專利名稱：一種含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種骨多肽制品，具體講，涉及一種含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物。
背景技術(shù)：
從動(dòng)物骨中提取的提取物，其主要成分為小分子多肽類物質(zhì)，是由膠原蛋白分解而來(lái)的小分子肽類混合物，具有調(diào)節(jié)骨代謝、刺激成骨細(xì)胞增殖，促進(jìn)新骨形成，以及調(diào)節(jié)鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，防止骨質(zhì)疏松的作用，臨床上主要用于促進(jìn)骨折愈合。其中，多肽提取物可通過(guò)補(bǔ)充和增加各種成骨因子，直接作用于成骨軟骨及破骨細(xì)胞，促進(jìn)骨與軟骨基質(zhì)的合成，加速損傷愈合與修復(fù)；同時(shí)，動(dòng)物骨中的多肽提取物還可以促進(jìn)體內(nèi)生長(zhǎng)激素、促甲狀腺激素、甲狀腺激素的分泌，同時(shí)全面促進(jìn)人體代謝、間接調(diào)節(jié)骨與軟骨的生長(zhǎng)代謝，最終促進(jìn)骨質(zhì)形成，提高骨愈合質(zhì)量?，F(xiàn)有技術(shù)中公開(kāi)針對(duì)骨多肽注射劑的報(bào)道和研究。專利ZL03111084. 3骨多肽氯化鈉注射液及其制備工藝，公開(kāi)了一種骨多肽氯化鈉注射劑，該產(chǎn)品由骨多肽溶液、氯化鈉和注射用水構(gòu)成，其制備工藝包括以下過(guò)程:取胎牛四肢骨，加純水于100 120°c熱壓提取兩次，每次O. 5 2小時(shí)，提取液過(guò)濾，用HCI調(diào)pH值3. 0 5· 5靜置15 24小時(shí)，離心，取上清液用NaOH調(diào)pH值8. O 10. 0，在-10°C -25°C冷凍24小時(shí)以上，取出融化，離心，取上清液，用HCI調(diào)pH值至6. 5 7. 5，加熱至70 100°C，離心，取上清液，用分子量5000 10000膜超濾，收集超濾液，制得骨多肽溶液；在濃度為3%的氯化鈉溶液中加入O. 05 2% g/ml的活性炭，煮沸5 30分鐘，過(guò)濾脫炭，冷卻至室溫，O. 45um微孔濾膜過(guò)濾，加入處方量的所述的超濾液，調(diào)pH值6. 5 7. 5，用O. 22um微孔濾膜除菌，于100 115C°C滅菌30分鐘。該專利采用了高壓的提取方法會(huì)對(duì)提取物的生物活性造成影響。專利ZL200510076912. 8公開(kāi)了一種新骨多肽注射液制備方法及產(chǎn)品，制備方法為1)將哺乳動(dòng)物骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過(guò)濾，合并煮提液，在低溫下放置I 40小時(shí)，將提取液溫?zé)岷箅x心過(guò)濾，收集濾液備用；2)將濾液真空濃縮后加入乙醇，靜置沉淀，吸出上層醇液，定容回收乙醇，得水提液；3)將水提液加等體積蒸餾水，依次通過(guò)弱酸性陽(yáng)離子樹(shù)脂柱、弱堿性陰離子樹(shù)脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，去雜純化，得純凈稀藥液；4)將純凈稀藥液濃縮后，加壓過(guò)微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌，或?qū)⑺盟幰和ㄟ^(guò)冷凍干燥，得到凍干粉針劑。該方法制備工藝復(fù)雜，需要采用多種提取柱子，成本高，不適用于大規(guī)模的工業(yè)化生產(chǎn)。專利ZL201110110502中公開(kāi)了一種骨多肽組合物制劑及制備方法，該專利中的骨多肽組合物包括骨多肽化合物A 8 10重量份、骨多肽化合物B 5 8重量份、骨多肽化合物C5 8重量份、骨多肽化合物D 4. 5 7. 5重量份、骨多肽化合物E 3 6重量份、游尚氨基酸16 22重量份、核糖O. 3 5. 4重量份、微量兀素O. 04 O. 12重量份、游尚脂肪酸O O. 01重量份；I)取健康新鮮冷凍的哺乳動(dòng)物的四肢骨，洗凈，壓碎；2).壓碎的四肢骨用骨泥機(jī)磨成骨泥，放入提取罐中，加3 6倍量水，80 100°C保溫?cái)嚢鐸 2小時(shí)，
4取上清液儲(chǔ)存；將得到的骨渣加入2 4倍量水，80 100°C保溫?cái)嚢鐸 2小時(shí)，取上清液；合并二次得到的上清液5(T60°C減壓濃縮至原料重；3).將步驟2中得到的溶液于-5 (TC條件下，放置12 24小時(shí)，除去上層脂肪；4).溶液用鹽酸調(diào)pH值4. 5 5. 5，加熱煮沸15 30min，過(guò)濾，冷卻后，于-5 0°C條件下放置12 24h，去除上層脂肪后低溫離心；5).酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值7. 5 9. 5，加熱煮沸15 30min，過(guò)濾，冷卻后，于-5 0°C條件下放置12 24h，去除上層脂肪后低溫離心；6).溶液用鹽酸調(diào)至中性，用10000分子量的超濾器超濾，超濾液50 60°C減壓濃縮至規(guī)定體積；7).溶液用鹽酸調(diào)pH值4. 5 5. 0，按溶液量的O. 1%加入藥用活性炭，加熱至100°C攪拌吸附30min，冷卻降溫至30 35°C，用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾得精濾液；8).精濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH6. 5
7.5，用6000道爾頓的超濾器超濾，得超濾液；9).超濾液50 60°C減壓干燥，得骨多肽組合物。該制備工藝需要進(jìn)行多次離心、濃縮等操作，步驟繁瑣，不利于工業(yè)化生產(chǎn)，并且對(duì)收率會(huì)造成一定的影響。針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提出了一種動(dòng)物骨多肽注射劑，該骨多肽注射劑中不僅大分子物質(zhì)含量低，游離脂肪酸含量低，并且生物活性高，其制備方法操作簡(jiǎn)單，適用于工業(yè)化生產(chǎn)，并且產(chǎn)率高，可使企業(yè)獲得較高的經(jīng)濟(jì)收益。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明目的在于提出一種動(dòng)物骨多肽的藥物組合物。本發(fā)明涉及一種含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，所述的藥物組合物的組成為由豬骨、牛骨和鹿骨中提取的骨多肽注射劑原液100重量份，三氯叔丁醇O. I 5重量份，磷酸二氫鈉O. 5 5重量份；優(yōu)選為由豬骨、牛骨和鹿骨中提取的多肽注射劑原液100重量份，三氯叔丁醇O. 5 2. 5重量份，磷酸二氫鈉I 4重量份。本發(fā)明的第一優(yōu)選技術(shù)方案為所述的藥物組合物的原料豬骨、牛骨和鹿骨的重量比為I 4 :1 2 :1 3 ;優(yōu)選I 2 :1 :1 2。本發(fā)明的第二優(yōu)選技術(shù)方案為所述骨多肽注射原液的制備方法包括以下步驟I.按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎；2.壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 IOmm的骨渣顆粒，放入提取罐中，加I 2倍量水，采用頻率為20 25kHz的超聲波處理O. 5 2小時(shí)，超聲處理完畢后90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入I 2倍量的水，采用頻率為25 35kHz的超聲波處理O. 5 I小時(shí)，超聲處理完畢后90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，取上清液；3.合并步驟2中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/4 1/2，然后在-15 _25°C條件下凍存,去除上層脂肪；4.將凍存3 7天的骨渣提取物解凍，取上清液；5.溶液用鹽酸調(diào)pH值5. O 5. 5，90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，過(guò)濾，降溫至O 1°C，再次過(guò)濾；6.酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8. O 8. 5，90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，過(guò)濾，降溫至O 1°C，再次過(guò)濾；7.溶液用鹽酸調(diào)pH值6. 5 7. 5，用5000 8000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液；
8.將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O. 02 O. 05%加入藥用活性炭，加熱至7(T75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到 骨多肽注射劑原液，按照比例加入三氯叔丁醇和磷酸二氫鈉攪拌均勻后，再用O. 22μπι微孔濾膜過(guò)濾一遍，得到含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物。本發(fā)明的第三優(yōu)選技術(shù)方案為在步驟2中，超聲功率為600 800W，超聲發(fā)出時(shí)間I 2秒，間歇2 3秒。本發(fā)明的第四優(yōu)選技術(shù)方案為在步驟2中，第一次超聲波處理的時(shí)間為45 90分鐘，優(yōu)選45 60分鐘ο本發(fā)明的第五優(yōu)選技術(shù)方案為在步驟2中，第二次超聲波處理的時(shí)間為30 60分鐘，優(yōu)選30 45分鐘ο本發(fā)明的第六優(yōu)選技術(shù)方案為在步驟4中，將凍存的骨渣提取物置于15 65°C的條件下解凍，優(yōu)選40 60°C。本發(fā)明的第七優(yōu)選技術(shù)方案為在步驟4中，凍存的骨渣提取物的升溫速度為
O.I O. 5°C /min,優(yōu)選 O. 2 O. 4°C /min。本發(fā)明的第八優(yōu)選技術(shù)方案為所述含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物的劑型為注射液或凍干粉。本發(fā)明的第九優(yōu)選技術(shù)方案為所述含動(dòng)物骨多肽的注射液為將所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物用注射用水稀釋至含有骨多肽5mg/ml。下面對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的解釋和說(shuō)明本發(fā)明涉及一種含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，該藥物組合物的制備方法為按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎；將壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 IOmm的骨渣顆粒，放入提取罐中，加I 2倍量水，采用頻率為20 25kHz的超聲波處理O. 5 2小時(shí)，優(yōu)選45 90分鐘，更優(yōu)選45 60分鐘；超聲處理完畢后90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入I 2倍量的水，采用頻率為25 35kHz的超聲波處理O. 5 I小時(shí)，優(yōu)選30 45分鐘；超聲處理完畢后90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，取上清液；超聲功率為600 800W，超聲發(fā)出時(shí)間I 2秒，間歇2 3秒；本發(fā)明通過(guò)將骨渣兩次超聲提取，最大限度的將骨中的有效成分提取出來(lái)，從而保證了本發(fā)明骨多肽注射劑的收率；同時(shí)，本發(fā)明對(duì)兩次超聲提取的頻率及時(shí)間進(jìn)行了反復(fù)實(shí)驗(yàn)，從而得到在該功率和時(shí)間條件下，提取效率最高，并且保證了骨多肽的生物活性。制備過(guò)程中，合并上一步驟中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/4 1/2，然后在-15 _25°C條件下凍存，去除上層脂肪；在該溫度條件下，將骨渣提取物凍存3 7天，優(yōu)選4 7天，然后解凍，取上清液；解凍的條件為在15 65°C的條件下解凍，優(yōu)選40 60°C ;骨渣提取物的升溫速度為O. I O. 5°C /min，優(yōu)選O. 2 O. 4°C /min ;本發(fā)明通過(guò)對(duì)骨渣提取物的凍存和解凍，從而促進(jìn)骨渣提取物中多肽物質(zhì)的游離，減少高分子物質(zhì)的含量。進(jìn)一步的，將解凍后的溶液用鹽酸調(diào)pH值5. O 5. 5，90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，過(guò)濾，降溫至O rc，再次過(guò)濾；過(guò)濾過(guò)程中可將下層沉淀和上層脂肪全部除去，從而減少溶液中的雜質(zhì)和脂肪等物質(zhì)；將過(guò)濾得到的酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值8. O
8.5，90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，過(guò)濾，降溫至O 1°C，再次過(guò)濾；過(guò)濾過(guò)程中可將在堿提過(guò)程中產(chǎn)生的雜質(zhì)和脂肪等物質(zhì)全部除去；本發(fā)明PH值做了更精細(xì)的調(diào)控，從而在保證產(chǎn)品收率的同時(shí)，保證了骨多肽的生物活性。最后，溶液用鹽酸調(diào)pH值6. 5 7. 5，用5000 8000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液；將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O. 02 O. 05%加入藥用活性炭，加熱至7(T75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到骨多肽注射劑原液，進(jìn)一步添加輔料制備組合物。通過(guò)對(duì)骨多肽溶液的進(jìn)一步精制和過(guò)濾，從而得到的骨多肽注射液的安全性大大提高。通過(guò)對(duì)現(xiàn)有骨多肽注射劑工藝的改進(jìn)，本發(fā)明制備得到的骨多肽注射劑中高分子物質(zhì)的含量很低，通過(guò)長(zhǎng)期試驗(yàn)檢測(cè)得知，本發(fā)明制備的注射劑在不添加穩(wěn)定劑等添加劑的基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)24個(gè)月的長(zhǎng)期試驗(yàn)，高分子物質(zhì)無(wú)明顯增加。并且通過(guò)進(jìn)一步添加輔料三氯叔丁醇和磷酸二氫鈉，可進(jìn)一步提高注射劑的穩(wěn)定性。本發(fā)明的制備工藝避免了反復(fù)凍融，從而避免了降壓物質(zhì)的產(chǎn)生，從而使藥物的安全性得到進(jìn)一步的提高。本發(fā)明由于選用了超聲提取的工藝，使骨多肽的產(chǎn)率大大增加，可達(dá)到原料重的I. 41 I. 50%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)。同時(shí)，通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的制備工藝得到的骨多肽注射劑的生物活性很高，超聲提取并未對(duì)多肽的生物活性產(chǎn)生不良的影響。并且由于本發(fā)明提取過(guò)程中對(duì)條件等的嚴(yán)格控制，通過(guò)臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)，其生物活性要高于現(xiàn)有技術(shù)。本發(fā)明的具體實(shí)施方式
僅是對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的進(jìn)一步解釋和說(shuō)明，并不限制本發(fā)明的內(nèi)容。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :I.按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎；豬骨、牛骨和鹿骨的重量比為I :2 :3 ;2.壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 10_的骨渣顆粒，放入提取罐中，加I倍量水，采用頻率為20kHz的超聲波處理O. 5小時(shí)，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢鐸小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入I倍量的水，采用頻率為25kHz的超聲波處理O. 5小時(shí)，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢鐸小時(shí)，取上清液；其中，超聲功率為600 800W，超聲發(fā)出時(shí)間2秒，間歇3秒；3.合并步驟2中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/2，然后在_25°C條件下凍存，去除上層脂肪；4.將凍存3天的骨渣提取物解凍，取上清液；將凍存的骨渣提取物置于65°C的條件下解凍；凍存的骨渣提取物的升溫速度為O. 30C /min ；5.溶液用鹽酸調(diào)pH值5. 0,100°C保溫?cái)嚢鐸小時(shí)，過(guò)濾，降溫至(TC，再次過(guò)濾；6.酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8. 0,100°C保溫?cái)嚢鐸小時(shí)，過(guò)濾，降溫至o°c，再次過(guò)濾；7.溶液用鹽酸調(diào)pH值6. 5，用5000 8000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液；8.將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O. 02%加入藥用活性炭，加熱至75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到骨多肽注射劑原液，按照骨多肽注射劑原液100重量份、三氯叔丁醇O. I重量份、磷酸二氫鈉I重量份的比例加入輔料攪拌均勻后，再用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾一遍，得到含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物；9.將所述的骨多肽藥物組合物用注射用水稀釋至含有骨多肽5mg/ml的骨多肽組合物注射液，按照常規(guī)方法制備骨多肽組合物注射液水針；或者將得到的骨多肽注射劑組合物采用常規(guī)方法凍干，得到骨多肽組合物的凍干粉針。實(shí)施例2 I.按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎；豬骨、牛骨和鹿骨的重量比為2 :1 :2 ;2.壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 IOmm的骨渣顆粒，放入提取罐中，加2倍量水，采用頻率為25kHz的超聲波處理2小時(shí)，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入2倍量的水，采用頻率為35kHz的超聲波處理30分鐘，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，取上清液；其中，超聲功率為800W，超聲發(fā)出時(shí)間I秒，間歇3秒；3.合并步驟2中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/4，然后在_25°C條件下凍存，去除上層脂肪；4.將凍存5天的骨渣提取物解凍，取上清液；將凍存的骨渣提取物置于60°C的條件下解凍，凍存的骨渣提取物的升溫速度為O. 20C /min5.溶液用鹽酸調(diào)pH值5. 5，100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾，降溫至(TC，再次過(guò)濾；6.酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8. 5，100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾，降溫至o°c，再次過(guò)濾；7.溶液用鹽酸調(diào)pH值7. 5，用8000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液；8.將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O. 02%加入藥用活性炭，加熱至75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到骨多肽注射劑原液，按照多肽注射劑原液100重量份，三氯叔丁醇2. 5重量份，磷酸二氫鈉I重量份的比例加入輔料攪拌均勻后，再用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾一遍，得到含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物；9.將得到的骨多肽注射劑組合物用注射用水稀釋至含有骨多肽5mg/ml的骨多肽組合物注射液，按照常規(guī)方法制備骨多肽組合物注射液水針；或者將得到的骨多肽注射劑組合物采用常規(guī)方法凍干，得到骨多肽組合物的凍干粉針。實(shí)施例3 I.按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎；豬骨、牛骨和鹿骨的重量比為4 :2 :3 ;2.壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 IOmm的骨渣顆粒，放入提取罐中，加2倍量水，采用頻率為25kHz的超聲波處理I小時(shí)，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入I倍量的水，采用頻率為30kHz的超聲波處理45分鐘，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢鐸小時(shí)，取上清液；其中，超聲功率為700W，超聲發(fā)出時(shí)間I秒，間歇3秒；3.合并步驟2中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/3，然后在_20°C條件下凍存，去除上層脂肪；4.將凍存6天的骨渣提取物解凍，取上清液；將凍存的骨渣提取物置于40°C的條件下解凍；凍存的骨渣提取物的升溫速度為O. rc /min ；5.溶液用鹽酸調(diào)pH值5. 0,100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾，降溫至1°C，再次過(guò)濾；6.酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8. 5，100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾，降溫至I °c，再次過(guò)濾；7.溶液用鹽酸調(diào)pH值7. 5，用5000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液；8.將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O. 02%加入藥用活性炭，加熱至75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到骨多肽注射劑原液，按照骨多肽注射劑原液100重量份、三氯叔丁醇I重量份、磷酸二氫鈉5重量份的比例加入輔料攪拌均勻后，再用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾一遍，得到含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物；9.將得到的骨多肽注射劑組合物用注射用水稀釋至含有骨多肽5mg/ml的骨多肽組合物注射液，按照常規(guī)方法制備骨多肽組合物注射液水針；或者將得到的骨多肽注射劑組合物采用常規(guī)方法凍干，得到骨多肽組合物的凍干粉針。實(shí)施例4 I.按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎；豬骨、牛骨和鹿骨的重量比為I :1 :2 ;2.壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 IOmm的骨渣顆粒，放入提取罐中，加I倍量水，采用頻率為25kHz的超聲波處理I. 5小時(shí)，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入2倍量的水，采用頻率為35kHz的超聲波處理O. 5小時(shí)，超聲處理完畢后100°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，取上清液；其中，超聲功率為700W，超聲發(fā)出時(shí)間2秒，間歇3秒；3.合并步驟2中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/5，然后在_25°C條件下凍存，去除上層脂肪；4.將凍存7天的骨渣提取物解凍，取上清液；將凍存的骨渣提取物置于65°C的條件下解凍，凍存的骨渣提取物的升溫速度為O. 30C /min ；5.溶液用鹽酸調(diào)pH值5. 0，98°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾，降溫至0°C，再次過(guò)濾；6.酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8. 5，98°C保溫?cái)嚢?小時(shí)，過(guò)濾，降溫至(TC，再次過(guò)濾；7.溶液用鹽酸調(diào)pH值7. 0，用7000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液；8.將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O. 02%加入藥用活性炭，加熱至75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到骨多肽注射劑原液，按照骨多肽注射劑原液100重量份、三氯叔丁醇I. 5重量份、磷酸二氫鈉2. 5重量份的比例加入輔料攪拌均勻后，再用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾一遍，得到含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物；9.將得到的骨多肽注射劑組合物用注射用水稀釋至含有骨多肽5mg/ml的骨多肽組合物注射液，按照常規(guī)方法制備骨多肽組合物注射液水針；或者將得到的骨多肽注射劑組合物采用常規(guī)方法凍干，得到骨多肽組合物的凍干粉針。實(shí)驗(yàn)例I高分子物質(zhì)檢測(cè)實(shí)施例I制備得到的骨多肽注射劑原液直接用注射用水稀釋至含有骨多肽5mg/ml，按照常規(guī)方法制備水針，取其中的三個(gè)批次101、102、103，模擬上市包裝，進(jìn)行如下穩(wěn)定性試驗(yàn)于400C ±2°C，75%±5%RH的條件下放置6個(gè)月，在試驗(yàn)期間分別于1、2、3、6個(gè)月末取樣一次，對(duì)各穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表I所示。表I :
權(quán)利要求
1.一種含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物的組成為由豬骨、牛骨和鹿骨中提取的多肽注射劑原液100重量份，三氯叔丁醇O. I 5重量份，磷酸二氫鈉O. 5 5重量份；優(yōu)選為由豬骨、牛骨和鹿骨中提取的多肽注射劑原液100重量份，三氯叔丁醇O. 5 2. 5重量份，磷酸二氫鈉I 4重量份。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物的原料豬骨、牛骨和鹿骨的重量比為I 4 :1 2 :1 3 ;優(yōu)選I 2 :1 :1 2。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，所述的組合物的制備方法包括以下步驟 (O按比例稱取健康新鮮冷凍的豬骨、牛骨和鹿骨的四肢骨，洗凈，壓碎； (2)壓碎的四肢骨研磨成直徑為2 IOmm的骨渣顆粒，放入提取罐中，加I 2倍量水，采用頻率為20 25kHz的超聲波處理O. 5 2小時(shí)，超聲處理完畢后90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，取上清液；再將骨渣顆粒加入I 2倍量的水，采用頻率為25 35kHz的超聲波處理O. 5 I小時(shí)，超聲處理完畢后90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，取上清液； (3)合并步驟(2)中兩次得到的上清液，減壓濃縮至原體積的1/4 1/2，然后在-15 _25°C條件下凍存,去除上層脂肪； (4)將凍存3 7天的骨渣提取物解凍，取上清液； (5)溶液用鹽酸調(diào)pH值5.O 5. 5，90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，過(guò)濾，降溫至O I °C，再次過(guò)濾； (6)酸性濾液用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值8.O 8. 5，90 100°C保溫?cái)嚢鐸 3小時(shí)，過(guò)濾，降溫至O 1°C，再次過(guò)濾； (7)溶液用鹽酸調(diào)pH值6.5 7. 5，用5000 8000分子量的超濾器超濾，收集超濾液，得到骨多肽溶液； (8)將制備得到的骨多肽溶液按溶液質(zhì)量的O.02 O. 05%加入藥用活性炭，加熱至7(T75°C攪拌吸附30min，用O. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾；用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌得到骨多肽注射劑原液，按照比例加入三氯叔丁醇和磷酸二氫鈉攪拌均勻后，再用O. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾一遍，得到含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，在步驟(2)中，超聲功率為600 800W，超聲發(fā)出時(shí)間I 2秒，間歇2 3秒。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，在步驟(2)中，第一次超聲波處理的時(shí)間為45 90分鐘，優(yōu)選45 60分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，在步驟(2)中，第二次超聲波處理的時(shí)間為30 60分鐘，優(yōu)選30 45分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，在步驟(4)中，將凍存的骨渣提取物置于15 65°C的條件下解凍，優(yōu)選40 60°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，在步驟(4)中，凍存的骨渣提取物的升溫速度為O. I O. 50C /min，優(yōu)選O. 2 O. 4°C /min。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物的劑型為注射液或凍干粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物，其特征在于，所述含動(dòng)物骨多肽的注射液為將所述的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物用注射 用水稀釋至含有 骨多肽5mg/ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種骨多肽制品，具體講，涉及一種含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物。所述的藥物組合物的組成為由豬骨、牛骨和鹿骨中提取的多肽注射劑原液100重量份，三氯叔丁醇0.1～5重量份，磷酸二氫鈉0.5～5重量份。本發(fā)明的含動(dòng)物骨多肽的藥物組合物的穩(wěn)定性好，高分子物質(zhì)含量極低，安全性高，非常適合于臨床應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P19/10GK102920994SQ20121050179
公開(kāi)日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月29日
發(fā)明者羅誠(chéng) 申請(qǐng)人:羅誠(chéng)