專利名稱：少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a及其基因和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
電壓門控鈉通道廣泛分布于肌肉、神經(jīng)元、腺體、心肌的可興奮性組織中，是一種重要的跨膜結(jié)構(gòu)蛋白，其活動與細(xì)胞的興奮、收縮、分泌和突觸傳遞等特異性功能密切相關(guān)。鈉通道亞型一個引人注目的重要功能就是與傷害性感受傳遞、神經(jīng)性疼痛的過程有關(guān)。 除河豚毒素不敏感型鈉通道Navl. 8和I. 9是這一過程重要參與者外，Navl. 7也是其中關(guān)鍵因素之一。在小直徑外周感覺神經(jīng)元上，Navl. 7能設(shè)定Navl. 8和Navl. 9激活開放的閾值。在致炎疼痛模式動物中，發(fā)現(xiàn)Navl. 7表達(dá)水平被明顯上調(diào)。與紅斑狼瘡相關(guān)的Navl. 7 突變體激活被易化，與陣發(fā)性極端疼痛障礙相關(guān)的Navl. 7突變體的失活時間被延長。特別是,當(dāng)Navl. 7不能產(chǎn)生功能時,患者會失去感受痛覺的能力，但對溫覺、壓覺等其它功能表現(xiàn)正常。因此，針對鈉通道的特異阻斷劑具有十分重要的鎮(zhèn)痛藥物的應(yīng)用前景。
蜈蚣是一種傳統(tǒng)中藥，性溫，味辛，有毒。具有息風(fēng)鎮(zhèn)痙、攻毒散結(jié)、通絡(luò)止痛之功能。蜈蚣毒腺中含有豐富的多肽成分，目前已經(jīng)證實(shí)了這些多肽成分多為神經(jīng)毒素。多肽能夠選擇性的抑制鈉通道，鉀通道或是鈣離子通道，因此蜈蚣毒液中的成分具有廣泛的應(yīng)用前途，如開發(fā)成為鎮(zhèn)痛藥物、及治療自身免疫疾病藥物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX_Ssm6a及其基因和應(yīng)用。
本發(fā)明提供的少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX_Ssm6a，是從少棘蜈蚣粗毒中通過分子篩和反向高效液相色譜分離純化得到，其氨基酸序列(SEQ ID NO: I)為ADNKCENSLRREIACG QCRDKVKTDGYFYECCTSDSTFKKCQDLLH,該多肽包括46個氨基酸殘基分子量為5318. 97，等電點(diǎn)為6. 76，分子內(nèi)含有三對二硫鍵排列方式為C1-C5、C2-C6和C3-C4。
少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX_Ssm6a的基因克隆包括
少棘蜈蚣毒腺總RNA提取，mRNA純化，mRNA反轉(zhuǎn)錄及cDNA文庫構(gòu)建，設(shè)計引物，利用PCR方法篩選少棘蜈蚣鈣離子通道激活劑多肽基因。擴(kuò)增引物長度為17個核苷酸，其序列為5 ’ -GCGAAAAATGGAAATCT-3 ’，PCR另一擴(kuò)增引物為CL0NTECH公司 SMART TM cDNA Library Construction Kit 中的 3’ PCR Primer 引物，其序列為 5 ' ATTCTACAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3丨。所獲陽性單克隆進(jìn)行基因核苷酸序列測定。
基因測序結(jié)果表明編碼少棘蜈蚣鈣離子通道激活劑的基因(SEQ ID N0:2)由426 個核苷酸組成，自5’端至3’端序列基因序列包括了信號肽、前體肽和成熟肽，其中下劃線部分為成熟肽。
權(quán)利要求
1.少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a，其特征在于由SEQID NO: I所示的氨基酸序列組成。
2.編碼少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a的基因，其特征在于由SEQID NO: I所示的核苷酸序列組成。
3.權(quán)利要求I所說的少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a是一種鈉通道抑制劑，在制備鎮(zhèn)痛藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a及其基因和應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a，由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列組成。編碼少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a的基因，由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列組成。少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a是一種鈉通道抑制劑，在制備鎮(zhèn)痛藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a，對大鼠背根神經(jīng)節(jié)上的鈉離子通道電流有非常顯著的抑制作用，是一種鈉通道抑制劑；該毒素能夠選擇性的作用鈉離子通道亞型Nav1.7，小鼠的鎮(zhèn)痛模型表明該多肽具有良好的鎮(zhèn)痛效果，能夠在制備鎮(zhèn)痛藥物中應(yīng)用。
文檔編號A61P29/00GK102977201SQ20121045353
公開日2013年3月20日 申請日期2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月13日
發(fā)明者賴仞, 容明強(qiáng), 楊仕隆, 肖瑤, 康迪 申請人:中國科學(xué)院昆明動物研究所