專利名稱：一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥領(lǐng)域，涉及一種新劑型的復(fù)方抗菌藥物，具體涉及一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
抗菌藥在治療動(dòng)物感染性疾病上具有起效快、生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)，使其在獸醫(yī)臨床上有著廣泛的應(yīng)用。但傳統(tǒng)劑型的局限性以及耐藥性的逐漸增加，使得其治療成本上升且療效下降。為此，臨床實(shí)踐中常采用聯(lián)合使用兩種或多種抗菌藥物，以達(dá)到擴(kuò)大抗菌譜，增強(qiáng)療效，減少用藥量，降低或避免毒副作用，減少或延緩耐藥菌株產(chǎn)生的目的。
甲氧芐啶(TMP)屬于合成的廣譜抗菌劑，為親脂性弱堿，對(duì)多種革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌均有抗菌作用。單用易產(chǎn)生耐藥性，其耐藥機(jī)理可能是細(xì)菌改變代謝途徑，例如產(chǎn)生較多的二氫葉酸合成酶，或直接利用外源性葉酸。鹽酸多西環(huán)素系半合成四環(huán)素類抗生素，為廣譜抑菌藥，高濃度具有殺菌作用，對(duì)肺炎球菌、鏈球菌、部分葡萄球菌等革蘭氏陽性菌和大腸桿菌、沙門氏菌、嗜血桿菌等革蘭氏陰性菌敏感。該藥臨床耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，常見耐藥菌為葡萄球菌等革蘭氏陽性菌及革蘭氏陰性菌。細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性后，不但使療效降低，而且會(huì)造成耐藥菌株的傳播，給治療帶來困難。因此，如何通過聯(lián)合用藥和開發(fā)新劑型來解決甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素以上存在的缺點(diǎn)，提高兩藥臨床用藥療效已經(jīng)成為當(dāng)前急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明目的在于提供一種復(fù)方甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素的納米乳新劑型，該納米乳制劑能增強(qiáng)甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素單獨(dú)使用時(shí)的抗菌活性和擴(kuò)大抗菌譜，減少細(xì)菌耐藥性，緩釋藥物，延長藥物作用時(shí)間，降低毒副作用和用藥量，提高藥物生物利用度和穩(wěn)定性。一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，該納米乳制劑為水包油型，粒徑在I 100 nm之間，由下述重量百分比的原料制成甲氧芐啶O. 01 I. 75%、鹽酸多西環(huán)素
O.04 6. 99%、表面活性劑21. 8 35. 7%、助表面活性劑7. 94 11. 9%、油3. 49 4. 76%,余量為蒸餾水。具體的，所述的表面活性劑優(yōu)選為吐溫-80或蓖麻油聚氧乙烯醚(EL-40);所述的助表面活性劑優(yōu)選為乙醇或1，2-丙二醇(PG);所述的油優(yōu)選為肉豆蘧酸異丙酯(IPM)或乙
酸乙酯。所述的表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量比以在2 — 3 :1之間為宜。所述復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑的制備方法，其包括以下步驟
O按比例分別稱取各原料；將甲氧芐啶完全溶解于助表面活性劑中，然后加入表面活性劑和油，混勻，得體系a，備用；
2)將鹽酸多西環(huán)素溶于蒸餾水，得溶液b，備用；3)常溫下將溶液b緩慢加入到體系a中，同時(shí)不斷攪拌，直至形成均勻透明的體系，即得外觀透明的納米乳制劑。本發(fā)明藥物的組成原理及科學(xué)依據(jù)由于甲氧芐啶難溶于水，鹽酸多西環(huán)素易溶于水，因此將鹽酸多西環(huán)素原料藥的水溶液作為水相部分，將甲氧芐啶作為油相部分。采用偽三元相圖法篩選出最佳配方制備甲氧芐啶納米乳。表面活性劑為吐溫-80或EL-40，助表面活性劑為乙醇或PG，油為IPM或乙酸乙酯。當(dāng)表面活性劑和助表面活性劑質(zhì)量比為2 1或3 :1時(shí)，表面活性劑、助表面活性劑之和與油的質(zhì)量比為9:1 7:3時(shí)形成的納米乳區(qū)最大、最穩(wěn)定，載藥量最高。配方中所用的吐溫-80或EL-40毒性相對(duì)較小，不易受電解質(zhì)、無機(jī)鹽類及酸堿的影響；乙醇或PG作為助表面活性劑形成的納米乳不但穩(wěn)定，而且作為甲氧芐啶的溶劑，提高了甲氧芐啶在該復(fù)方納米乳中的含量；肉豆蘧酸異丙酯(IPM)與吐溫-80的HLB值接近，易形成穩(wěn)定的納米乳。利用油溶性染料蘇丹紅和水溶性染料亞甲基藍(lán)在復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳中擴(kuò)散的快慢來判斷納米乳的類型，發(fā)現(xiàn)亞甲基藍(lán)溶液在納米乳中有擴(kuò)散，蘇丹紅溶液在納米乳中則沒有擴(kuò)散，表明所制備的復(fù)方納米乳是水包油型(0/W)。 本發(fā)明復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳外觀透明，粒徑介于I 100 nm，其粘稠度可根據(jù)需要加入任意比例的蒸餾水調(diào)整，方便臨床給藥，兩種原料藥甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素的結(jié)構(gòu)均未發(fā)生變化。本發(fā)明復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳可用于治療由敏感菌引起的各類畜禽感染。本發(fā)明的制備工藝簡單，生產(chǎn)成本低，不需特殊設(shè)備即可規(guī)?；a(chǎn)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的復(fù)方納米乳具有以下優(yōu)點(diǎn)
1)本發(fā)明的復(fù)方納米乳安全、高效、耐藥性低；
2)本發(fā)明的復(fù)方納米乳吸收迅速，生物利用度高；靶向釋藥，副作用低；粒徑小且均勻，透膜吸收好；
3)本發(fā)明的復(fù)方納米乳黏度低，注射時(shí)疼痛小；
4)本發(fā)明的復(fù)方納米乳具有穩(wěn)定性良好，可過濾除菌，易于保存。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此。實(shí)施例I
一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，該納米乳制劑由O. 003g甲氧芐啶、
O.012g鹽酸多西環(huán)素、9. Og表面活性劑EL-40,3. Og助表面活性劑PG、I. 2g IPM, 12g蒸餾水制成。所述復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑的制備方法，其包括以下步驟
1)按比例分別稱取各原料；將甲氧芐啶原料藥加入助表面活性劑(PG)中混合均勻，適當(dāng)超聲乳化直至甲氧芐啶完全溶解，然后加入表面活性劑(EL-40)和油(IPM)，攪拌混勻，得體系a，備用；
2)將鹽酸多西環(huán)素原料藥溶于蒸餾水，得溶液b，備用；
3)常溫下將溶液b緩慢滴加到體系a中，同時(shí)不斷攪拌，直至形成均勻透明的體系，即得粒徑為I 100 nm、外觀透明的納米乳制劑。實(shí)施例2
一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，該納米乳制劑由O. 03g甲氧芐啶、
O.12g鹽酸多西環(huán)素、3. Og表面活性劑吐溫-80、I. Og助表面活性劑乙醇、O. 44g IPM, 8. Og蒸餾水制成。所述復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑的制備方法參照實(shí)施例I。實(shí)施例3
一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，該納米乳制劑由O. 4g甲氧芐啶、I. 6g鹽酸多西環(huán)素、6. Og表面活性劑EL-40、2. Og助表面活性劑乙醇、O. 88g乙酸乙酯，12g蒸餾水制成。 所述復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑的制備方法參照實(shí)施例I。實(shí)施例4
一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，該納米乳制劑由O. 4g甲氧芐啶、I. Sg鹽酸多西環(huán)素、6. Og表面活性劑吐溫-80、3. Og助表面活性劑乙醇、I. Og IPM, 15g蒸餾水制成。所述復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑的制備方法參照實(shí)施例I。試驗(yàn)例I復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳的穩(wěn)定性試驗(yàn) I)離心加速試驗(yàn)
取本發(fā)明制備的納米乳液，以20 000 r/min離心，10 min后觀察納米乳液外觀仍保持澄清透明，未出現(xiàn)油水分層現(xiàn)象。2)光穩(wěn)定性試驗(yàn)
將本發(fā)明納米乳液適量裝入玻璃瓶內(nèi)，密封后(4500 土 500 ) Ix光照條件下室溫放置，分別于O d、5 d、10 d取樣觀察。結(jié)果表明，乳液保持澄清透明外觀，未見分層和破乳等現(xiàn)象。3)溫度穩(wěn)定性試驗(yàn)
將本發(fā)明納米乳液分裝于玻璃瓶內(nèi)，密封后分別置于4 °C、25 °C、37 °C、60 °C條件下留樣考察3個(gè)月，每隔10 d取樣觀察。結(jié)果表明，乳液在該四種溫度條件下均保持澄清透明外觀，未見分層和破乳等現(xiàn)象。透射電子顯微鏡下觀察，本發(fā)明納米乳的液滴呈球形，其粒徑大小為I IOOnm,且分布均勻,分散性良好。試驗(yàn)例2復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳的聯(lián)合藥敏試驗(yàn) I)單藥紙片搭橋試驗(yàn)
制備的甲氧芐啶藥敏紙片含甲氧芐啶5 μ g/片，鹽酸多西環(huán)素藥敏紙片含甲氧芐啶30μ g/片。試驗(yàn)菌株為金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸桿菌ATCC25922。將濃度為1/2麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管的菌液接種到MHA培養(yǎng)基上，然后將上述兩種藥敏紙片各一張分別貼在MHA培養(yǎng)基表面，間距2 3 mm，35°C培養(yǎng)18 h后，觀察兩紙片間的抑菌圈直徑和形態(tài)。結(jié)果表明，兩種抗菌藥物對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸桿菌ATCC25922的抑菌圈交界角平直，表示甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素呈協(xié)同抗菌作用。2)肉湯稀釋棋盤試驗(yàn)
根據(jù)所測得的單藥甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素納米乳對(duì)金黃色葡萄球菌ATCC25923和大腸桿菌ATCC25922的最低抑菌濃度MIC值，采用微量肉湯稀釋棋盤法進(jìn)行藥物的聯(lián)合抗菌試驗(yàn)。按照本發(fā)明復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳的制備方法分別制備甲氧芐啶納米乳液和鹽酸多西環(huán)素納米乳液，并分別用MHB倍比稀釋成一系列濃度，然后將不同濃度的兩種抗菌藥物按棋盤法設(shè)計(jì)，兩兩組合加入96孔平板中，每種抗菌藥物取50 μ L，再將1.5Χ105 CFU/mL的菌液100 yL加入孔中，37 °C孵育24 h。記錄兩藥單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的MIC,和兩藥聯(lián)合用藥時(shí)各自的MIC，并計(jì)算FIC指數(shù)。試驗(yàn)過程重復(fù)5次，取眾數(shù)為MIC值，結(jié)果見表I。
表I為甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素單用和聯(lián)用的MG (mg/'L)和FIC指數(shù)
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，其特征在于，該納米乳制劑為水包油型，粒徑在I 100 nm之間，由下述重量百分比的原料制成甲氧芐啶O. 01 I. 75%、鹽酸多西環(huán)素O. 04 6. 99%、表面活性劑21. 8 35. 7%、助表面活性劑7. 94 11. 9%、油3.49 4. 76%，余量為蒸餾水。
2.如權(quán)利要求I所述的復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，其特征在于，所述的表面活性劑為吐溫-80或蓖麻油聚氧乙烯醚，所述的助表面活性劑為乙醇或1，2-丙二醇；所述的油為肉豆蘧酸異丙酯或乙酸乙酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，其特征在于，所述的表面活性劑與助表面活性劑質(zhì)量比為2 — 3 :1。
4.一種制備權(quán)利要求I至3任一所述復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑的方法，其特征在于，具體包括以下步驟 O按比例分別稱取各原料；將甲氧芐啶溶解于助表面活性劑中，然后加入表面活性劑和油，混勻，得體系a，備用； 2)將鹽酸多西環(huán)素溶于蒸餾水，得溶液b，備用； 3)常溫下將溶液b加入到體系a中，同時(shí)不斷攪拌，直至形成均勻透明的體系，即得外觀透明的納米乳制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復(fù)方甲氧芐啶與鹽酸多西環(huán)素納米乳制劑，該納米乳制劑為水包油型，粒徑在1～100nm之間，由下述重量百分比的原料制成甲氧芐啶0.01～1.75%、鹽酸多西環(huán)素0.04～6.99%、表面活性劑21.8～35.7%、助表面活性劑7.94～11.9%、油3.49～4.76%，余量為蒸餾水。該復(fù)方制劑為水包油型納米乳，外觀呈淡黃色透明狀，粒徑在1～100nm之間，穩(wěn)定性好，制劑中的甲氧芐啶和鹽酸多西環(huán)素表現(xiàn)出明顯的協(xié)同作用。該復(fù)方納米乳制劑具有安全、廣譜、高效、靶向、緩釋等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K31/505GK102895245SQ20121042325
公開日2013年1月30日 申請(qǐng)日期2012年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月30日
發(fā)明者胡帥, 樊楠, 李坤鵬 申請(qǐng)人:河南牧翔動(dòng)物藥業(yè)有限公司