檢驗，P< O. 05認為有顯著統(tǒng)計學差異。2、實驗結果I)甲磺酸萘莫司他對pMCAO模型大鼠行為學的影響表I :pMCA0大鼠手術后注射甲磺酸萘莫司他后動物行為學功能評分的比較
權利要求
1.甲磺酸萘莫司他在制備用于防治缺血性腦中風藥物中的用途。
2.根據(jù)權利要求書I中的用途，其中所述的缺血性腦中風是指局灶性腦梗死。
3.根據(jù)權利要求書I中的用途，其中所述的缺血性腦中風是指永久性缺血造成的腦損傷和缺血再灌注造成的腦損傷。
4.根據(jù)權利要求書I中的用途，其中所述的缺血性腦中風的防治是指缺血性腦中風的預防或缺血性腦中風發(fā)生后的治療。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術領域，目的在于提供甲磺酸萘莫司他在制備防治缺血性腦中風藥物中的新用途。本發(fā)明在經典的大腦永久性腦缺血模型(大腦中動脈栓塞-pMCAO)及腦缺血再灌性模型(tMCAO)上，分別進行了術前的預防性給藥或術后的治療性給藥，結果均表現(xiàn)出甲磺酸萘莫司他具有顯著的抗缺血性腦中風的作用，在實驗指定的劑量點上，該藥物能明顯改善缺血導致的動物行為功能障礙，降低永久性腦缺血和腦缺血再灌大鼠的腦梗死率，研究結果提示甲磺酸萘莫司他可以用于防治缺血性腦中風。
文檔編號A61K31/245GK102871998SQ20121041129
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月25日 優(yōu)先權日2012年10月25日
發(fā)明者廖紅, 王靜, 李晨輝, 陳濤, 王藝瑾, 安魯凡 申請人:江蘇杜瑞制藥有限公司