專利名稱：從北柴胡中提取的有效組分及其抗抑郁活性的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體說，涉及從北柴胡中提取有效組分CHB及該組分抗抑郁生物活性的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著現(xiàn)代城市生活節(jié)奏不斷地加快，人們壓力越來越大，抑郁癥的發(fā)病率也在逐年遞增。抑郁癥以持續(xù)情緒低落和認(rèn)知功能障礙為主要臨床特征，是一種慢性的反復(fù)發(fā)作的腦疾病，影響到全球20%的人群。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，抑郁癥已成為世界第四大疾患，預(yù)計(jì)到2020年，可能成為僅次于冠心病的第二大疾病。現(xiàn)有的抗抑郁西藥主要是三環(huán)類抗抑郁藥(TCA)、單胺氧化酶抑制劑(MA0I)、選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRS)。由于化學(xué)合成抗抑郁藥在長期服用后會出現(xiàn)嚴(yán)重的毒副作用，也存在著抗抑郁譜窄、易復(fù)發(fā)等缺點(diǎn)，所以作用溫和、副作用少的傳統(tǒng)中藥及其方劑越來越受到人們的關(guān)注。抑郁癥以持續(xù)情緒低落和認(rèn)知功能障礙為主要臨床特征，包括焦躁情緒、快感缺失、睡眠障礙、負(fù)罪感和反復(fù)自殺念頭等。抑郁癥不僅給患者帶來精神上的損失，也給患者造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，約15%的抑郁患者死于自殺。目前，抑郁癥的發(fā)病率已呈現(xiàn)出逐年增長的趨勢。據(jù)調(diào)查，每十位男性中就有一位可能患有抑郁癥，而女性則每五位中就有一位患有抑郁癥。美國每年因抑郁癥造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)到437億美元。世界衛(wèi)生組織、世界銀行和哈佛大學(xué)的一項(xiàng)聯(lián)合研究表明，抑郁癥已經(jīng)成為中國疾病負(fù)擔(dān)的第二大疾病。柴胡為傘形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)或狹葉柴胡(Bupleurumscorzonerifolium Willd.)的干 燥根，按形狀不同分別稱為“北柴胡”和“南柴胡”。柴胡具有鎮(zhèn)靜、止痛、降溫、鎮(zhèn)咳、抗炎抗菌、保肝利膽、降血壓、抗病毒、抗腫瘤以及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)活性等藥理作用。但是現(xiàn)有技術(shù)中沒有公開北柴胡治療抑郁癥的用途。應(yīng)激是當(dāng)機(jī)體所處的外界環(huán)境突然發(fā)生變化時(shí)，機(jī)體通過對它的認(rèn)知和評價(jià)而做出的一系列心里生理反應(yīng)。應(yīng)激導(dǎo)致下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamic-pituitary-adrenocortical,HPA)軸功能的失調(diào)，行為和心理應(yīng)激可以引起血清糖皮質(zhì)激素的升高。增高的糖皮質(zhì)激素通過激活糖皮質(zhì)激素受體降低海馬神經(jīng)元新生，造成海馬神經(jīng)元萎縮、體積減小，而海馬神經(jīng)元的損害將打斷正常應(yīng)激反應(yīng)時(shí)海馬對HPA軸的抑制作用而造成惡性循環(huán)。因此本實(shí)驗(yàn)采用到了國際上用于抗抑郁藥物初篩的兩個(gè)最常見的動物模型小鼠懸尾(tail suspension test, TST)和強(qiáng)迫游泳(forced swim test’FST)。兩種模型的作用原理均是通過對動物施以無法逃避的應(yīng)急刺激造成動物的行為絕望而模擬人類的抑郁癥癥狀，又稱為行為絕望抑郁動物模型。FST是由Porsolt于1977年首先提出，TST是受FST的啟發(fā)而創(chuàng)建的。兩個(gè)模型的特點(diǎn)是操作簡單、快速、敏感，而且特異性較高，動物行為表現(xiàn)與抑郁癥有某些相似之處，因此成為抗抑郁藥物臨床前篩選及療效評價(jià)的重要指標(biāo)。目前公認(rèn)的抑郁癥發(fā)病機(jī)制是單胺類神經(jīng)遞質(zhì)假說，該假說認(rèn)為抑郁癥是由單胺類遞質(zhì)功能降低引起的，基于單胺類遞質(zhì)的藥物至今仍是抑郁癥治療的一線藥物。這些抗抑郁藥通過抑制突觸外單胺類遞質(zhì)的重吸收或抑制它們的降解來提高突觸外單胺遞質(zhì)的濃度達(dá)到抗抑郁的效果。有發(fā)現(xiàn)，長期服用利血平會出現(xiàn)抑郁癥狀，其誘發(fā)抑郁的機(jī)制與之引起的腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的耗竭有關(guān)。腹腔注射利血平建立動物模型不僅模擬了抑郁癥患者的臨床行為表現(xiàn)，更模擬了抑郁癥患者腦內(nèi)單胺類遞質(zhì)系統(tǒng)功能降低的病理機(jī)制，因而在新藥研發(fā)中被廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供一種治療治療抑郁癥的物質(zhì)，S卩北柴胡的有效組分。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案本發(fā)明第一方面提供了一種北柴胡的有效組分。本發(fā)明第二方面提供了北柴胡的有效組分的制備方法。本發(fā)明第三方面提供了北柴胡的有效組分的藥物組合物。本發(fā)明第四方面提供了北柴胡的有效組分的治療抑郁癥的用途。本發(fā)明的北柴胡的有效組分，通過如下的制備方法獲得I)北柴胡根用80-90%乙醇提取，提取液合并后濃縮揮至無醇味，2)向提取物中加入60-90%乙醇攪拌至溶解，將提取物的醇溶用石油醚進(jìn)行萃取至石油醚層顏色較淺，將石油醚層棄去；3)剩余醇溶液用大孔吸附樹脂拌勻，并加熱揮干，將吸附樣品的大孔樹脂裝入一個(gè)下部預(yù)先填裝了大孔吸附樹脂的色譜柱上；

4)首先用10-30%的乙醇洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液棄去；5)再用50-70%的乙醇洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液收集，6)減壓回收乙醇得浸膏，并將浸膏干燥、粉碎得柴胡有效組分。為提高提取的效率，步驟I)中所述的北柴胡根優(yōu)選經(jīng)過干燥、粉碎。步驟I)中提取溫度優(yōu)選是乙醇回流的溫度。步驟I)中80-90%乙醇的用量以北柴胡根計(jì)優(yōu)選每公斤10-14升，更優(yōu)選每公斤12升。步驟2)中萃取步驟優(yōu)選使用分液漏斗中進(jìn)行。步驟3)的優(yōu)選的大孔吸附樹脂選自DlOl大孔吸附樹脂、AB-8樹脂、DM-130樹脂、HPD-100 樹脂。本發(fā)明的最優(yōu)選的的北柴胡的有效組分，通過如下的制備方法獲得I)干燥的北柴胡根經(jīng)粉碎后用85%乙醇(以北柴胡根計(jì)優(yōu)選每公斤12倍體積)回流提取，提取液合并后濃縮揮至無醇味，2)向提取物中加入適量60%乙醇，攪拌溶解后將提取物的醇溶液置于分液漏斗中，用等體積石油醚進(jìn)行萃取至石油醚層顏色較淺，將石油醚層棄去；3)剩余醇溶液用DlOl大孔吸附樹脂拌勻，并在水浴鍋上揮干，將吸附樣品的大孔樹脂裝入一個(gè)下部預(yù)先填裝了少量DlOl大孔吸附樹脂的玻璃色譜柱上；4)首先用20%的乙醇洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液棄去；5)再用60%的乙醇洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液收集；6)減壓回收乙醇得浸膏，并將浸膏真空干燥、粉碎得柴胡有效組分粉末。
本發(fā)明北柴胡有效組分CHB對皮質(zhì)酮造成的U251細(xì)胞損傷有一定的保護(hù)作用，在藥理學(xué)抑郁模型有顯著的抗抑郁活性。北柴胡有效組分CHB均能縮短小鼠懸尾不動時(shí)間和強(qiáng)迫游泳的不動時(shí)間，并改善由利血平造成的小鼠體溫降低，各劑量組與模型組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，呈劑量依賴性，體現(xiàn)顯著的抗抑郁作用。所述的柴胡的有效組分在制備治療抑郁癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。所述的抑郁癥是指由于各種原因引起的抑郁及抑郁伴隨的神經(jīng)、精神癥狀。本發(fā)明首次公開北柴胡有效組分CHB用于治療西醫(yī)范疇的以抑郁癥狀為主的精神疾病和中醫(yī)范疇的情志性方面的應(yīng)用。本發(fā)明首次公開了北柴胡有效組分CHB治療抑郁癥的藥用作用，因此，將柴胡有效組分單獨(dú)或與其他組分或輔料配合制成藥劑，只要該藥劑用于治療抑郁癥及相關(guān)神經(jīng)精神癥狀，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明提供的藥物組合物，包括有效劑量的的柴胡有效組分和藥學(xué)可接受的載體和/或輔料。本發(fā)明的北柴胡有效組分CHB是一種藥物活性成分。該藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明柴胡有效組分與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明柴胡有效組分在其藥物組合物中的含量通常為0. 1-95重量％。本發(fā)明柴胡有效組分或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、陰道、直腸等。給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑(包括真溶液和膠體溶液)、乳劑(包括0/V型、w/o型和復(fù)乳)、混懸劑、注射劑(包括水針劑、粉針劑和輸液)、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑(包括普通片、腸溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片)、膠囊劑(包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊)、顆粒劑、散齊IJ、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣(粉)霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟膏劑、凝膠劑、糊劑等。本發(fā)明柴胡有效組分可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了將本發(fā)明柴胡有效組分制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹月旨、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解劑可以是干淀粉、微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉等；潤滑劑和助流劑可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸鹽、酒石酸、液體石蠟、聚乙二醇等。
還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成膠囊劑，可以將有效成分本發(fā)明柴胡有效組分與稀釋劑、助流劑混合，將混合物直接置于硬膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明柴胡有效組分先與稀釋劑、黏合劑、崩解劑制成顆粒或微丸，再置于硬膠囊或軟膠囊中。用于制備本發(fā)明柴胡有效組分片劑的各稀釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、助流劑品種也可用于制備本發(fā)明柴胡有效組分的膠囊劑。為將本發(fā)明柴胡有效組分制成注射劑，可以用水、乙醇、異丙醇、丙二醇或它們的混合物作溶劑并加入適量本領(lǐng)域常用的增溶劑、助溶劑、PH調(diào)劑劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑。增溶劑或助溶劑可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羥丙基-￠-環(huán)糊精等；PH調(diào)劑劑可以是磷酸鹽、醋酸鹽、鹽酸、氫氧化鈉等；滲透壓調(diào)節(jié)劑可以是氯化鈉、甘露醇、葡萄糖、磷酸鹽、醋酸鹽等。如制備凍干粉針劑，還可加入甘露醇、葡萄糖等作為支撐劑。此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑或其它添加劑。為達(dá)到用藥目的，增強(qiáng)治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可用任何公知的給藥方法給藥。本發(fā)明柴胡有效組 分藥物組合物的給藥劑量依照所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的個(gè)體情況，給藥途徑和劑型等可以有大范圍的變化。一般來講，本發(fā)明柴胡有效組分的每天的合適劑量范圍為0. 001-150mg/Kg體重，優(yōu)選為0. l-100mg/Kg體重，更優(yōu)選為l_60mg/Kg體重，最優(yōu)選為2-30mg/Kg體重。上述劑量可以一個(gè)劑量單位或分成幾個(gè)劑量單位給藥，這取決于醫(yī)生的臨床經(jīng)驗(yàn)以及包括運(yùn)用其它治療手段的給藥方案。本發(fā)明的柴胡有效組分或組合物可單獨(dú)服用，或與其他治療藥物或?qū)ΠY藥物合并使用。當(dāng)本發(fā)明的柴胡有效組分與其它治療藥物存在協(xié)同作用時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整它的劑量。本發(fā)明的北柴胡有效組分CHB在制成任何一種劑型時(shí)，均具有治療抑郁癥的作用。任何藥劑，如果其組分中含有北柴胡有效組分CHB或者僅以北柴胡有效組分CHB單獨(dú)成分制備成藥，在其包裝或說明書等標(biāo)識上或者其他任何宣傳品上只要注明或提示具有治療抑郁癥的作用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的產(chǎn)品包括藥品和保健品。本發(fā)明的北柴胡有效組分CHB是來源于天然種草藥物傘形科植物北柴胡(Bupleurum chinense DC.)的干燥根。因此,也可以將北柴胡有效組分CHB制成保健食品或保健藥品。將北柴胡有效組分CHB制成的保健食品或保健藥品，如果在其包裝或包裝說明書等標(biāo)識上注明或提示具有治療抑郁癥的作用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。


圖1.柴胡有效組分的HPLC分析圖譜(注經(jīng)與對照品對照，27. 194min的色譜信號歸屬為柴胡皂苷b2)
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 :北柴胡有效組分的分離1.材料
1.1動物KM小鼠，6，體重18_22g，維通利華動物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證編號SCXK-2006-0008。1. 2藥品與試劑鹽酸氟西汀(Fluoxetine, Prozac百憂解),禮來蘇州制藥有限公司，批號0724A,將其研成粉末用水配成3. 5mg/kg混懸液。1. 3儀器與材料HPLC，小鼠懸尾測試儀TU-1，中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供。C0NTR0NIX小鼠肛溫測定儀，購自北京業(yè)之恒科技有限公司。2.方法2.1組分提取12Kg干燥的北柴胡根經(jīng)粉碎后用85%的乙醇(約140L)回流提取3次，提取時(shí)間分別為2h;2h; lh。將提取液合并后濃縮揮至無醇味得浸膏溶液5L，用60%的乙醇將上述浸膏溶液稀釋至8L。將8L溶液分成兩份，分別置于兩個(gè)IOL的分液漏斗中用石油醚萃取3次(3LX2X3)，至第三次萃取時(shí)石油醚層基本無色，將萃取所得石油醚層棄去。將石油醚萃取后的醇溶液用DlOl大孔吸附樹脂(5L)拌勻，并在水浴鍋上揮干，將吸附樣品的大孔樹脂裝入一個(gè)下部預(yù)先填裝了少量的DlOl大孔吸附樹脂的玻璃色譜柱。首先用20%的乙醇(40L)洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液棄去。再用60%的乙醇(44L)洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液收集，減壓回收乙醇得浸膏，并將浸膏真空干燥、粉碎得柴胡有效組分粉末240g。2.2結(jié)構(gòu)鑒定將上述柴胡有效組分進(jìn)行`HPLC分析，分析條件為色譜柱KromasilC18(250mmX4. 6mm，。柱溫25°C。流動相乙腈(A)和純凈水(B)，梯度洗脫，0 20min 30 40%A ；20 35min 40 50%A ；35 45min 50 60%A ；45 55min 60 80%A ；55 65min:80 100%A。流速1. OmL/min。檢測波長為 254nm。進(jìn)樣量20uL。HPLC 圖
譜如附圖1所示
權(quán)利要求
1.一種北柴胡的有效組分，其特征在于，通過如下的制備方法獲得 1)北柴胡根用80-90%乙醇提取，提取液合并后濃縮揮至無醇味， 2)向提取物中加入60-90%乙醇攪拌至溶解，將提取物的醇溶用石油醚進(jìn)行萃取至石油醚層顏色較淺，將石油醚層棄去； 3)剩余醇溶液用大孔吸附樹脂拌勻，并加熱揮干，將吸附樣品的大孔樹脂裝入一個(gè)下部預(yù)先填裝了大孔吸附樹脂的色譜柱上； 4)首先用10-30%的乙醇洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液棄去； 5)再用50-70%的乙醇洗脫大孔樹脂柱至洗脫液色淺，將該部分洗脫液收集， 6)減壓回收乙醇得浸膏，并將浸膏干燥、粉碎得柴胡有效組分。
2.根據(jù)要求I的北柴胡的有效組分，其特征在于，步驟I)中所述的北柴胡根經(jīng)過干燥、粉碎。
3.根據(jù)要求I的北柴胡的有效組分，其特征在于，步驟I)中提取溫度是乙醇回流的溫度，
4.根據(jù)要求I的北柴胡的有效組分，其特征在于，步驟I)中80-90%乙醇的用量以北柴胡根計(jì)每公斤10-14升。
5.根據(jù)要求I的北柴胡的有效組分，其特征在于，步驟2)中萃取步驟是在分液漏斗中進(jìn)行。
6.根據(jù)要求I的北柴胡的有效組分，其特征在于，步驟3)的大孔吸附樹脂選自DlOl大孔吸附樹脂、AB-8樹脂、DM-130樹脂、HPD-100樹脂。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的柴胡的有效組分在制備治療抑郁癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的應(yīng)用，其特征在于，所述的抑郁癥是指由于各種原因引起的抑郁及抑郁伴隨的神經(jīng)、精神癥狀。
9.根據(jù)權(quán)利要求7-8中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括藥品和保健品。
10.一種藥物組合物，包括有效劑量的權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的柴胡有效組分和藥學(xué)可接受的載體和/或輔料。
全文摘要
本發(fā)明公開了北柴胡有效組分CHB的制備和藥物用途，具體涉及其在治療抑郁癥產(chǎn)品中的應(yīng)用。北柴胡有效組分CHB對于各種原因引起的抑郁癥具有較好的治療作用。北柴胡有效組分CHB對皮質(zhì)酮損傷的U251細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。北柴胡有效組分CHB能明顯縮短小鼠懸尾不動時(shí)間和游泳不動時(shí)間，改善由利血平而造成的小鼠體溫的降低，各劑量組與模型組相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著差異，有劑量依賴性，體現(xiàn)較好的抗抑郁作用。
文檔編號A61K36/233GK103054921SQ20121041179
公開日2013年4月24日 申請日期2012年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月24日
發(fā)明者陳乃宏, 秦海林, 苑玉和, 鄧安珺, 劉佳莉, 于金倩, 劉巖, 李志宏 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所