專利名稱：五倍子抗腫瘤有效組分提取物及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及五倍子抗腫瘤有效部位提取物、含有它的藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
腫瘤是當今世界上危害人類健康的最嚴重疾病之一，目前，腫瘤的治療有手術(shù)、放化療、介入等多種手段，但死亡率依然居高不下，現(xiàn)已上升為第一位[參見肖震宇，何少忠，彭衛(wèi)衛(wèi).2011，22 (23) :2204-2206]。世界各國的專家學者都在積極研究尋找治療腫瘤的方法和藥物。中醫(yī)藥對于治療癌癥等疑難病癥有著悠久的歷史，藥用植物中的活性成分可通過多種途徑、多個靶點發(fā)揮其生物學作用。特別是植物來源的藥物及其衍生物，如長
春新堿、羥基喜樹堿、紫杉醇、多西紫杉醇等已廣泛應(yīng)用并作為一線用藥，抗癌中藥及其靶向給藥系統(tǒng)的研究已經(jīng)受到了極大關(guān)注。作為中藥和化工原料，五倍子在國內(nèi)外市場享有盛譽。[參見李春遠，丁唯嘉，渠桂榮.中草藥，2008,39 (8) :1129-1132.喬彩云，李建科.食品工業(yè)科技，2011，32
(7)=458-462 ]五倍子(fe77a，別名倍子、百蟲倉、百藥煎、麩木、木麩子、文蛤等，為癭綿姆科(Pemphigidae)的一些姆蟲寄生在漆樹科鹽膚木屬植物鹽膚木(Rhuschinensis Mill)、青鉄楊{R. po tan ini Maxim.)或紅鉄楊{R. pun jabensis Stew. Var.Sinica Rehd. Et # 7·5)等的葉或葉柄上而形成的囊狀蟲癭，以葉上蟲癭(又稱角倍、肚倍、花倍、藥倍)入藥。五倍子適宜生長在溫暖濕潤的山區(qū)和丘陵，在我國主產(chǎn)區(qū)集中在貴州、四川、湖北、湖南、陜西、云南等六省，這些省的五倍子產(chǎn)量約占全國總產(chǎn)量的90%以上。此外，湖南、河南、甘肅、廣東、安徽、浙江、江西、福建、山西等地亦產(chǎn)[參見周勁光.海峽藥學，2010,22 (4) 30-32 ]。五倍子主要有效成分五倍子單寧又稱五倍子鞣質(zhì)，由7 9個分子沒食子酸和I分子葡萄糖縮合而成，含量約為60% 70%，甚至高達80% ;另外尚有沒食子酸2% 4%，脂肪、樹脂以及蠟質(zhì)等。因五倍子盛產(chǎn)于我國，國際上又將五倍子鞣質(zhì)稱為中國鞣質(zhì)(Chinese gallotannin),它是倍酰葡萄糖的混合物，即葡萄糖上的輕基與沒食子酸所形成的酯類化合物的混合物，屬水解類鞣質(zhì)。五倍子的鞣質(zhì)含量很高，最高可達70%以上。沒食子酸也是五倍子中主要成分之一，它的含量約占29Γ 4%。五倍子油的化學成分為癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸等。五倍子油與其他種子油相比，含有大量的月桂酸和肉豆蘧酸。有文獻報道五倍子油對糖尿病有一定的療效[參見李秀萍，李春遠，渠桂榮，李彩麗.中醫(yī)藥學報，2002,30 (3) :72-74.韓瑞，李建科，曹立強，鄧紅·糧食與油脂，2008, 11:26-28]。五倍子目前研究認為其主要藥理作用為止血和抑菌[劉現(xiàn)兵，杜鎮(zhèn)鎮(zhèn)，王冬，等.中國實用醫(yī)藥，2008, 7(3):96 —97. Jaw-Chyun Chen, Tin-Yun Ho, Yuan-Shiun Chang,et al. Journal of Ethnopharmacology, 2006 ,103:385—391·]。近年來，開始有學者對五倍子有效成分9201的癌化學預(yù)防作用進行了系統(tǒng)的研究，應(yīng)用苯并芘B (a) P誘發(fā)V79細胞體外轉(zhuǎn)化模型，B (A)誘發(fā)小鼠肺腺瘤模型以及DMBA /巴豆油誘發(fā)的小鼠皮膚乳頭狀瘤模型。證明9201能明顯抑制苯并芘對中國倉鼠肺細胞(V 79)的惡化轉(zhuǎn)化，在體內(nèi)明顯抑制苯并花誘發(fā)的小鼠肺腺瘤的形成，使生瘤率降低，而且還能有效抑制DMB A/巴豆油誘發(fā)的小鼠皮膚乳頭狀瘤的形成，使?jié)摲谘娱L，皮膚乳頭狀瘤的發(fā)生率降低[陳曉光，李燕，韓銳.醫(yī)學研究通訊，2000，29 (3):15-16]。有效成分9201的具體成分由相關(guān)文獻可見應(yīng)為五倍子的鞣質(zhì)部分[陳曉光.五倍子有效成分9201的癌化學預(yù)防作用及其機理的研究(博士論文)，中國協(xié)和醫(yī)科大學，1994]。目前尚未見到有關(guān)五倍子醚提物成分抗腫瘤作用研究與應(yīng)用方面的報道。有關(guān)五倍子成分研究，國內(nèi)外文獻均集中在鞣質(zhì)類成分上，有關(guān)五倍子醚提物研究很少。中國專利申請CN200710041748. 6《一種五倍子鞣質(zhì)的提取 方法》，涉及了五倍子鞣質(zhì)的提取方法，未涉及醚提成分。中國專利申請CN CN200710150082. 8、CN200710150138. X、CN200710150139. 4、CN200710150154. 9.CN200710150159.1 及 CN200710150161. 9《五倍子有效組分及其制備方
法與用途》，涉及了五倍子乙酸乙酯和乙醇混合提取的部分，未涉及醚提部分。本發(fā)明的目的之一是，提供一種五倍子乙醚提取物的抗腫瘤有效部位及其制備方法。本發(fā)明的目的之二是，提供一種以所說部位為有效成分的藥物組合物。本發(fā)明的目的之三是，提供所說有效部位在制備抗腫瘤及相關(guān)藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于開發(fā)五倍子新的藥用部位，提供一種從五倍子中提取具有抗腫瘤作用的有效部位。本發(fā)明的優(yōu)點和效果在于采用簡單的方法提取得到五倍子中具有抗腫瘤作用的提取物，并經(jīng)實驗證明對惡性腫瘤細胞具有較強的抑制作用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
五倍子抗腫瘤有效組分提取物，它是五倍子干燥后粉碎，加入石油醚去油，晾干，水提醇沉，濾液蒸去乙醇后用乙醚提取，濃縮后得到的五倍子抗腫瘤有效組分提取物。一種制備上述的五倍子抗腫瘤有效組分提取物的方法，它包括以下步驟
(1)五倍子為原料，藥材五倍子干燥后粉碎，取80_400g加入石油醚均勻攪拌，靜置，濾去石油醚，晾干，加水回流提取，藥渣重復(fù)提取I次，收集濾液，蒸發(fā)縮至約300ml，加入2-6倍體積的95%乙醇攪拌，靜置過夜，過濾，得提取液；
(2)步驟(I)的提取液濃縮去除乙醇后用2-5倍體積的乙醚進行萃取，乙醚萃取液蒸發(fā)濃縮后，即得五倍子抗腫瘤有效組分提取物。本發(fā)明提供的五倍子抗腫瘤有效組分提取物經(jīng)過進一步分離提純及碳譜氫譜分析鑒定主要含有沒食子酸、沒食子酸乙酯及其他未知物。本發(fā)明進一步提供五倍子抗腫瘤有效組分提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。以抑制U251增殖能力為活性指標進行抗腫瘤活性實驗。實驗結(jié)果表明，在體外細胞毒實驗中，可以明顯抑制U251的增殖，具有抗腫瘤作用，可用于制備抗腫瘤治療藥物。本發(fā)明還提供了以所述方法制備的五倍子抗腫瘤有效組分提取物的藥物組合物。所述藥物組合物是以本發(fā)明的五倍子抗腫瘤有效組分提取物為有效成分，與藥學上可接受的載體所組成，并以適合藥用的制劑形式存在，這些制劑形式可以是片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、緩釋片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、滴丸劑和貼劑等。有益效果
(I)本發(fā)明的優(yōu)點和效果在于采用溶劑提取、萃取等常規(guī)方法，從五倍子中提取得到了具有抗腫瘤作用的有效組分的乙醚提取物，該有效組分經(jīng)實驗證明具有體外抑制腦膠質(zhì)細胞U251生長的活性。(2)本發(fā)明拓展了抗腫瘤藥物的原料渠道，擴大了五倍子的用途，使五倍子發(fā)展成為高效的抗腫瘤藥物組分的原料，可顯著提高五倍子的附加值。
具體實施例方式以下所列實施例有助于本領(lǐng)域技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1:五倍子抗腫瘤有效組分提取物的制備
藥材五倍子干燥后粉碎。取400g藥粉，加入石油醚250ml，均勻攪拌5min，靜置lh，過濾除去石油醚，重復(fù)3次，取出藥品晾干。將上述樣品分成4份，加入水1L，回流提取2h，藥渣重復(fù)提取4次，收集濾液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液至約200ml，加入95%乙醇450ml攪拌，靜置過夜。過濾，取濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇蒸出，蒸至無乙醇味，得粗提液200ml。用乙醚分4次萃取粗提液(每次乙醚250 ml)，合并乙醚層，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至無乙醚味，得褐色浸膏，即五倍子抗腫瘤有效組分提取物。五倍子抗腫瘤有效組分提取物經(jīng)過液相制備色譜進一步分離純化及NMR碳譜氫譜分析，初步判定主要含有沒食子酸、沒食子酸乙酯及其他未知物。實施例2 :五倍子抗腫瘤有效組分提取物的制備
藥材五倍子干燥后粉碎。取400g藥粉，加入石油醚350ml，靜置過夜，過濾除去石油醚，取出藥品晾干。將上述樣品分成4份，加入水1L，回流提取3h，藥渣重復(fù)提取2次，收集濾 液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液至約300ml，加入95%乙醇600ml攪拌，靜置過夜。過濾，取濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇蒸出，蒸至無乙醇味，得粗提液300ml。用同體積的乙醚萃取粗提液三次，合并乙醚層，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至無乙醚味，得褐色浸膏，即為五倍子抗腫瘤有效組分提取物。五倍子抗腫瘤有效組分提取物經(jīng)過液相色譜分析，保留時間與市購對照品比較定性，確認其主要含有沒食子酸、沒食子酸乙酯及其他未知物。實施例3 :固態(tài)五倍子抗腫瘤有效組分提取物的制備
藥材五倍子干燥后粉碎。取80g藥粉，加入石油醚80ml，均勻攪拌，靜置過夜，過濾除去石油醚，取出藥品晾干。將上述樣品加入水600ml，回流提取2h，藥渣重復(fù)提取2次，收集濾液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液至約80ml，以95%乙醇藥液6 I的比例加入95%乙醇，攪拌10分鐘，靜置過夜，過濾，取濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇蒸出，蒸至無乙醇味，得粗提液80ml。以IOOml乙醚萃取粗提液，萃取2次，每次約10 min，取乙醚層合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至無乙醚味，烘干得約4. Sg黃色粉末狀的固態(tài)五倍子抗腫瘤有效組分提取物。固態(tài)五倍子抗腫瘤有效組分提取物經(jīng)過液相色譜分析，保留時間與市購對照品比較定性，確認其主要含有沒食子酸、沒食子酸乙酯及其他未知物。實施例4 :固態(tài)五倍子抗腫瘤有效組分提取物的制備
藥材五倍子干燥后粉碎。取80g藥粉，加入石油醚80ml，均勻攪拌5min，靜置過夜，去除石油醚，取出藥品晾干。將上述樣品加入水700ml，回流提取2h，藥渣重復(fù)提取2次，收集濾液。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮濾液至約60ml，以95%乙醇藥液5 :1的比例加入95%乙醇，攪拌5分鐘，靜置過夜，過濾，取濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇蒸出，蒸至無乙醇味，得粗提液60ml。用300ml乙醚萃取粗提液I次，取上清液(乙醚層)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸至無乙醚味，烘干得約3. Sg黃色粉末狀的固態(tài)五倍子抗腫瘤有效組分提取物。實施例5 MTT法體外抗腫瘤活性評價
以實施例1得到的五倍子抗腫瘤有效組分提取物為受試藥物，體外培養(yǎng)U251，取指數(shù)生長期的細胞，用胰酶消化后，1500r . HiirT1離心5min，將細胞重懸于培養(yǎng)基中，細胞濃度調(diào)至2 X 104個/ml，接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100 μ I，放置細胞培養(yǎng)箱(37°C，5%C02)中培養(yǎng)24h，之后加入受試藥物20 μ I，陰性對照組加入終濃度為O. 5%DMS0,各組均設(shè)3個復(fù)孔。在加藥48h后，每孔加入5mg · Hir1MTT試劑20 μ 1，繼續(xù)置于37°C培養(yǎng)4h。每孔加入DMSO100 μ 1，振蕩混勻，測定各孔在波長570nm處的吸光度值。計算細胞增殖抑制率抑制率(％) = (1-實驗組吸光度/對照組吸光度)X 100%,結(jié)果見表I。以實施例2-4得到的五倍子抗腫瘤有效組分提取物重復(fù)本實施例得到相同結(jié)果。表I五倍子抗腫瘤有效組分提取物的抗腫瘤活性實驗(U251)
權(quán)利要求
1.五倍子抗腫瘤有效組分提取物，其特征是它是五倍子干燥后粉碎，加入石油醚去油，晾干，水提醇沉，濾液蒸去乙醇后用乙醚提取，乙醚萃取液濃縮后得到的五倍子抗腫瘤有效組分提取物。
2.一種制備上述的五倍子抗腫瘤有效組分提取物的方法，其特征是它包括以下步驟(I)藥材五倍子干燥后粉碎，取80-400g加入石油醚均勻攪拌，靜置，濾去石油醚，晾干，加水回流提取，藥渣重復(fù)提取I次，收集濾液，蒸發(fā)縮至約300ml，加入2-6倍體積的95% 乙醇攪拌，靜置過夜，過濾，得提取液；(2 )步驟(I)的提取液濃縮去除乙醇后用2-5倍量乙醚進行萃取，乙醚萃取液蒸發(fā)濃縮后，即得五倍子抗腫瘤有效組分提取物。
3.權(quán)利要求1所述的五倍子抗腫瘤有效組分提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的五倍子抗腫瘤有效組分提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用， 其特征是所述的抗腫瘤藥物是以五倍子抗腫瘤有效組分提取物為有效成分，與藥學上可接受的載體所組成，并以藥用的制劑形式存在，這些制劑形式是片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、緩釋片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、緩釋膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓齊U、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴劑、滴丸劑或貼劑。
全文摘要
一種五倍子抗腫瘤有效組分提取物，它是五倍子干燥后粉碎，加入石油醚去油，晾干，水提醇沉，濾液蒸去乙醇后用乙醚提取，乙醚萃取液濃縮后得到的五倍子抗腫瘤有效組分提取物。研究證明，該有效組分提取物具有體外抑制U251(膠質(zhì)瘤細胞)生長的活性，因此，可用于制備開發(fā)抗腫瘤藥物。本發(fā)明公開了其制法。
文檔編號A61K35/64GK102988421SQ20121047479
公開日2013年3月27日 申請日期2012年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月21日
發(fā)明者余江南, 童姍姍, 徐希明, 付敏, 楊艷, 馮穎淑 申請人:江蘇大學