一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用，所述制備方法包括（1）取殼聚糖和抗生素，以摩爾比例為1:0.1～1:10混合，溶于水中，加入NaCNBH3，避光攪拌，0℃～90℃反應(yīng)0.5～72小時；（2）將所得混合溶液透析1～5天；（3）將所得透析液干燥，即得。制備所述殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物的原料易得，合成方法簡便；該共價復(fù)合物對已經(jīng)形成的細菌生物膜具有較強的破壞作用，殺菌范圍廣，有效成分明確，對生物膜的形成具有良好的抑制作用。
【專利說明】一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]生物膜(biofilms，BF)是微生物細胞(如細菌、真菌、原蟲)及其產(chǎn)生的細胞外大分子多聚物所形成的一種特殊群落，是高度組織化的多細胞結(jié)構(gòu)。細菌生物膜是細菌在生長過程中為適應(yīng)生存環(huán)境而吸附于生命或非生命物體表面形成的一種生長方式，由細菌和自身分泌的胞外基質(zhì)組成。研究人員將這些能形成這類生物膜的細菌稱為生物膜細菌(BF細菌)。BF在自然界、某些工業(yè)環(huán)境(如輸水系統(tǒng)、食品加工、航運等領(lǐng)域)、人和動物體內(nèi)中都可見到細菌生物膜的影響。此外，BF與多種人體相關(guān)性感染性疾病的關(guān)系也非常密切。當細菌以BF形式存在時耐藥性明顯增強(10~1000倍)，對抗生素變得不敏感，誘導(dǎo)耐藥性產(chǎn)生；還可以抵抗宿主的防御體系，在發(fā)病前生長于牙齒、牙齦、皮膚、肺、尿道及其他器官的表面達數(shù)月甚至數(shù)年，造成頑固性感染，給臨床治療帶來嚴重影響。據(jù)估計，65%的人類感染與生物膜有關(guān)。BF的耐藥機制不同于浮游菌，有效濃度的抗菌藥物能迅速殺死浮游生長的細菌和BF表面的細菌，但對BF深處的細菌卻難以有效殺滅。由于傳統(tǒng)的抗生素如鏈霉素、慶大霉素、青霉素對細菌BF引起的感染療效欠佳，因此，臨床上急需尋找能夠殺滅BF深處細菌的藥物。
[0003]殼聚糖(chitosan)是由自然界廣泛存在的幾丁質(zhì)經(jīng)過脫乙酰作用得到的復(fù)合物，在醫(yī)藥、食品、化工、化妝品、水處理、金屬提取及回收、生化和生物醫(yī)學工程中廣泛應(yīng)用。鏈霉素(streptomycin)是繼青霉素后第二個生產(chǎn)并用于臨床的一種氨基葡萄糖型抗生素，鏈霉素在臨床上的應(yīng)用非常廣泛。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]因此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對臨床上缺乏能夠有效殺滅生物膜深處細菌的藥物，傳統(tǒng)抗生素對細菌生物膜引起的感染療效欠佳，并且不能阻止細菌生物膜形成的問題，提供了一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物及其制備方法和應(yīng)用。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之一為:一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
[0006](1I)制備殼聚糖和抗生素水溶液，將殼聚糖和抗生素按照摩爾比例為1:0.1~1:10混合，加入NaCNBH3，避光攪拌，0°C~90°C反應(yīng)0.5~72小時；
[0007](2)將步驟(1)所得的水溶液移入截留分子量為1000~14000的透析袋中，透析1~5天，得到透析液；
[0008](3)將步驟(2)所得的透析液干燥，即得。
[0009]其中步驟(1)所述殼聚糖為本領(lǐng)域常規(guī)殼聚糖。所述殼聚糖(chitosan)是由自然界廣泛存在的幾丁質(zhì)(chitin)經(jīng)過脫乙酰作用得到的，化學名稱為聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖。其中所述抗生素為本領(lǐng)域常規(guī)的抗生素。所述抗生素較佳地為氨基糖苷類抗生素。所述氨基糖苷抗生素是由氨基糖與氨基環(huán)醇通過氧橋連接而成的糖苷類抗生素。所述抗生素較佳地為鏈霉素，卡那霉素或慶大霉素。本發(fā)明所述抗生素優(yōu)選地為鏈霉素。
[0010]其中步驟(1)所述殼聚糖和抗生素水溶液混合形成混合液，所述殼聚糖和抗生素的摩爾比較佳地為1:0.1~1:10，更佳地為1:0.5~1:6，最佳地為1:0.5。所述反應(yīng)的時間較佳地為0.5~72小時，更佳地為10~48小時，最佳地為24小時。所述反應(yīng)的溫度較佳地為0°C~90°C，更佳地為15°C~30°C，最佳地為20°C。
[0011 ] 其中步驟(1)所述NaCNBH3的添加量較佳地為所述抗生素含量的30%~50%，添加量最佳地為30%，所述百分比為質(zhì)量百分比。
[0012]其中步驟(2)所述的透析為本領(lǐng)域常規(guī)透析方法。所述透析是一種穿過膜的選擇性擴散過程，可用于分離分子量大小不同的溶質(zhì)，低于膜所截留閾值分子量的物質(zhì)可擴散穿過膜，高于膜截留閾值分子量的物質(zhì)則被保留在半透膜的另一側(cè)。其中所述透析袋為本領(lǐng)域常規(guī)透析袋。所述透析袋的截留分子量較佳地為1000~14000，更佳地為3000~5000，截留分子量最佳地為3500。其中所述透析的時間較佳地為2~5天，更佳地為2~3天，透析時間最佳地為2天。
[0013]其中步驟(3)所述的干燥為本領(lǐng)域常規(guī)干燥方式。所述干燥較佳地為真空冷凍干燥、真空干燥、噴霧干燥、烘干或紅外干燥，最佳地為真空冷凍干燥。所述真空冷凍干燥的參數(shù)較佳地為:溫度_35°C~_45°C，真空度20~30Pa，時間36~48小時。
[0014]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之二為:如上所述的制備方法制備所得的殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物。
[0015]所述殼聚糖-抗生·素共價復(fù)合物中殼聚糖和抗生素的摩爾比較佳地為1:0.1~1:10，更佳地為1:0.5~1:6，最佳地為1:0.5。
[0016]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案之三為:如上所述的殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物在制備抗感染藥物中的用途。
[0017]本發(fā)明所述用途較佳地是指將殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物作為活性成分，與藥學上可接受的輔料制成各種劑型的抗感染藥物。其中所述藥學上可接受的輔料是本領(lǐng)域常規(guī)使用的輔料。所述藥物輔料是指生產(chǎn)藥品和調(diào)配處方時所用的賦形劑與附加劑。
[0018]其中所述抗感染藥物更佳地為抗細菌感染類藥物。所述細菌為本領(lǐng)域常規(guī)致病菌。所述細菌較佳地為革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。其中革蘭氏陽性菌較佳地為單增李斯特菌，其中革蘭氏陰性菌較佳地為金黃色葡萄球菌或銅綠假單胞菌。
[0019]在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。
[0020]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0021]本發(fā)明的積極進步效果在于:制備本發(fā)明所述殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物的原料易得，合成方法簡便易行；經(jīng)微生物試驗證明，該殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物對已經(jīng)形成的細菌生物膜具有較強的破壞作用，殺菌范圍廣，有效成分明確；該復(fù)合物對生物膜的形成具有良好的抑制作用。同時，所述殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物能夠有效降低細菌以生物膜形式存在時產(chǎn)生的耐藥性，提高細菌對傳統(tǒng)抗生素的敏感性，降低傳統(tǒng)抗生素的使用量?！緦＠綀D】

【附圖說明】
[0022]圖1為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物分子量測定圖譜。
[0023]圖2為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物紅外圖譜。
[0024]圖3為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物的核磁共振C譜。
[0025]圖4為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物的核磁共振H譜。
[0026]圖5為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對細菌生物膜的破壞作用效果圖；注:對照為不加任何藥的空白對照，L為鏈霉素，CS為殼聚糖，L+CS為鏈霉素與殼聚糖的混合物。A代表單增李斯特細菌；B代表金黃色葡萄球菌；C代表銅綠桿菌。 [0027]圖6為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對生物膜內(nèi)細菌的抑制作用效果圖；注:對照為不加任何藥的空白對照，L為鏈霉素，CS為殼聚糖，L+CS為鏈霉素與殼聚糖的混合物，A代表單增李斯特細菌；B代表金黃色葡萄球菌；C代表銅綠桿菌。
[0028]圖7為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對生物膜內(nèi)細菌的抑制作用效果圖；注:對照為不加任何藥的空白對照，L為鏈霉素，CS為殼聚糖，L+CS為鏈霉素與殼聚糖的混合物。A代表單增李斯特細菌；B代表金黃色葡萄球菌；C代表銅綠桿菌。
[0029]圖8為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在生物膜形成過程中的抑菌效果圖；注:對照為不加任何藥的空白對照，L為鏈霉素，CS為殼聚糖，L+CS為鏈霉素與殼聚糖的混合物。A代表單增李斯特細菌；B代表金黃色葡萄球菌；C代表銅綠桿菌。
[0030]圖9為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在生物膜形成過程中的抑菌效果圖；注:對照為不加任何藥的空白對照，L為鏈霉素，CS為殼聚糖，L+CS為鏈霉素與殼聚糖的混合物。A代表單增李斯特細菌；B代表金黃色葡萄球菌；C代表銅綠桿菌。
【具體實施方式】
[0031]下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。
[0032]實施例1
[0033]取殼聚糖50mg,鏈霉素45.3mg分別溶于20ml去離子水中，并加入0.372g氰基硼氫化鈉(NaCNBH3)，置于黑暗處15°C條件下300rpm，攪拌10h，將溶液加入攔截分子量為3000的透析袋，在去離子水中透析2天，真空度20pa，_35°C冷凍干燥48小時，即得摩爾比1:0.1的殼聚糖-鏈霉素復(fù)合物85.8mg。經(jīng)HPLC凝膠分析系統(tǒng)(Waters公司生產(chǎn))測定，(測試溫度25°C，流動相:3mmol乙酸鈉，流動相流速0.5ml/min.標準品采用葡聚糖)，殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物的相對分子量為7026Da，鑒定結(jié)果如圖1所示。
[0034]實施例2
[0035]取殼聚糖lOOmg，鏈霉素452.5mg分別溶于30ml去離子水中，并加入0.744gNaCNBH3置于黑暗處20°C，300rpm,攪拌24h，將溶液加入攔截分子量為3500的透析袋，在去離子水中透析2天，真空度30Pa，-45°C冷凍干燥48小時，即得摩爾比1:0.5的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物497.3mg。所得殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物紅外光譜采用Bruker公司生產(chǎn)的紅外儀檢測，采用溴化鉀壓片法。(董炎明；王勉；吳玉松；阮永紅.纖維素科學技術(shù)6，9(2)，42-55(2001))。所得殼聚糖_鏈霉素共價復(fù)合物紅外鑒定圖譜如圖2所示，其中2880~2900CHT1出現(xiàn)的吸收峰為鏈霉素上殘余的醛基，1650cm-1是N_H，1360"l250cm_1是C-N, 1153"l031cm_1 為 C-0。
[0036]實施例3
[0037]取殼聚糖150mg，鏈霉素2.714g分別溶于40ml去離子水中，并加入1.16gNaCNBH3,置于黑暗處25°C，300rpm,攪拌36h，將溶液加入攔截分子量為4000的透析袋，在去離子水中透析3天。在真空度20Pa，-45 V冷凍干燥48小時，即得摩爾比1:2的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物2.55g。將所得殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物溶于氘代水，采用Bruker公司生產(chǎn)的核磁共振儀檢測。所得殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物的核磁共振C譜如圖3所示，其中IOppm是甲基上的碳原子,30ppm是亞甲基，6(Tl00ppm之間是糖環(huán)，160ppm是鏈霉素上殘余的醛基。
[0038]實施例4
[0039]取殼聚糖50mg，鏈霉素1.81g分別溶于20ml去離子水中，并加入0.372g NaCNBH3,置于黑暗處30°C條件下300rpm，攪拌48h，將溶液加入攔截分子量為4500的透析袋，在去離子水中透析4天，真空度30Pa，_45°C冷凍干燥48小時，即得摩爾比1:4的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物1.66g。將所得殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物溶于氘代水，采用Bruker公司生產(chǎn)的核磁共振儀檢測。所述殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物的核磁共振H譜如圖4所示，其中
1.0ppm是甲基,2.0ppm是殼聚糖上未去乙酰化的羰基,3.(T4.0ppm是糖環(huán),4.5^5.0ppm是水,5.0^5.5ppm是鏈霉素上的頭碳上的氫。
[0040]實施例5
[0041]取殼聚糖50mg，鏈霉素2.72g分別溶于20ml去離子水中，并加入0.372g NaCNBH3,置于黑暗處25°C，300rpm，攪拌48h`，將溶液加入攔截分子量為5000的透析袋，在去離子水中透析5天，真空度30Pa，-40°C冷凍干燥36小時，即得摩爾比1:6的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物2.51g。
[0042]實施例6
[0043]取殼聚糖150mg，鏈霉素13.75g分別溶于20ml去離子水中，并加入6.785gNaCNBH3，置于黑暗處0°C，300rpm，攪拌72h，將溶液加入攔截分子量為14000的透析袋，在去離子水中透析5天，烘干36小時，即得摩爾比1:10的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物12.28g。
[0044]實施例1
[0045]取殼聚糖50mg，卡那霉素58.3mg分別溶于20ml去離子水中，并加入17.49mg氰基硼氫化鈉(NaCNBH3)，置于黑暗處90°C條件下300rpm，攪拌72h，將溶液加入攔截分子量為14000的透析袋，在去離子水中透析I天，紅外干燥48小時，即得摩爾比1:0.1的殼聚糖-卡那霉素復(fù)合物85.8mg0
[0046]實施例8
[0047]取殼聚糖50mg，鏈霉素2.72g分別溶于20ml去離子水中，并加入0.816g NaCNBH3,置于黑暗處25°C，300rpm，攪拌48h，將溶液加入攔截分子量為5000的透析袋，在去離子水中透析5天，噴霧干燥，即得摩爾比1:6的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物2.51g。
[0048]實施例9
[0049]取殼聚糖150mg，鏈霉素2.714g分別溶于40ml去離子水中，并加入0.81gNaCNBH3，置于黑暗處60°C，300rpm，攪拌0.5h，將溶液加入攔截分子量為1000的透析袋，在去離子水中透析I天。所得透析液在真空度20Pa，干燥48小時，即得摩爾比1:2的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物2.55g。
[0050]效果實施例1殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對細菌生物膜的破壞作用
[0051]微生物:單增李斯特菌CMCC 54004、金黃色葡萄球菌ATCC 29213、銅綠假單胞菌ATCC9027。
[0052]藥物:實施例1-9制備所得殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物，藥物對照殼聚糖(青島云宙生物科技有限公司)、鏈霉素(阿拉丁)。
[0053]試驗方法:在96孔培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5X IO8~IO9的細菌，放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，讓細菌帖壁形成生物膜。吸去培養(yǎng)液，用PBS (0.lmol/L)洗滌三次，每孔加90iU LB培養(yǎng)基和IOiU藥物。藥物為殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物(其中殼聚糖和鏈霉素的摩爾比分別為1:0.1,1:0.5，1:2，1:4，1:6，1:10)，殼聚糖(CS)，鏈霉素(L)，以及殼聚糖和鏈霉素的混合物(CS+L)(其中殼聚糖和鏈霉素質(zhì)量比為1:1)，所述藥物濃度均為
0.25mg/ml。每組平行6孔。置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。吸去藥物，用PBS(0.lmol/L)小心洗滌三次，每孔加0.1ml 99%甲醇溶液固定細菌15分鐘。吸去甲醇溶液，每孔加0.1ml
0.1%結(jié)晶紫染液，室溫中放置20分鐘。輕輕甩去染色液，用蒸餾水洗滌各孔，將培養(yǎng)板倒置于吸水紙上吸干水分。自然干燥或37°C烘干。測定前，每孔加0.1ml 33%醋酸脫色，充分振蕩后在595nm處測定光吸收度。試驗重復(fù)三次。
[0054]三次重復(fù)試驗結(jié)果表明，殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對上述三種細菌形成的生物膜具有顯著的抑制、破壞作用，并且在24h內(nèi)都具有顯著的效果，其結(jié)果如圖5 (A、B、C)所示。
[0055]效果實施例2殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對生物膜深處細菌的抑制作用
[0056]菌株:同效果實施例1。
[0057]藥物:同效果實施例1。
[0058]試驗方法:在96孔培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5X IO8~IO9的細菌，放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，讓細菌帖壁形成生物膜。吸去培養(yǎng)液，用PBS(0.lmol/L)小心洗滌三次，每孔加90 u I培養(yǎng)基和10 u I不同的藥物(同效果實施例1 )，每組平行6孔。置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。吸去藥物，用PBS (0.lmol/L)小心洗滌三次，每孔加90 u I培養(yǎng)基和IOu IMTT溶液(5mg/ml用PBS配制，0.22 u m過濾)，繼續(xù)孵育3h，終止培養(yǎng)，3500rmp離心5min，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加100 ill DMS0，振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分融解。490nm波長下，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。試驗重復(fù)三次。
[0059]三次重復(fù)試驗結(jié)果表明，在24h內(nèi)，殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對生物膜深處的上述三種細菌具有顯著的抑制、殺死作用，其結(jié)果如圖6 (A、B、C)所示。
[0060]效果實施例3殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物對生物膜深處細菌的抑制作用
[0061]菌株:同效果實施例1。
[0062]藥物:同效果實施例1。
[0063]在96孔培養(yǎng)板各孔中加0.1ml含5X IO8~IO9的細菌，放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，讓細菌帖壁形成生物膜。吸去培養(yǎng)液，用PBS小心洗滌三次，每孔加90 u I培養(yǎng)基和IOiIl藥物(同效果實施例1)，每組平行6孔。置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。吸去藥物，用PBS小心洗滌三次，加入0.1ml0.2%Triton X-100裂解Ih后，稀釋點板、計數(shù)。
[0064]試驗結(jié)果表明，不同摩爾比例的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在24h內(nèi)對生物膜深處的上述三種細菌具有顯著的抑菌、殺菌效果，其結(jié)果如圖7 (A、B、C )所示。
[0065]效果實施例4殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在生物膜形成過程中的殺菌作用
[0066]菌株:同效果實施例1。
[0067]藥物:同效果實施例1。
[0068]試驗方法:在96孔培養(yǎng)板各孔中加90 ill含5X IO8~IO9的細菌的溶液，同時加AlOul不同的藥物(同效果實施例1)，每組平行6孔，放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。吸去藥物，用PBS (0.lmol/L)小心洗滌三次，每孔加90 u I培養(yǎng)基和10 u I MTT溶液(濃度為5mg/ml,用PBS配制,0.22 u m過濾),繼續(xù)孵育3h,終止培養(yǎng),3500rmp離心5min,小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加100 ill DMS0，振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分融解。490nm波長下，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。試驗重復(fù)三次。
[0069]試驗結(jié)果表明，殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在所述三種細菌生物膜形成過程的24h內(nèi)，具有顯著的抑菌和殺菌作用，其結(jié)果如圖8 (A、B、C)所示。其中殼聚糖和鏈霉素摩爾比為1: 0.5的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物殺菌效果較好，鏈霉素的使用量較低。
[0070]效果實施例5殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在生物膜形成過程中的殺菌作用
[0071]菌株:同效果實施例1。
·[0072]藥物:同效果實施例1。
[0073]試驗方法:在96孔培養(yǎng)板各孔中加90 ill含5X IO8~IO9的細菌，同時加入10 ill不同的藥物(同效果實施例1)，每組平行6孔，放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。吸去96孔板內(nèi)液體，用PBS (0.lmol/L)小心洗滌三次，加入0.1ml 0.2%Triton X-100裂解Ih后，稀釋點板、計數(shù)。
[0074]試驗結(jié)果表明，殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物在上述三種細菌生物膜形成過程的24h內(nèi)，具有顯著的抑菌和殺菌作用，其結(jié)果如圖9 (A、B、C)所示。其中殼聚糖和鏈霉素摩爾比為1: 0.5的殼聚糖-鏈霉素共價復(fù)合物殺菌效果好，鏈霉素的使用量較低。
[0075]應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物的制備方法，其特征在于，該制備方法包括以下步驟: (1)制備殼聚糖和抗生素水溶液，將殼聚糖和抗生素按照摩爾比例為1:0.1~1:10混合，加入NaCNBH3，避光攪拌，(TC~90°C反應(yīng)0.5~72小時； (2)將步驟(1)所得的水溶液移入截留分子量為1000~14000的透析袋中，透析I~5天，得到透析液； (3)將步驟(2)所得的透析液干燥，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述抗生素為慶大霉素、鏈霉素或卡那霉素。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述抗生素為鏈霉素。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述殼聚糖和抗生素的摩爾比例為1:0.5~1:6。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述NaCNBH3的添加量是所述抗生素含量的30%~50%,所述百分比為質(zhì)量百分比。
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述反應(yīng)的溫度為15°C~30°C，所述反應(yīng)的時間為10~48小時。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述透析袋截留分子量為3000~5000，所述透析的時間為2~5天。`
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)所述干燥的方式為真空冷凍干燥、真空干燥、噴霧干燥、烘干或紅外干燥。
9.一種如權(quán)利要求1~8任一項所述的制備方法制備所得的殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物。
10.如權(quán)利要求9所述的殼聚糖-抗生素共價復(fù)合物在制備抗感染藥物中的用途。
【文檔編號】A61P31/04GK103784968SQ201210433695
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2012年11月2日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月2日
【發(fā)明者】段金友, 張阿敏, 崔國庭, 母海缽, 張武霞, 張琳, 牛紅, 王清潔, 董冬旗 申請人:西北農(nóng)林科技大學